植物组织培养的培养基
培养基配制
（2）无机微量(100倍液，配制500ml） 无机微量(100倍液，配制500ml） 倍液 500ml 药品名称 MnSO4 ·4H2O 4H ZnSO4 ·7H2O 7H CuSO4 ·5H2O 5H H3BO3 Na2MoO4 ·2H2O 2 KI CoCl2· 6H2O 配方用量mg/L 扩大50倍称量mg 50倍称量 配方用量mg/L 扩大50倍称量mg 1150 22.3 8.6 0.025 6.2 0.25 0.83 0.025 430 1.25 310 12. 12.5 41. 41.5 1.25 定容于500ml 定容于500ml 蒸馏水中。 蒸馏水中。每 升培养基吸此 液10ml
四、实验步骤
1、接种前的准备：如实验一准备的培养基等； 接种室的准备（超净台的准备） 2 2、培养材料表面灭菌：洗涤、清理；（此处 开始在超净台上操作）75%酒精浸泡30秒， 倒出酒精；0.1%升汞5-8 min，倒出升汞； 无菌水洗涤3-5次，无菌水浸泡备用。
四、实验步骤
3、接种：取出叶片置于培养皿中的滤纸上， 吸取水分，剪去被升汞杀死的叶片边缘，将 叶片剪成适当大小（3-5mm见方），接种到 适当培养基中。重新包扎好瓶口，写好标签 （时间、材料等） 4、培养观察：置于培养室或培养箱中培养， 温度25度左右，光照16小时，照度20003000lux。第一周注意观察污染情况，随时 清理污染的培养瓶，记录污染率及生长情况。
实验三 月季的快繁
一、实验目的：对月季茎段进行快繁 ，掌握 利用茎段作为外植体进行无性繁殖的方法 二、实验用品： 1、仪器用具：超净工作台、接种器具（实验 一已灭菌）酒精灯、酒精棉球 2、试剂：实验一准备的培养基、0.1%升汞、 75%酒精、吐温、无菌水 三、实验材料：植物茎段（月季）
植物组织培养培养基及其配制
四天然复合物-其成分比较复杂，大多含氨基酸、激素、-酶等一些复杂化合物。它对细胞和组-织的增殖与分化有明显 促进作用-但对器官的分化作用不明显。它的成分-大多不清楚，所以一般应尽量避免使用。
1椰乳是椰子的液体胚乳。它是使用最多、效果最大的一种天-然复合物。一般使用浓度在10%一20%，与其果实成 度及产地-关系也很大。它在愈伤组织和细胞培养中有促进作用。在马铃薯-茎尖分生组织和草莓微茎尖培养中起明显的 进作用，但茎尖组-织的大小若超过1nun时，椰乳就不发生作用。-2香蕉用量为150-200ml/L。用黄熟 小香蕉，加入培养基后-变为紫色。对H值的缓冲作用大。主要在兰花的组织培养中应用，-对发育有促进作用。-3马 薯potato去掉皮和芽后，加水煮30min,再经过过滤，取-其滤液使用。用量为150一200g/L。对p 值缓冲作用也大。添-加后可得到健壮的植株。-4水解酪蛋白为蛋白质的水解物，主要成分为氨基酸，使用浓度-为1 0一200mg/L。受酸和酶的作用易分解，使用时要注意。-5其他酵母提取液YE0.01%-0.05%,主要 分为氨基酸和维-生素类；麦芽提取液0.01%0.5%、苹果和番茄的果汁、黄瓜-的果实、未熟玉米的胚乳等。遇 较稳定，大多在培养困难时使-用，有时有效。
二、培养基的成分-水、无机盐、有机物、天然复合物、-植物激素、培养体的支持材料、抗生素、-活性炭等。
一水-是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过-程的介质和溶媒。它是生命活动过程中不可缺-少的物质-配制培 基母液时要用蒸馏水，以保持母液及-培养基成分的精确性，防止贮藏过程发霉变质-大规模生产时可用自来水。但在少 研究上尽-量用蒸馏水，以防成分的变化引起不良效果。
