实验用培养基适用性检查标准操作规程
052无菌检查用培养基的适用性检查标准操作规程
052⽆菌检查⽤培养基的适⽤性检查标准操作规程⽬的：建⽴⼀个⽆菌检查⽤培养基适⽤性检查的标准操作规程。
范围：化验室菌检岗位操作者。
责任：化验室检验员。
程序：1. 概述：培养基质量是影响微⽣物检验结果的重要环节，⽆菌检查⽤培养基的⽆菌性检查和灵敏度检查⽆菌检查结果判断的重要影响因素。
2. 培养基适⽤性检查的范围：2010年版《中国药典》规定微⽣物检查中成品培养基、由脱⽔培养基或按处⽅配制的培养基均应进⾏培养基适⽤性检查。
3. 试验⽤菌株⾦黄⾊葡萄球菌［CMCC(B)26003］铜绿假单胞菌［CMCC(B)10104］枯草芽孢杆菌［CMCC(B)63501］⽣孢梭菌［CMCC（B）64941］⽩⾊念珠菌［CMCC(F)98001］⿊曲霉［CMCC(F)98003］4. 试验⽤培养基4.1 菌液制备⽤培养基营养⾁汤培养基改良马丁培养基改良马丁琼脂培养基4.2 适⽤性检查培养基硫⼄醇酸盐流体培养基改良马丁培养基胰酪胨⼤⾖⾁汤培养基（TSB）5. 试验⽤稀释剂0.9%⽆菌氯化钠溶液含0.05%（ml/ml)聚⼭梨酯80的0.9%氯化钠溶液6. 试验⽤仪器设备6.1 恒温培养箱（30～35℃）、霉菌培养箱（23～28℃）、脉动真空蒸汽灭菌器、⽣物安全柜、电热恒温⿎风⼲燥箱、微型智能集菌仪。
6.2 锥形瓶、培养⽫（90mm）、量筒、试管及塞、吸管（1ml分度0.01，10ml分度0.1）6.3 接种环、酒精灯、酒精棉球、打⽕机、记号笔。
7 操作步骤：7.1培养基⽆菌性检查：每批培养基随机取不⼩于5瓶(⽀)，培养14天。
7.2培养基灵敏度检查：7.2.1菌液的制备7.2.1.1 接种铜绿假单胞菌、⾦黄⾊葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物⾄营养⾁汤培养基中，于30～35℃培养18～24h，取上述培养物1ml，⽤ 0.9%⽆菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含菌数50～100cfu的菌悬液，备⽤。
7.2.1.2 接种⽩⾊念珠菌的新鲜培养物⾄改良马丁培养基上，于23～28℃培养24～48h，取上述培养物1ml，⽤0.9%⽆菌氯化钠溶液10倍递增稀释每1ml含菌数50～100cfu的菌悬液备⽤。
培养基配制、适用性检查标准操作程序
目的：制定培养基配制、培养基适用性检查的标准操作程序。
范围：适用于微生物实验室培养基的配制和适用性检查。
责任者：微生物检验员所用器具、仪器、材料、菌种器具、仪器：高压蒸汽灭菌锅、高温灭菌柜、隔水恒温培养箱、生化培养箱、双人净化操作台、单人净化操作台、干燥箱、恒温水浴锅、电子天平、500ml三角瓶、移液管、培养皿、试管、接种环、酒精灯材料：标准干燥培养基（购于生物研究所）、待验证培养基菌种：大肠杆菌CMCC（B）44102、金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003、枯草芽孢杆菌CMCC （B）63501、白色念球菌CMCC （F）10231沙门氏菌CMCC （B）500941. 培养基的配制1.1 准备工作1.1.1 选择适宜容量的容器配制试剂，配制培养基的容器应为玻璃容器，以避免接触金属离子，如吸管、试管、三角瓶和平皿等，应按《玻璃容器清洗规程》洗涤、干燥、灭菌。
1.1.2 配制用水培养基配制用水应为纯化水，纯化水应临用新配。
1.2 配制1.2.1 记录所用脱水培养基的品名、批号、生产日期、生产厂家及配制处方。
1.2.2 用分度值为0.01的电子天平准确按处方量进行称量并装入三角瓶内。
1.2.3 用量筒按照培养基处方配比加入纯化水。
1.2.4 用硅胶橡皮塞塞上瓶口，轻轻振摇使充分混匀。
1.2.5 培养基在配置后必须进行PH值的测定，以确保符合药典要求和生产厂家的规定，一般情况下，PH值不能超过规制值±0.2。
1.2.6 用牛皮纸包扎瓶口，贴上标签，注明品名、批号、配置日期、配置人、有效期。
1.3 灭菌将上述已配制的培养基放入高压蒸汽灭菌锅按培养基灭菌条件进行灭菌（每次配制的培养基应在2小时内进行有效灭菌，否则极易染菌。
若未能在2小时内进行有效灭菌，则倒掉重新配制）。
若没有具体要求，一般灭菌温度（压力）为121℃（0.1MPa），灭菌时间为20分钟。
灭菌完成后，待高压灭菌锅温度、压强自然下降为“0”值，方可取出灭菌好的培养基（不可未降温时拿出，否则培养基内外会形成负压，易染菌）。
计数培养基的适用性检查标准操作规程
改良马丁培养基、营养琼脂培养基、营养肉汤培养基、改良马丁琼脂斜面培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基、对照培养基。
4.3菌种
培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），试验用菌种应采用适宜的菌种保存技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
1.目的
