沉降菌菌落数的监测标准操作程序.doc
沉降菌检测操作规程
●1、目的规范洁净区和洁净室沉降菌测试条件和测试方法。
●2、适用范围适用于公司洁净区、洁净室或局部空气净化区域（如：洁净工作台）的沉降菌的测试和环境验证。
●3、引用文件⏹化妆品卫生规范-2007⏹GB/T 16294-2010 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法●4、定义⏹ 4.1 沉降菌：用本测试规定的方法收集空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖的可见菌落数。
⏹ 4.2 沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以（个/皿）表示●5、仪器和设备⏹ 5.1 灭菌培养皿90mm *15mm⏹ 5.2 培养基。
⏹ 5.3 恒温培养箱。
⏹ 5.4 高压灭菌器。
⏹ 5.5 放大镜●6、培养基和试剂⏹ 6.1 生理盐水：成份﹕氯化钠 8.5g蒸馏水加至 1000ml制法﹕溶解后﹐分装到加玻璃珠的三角瓶内﹐每瓶90ml﹐121℃（15 1b）2 0 mi n，高压灭菌。
⏹ 6.2 卵磷脂、吐温80—营养琼脂培养基6.2.1 成分：蛋白胨20g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂15g卵磷脂1g吐温80 7g蒸馏水1000mL6.2.2制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80，将其他成分（除琼脂外）加到其余的蒸馏水中，溶解。
加入已溶解的卵磷脂、• 吐温80，混匀，调pH 值为7.1～7.4，加入琼脂，103.43kPa（121℃15 lb）20min 高压灭菌，储存于冷暗处备用。
●7、操作步骤⏹7.1 取样：7.1.1 取样点的设置：A) 最少取样点数：灌装间、制造间3个，其他洁净区2 个；B) 取样点的位置：取样点应均匀分布在待测试区域内，一般离地高度为0.8m左右，关键设备处可增加取样点；C）每个取样点一般取样一次，每次一般为2个取样皿；D) 布置采样点时，应避免回风口；7.1.2 取样时间：可采用动态取样和静态取样：A) 动态取样：正常生产，且空气净化系统正常运转30分钟后开始取样；B）静态取样：员工己撤离生产区域，且空气净化系统正常运转至少20分钟后；静态取样时人员不得多于2人；7.1.3 取样A）将制备好的培养皿逐个放置到采样点，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养皿暴露在空气中；B）静态测试时，培养皿的暴露时间为30分钟以上；动态测试时，培养皿的暴露时间不得大于4个小时⏹7.2 置于37±1℃恒温培养箱内培养至少48小时，记录每个平皿的菌落数；●8、菌落计数方法：⏹8.1先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5 倍～10 倍的放大镜检查，以防遗漏；⏹每个测点的沉降菌总数为该测点所有培养皿菌落数的平均数；●9、结果评定：⏹9.1 每个测点的菌落数必需低于该洁净区的标准时判定符合要求；⏹9.2 静态测试时，如某测点的的菌落平均数超过标准，应再重新取样两次，两次都低于标准时才能判定符合；。
沉降菌检测操作规程
沉降菌检测操作规程沉降菌检测操作规程一、实验材料和仪器设备准备1. 培养基：选择适合于沉降菌生长的培养基，如营养琼脂、脑心提取物琼脂等。
2. 试管：清洁且干燥的试管，用于制备培养基和盖儿。
3. 平板培养皿：密封性好、无明显污损的平板培养皿。
4. 无菌纱布：用于对培养皿进行覆膜。
5. 显微镜：高倍显微镜，用于观察沉降菌。
6. 其他常规的无菌操作用具和试剂。
二、实验操作步骤1. 准备培养基：根据所选的培养基配方，按照要求将培养基配制成液体状态，并进行无菌过滤。
将液体培养基倒入试管中，每个试管约倒满的1/3，悬挂液体培养基放置在试管架上，待培养基凝固后，封闭试管盖儿。
2. 取样：将待检测的样品进行无菌采样，如空气、水、土壤、食品等，确保取样时避免污染和杂菌的进入。
3. 塑料膜覆盖：将待检测的培养基倒入平板培养皿中，约倒满1/2，然后用无菌纱布覆盖培养皿口，并用橡皮筋固定好。
确保培养基表面整齐平坦，无明显凸起或凹陷。
4. 样品接种：将取样时采集的样品（空气、水、土壤等）用滴管或铁丝等工具，均匀地接种到培养基的表面上，每个培养皿大约接种2～3滴，然后迅速盖上试管上的盖子。
5. 培养条件：将培养皿置于恒温箱中，一般温度设定为30-35°C，培养时间为24小时至72小时不等，具体视沉降菌生长速度而定。