微量元素指小于0.5mmol/L的元素，Fe,B,Mn,-Zn、Cu,Mo,-Co等-铁是一些氧化酶、细胞 素氧化酶、过氧化氢酶-等的组成成分；是叶绿素形成的必要条件。对胚-的形成、芽的分化和幼苗转绿有促进作用-供 物：鳌合铁FeSO4·7H,0+Na2一EDTA在-制做培养基时不用Fe2SO43,-和FeCl,因其在H值5.2以上，易形成FeOH田3的不溶性沉淀-B,Mn,Zn,Cu,Mo,Co等：也是植物组织培-养中不 缺少的元素，缺少这些物质会导致生长、-发育异常现象
植物组织培养的培养基
★植物组织培养培养基的主要成分1.无机营养物：无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成，大量元素主要包括氮、磷、钾、钙、镁和硫六种，氮源通常有硝态氮或铵态氮，但在培养基中用硝态氮的较多，也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。
磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。
钾是培养基中主要的阳离子，在近代的培养基中，其数量有逐渐提高的趋势。
而钙、钠、镁的需要则较少。
培养基所需的钠和氯化物，由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。
微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁,这些元素有的对生命活动的某个过程十分有用，有的对蛋白质或酶的生物活性十分重要，有的是参与某些生物过程的调节。
培养基中的铁离子，大多以螯合铁的形式存在，即FeSO4与Na2—EDTA（螯合剂）的混合。
2.碳源：培养的植物组织或细胞，它们的光合作用较弱。
因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。
培养基中的碳水化合物通常是蔗糖或D-葡萄糖，用量通常为2%-4%，高者可达5%，亦可用市售的白糖所代替，但一般应增加用量，而且最好用比较固定的厂家生产的产品，以保证实验的稳定性。
3.有机营养成分：包括人工合成或天然的有机附加物（包括维生素，氨基酸及其它有机物质等）。
最常用的有酪朊水解物(水解乳蛋白、水解酪蛋白CH)、酵母提取物、玉米胚乳、麦芽浸出物、西红柿汁、椰子汁(CM)及各种氨基酸如甘氨酸（氨基乙酸）等。
维生素：在培养基中加入维生素，常有利于外植体的发育。
培养基中的维生素属于B族维生素，其中效果最佳的有硫氨素（维生素B1）、盐酸吡哆醇（维生素B6）和维生素H（生物素）、泛酸钙等、肌醇（环己六醇）、烟酸。
在部分培养基中还添加维生素BX（氨酰苯甲酸）、维生素C（抗坏血酸）、维生素E（生育酚）、、维生素B12（氰钴胺酸）、维生素BC（叶酸）、维生素B2（核黄素）和氯化胆碱等维生素。
这些可能对某些植物或植物的某些代谢过程有重要作用，如肌醇主要以磷酸肌醇和磷脂酰肌醇的形式参与由Ca介导的信号转导。
植物组织培养MS培养基配方
植物组织培养MS培养基配方MS培养基主要包括两部分：无机盐和有机物。
无机盐部分的配方如下：1.氮源：氮源通常由硝酸铵（NH4NO3）、硝酸钾（KNO3）和硫酸铵（（NH4）2SO4）组成。
氮源的浓度通常为20-30mM。
2.磷酸盐：磷酸盐通常由二氢二钠磷酸盐（NaH2PO4）组成，浓度为10mM。
3.钠盐：MS培养基中含有钠盐，通常由硝酸钠（NaNO3）和硝酸钾（KNO3）组成。
钙盐的浓度为2.0mM，钾盐的浓度为1.0mM。
4.钠盐：MS培养基中含有钠盐，通常由硝酸钠（NaNO3）和硝酸钾（KNO3）组成。