建立计数培养基适用性检查的标准操作规程，保证微生物限度检查结果的准确性可靠性。
2.范围
计数培养基的灵敏度检查。
3.职责
检验员实施本操作规程，质量控制部主管监督本规程正确执行。
4.程序
4.1实验设备及用具
高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、试管、试管架、灭菌生理盐水、含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液、0.9%无菌氯化钠溶液、75%酒精棉球、滴管。
大肠埃希菌(Escherichia coli)〔CMCC(B)44 102〕
金黄色葡萄球菌( Staphylococcus aureus)〔CMCC(B) 26 003〕
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63 501〕
白色念珠菌( Candida albicans)〔CMCC(F) 98 001〕
菌悬液在室温下放置应在2小时内使用，若保存在2～8℃可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。
4.5适用性检查
取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各50～100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养48小时，计数；取白色念珠菌、黑曲霉各50～100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置23～28℃培养72小时，计数；取白色念珠菌50～100cfu，注入无菌平皿中，立即倾注酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，平行制备2个平皿，混匀，凝固，置23～28℃培养72小时，计数。同时，用相应的对照培养illus niger)〔CMCC(F) 98 003〕
培养基适用性检查SOP
培养基适用性检查SOP1．目的规范计数培养基的适用性检查，确保微生物限度检查培养基计数的准确性。
2．范围适用于本公司检定用菌种。
3．定义无4．职责4.1.QC负责本规程的起草、修订、培训及执行；4.2.QA、QC组长质量管理部经理负责本规程的审核；4.3.质量总监负责批准本规程；4.4.QA负责本规程执行的监督。
5．引用标准《中华人民共和国药典》2020年版三部6．材料6.1.房屋、设备、试验用具6.1.1.房屋：阳性实验室6.1.2.设备：100级洁净工作台，30～35℃培养箱，20～25℃培养箱，立式灭菌器6.1.3.试验用具：隔离服、洁净工作服、工作鞋、口罩、帽子、10ml刻度吸管、1ml刻度吸管、毛巾、吸耳球、记号笔、中试管架、酒精灯、镊子、酒精棉、三角瓶、托盘、电子天平、药勺、量筒等。
6.2.菌种检查所用菌株传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），以保证试验菌株的生物学特性。
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC(B) 26003〕：用于无菌实验培养基灵敏度检查及微生物限度培养基的适用性检查；枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63501〕：用于无菌实验培养基灵敏度检查及微生物限度培养基的适用性检查；白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F) 98001〕：用于无菌实验培养基灵敏度检查及微生物限度培养基的适用性检查；黑曲霉(Aspergillus niger) 〔CMCC(F) 98003〕：用于无菌实验培养基灵敏度检查及微生物限度培养基的适用性检查；大肠埃希菌（Escherichia coli）〔CMCC（B）44102〕：用于微生物限度培养基的适用性检查；6.3.培养基:营养琼脂斜面培养基（中管）、硫乙醇酸盐流体培养基（中管）、改良马丁琼脂斜面培养基（中管）6.4.试剂与配制0.9%无菌氯化钠溶液：取氯化钠9.0g，加注射用水1000ml，充分溶解摇匀，加塞、包扎，经121℃30分钟高压灭菌，即得。
无菌检查用培养基的适用性检查标准操作规程
无菌检查用培养基的适用性检查标准操作规程目的：建立无菌检查用培养基适用性检查标准操作规程。
范围：适用于无菌检查使用培养基的适用性检查。
依据：中国药典》2015年版《药品生产质量管理规范》2010年修订《中国药品检验标准操作规程》2010年版责任：QC化验员对实施本规程负责。
内容:1、概要：无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符合培养基的无菌检查及灵敏度检查要求。
本检查可在供试品的检查前或与供试品的检查同时进行。
