β-actin内参
内参Beta-actin和GAPDH使用的局限性
内参Beta-actin和GAPDH使用的局限性大部分科研新手接触到的第一个实验就是蛋白免疫印迹(Westernblot e Immunoblotting)。
做这个实验最基本的步骤就是内参的选择，但是各位小伙伴有没有想过你为什么要用Beta-actin，又或者是GAPDH。
我相信你一定听师兄师姐说过“都一样”，“哪个能和目的蛋白分开就用哪个”、要么就是“以前一直用的哪个所以就用哪个”。
那么小伙伴你们觉得，真的是这么随意选择的吗？今天我就跟大家一起探讨一下两大内参 Beta-actin 和 GAPDH 使用的局限性。
Beta-actin: 脊椎动物 actin 分为α、β 和γ 三种类型，α 型主要表达于心肌和横纹肌细胞中，β 及γ 型主要表达于非肌细胞中 (这句来自百度百科)。
那么Beta-actin 的局限性具体体现在哪里呢？Angela Dittmer 等人通过使用不同抗体配比浓度 Beta-actin (1:1000, 1:2000, or 1:4000, Cell Signaling #4967) 以及不同的总蛋白质量（3.8 μg、7.5 μg、15 μg）进行实验，结果发现：1:1000 稀释时，三种总蛋白浓度的条带区别不大；而当1:4000 稀释时，才能看到Beta-actin蛋白表达会随着总蛋白质量的升高而变化（Figure 1）。
之后作者采用不同蛋白质量（0.06 μg、0.12 μg、0.23 μg、0.47μg、0.94 μg、1.88 μg、3.75 μg、7.5 μg）继续进行实验，结果显示，当总蛋白超过一定质量时，Beta-actin 条带的灰度值将不会再随着总蛋白质量的升高而升高。
换而言之，你一个样品的总蛋白质量是1.88 μg，另一个样本的总蛋白质量是7.5 μg，结果两个样本的Beta-actin 条带一摸一样（Figure 2）[1]。
怎么样，意不意外，惊不惊喜。
β-Actin抗体-β-Actin内参抗体
β-Actin抗体推荐—高效价的Beta-Actin内参抗体Actin即肌动蛋白，是细胞的一种重要骨架蛋白。
Actin大致可分为六种，其中四种是不同肌肉组织特异性的，其余两种广泛分布于各种组织中，包括β-actin和γ-non-muscle actin。
β-actin作为内参是得到了公认的，这是针对大多数组织和细胞来说的，它广泛分布于细胞浆内，表达量非常丰富，其含量占所有细胞总蛋白的50%。
但是在一些少量特殊的情况下，如脂肪组织或细胞内，β-Actin的表达量就很少。
β-actin由375个氨基酸组成，分子量大小为42-43kDa左右。
如何选择合适的β-Actin抗体？内参抗体虽然选择较多，但是也需要遵循一定的原则，并契合实际的应用要求。
首先，我们需要考虑目的蛋白的大小，我们推荐内参要与检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上，因此你需要根据你目的检测蛋白的分子量来选择合适的内参，由于β-Actin的检测分子量大约在42kD，因此该内参抗体不是很适合用于检测38kD-48kD大小目标蛋白的WB实验中。
另外，虽然β-Actin是最合适的内参抗体之一，但是在某些条件下，一些因素也会导致样品间β-Actin含量的变化。
特别需要注意的是，在脂肪组织里，β-Actin的表达量非常低，不适合作为内参。
很耐用，质量也很稳定，购买后放了一年了，拿出来用效价还是很高，后来买了他们大包装的，直接定制的5ml，很推荐。
——北京工业大学生命科学与生物工程学院一客户另外，我们还需要考虑自己的需要，特别是实验应用上的需要。
一般来说，应用类型越多，在使用过程中的选择余地就越大，而小鼠源的单克隆抗体一般在特异性、稳定性以及效价都要优于多克隆抗体。
另外，抗体的效价也是考察该抗体性价比的重要方面，也即相当于实际应用时的稀释比率。
一个效价高的100μl β-Actin抗体（假如其WB检测的稀释比率是1:5000，最终使用液相当于500ml），要比效价低的1ml的β-Actin抗体（假如WB检测的稀释比率是1:200，最终使用液相当于2ml）性价比更高。
小鼠常用内参基因
小鼠常用内参基因