三、结果判读1. 观察培养皿：取出培养皿，观察上面是否出现菌落。
正常情况下，如果检测的样品中存在沉降菌，培养皿上会出现可见的菌落。
2. 菌落形态观察：使用高倍显微镜观察菌落的形态特征，确定是否为沉降菌。
3. 菌种的鉴定：对形态特征与已知的沉降菌标准比对，进行菌种鉴定。
四、注意事项1. 所有操作必须在无菌条件下进行，避免外界杂菌的污染。
2. 严格控制培养基、试管和平板培养皿等材料的无菌。
3. 样品采集要避免手部接触，使用无菌工具进行采样。
4. 培养条件要保持稳定，避免温度、湿度等因素对实验结果的影响。
5. 观察菌落时要细心，准确判断是否为沉降菌。
沉降菌检验标准操作规程
01.0 目的01.1 阐述洁净室（区）空气中沉降菌检测操作规程，保证药品的质量，防止生产环境对产品的污染，保证实验室的环境达到检测产品的要求。
02.0 适用范围02.1 适用于本公司的洁净室（区）的沉降菌监测和洁净度等级的验证。
03.0 人员职责测试人员对洁净室（区）沉降菌的测试。
04.0 内容04.1 术语和定义下列术语和定义适用于本规程。
04.1.1 菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的细菌集落，简称CFU，通常用个数来表示。
04.1.2 沉降菌：用GB/T16292-2010 提及的方法收集空气中的活性微生物粒子，通过专门的培养基在适宜的生长条件下系繁殖到可见到的菌落数。
04.1.3 沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以cfu/皿表示。
04.2 测试原理：本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。
04.3 监测周期：A级洁每次室验做监控， B 级每周一次，C级每季度一次，D级每半年一次监控。
04.4 测试方法：04.4.1 使用设备与材料高压灭菌锅：使用时应严格按照操作规程进行。
恒温恒湿培养箱：必须定期对培养箱进行校验。
培养皿：一般采用φ90mm×15mm培养皿。
培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）；已灭菌配制好的培养基平皿放入30-35 ℃恒温培养箱中培养72 小时，若培养基平皿上确无菌落生生即可供采样用，制备好的培养基平皿应放在2- 8℃的环境中存放。
清洁剂：75%酒精04.4.2 测试时间：（1）对单向流，如 A 级净化房间内及超净工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10 分钟后开始。
（2）对非单向流，如B级、C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟后开始。
微生物限度检查室沉降菌检查标准操作程序
微生物限度检查室沉降菌检查标准操作程序一、目的：为规定微生物限度检查室沉降菌测试方法和要求，特制定本操作规程。
二、适用范围：适用于公司微生物限度检查室沉降菌测试。
三、责任者：质量监督员、质量检验人员。
四、正文：2 仪器和设备：a、高压消毒锅b、恒温培养箱c、培养皿（φ90mm×15mm）d、培养基（营养琼脂培养基）3 测试方法：3.1 将已制备好的培养皿按要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5h，再将培养皿盖盖上后倒置。
3.2 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中 30~35℃培养 48h。
3.3 每批培养基可选定 3 只培养皿作对照试验，检验培养基本身是否污染。
3.4 用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用 5~10 放大镜检查，有否遗漏，若培养皿上有 2 个或 2 个以上的菌落重叠，可分辨时，仍以 2 个或 2 个以上菌落计数。
3.5 注意事项：3.5.1 测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。
3.5.2 采取一切措施防止人为对样品的污染。
3.5.3 对培养基培养条件及其他参数作详细的记录。
3.5.4 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。
4测试规则：4.1 测试状态：4.1.1 沉降菌测试前，微生物限度检查室的温湿度须达到规定的要求；换气次数，空气流速必须控制在规定值内。
4.1.2 测试前，微生物限度检查室应已经消毒过。
4.1.3 测试状态为静态测试，并在报告中注明测试状态。