钙盐的浓度为2.0mM，钾盐的浓度为1.0mM。
5.硫酸镁：硫酸镁（MgSO4）的浓度为1.0mM。
6.磷酸铵铁：磷酸铵铁（FeSO4·(NH4)2SO4）的浓度为27.8μM。
7.各种微量元素：包括锌、铜、锰、硼、钼、钴和镍等微量元素。
这些微量元素的浓度通常在微摩尔（μM）级别。
有机物部分的配方如下：1.蔗糖：蔗糖是植物培养基中最常用的碳源，浓度通常为30g/L。
2. 维生素：通常使用的维生素有二硝基地巴泼甲素（2,4-D）和吲哚-3-乙酸（IAA）。
它们的浓度通常在0.1-2.0 mg/L之间。
3. 激素：常用的激素包括植物生长素（BA）和乙烯利（2,4-D）。
它们的浓度通常在1.0-10.0 mg/L之间。
4.混合物：还可以加入一些有机物混合物，如胆固醇、烟酸和核酸酸等。
值得注意的是，这只是MS培养基的一个基本配方，根据具体的研究目的和植物种类的不同，还可以对该配方进行一些调整和优化。
总结起来，MS培养基是一种常用的植物组织培养基，主要用于植物生长和增殖。
其配方包括无机盐和有机物两部分，无机盐包括氮源、磷酸盐、钙盐、镁盐、磷酸铵铁和微量元素等；有机物包括蔗糖、维生素和激素等。
通过适当调整这些配方的浓度和比例，可以实现不同植物的生长和增殖需求。
植物组织培养培养基及其配制
（四）天然复合物
• 其成分比较复杂，大多含氨基酸、激素、
酶等一些复杂化合物。它对细胞和组 织的增殖与分化有明显的促进作用，
于双子叶植物特别是木本植物。
• (3) White培养基 1943年，White，培养番茄根尖。 • 特点：无机盐数量较低，适于生根培养。
（养4。）N6培养基 1974年，朱至清等，水稻等禾谷类作物花药培
广特泛点应：用成于分小较简麦单、，水K稻N及O其3和他（植N物H4的）花2S药O4培含养量和高其。他在组国织内培已 养。
种代谢活动，对生长、分化等有很好的促 进作用。
• V活B力l(盐有酸重硫要胺作素用)。：对愈伤组织的产生和生
• VB6(盐酸吡哆醇)：能促进根的生长。 • Vpp(烟酸)：与植物代谢和胚的发育有一定
关系。
• Vc（抗坏血酸）：有防止组织变褐的作用。 (酚类物质-醌)
一般用量：0．1—1．0mg／L。有时用量 较高。有时还使用生物素、叶酸、VB12等。
提供能量，而且也促进对N的吸收，增加蛋白质在植物体中的积 累。
• (3)K • 作用：对碳水化合物合成、转移、以及氮素代
谢等有密切关系。一般为1—3mg／L为好。 • 供应物质：KCI、KN03等盐类提供。
• (4)Mg、S和Ca • Mg-是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂；
S-是含S氨基酸和蛋白质的组成成分。 • Ca-是构成细胞壁的一种成分，Ca对细胞分裂、
常用的培养基及特点如下：
• (1) MS培养基 1962年，Murashige和Skoog，培养烟草细胞。 • 特点：无机盐和离子浓度较高，为较稳定的平衡溶液；硝酸
植物组织培养培养基
水的作用
1.水是细胞原生质的主要组成成分； 2.水是重要代谢过程的反应物质和产物； 3.细胞分裂及伸长都需要水分； 4.水是植物物质吸收和运输及生化反应的良好溶剂； 5.水能使植物保持固有姿态，有利于光合作用和传粉； 6.调节植物体周围的温、湿度，维持植物体温稳定。 总之，水是植物原生质体的组成成分，是一切代谢过程的 介质和溶液，是生命活动过程中不可缺少的物质。
MS培养基特点
MS固体培养基可用来诱导愈伤组织，或用于胚、 茎段、茎尖及花药培养，MS液体培养基用于细 胞悬浮培养,都能获得明显成功。