小鼠常用内参基因是进行实验研究时非常重要的工具，内参基因是一种用于标准化实验结果的参照基因，用于减少实验中因样本差异和反应效率的影响。
在小鼠实验中，常用的内参基因包括GAPDH、β-actin和18S rRNA等。
GAPDH（糖酵解酶）是一种广泛存在于细胞中的酶，参与细胞内的糖酵解代谢过程，同时也是常用的内参基因。
在小鼠实验中，GAPDH 的mRNA水平是相对稳定的，因此可以作为实验中的内参基因使用。
另一个常用的内参基因是β-actin（β-肌动蛋白），β-actin
是构成细胞骨架的主要成分之一，也是一种常用的内参基因。
在小鼠实验中，β-actin的mRNA水平也是相对稳定的，因此可以用来进行实验结果的标准化。
18S rRNA是小鼠细胞中的核糖体RNA，也是常用的内参基因之一。
18S rRNA的mRNA水平在细胞中是相对稳定的，因此可以用来进行实验结果的标准化。
除了上述几种常用的内参基因外，还有许多其他的内参基因可以用于小鼠实验中。
但无论选择哪种内参基因，都需要进行验证，确保其在实验条件下的稳定性和可靠性。
只有选择合适的内参基因，才能保证实验结果的准确性和可靠性。
- 1 -。
医学实验内参的选择
实验内参，即是在检测细胞内分子表达变化时选择的参照物，其在细胞内的表达相对恒定，在处理因素作用条件下不会发生表达改变的基因。
内参同样可以校正上样量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。
1、管家基因最普通的内参是内源性参照基因，也就是管家基因（持家基因，house keeping gene）。
管家基因是一类始终保持着低水平的甲基化并且一直处于活性转录状态的基因，高度保守并且在大多数情况下持续表达。
其表达水平受环境因素影响较小，而且是在个体各个生长阶段的大多数，或几乎全部组织中持续表达，或变化很小，因此常存在于生物细胞核的常染色质中。
它的表达只受启动序列或启动子与RNA 聚合酶相互作用的影响，而不受其他机制调节。
管家基因维持细胞最低限度功能所不可少的基因, 如编码组蛋白基因、编码核糖体蛋白基因、线粒体蛋白基因、糖酵解酶的基因等。
这类基因在所有类型的细胞中都进行表达，因为这些基因的产物对于维持细胞的基本结构和代谢功能是必不可少的。
部分人类管家基因列表2、内参基因选择的条件1、不存在假基因，以免基因组DNA的扩增；2、高度或中度表达，避免太高或太低的丰度；3、稳定表达于不同类型的细胞和组织中，表达量无明显差异；4、表达水平与细胞周期、活化等无关；5、不受外源性或内源性因素的影响。
3、不同管家基因在选择管家基因作为内参时，首先要按不同类型的分子选择正确的内参。
曾看到有人用检测miRNA时选择了GAPDH作为内参呢。
a、检测mRNA时的内参通常使用的是GAPDH、beta-actin、tubulinGAPHDGAPDH是糖酵解反应中的一个酶，由4个30－40kDa的亚基组成，分子量146kDa。
该酶基因为管家（house keeping）基因，几乎在所有组织中都高水平表达，在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的，且不受含有的部分识别位点、佛波脂等的诱导物质的影响而保持恒定，故被广泛用作抽提total RNA，poly(A)+ RNA，Western blot等实验操作的标准化的内参。
内参基因β-actin质粒标准品的构建
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内参基因βactin质粒标准品的构建
万方数据万方数据ｉ玉棘．等ｉ内参基因Ｂ．ａｃｔｉｎ质粒标推品的构建Ｒ＇］＇矽Ｒｗｗｗ．ｃＲｒｅＲ．ｏｒｇ标准品１．０ｕＬ、ｄｄＨ２０８．０ｕＬ。
ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒＲｅａｌＴｉｍｅＰＣＲ扩增仪扩增，反应条件为９５℃预变性５Ｓ，９５℃变性５Ｓ，６０℃退火／延伸２０Ｓ，共４０个循环。
主要观察指标：①ＲＮＡ质量检测结果。
②扩增的目的片段电泳结果。
③Ｂ．ａｃｔｉｎ基因测序结果。
④标准品的扩增情况。
设计、实施、评估者：实验设计为第二作者，干预实施为第一、三、四作者，结果评估为第五作者，均经过系统培训，未使用盲法评估。