4.2 测试人员：4.2.1 测试人员必须穿戴符合洁净室级别的工作服。
4.2.2 静态测试时，室内测试人员不得多于二人。
4.3 测试时间：对单向流，如 100 级净化工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min 后开始。
采样点布置见“质检微生物限度检查室悬浮粒子测试操作规程”。
4.4.1 采样点的布置：采样点的位置可以同悬浮粒子测试点。
4.4.1.1 工作区采样点的位置离地 0.8m~1.5m 左右（略高于工作面）。
版药典沉降菌检测操作规程.doc
题目：洁净区（室）沉降菌监测标准操作规程编码：颁发部门：质量部起草：日期：2015 年月日修订日期：年月日审核：日期：2015 年月日生效日期： 2016 年月日批准：日期：2015 年月日发放份数：版次：第 1 版分发部门：质量部、中心化验室1.目的：阐述洁净室空气中沉降菌检测操作规程，保证药品质量，防止生产环境对产品的污染。
2.范围：适用于本公司洁净区 ( 室) 的沉降菌的监测。
3.责任：沉降菌检测员。
4.内容：基本概念：菌落 : 细菌培养后 , 由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落 , 简称 CFU.通常用个数表示。
沉降菌：用 GB/T16292-2010 提及的方法收集空气中的活性微生物粒子，通过专门的培养基在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。
沉降菌菌落数 : 规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以个 / 皿表示。
测试原理 : 本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。
测试方法：使用的仪器设备和培养基:高压消毒锅 : 使用时应严格按照操作规程进行。
恒温培养箱 : 必须定期对培养箱的温度计进行检定。
培养皿 : 一般采用φ 90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。
使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌 20min。
培养基 : 胰酪大豆胨琼脂培养基。
将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约 15ml。
待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8 ℃的坏境中存放。
测试时间 :对单向流，如 A 级净化房间内及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于 10 分钟后开始。
对非单向流，如 B 级、 C级、 D 级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于 30 分钟开始。
沉降菌检验标准操作规程
01.0目的01.1阐述洁净室（区）空气中沉降菌检测操作规程，保证药品的质量，防止生产环境对产品的污染，保证实验室的环境达到检测产品的要求。
02.0适用范围02.1适用于本公司的洁净室（区）的沉降菌监测和洁净度等级的验证。
03.0人员职责测试人员对洁净室（区）沉降菌的测试。
04.0内容04.1术语和定义下列术语和定义适用于本规程。
04.1.1菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的细菌集落，简称CFU，通常用个数来表示。
04.1.2沉降菌：用GB/T16292-2010 提及的方法收集空气中的活性微生物粒子，通过专门的培养基在适宜的生长条件下系繁殖到可见到的菌落数。
04.1.3沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以cfu/皿表示。
04.2测试原理：本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。
04.3监测周期：A级洁每次室验做监控，B级每周一次，C级每季度一次，D级每半年一次监控。
04.4测试方法：04.4.1使用设备与材料高压灭菌锅：使用时应严格按照操作规程进行。
恒温恒湿培养箱：必须定期对培养箱进行校验。
培养皿：一般采用φ90mm×15mm培养皿。
培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）；已灭菌配制好的培养基平皿放入30-35℃恒温培养箱中培养72小时，若培养基平皿上确无菌落生生即可供采样用，制备好的培养基平皿应放在2-8℃的环境中存放。