B5培养基
1968年由Galmborg等为培养大豆根细胞而设计 的。
B5培养基的特点—高硝态氮培养基
◆较含有较高的硝酸钾,较低的铵和较高VB1，这可 能对不少培养物的生长有抑制作用。 ◆实践表明有些植物在B5培养基上生长更适宜，如 南洋杉、葡萄及豆科与十字花科植物等的培养。
五个桑树品种芽再生的比较
White培养基——低盐培养基
是1943年由White为培养番茄根尖而设计的。 1963年又作了改良，称作White改良培养基，提 高了MeSO4的浓度和增加了硼素。 ◆ 无机盐量较低；有机成分含量相对也较低。 ◆ 适合生根培养、胚胎培养等。
SH培养基—高硝态氮培养基
◆ 特点与B5相似，硫酸铵改用磷酸二氢铵。 ◆ 无机盐浓度较高。
常见培养基及特点
MS培养基：1962年由Murashige和Skoog为 烟草细胞而设计的。
MS培养基特点
特点是无机盐和离子浓度较高（钾盐、铁盐、硝
酸盐含量均较高），特别是硝酸盐含量较其他培 养基高，离子平衡性好，具有较强的缓冲能力,是 一种较稳定的平衡溶液。 微量元素种类齐全，浓度高；培养基营养丰富， 在一般的培养中，无需额外加入氨基酸、酪蛋白 水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。 养分的数量和比例较合适，可满足植物的营养和 生理需要。 能加速愈伤组织和培养物生长。广泛用于植物的 器官、花药、细胞和原生质体培养效果良好。有 些培养基是由它演变而来。
植物组培培养基的成分
植物组培培养基的成分培养基是人工配制的，满足不同材料生长，繁殖或积累代谢产物的营养物质。
在离体培养条件下，不同种类植物对营养的要求不同，甚至同一种植物不同部位的组织以及不同培养阶段对营养要求也不相同。
筛选合适的培养基是植物组织培养极其重要的内容，是决定成败的关键因素之一。
大多数植物组织培养基的主要成分是无机营养物质（大量营养元素和微量营养元素）、碳源、有机添加物、植物生长调节剂和凝胶剂。
一些组织可以生长在简单的培养基上，这些培养基只含无机盐和可利用的碳源（蔗糖），但大多数组织必须在培养基中添加维生素、氨基酸和生长物质，而且经常还将一些复合的营养物质加入到培养基中，这种由“化学定义”的化合物组成的培养基称为“合成”培养基。
人们已设计了许多培养基用于特殊组织和器官的培养。
怀特培养基是最早的植物组织培养基之一，最初作为根培养的培养基。
为了诱导培养组织器官发生和再生植株，广泛使用含有大量无机盐成分的MS（Murashige和Skoog，1962）和LS(Linsmaier和Skoog，1965)培养基。
原本为细胞悬液或愈伤组织培养而设计的B5培养基，经过改良后，被证实有利于原生质体培养。
同时，B5培养基也被用于诱导原生质体再生植株。
尽管Nitshch(1969)为花药培养设计的培养基仍然使用频繁，但另一个称为N6的培养基，专门用于禾谷类花药培养和其他组织培养。
类似的，N6培养基越来越多地用于大豆、红三叶草和其他豆科植物的培养。
该培养基营养成分促进胚性细胞和原生质体再生细胞快速生长。
使用这些培养基成功的原因很可能是营养元素的比例和浓度基本上满足不同培养体系中细胞或组织生长和分化的最适需要。
植物组织培养基中无机和有机成分的浓度用质量浓度（mg/L或ppm，但现在习惯用mg/L）或物质的量浓度(mol/L)表示。
按照国际植物生理学协会的推荐，应该用mol/L表示大量营养元素和有机营养成分浓度，用μmol/L表示微量营养元素、激素、维生素和有机成分浓度。
植物组织培养基的配制—培养基种类及成分
有时应用水解乳蛋白或水解酪蛋白，它们是含有约20种氨基酸的混合物， 用量在10～1000mg／L之间。由于它们营养丰富，极易引起污染。