．２结果２．１ＲＮＡ质量检测结果核酸分析仪检测抽提成人外周血总ＲＮＡ，Ａｖｏｏ／Ａ２舳比值为１．８－２．０，提示总ＲＮＡ质量较好。
取５ｕＬＲＮＡ经１．５％琼脂糖凝胶电泳，清晰显示３条带，提示总ＲＮＡ完整性较好，见图１。
２．２扩增的目的片段电泳结果扩增的ＰＣＲ产物５０ｕＬ上样１．５％琼脂糖平板电泳，出现１８６ｂｐ的目的片段，见图２。
１ＳＳＮ１６７３，８２２５ＣＮ２１—１５３９１ＲＣＯＤＥＮ：ＺＬＫＨＡＨ２．３Ｂ．ａｃｔｉｎ基因测序结果Ｂ．ａｃｔｉｎ质粒测序结果与原Ｂ．ａｃｔｉｎｇ］物序列用ｐｒｉｍｅｒｐｒｅｍｉｅｒ５软件比对，一致率为１００％，见图３。
２．４标准品的扩增将Ｃｔ值与不同浓度标准品的对数值拟合作图，得出的标准曲线显示，Ｃｔ值和模板起始浓度对数值之间具有较好的线性关系（舻＝１），见图４。
３讨论在实时荧光定量聚合酶链反应中，模板定量有两种９５０３万方数据万方数据内参基因β-actin质粒标准品的构建作者：王玉林， 史进方， 蔡惠芬， 樊一笋， 顾国浩， Wang Yu-lin， Shi Jin-fang， Cai Hui-fen， Fan Yi-sun， Gu Guo-hao作者单位：苏州大学附属第一医院检验科,江苏省临床免疫学实验室,江苏省苏州市,215006刊名：中国组织工程研究与临床康复英文刊名：JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH年，卷(期)：2008，12(48)被引用次数：0次1.Bustin SA.Benes V.Nolan T Quantitative real-time RT-PCR-a perspective 2005(03)2.Espy MJ.Uhl JR.Sloan LM Real-time PCR in clinical microbiology:applications for routine laboratory testing 2006(01)3.陈凤花.王琳.胡丽华实时荧光定量RT-PCR内参基因的选择[期刊论文]-临床检验杂志 2005(05)4.Révillion F.Pawlowski V.Hornez L Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase gene expression in human breast cancer 2000(08)5.Vila MR.Nicolas A.Morote J Increased glyceroldehyde-3-phosphate dehydrogenase expression in renal cell carcinoma identified by RNA-based,arbitrarily primed polymerase chain reaction 2000(01)6.Mori R.Wang Q.Danenberg KD Both beta-aetin and GAPDH are useful reference genes for normalization of quantitative RT-PCR in human FFPE tissue samples of prostate cancer 2008(14)7.ZhuG.ChangY.Zuo J Fudenine,aC-terminai truncated rat homologue of mouse prominin,is blood glucose-regulated and can up-regulate the expression of GAPDH 2001(04)8.Tricarico C.Pinzani P.Bianchi S Quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction:normalization to rRNA or single housekeeping genes is inappropriate for human tissue biopsies 2002(02)9.Lossos IS.Czerwinski DK.Wechser MA Optimization of quantitative real-time RT-PCR