2、材料及设备2.1 生化培养箱2.2 生物安全柜2.3 中国浊度标准管（由中国药品生物制品检定所提供）2.4 灭菌试管、灭菌注射器2.5 0.9%无菌氯化钠溶液2.6 0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液：取聚山梨酯80 0.05ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠至100ml，混匀，灭菌即可。
3、无菌检查培养基的适用性检查3.1无菌性检查取新鲜配制灭菌的培养基各5瓶，硫乙醇酸盐流体培养基置30～35℃，胰酪大豆胨液体培养基置20～25℃，培养14天，应无菌生长。
3.2灵敏度检查3.2.1菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
金黄色葡萄球菌[Staphylococcus aureus CMCC(B) 26003]铜绿假单胞菌[Pseudomonas aeruginosa CMCC(B) 10104]枯草芽孢杆菌[Bacillus subtilis CMCC(B) 63501]生孢梭菌[Clostridium sporogenes CMCC(B) 64941]白色念珠菌[Candida albicans CMCC(F) 98001]黑曲霉[Aspergillus niger CMCC(F) 98003]3.2.2菌液制备3.2.2.1 金黄色葡萄球菌菌悬液制备3.2.2.1.1 取金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30～35℃培养18～24小时，取新鲜传代菌种一支待用。
培养基灵敏度及适用性检查操作规程
培养基灵敏度及适⽤性检查操作规程1. ⽬的：通过培养基适⽤性检查，确保购买的培养基符合实验要求。
2. 范围：本规程适⽤于技术质量部实验员对培养基适⽤性的检查。
3. 职责：质量部实验员负责执⾏此规程。
4. 内容：4.1 检验依据：《中华⼈民共和国药典》2015版4.2 试验⽤具：烧杯、三⾓瓶、酒精灯、接种环、平⽫、试管、吸管、移液枪、滴管、电⼦天平、电热恒温培养箱、⽣化培养箱或恒温恒湿培养箱、单⼈净化⼯作台、⾼压蒸汽灭菌器、微⽣物限度仪、漩涡混合器、试验菌种、检查⽤培养基等。
4.3 ⽆菌培养基适⽤性检查：本检查可在供试品的⽆菌检查前或与供试品的⽆菌检查同时进⾏。
4.3.1 培养基：硫⼄醇酸盐流体培养基、胰酪⼤⾖胨液体培养基或胰酪⼤⾖胨琼脂培养基（培养基的配制按《培养基配制操作规程》配制）。
4.3.2 稀释液、冲洗液及其制备⽅法稀释液、冲洗液配制后应采⽤验证合格的灭菌程序灭菌。
a) 0.1%⽆菌蛋⽩胨⽔溶液取蛋⽩胨1.0g，加⽔1000ml，微温溶解，滤清，调节pH值⾄7.1±0.2，分装，灭菌。
b) pH7.0⽆菌氯化钠-蛋⽩胨缓冲液取磷酸⼆氢钾3.56g，⽆⽔磷酸氢⼆钠5.77g，氯化钠4.30g，蛋⽩胨1.00g，加⽔1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。
c) 根据供试品的特性，可选⽤其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液（如0.9%⽆菌氯化钠溶液）。
如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加⼊表⾯活性剂或中和剂等。
4.3.3 ⽆菌性检查：每批培养基随机取不少于5⽀（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，应⽆菌⽣长。
4.3.4 灵敏度检查4.3.4.1 菌种培养基灵敏度检查所⽤的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中⼼获得的⼲燥菌种为第0 代），并采⽤适宜的菌种保藏技术进⾏保存，以保证试验菌株的⽣物学特性。
⾦黄⾊葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）〔CMCC（B）26 003〕铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa ）〔CMCC（B）10 104〕枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63 501〕⽣孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B）64 941〕⽩⾊念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F）98 001〕⿊曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC（F）98 003〕4.3.4.2 菌液制备a) 接种⾦黄⾊葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物⾄胰酪⼤⾖胨液体培养基中或胰酪⼤⾖胨琼脂培养基上，接种⽣孢梭菌的新鲜培养物⾄硫⼄醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24⼩时；b) 接种⽩⾊念珠菌的新鲜培养物⾄沙⽒葡萄糖液体培养基中或沙⽒葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养24～48⼩时，上述培养物⽤pH7.0⽆菌氯化钠-蛋⽩胨缓冲液或0.9%⽆菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数⼩于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。