清洁剂：75%酒精04.4.2测试时间：（1）对单向流，如A级净化房间内及超净工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。
（2）对非单向流，如B级、C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟后开始。
（3）培养皿的采样时间：静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时，培养皿暴露时间为不大于4小时。
沉降菌检测标准操作规程
1.目的：规范对洁净区沉降菌检查的方法，以做出洁净情况的正确评价。
2.范围：各生产车间洁净区3.职责：空气沉降菌检测操作人员负责本规程的实施，品保部经理监督执行4.内容4.1本测试方法是采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养皿中，经若干时间，在适宜条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室的洁净度。
4.2所用设备、试剂高压消毒锅、恒温培养箱、φ90mm 营养琼脂培养基培养皿。
4.3测试状态4.3.1沉降菌测试前，被测试洁净室的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。
4.3.2测试前，被测试洁净室已经过消毒。
4.3.3洁净厂房的空气净化调节系统的风机已启动至少30分钟。
4.3.4测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。
4.4测试人员4.4.1测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服，培养基按物料进入规定传入。
4.4.2静态测试时，室内测试人员不得多于2人。
4.5采样点数目及布置注:表中的面积，对于单向流洁净室，是指送风面积，对于乱流洁净室是指房间的面积4.5.2在满足最少测点数的同时，还要满足最少培养皿数，如下表。
不论面积大小，作为4.5.3采样点的布置：1)采样点的位置离地0.8m～1.5m左右（略高于工作面）。
2)可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。
4.6采样方法及培养4.6.1将培养皿按要求放置后，打开平皿盖，使培养皿表面暴露30分钟后，将培养皿盖上后倒置，全部采样结束后将培养皿倒置于恒温培养箱中培养，在30～35℃的条件下，培养48小时后计数。
每批可选定3只培养皿作对照培养。
4.7结果计算4.7.1用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5-10倍放大镜检查，有否遗漏若。
4.7.2培养皿上有2个或者2个以上菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。
沉降菌检验标准操作规程
01.0目的01.1阐述洁净室（区）空气中沉降菌检测操作规程，保证药品的质量，防止生产环境对产品的污染，保证实验室的环境达到检测产品的要求。
02.0适用范围02.1适用于本公司的洁净室（区）的沉降菌监测和洁净度等级的验证。
03.0人员职责测试人员对洁净室（区）沉降菌的测试。
04.0内容04.1术语和定义下列术语和定义适用于本规程。
04.1.1菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的细菌集落，简称CFU，通常用个数来表示。
04.1.2沉降菌：用GB/T16292-2010 提及的方法收集空气中的活性微生物粒子，通过专门的培养基在适宜的生长条件下系繁殖到可见到的菌落数。
04.1.3沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以cfu/皿表示。
04.2测试原理：本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。
04.3监测周期：A级洁每次室验做监控，B级每周一次，C级每季度一次，D级每半年一次监控。
04.4测试方法：04.4.1使用设备与材料高压灭菌锅：使用时应严格按照操作规程进行。
恒温恒湿培养箱：必须定期对培养箱进行校验。
（2）最少培养皿数洁净室（区）采样点布置宜力求均匀，避免采样点在局部区域过于稀疏。
下列多点采样的采样点布置图示可作参考（见图1）图1平面采样点布置图A级单向流区域，洁净工作台或局部空气净化设施的采样点宜布置在正对气流的工作面上，气流形式可参考图2、图3。