parameters for the study of lymphoid malignancies 2003(04)10.Ghosh T.Soni K.Scaria V MicroRNA-mediated up-regulation of an alternatively polyadenylatedvariant of the mouse cytoplasmic {beta}-actin gene 200811.Holford NC.Sandhu HS.Thakkar H Stability of beta-actin mRNA in plasma 20081.期刊论文陈可.王增产pcDNA3.1载体对内参基因表达影响分析-重庆医科大学学报2010,35(6)目的:研究转染质粒pcDNA3.1对内参基因表达影响差别,为今后在采用pcDNA3.1载体进行表达分析时内参基因的选择提供参考.方法:选用HepG2、HEK293、Hela、A549、QGY共5种细胞转染pcDNA3.1空载体质粒,转染后48 h提取细胞总RNA荧光定量PCR法比较内参基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphste dehydrogenase,GAPDH)、肌动蛋白(β-actin)、18sRNA表达水平差异,提取细胞总蛋白,检测GAPDH、β-actin表达水平差异.结果:5种细胞在转染质粒pcDNA3.1后,内参基因转录和蛋白表达均出现不同程度的下降,其中以β-actin下降最为明显,GAPDH及18sRNA在转录水平下降幅度小,且下降程度接近.结论:pcDNA3.1质粒转染造成基因表达非特异性抑制,其中对管家基因β-actin影响较大,因此在应用pcDNA3.1来源载体进行基因功能分析时,不推荐使用β-actin作为内参基因.2.期刊论文周瑞雪.蒙涛.孟海波.陈敦学.宾石玉.成嘉.符贵红.褚武英.张建社.ZHOU Rui-Xue.MENG Yao.MENGHai-Bo.CHENG Dun-Xue.BIN Shi-Yu.CHENG Jia.FU Gui-Hong.CHU Wu-Ying.ZHANG Jian-She鳜鱼基因表达转录分析中的内参选择比较-动物学研究2010,31(2)目前基因表达的转录分析多采用单一或多个看家基因作为内参柬校正目的基冈的表达量.该实验以鳜鱼6个不同组织和5个不同胚胎发育阶段为研究对象,应用实时荧光定量PCR技术,观察了GAPDH、β-actin和18SrRNA三个看家基因mRNA水平的表达情况.geNorm统计分析表明,胚胎发育阶段β-actin表达最为稳定;不同的组织样品间,GAPDH表达最为稳定:而18SrRNA的表达在不同的发育阶段不稳定.当利用多基因作为内参时,使用两个最稳定表达的看家基因即可对目的基因的表达进行准确校正.该结果证实了基因表达转录分析中内参基因选择的必要性,同时为鳜鱼等鱼类基凶表达分析时内参基因的选择提供有价值的参考.3.学位论文孙俊红大鼠肌肉挫伤后组织中时间相关基因表达的研究2009目的: 运用差异显示技术结合硝酸银染色筛选大鼠肌肉挫伤后与正常肌肉表达差异的基因，并通过Real—timePCR方法研究差异基因与损伤时间的关系，旨在寻找一种或几种与损伤相关的敏感基因，为法医学损伤时间推断提供科学、有效的指标。
PCR内参：选还是不选？,PCR内参,RT
PCR内参：选还是不选？,PCR内参,RT生物帮> 专题> 实验技术> 分子> PCR内参：选还是不选？导读：内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。
常用的PCR内参有GAPDH 、β- actin 、18sRNA、28sRNA 、B2M、ACTB、SDHA、HPRT1、ARBP内参基因等。
本专题就PCR实验中遇见的有关于内参的一些问题作出总结，以供读者参考。
PCR内参基因介绍GAPDH简介内参基因β-Actin简介实时荧光定量PCR 中内参基因的选择内参基因的概念和作用PCR内参基因介绍基因表达转录分析中内参基因的选择目前基因表达的转录分析多采用单一看家基因作为内参来校正目标基因的表达量.实验中以人肝癌BEL-7402细胞为研究对象，应用[详细]海带配子体18S rRNA 基因作为内参基因的应用通过基因克隆和序列测定,获得了海带( Laminaria japonica) 配子体的18S rRNA 基因序列,其长度为1 716bp ,GenBank 登录号为EU293553。