培养基灵敏度及适用性检查操作规程
1. 目的：通过培养基适用性检查，确保购买的培养基符合实验要求。
2. 范围：本规程适用于技术质量部实验员对培养基适用性的检查。
3. 职责：质量部实验员负责执行此规程。
4. 内容：4.1 检验依据：《中华人民共和国药典》2015版4.2 试验用具：烧杯、三角瓶、酒精灯、接种环、平皿、试管、吸管、移液枪、滴管、电子天平、电热恒温培养箱、生化培养箱或恒温恒湿培养箱、单人净化工作台、高压蒸汽灭菌器、微生物限度仪、漩涡混合器、试验菌种、检查用培养基等。
4.3 无菌培养基适用性检查：本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。
4.3.1 培养基：硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基（培养基的配制按《培养基配制操作规程》配制）。
4.3.2 稀释液、冲洗液及其制备方法稀释液、冲洗液配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
a) 0.1%无菌蛋白胨水溶液取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，调节pH值至7.1±0.2，分装，灭菌。
b) pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液取磷酸二氢钾3.56g，无水磷酸氢二钠5.77g，氯化钠4.30g，蛋白胨1.00g，加水1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。
c) 根据供试品的特性，可选用其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液（如0.9%无菌氯化钠溶液）。
如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加入表面活性剂或中和剂等。
4.3.3 无菌性检查：每批培养基随机取不少于5支（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，应无菌生长。
4.3.4 灵敏度检查4.3.4.1 菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）〔CMCC（B）26 003〕铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa ）〔CMCC（B）10 104〕枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63 501〕生孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B）64 941〕白色念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F）98 001〕黑曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC（F）98 003〕4.3.4.2 菌液制备a) 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24小时；b) 接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养24～48小时，上述培养物用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。
培养基使用性检查操作规程
培养基适用性检查操作规程编制人：日期：部门：微生物室审核人：日期：替代：批准人：日期：执行日期：1、目的建立一个培养基适用性检查操作规程。
2、适用范围微生物限度及无菌检查的成品培养基，由脱水培养基或按处方配置的培养基均应进行培养基适用性检查。
3、检验依据按2010年版《中国药典（一、二部）》附录无菌方法进行测试检查。
4、试验所需菌种大肠埃希菌；金黄色葡萄球菌；枯草芽孢杆菌；生孢梭菌；白色念珠菌；黑曲霉。
5、标准规定5.1 无菌培养基使用性检查5.1.1 无菌性：每批培养基随机取不少于5支（瓶），经培养14天应无菌生长。
5.1.2 灵敏度：经培养对照管应无菌生长，试验管接菌小于100cfu均应生长良好。
5.2 微生物限度使用性检查5.2.1 细菌、霉菌和酵母菌计数检查取标准菌株大肠、金葡、枯草、白念、黑曲霉菌50～100cfu,分别接入于测试与对照培养基，经规定温度、时间培养，测试结果测试与对照培养基平均菌落数比不应小于70%。