图2水平单向流的气流形式图3垂直单向流气流形式流产生干扰，取样时应避免可能对气流组织的干扰。
04.4.4测试步骤：04.4.4.1采样方法用无菌容器将预先培养的培养基（无菌平皿）放至传递窗，紫外灯照0.5小时，待检测用，将培养皿取出，用75%酒精擦平皿表面，放置在预先确定的取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露时间不少于30min，现将培养皿盖，盖后倒置培养。
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编号：
目的：建立沉降菌菌落数检测标准操作程序
范围：适用于洁净区或洁净室的沉降菌菌落数测定操作。
职责：微生物检验员
提要：本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。
沉降菌：用本标准提及的方法收集空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。
沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以个/皿表示。
1.所用仪器、器具和培养基
高压蒸汽灭菌锅、隔水恒温培养箱、培养皿（φ90mm 15mm）、营养琼脂培养基。
2.测试人员
测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服，不得随意进出洁净区；室内测试人员不得多于2人。
3.准备工作
3.1 温度和湿度：洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（温度控制在18~24℃，相对湿度控制在45%~60%之间为宜），同时应满足测试仪器的使用范围。
3.2静态测试时,测试宜在生产操作人员撤离现场且净化空气调节系统正常运行时间不少于10分钟达到自净后开始，对非单向流洁净室，测试宜在净化空气调节系统正常运行时间不少于20分钟自净后开始，必要时可对被测试洁净室进行消毒。
3.3菌落数测定的培养皿应布置在有代表性的地方和气流扰动最少的地方。
3.4对培养皿表面必须进行严格消毒。
4.测试步骤
4.1 将已制备好的培养皿按采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。
4.2 静态测试时，培养基暴露时间为30分钟以上。
4.3全部采样结束后，将培养皿倒置于隔水恒温培养箱中培养（培养条件为：30~35℃）。
4.4注意事项：
4.4.1采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。
采取一切措施防止人为对样本的污染。
4.4.2测试用具要进行灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。
4.4.3 布置采样点时，至少应尽量避开尘粒集中的回风口。
4.4.4测试人员应站在采样口的下风侧，并尽量减少走动。
4.4.5 所用培养基应为通过适用性检查后的培养基。
4.4.6 每批培养基应有对照试验，检验培养基是否污染。
4.4.7应对隔水恒温水浴锅进行校正。
5. 采样点数目及布置
5.1 工作区采样点位置离地0.8~1.5m左右。
5.2 可在关键设备或关键工作活动范围处增加测试点。
5.3 每个采样点一般采样一次。
5.4 沉降菌测定最少采样点数，如下表：
沉降菌测定最少采样点数目/个
5.5 在满足最少测点数的同时,还要满足最少培养皿数,不论面积大小，作为一个被测对象，都应满足这个要求。
如下表： 沉降菌测定最少采样培养皿数
5.6 微生物试验室、超净台、支架式层流罩等洁净区域或设备参照以上要求执行。
5.7以下采样点布置的图示可供参考：
“ ”为取样点。
6. 结果计算：
每个测试点的沉降菌平均菌落数的计算：
n
M M M M n
+++=
21
M-平均菌落数；
M-n号培养皿菌落数；
n
n-培养皿总数。
每个测点的沉降菌平均菌落数必须低于所选定标准中的界限。
7. 菌落计数
用肉眼直接计数、标记，可使用5-10倍放大镜辅助。
若培养皿上有2个或者2个以上菌落重叠,可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。
8.结果判定
8.1各洁净度级别的平均菌落数限度,如下表：
8.2在静态测试时，若某测点的沉降菌平均菌落数超过评定标准，则应重新采样两次，两次测试结果均合格才能判为符合。
9.日常监控
对于沉降菌的监控，宜设定纠偏限度，以保证洁净区的微生物浓度受到控制。
应定期检测微生物负荷以及消毒剂的效力，并作倾向分析。
10. 根据沉降菌检测情况填写沉降菌检查报告及相关记录。