以蓝[详细]白纹伊蚊β2肌动蛋白基因片段作为基因表达内参目的获取白纹伊蚊β2肌动蛋白基因序列并探讨其作为基因表达内参照的作用。
方法根据昆虫β2肌动蛋白核苷酸序列[详细]常用的内参基因及其使用范围包括GAPDH 、β- actin(BETA-actin) 、18sRNA、28sRNA 、B2M、ACTB、SDHA、HPRT1、ARBP内参基因等。
[详细]常用的β-actin 引物序列常用的β-actin 引物序列[详细]RT-PCR常用引物序列引物应该用TE稀释。
oligo在酸性条件下是不稳定的，容易降解，如果用水溶解引物，无法保证pH值，如果合成引物纯化不好，造[详细]PCR内参常见问题汇总内参能跑出来但为何我的cDNA总是不稳定？我要做荧光定量试验，师姐做的定性，我能共用RT-PCR电泳照片有问题qPCR 目的基因与内参是不是要在同样体系里扩增斑马鱼的内参基因组怎么选择啊绝对定量需要用到内参基因吗选择内参基因的原则PCR内参常见问题汇总RT-PCR内参基因选择：除了β-actin还能用什么？实时定量PCR试验中，内参对于实验具有重要意义。
常见内参基因
β-A c t i nActin即“肌动蛋白”，是细胞的一种重要骨架蛋白。
同时Actin在细胞分泌、吞噬、β-Actin移动、胞质流动和胞质分离等过程中起重要作用。
Actin在不同物种之间高度保守，以至于很难获得较好的针对actin的抗血清。
Actin大致可分为六种，其中四种是不同肌肉组织特异性的，包括α-skeletalmuscleactin，α-cardiacmuscleactin，α-smoothmuscleactin，和γ-smoothmuscleactin；其余两种广泛分布于各种组织中，包括β-actin(β-non-muscle)和γ-non-muscleactin。
不同的actin之间同源性大于90%，但在N-terminal同源性仅50%-60%，因此N-terminal常被用作actin的抗原。
β-Actin是横纹肌肌纤维中的一种主要蛋白质成分，也是肌肉细丝及细胞骨架微丝的主要成分。
具有收缩功能，分布广泛。
β-Actin用途β-Actin是PCR常用的内参，β-Actin抗体是WesternBlot很好的内参指数。
内参即是内部参照（InternalControl），对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白。
它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。
常用的蛋白质内参有细胞骨架蛋白beta-actin或beta-tubulin和GAPDH（glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase）等。
因此β-Actin抗体、β-Tubulin抗体以及GAPDH抗体成为最常见的三个动物细胞内参抗体。
β-Actin作为内参是得到了公认的，这是针对大多数组织和细胞来说的，它广泛分布于细胞浆内，表达量非常丰富。
Beta-actin 由375个氨基酸组成，分子量大小为42-43kDa左右。
β-actin的蛋白水平通常不会发生改变，因此被广泛用于Western时上样量是否一致的参照，也常被用于免疫染色观察细胞的微丝结构。
β–actin内参蛋白
β–actin内参蛋白β-actin是一种内参蛋白，它在细胞内起着重要的作用。
内参蛋白是指在不同条件下，其表达水平不会发生变化的蛋白质。
因此，内参蛋白常常用于研究不同条件下基因表达水平的变化。
β-actin作为内参蛋白之一，其表达水平稳定，广泛分布于各种细胞中，因此是常用的内参蛋白之一。
β-actin是一种肌动蛋白家族成员，其分子量约为42kDa。
它是一种高度保守的蛋白质，在不同物种中的氨基酸序列相似度高达90%以上。
β-actin参与调节细胞的形态和运动，维持细胞骨架的稳定性，并参与细胞内运输和信号传导等生物学过程。
在细胞内，β-actin主要存在于细胞质和细胞膜中。