5.2.2 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌检查取新鲜标准菌株大肠、金葡、铜绿假单胞菌制备使成10～100cfu菌悬液，分别对测试与对照培养基进行促生长能力、抑制能力及指示能力测试，结果被测培养试验菌的生长反应情况与对照培养基一致。
（液体培养基应记录为生长良好/生长微弱/未生长；固体培养基应记录为符合xx菌特征/不符合xx菌特征）。
5.2.3 大肠埃希菌、大肠菌群检查取新鲜标准菌株大肠、金葡球菌制备使成10～100cfu菌悬液，分别对测试与对照培养基进行促生长能力、抑制能力即指示能力测试，结果被测培养基试验菌的的生长反应情况应与对照培养基一致。
（液体培养基应记录为生长良好/生长微弱/未生长；固体培养基应记录为符合xx菌特征/不符合xx菌特征）。
5.2.4白色念珠菌、梭菌检查取新鲜标准菌株大肠、白念、生孢梭制备使成10～100cfu菌悬液，分别对测试与对照培养进行促生长能力、抑制能力及指示能力测试，结果被测培养基试验菌的生长反应情况应与对照培养基一致。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
起草人Prepared by:
起草日期
Date: _____________________ QC
审核人Reviewed by:
审核日期
Date: _____________________ QC
审核人Reviewed by:
审核日期
Date: QA
批准人Approved by:
批准日期
Date:
质量部QD
目的Purpose
为保障微生物检验的准确性及相关工作特制定本规定。
范围Scope
本程序适用于微生物限度测定培养基的适用性检查及相关工作。
职责Responsibility
分析员：严格按照本操作规程执行。
及时完成各类相关记录。
在主管的指导下进行任何可能的OOS及偏差调查。
主管：监督本操作规程的执行。
对检验员进行必要的培训。
指导任何可能的OOS和偏差调查。
内容procedure
1检验员应根据培养基配制程序或培养基各自的说明书配制培养基。
2试验用菌种及培养基
2.1菌种:
2.1.1培养基灵敏度测试所用的菌株传代次数不得超过5代，从国家药检所或菌种保藏中心购买。
2.1.2枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[ATCC 6633]
2.1.3大肠埃希菌(Escherichia coli) [ATCC 8739]
2.1.4金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [ATCC 6538]
2.1.5白色念珠菌(Candida albicans) [ATCC 10231]
2.1.6黑曲霉(Aspergillus niger)[ATCC 16404]
2.1.7伤寒沙门菌(Salmonella) [ATCC 14028]
2.1.8铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) [ATCC 9027]
2.2培养基
2.2.1按照培养基说明书进行配制灭菌。
2.2.2大豆酪蛋白消化肉汤Soybean-Casein Digest Broth
2.2.3大豆酪蛋白消化琼脂Soybean-Casein Digest Agar
2.2.4沙氏葡萄糖琼脂Sabouraud Dextrose Agar
2.2.5肠道菌增菌肉汤Enterobacteria Enrichment Broth Mossel
2.2.6紫红色胆汁葡萄糖琼脂Violet Red Bile Glucose Agar
2.2.7麦康凯肉汤MacConkey Broth
2.2.8麦康凯琼脂MacConkey Agar
2.2.9RV沙门氏菌富集肉汤Rappaport Vassiliadis Salmonella Enrichment Broth
2.2.10木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂Xylose Lysine Deoxycholate Agar
2.2.11甘露醇氯化钠琼脂培养基Mannitol Salt Agar
2.3微生物计数培养基的适用性检查
2.3.1微生物计数用的成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。
2.3.2菌悬液的制备
2.3.3上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.2磷酸盐缓冲液制成每1ml含菌数不大于100cfu的菌悬
液，制备黑曲霉孢子悬浮液时，添加3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液
或pH7.2磷酸盐缓冲液，将孢子洗脱。
然后，用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%
（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%菌氯化钠溶液或pH7.2磷酸盐缓冲液制成每1ml含孢子数不大于100cfu
的孢子悬液。
菌悬液在室温下放置应在2小时内使用，若保存在2～8℃可在24小时内使用。
黑曲
霉孢子悬液可保存在2-8℃，在验证过的贮存期内使用。
2.4大豆酪蛋白消化肉汤促生长试验
2.4.1取以上前3种菌悬液各0.1ml(不大于100cfu)，分别注入灭过菌的含有10ml大豆酪蛋白消化肉汤的
试管中，于30℃-35℃培养不超过3天。
同时用相应的上一批通过促生长试验的培养基替代被检培
养基进行上述试验。
培养结束后进行观察，如果肉眼能清晰看到的微生物的生长与上一批通过促生
长试验的培养基的生长情形基本一致，则判定此培养基通过促生长试验。
反之则判定此培养基不符
合规定，未通过促生长试验。
2.5 大豆酪蛋白消化琼脂和沙氏葡萄糖琼脂促生长试验
2.5.1 取以上5种菌悬液各1ml （不大于于100cfu ），分别注入无菌平皿中，立即倾注大豆酪蛋白消化琼
脂，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀、凝固，置30℃-35℃培养不超过3天，计数，后2种菌悬液不超过5天，计数。
再取后2种菌悬液各少于100cfu ，分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀、凝固，置20℃-25℃培养不超过5天，计数。
同时用相应的上一批通过促生长试验的培养基替代被检培养基进行上述试验。
进行促生长试验的培养基平皿上，微生物生长情况必须与已通过促生长试验的培养基平皿上的微生物生长情况一致或者更好，同时将待测定的培养基上的菌落数与已通过促生长试验的培养基上的菌落数对比，两者之间的比值应处于70%-200%之间,则判定此培养基通过促生长试验；反之则判定该培养基不符合规定，未通过促生长试验。
2.6 控制菌测试所用培养基的适用性检查
2.6.1 控制菌检查用的成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。
2.6.2 菌悬液的制备
2.6.3 上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.2磷酸盐缓冲液制成适宜浓度的菌悬液。
菌悬液在室温下
放置应在2小时内使用，若保存在2～8℃可在
24小时内使用。
2.6.4 控制菌检查用培养基的适用性检查项目包括培养基的促生长能力、抑制能力及指示能力的检查。
各
培养基的检查测试项目及所用菌株见下表
2.7液体培养基促生长能力检查
取试验菌各0.1ml（含菌数不大于100cfu）（见上表）于被检培养基和上一批检验并通过的培养基中，在相
应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。
两者比较，被检培养基与上一批检验并通过的培养
基比较，微生物生长良好并且相当。
2.8固体培养基促生长能力检查
取试验菌各0.1ml（含菌数不大于100cfu）（见上表）分别涂布于被检培养基和上一批检验并通过的培养基
中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。
两者比较，被检培养基与上一批检验并通
过的培养基比较，微生物生长良好并且相当。
2.9液体培养基和固体培养基的抑制能力检查
取试验菌各0.1ml（含菌数不小于100cfu）（见上表）于被检培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度
及最长时间下培养，试验菌应不得生长。
2.10培养基指示能力检查
取试验菌各0.1ml（含菌数不大于100cfu）（见上表）分别涂布于被检培养基和上一批检验并通过的培养基
中，在相应控制菌检查规定的培养温度及时间范围内培养。
被检培养基中生长的菌落在外观和指示反应上
与从此前已检测并批准的培养基批次所获得的菌落是相当的。
3参考文件
Current USP、BP、EP
附件及相关文件Attachment and related documents
R01 微生物计数固体培养基适用性检查记录
R02 微生物计数液体培养基适用性检查记录
R03 微生物控制菌培养基适用性检查记录
历史History
附件编号Attachment No.:R01 微生物计数固体培养基适用性检查记录
Growth promotion test of solid media for Microbial enumeration test
附件编号Attachment No.:R02
微生物计数液体培养基适用性检查记录
Growth promotion test of liquid media for Microbial enumeration test
附件编号Attachment No.:R03 微生物控制菌培养基适用性检查记录
Growth promotion test of media for Specified Microorganisms tests。