它是细胞骨架的主要组成部分之一，参与细胞的形态维持和细胞运动。
此外，β-actin还参与细胞内运输和信号传导等生物学过程。
例如，β-actin参与细胞内的RNA运输和局部蛋白合成，促进蛋白质的合成和分泌。
此外，β-actin还参与细胞内钙离子的调节和信号传导，对细胞的生长和分化具有重要作用。
在分子生物学研究中，β-actin常被用作内参蛋白。
内参蛋白是指在不同条件下其表达水平不会发生变化的蛋白质，它们可以用于研究不同条件下基因表达水平的变化。
例如，在药物治疗或疾病发生时，研究β-actin的表达水平变化可以判断药物治疗或疾病对基因表达的影响。
此外，β-actin的表达水平还可以用于比较不同细胞类型的基因表达水平，从而研究不同细胞类型的生物学特性。
在实验过程中，选择适当的内参蛋白是非常重要的。
一般来说，内参蛋白应该具备以下特点：在不同组织和细胞类型中表达量稳定；不受实验条件的影响，例如药物处理、细胞密度等；表达量适中，不过高也不过低。
β-actin作为内参蛋白，其表达水平稳定，广泛分布于各种细胞中，因此是常用的内参蛋白之一。
在实验中，常用的方法是通过Western blot或RT-qPCR等技术检测β-actin的表达水平。
Western blot是一种常用的蛋白质分析方法，可以用于检测蛋白质的表达水平和分子量。
β-actin内参
β-actin内参
β-Actin是PCR常用的内参，β-Actin抗体是Western Blot很好的内参指数。
内参即是内部参照（Internal Control），对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白。
它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。
常用的蛋白质内参有细胞骨架蛋白beta-actin或beta-tubulin 和GAPDH（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）等。
因此β-Actin抗体、β-Tubulin抗体以及GAPDH抗体成为最常见的三个动物细胞内参抗体。
β-Actin作为内参是得到了公认的，这是针对大多数组织和细胞来说的，它广泛分布于细胞浆内，表达量非常丰富。
Beta-actin由375个氨基酸组成，分子量大小为42-43kDa左右。
β-actin的蛋白水平通常不会发生改变，因此被广泛用
于Western时上样量是否一致的参照，也常被用于免疫染
色观察细胞的微丝结构。
在用作Western的参照时，
Actin抗体和Tubulin抗体的主要不同之处在于两者所识别
蛋白的分子量不同，这样可以选择合适的参照在同一块胶
同一张膜上实现同时检测目标蛋白和参照蛋白。
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β-Actin是PCR常用的内参，β-Actin抗体是Western Blot很好的内参指数。
内参即是内部参照（Internal Control），对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白。
它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。
常用的蛋白质内参有细胞骨架蛋白beta-actin或beta-tubulin和GAPDH（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）等。
因此β-Actin抗体、β-Tubulin抗体以及GAPDH抗体成为最常见的三个动物细胞内参抗体。
β-Actin作为内参是得到了公认的，这是针对大多数组织和细胞来说的，它广泛分布于细胞浆内，表达量非常丰富。
Beta-actin由375个氨基酸组成，分子量大小为42-43kDa左右。
β-actin的蛋白水平通常不会发生改变，因此被广泛用
于Western时上样量是否一致的参照，也常被用于免疫染
色观察细胞的微丝结构。
在用作Western的参照时，
Actin抗体和Tubulin抗体的主要不同之处在于两者所识别
蛋白的分子量不同，这样可以选择合适的参照在同一块胶
同一张膜上实现同时检测目标蛋白和参照蛋白。