• 天然有机添加物
其成分比较复杂，大多含氨基酸、激素、酶等一些复杂化合物。它对细胞和 组织的增殖与分化有明显的促进作用，但对器官的分化作用不明显。
（四）、生长调节物质
• 是植物新陈代谢中产生的天然化合物，它能以极微小的量影响到植物的细胞 分化、分裂、发育，影响到植物的形态建成、开花、结实、成熟、脱落、衰 老和休眠以及萌发等许许多多的生理生化活动。
• 在培养基的各成分中，植物激素是培养基的关键物质，对植物组织培养起着 决定性作用
• 常用的有生长素类和细胞分裂素类。
锰：参与植物的光合、呼吸代谢过程，影响根系生长。 锌：是各种酶的构成要素，能增强光合作用效率，参与生长
素的代谢，促进生殖器官发育和提高抗逆性。 铜：有促进离体根生长的作用。 硼 ：能促进生长器官的正常发育，参与蛋白质合成或糖类运输。 钼：参与 氮素代谢
（三）、有机营养成分
• 主要包括： 各种维生素、肌醇、氨基酸和天然有机添加物。
维生素具有热易变性，易在高温下降解，可进行过滤灭菌
• 肌醇
使用浓度一般为l00mg／L，适当使用肌醇，能促进愈伤 组织的生长以及胚状体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、 分化有促进作用，对细胞壁的形成也有作用。
• 氨基酸
是很好的有机氮源，是蛋白质的组成成分，可直接被细胞吸收利用，对外 植体的芽、根、胚状体的生长、分化均有良好的促进作用。
• 维生素
主要有盐酸硫胺素（VB1）、盐酸吡哆醇(VB6)、烟酸（VB3）、抗坏血酸 （VC）、泛酸钙、生物素（VB7）、叶酸（VB11）、钴胺素、VB2等。一般 用量为0.1～1.0mg／L。
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植物组织培养的培养基中，需要添加糖类作为碳源物质，因此糖类是影响植物组织培养成功与否的关键之一。
高中生物教材中明确指出，植物组织培养的培养基中添加的糖类是蔗糖。
那么为什么不添加葡萄糖呢？很多资料上解释为蔗糖较葡萄糖便宜，易被植物细胞吸收。
其实并非如此。
之所以以蔗糖作为碳源，主要有三个方面的原因：
（1）同样作为碳源为植物细胞提供能量来源，蔗糖较葡萄糖能更好地调节培养基内的渗透压。
配制相同质量分数的培养基，蔗糖形成的渗透压要明显低于葡萄糖，因此若采用葡萄糖作为碳源，易使植物细胞脱水而生长不良。
同时，植物细胞吸收蔗糖的速率要明显慢于吸收葡萄糖的速率，所以蔗糖形成的渗透压可相对长期的保持稳定。
（2）植物组织培养过程中，要时刻注意防止培养基受到微生物的污染。
微生物生长所需的碳源最常用的是葡萄糖，一般很少利用蔗糖。
因此，采用蔗糖作为培养基的碳源，可一定程度上减少微生物的污染。
（3）诱导作用。
在培养基成分中，增加生长素的浓度，导致木质部形成，增加蔗糖浓度则导致韧皮部形成。
当生长素水平恒定时，2％蔗糖使分化出的全部是木质部，4％蔗糖使分化出的几乎全部是韧皮部，3％蔗糖则可以分化出两者。
所以，生长素和蔗糖浓度决定愈伤组织中维管束的类型与数量。
因此，在植物组培中要选用蔗糖而不选用葡萄糖。
通过细胞膜内外的液体的浓度差来调节
当细胞膜内的浓度小于细胞膜外的时候蔗糖救能进入细胞中了
植物细胞培养中最常用的培养基的碳源是蔗糖，已知葡萄糖和果糖也能使某些植物生长得很好。
植物细胞可以分解蔗糖，蔗糖是由一分子果糖和一分子葡萄糖组成的，蔗糖是可以直接进入细胞的，蔗糖跨质膜从质外体进入细胞是由载体介导并需要消耗能量的质子-蔗糖共运输机制进行的，另外，植物能够利用的某些其他形式的碳源有麦芽糖、半乳糖、甘露糖和乳糖等。
葡萄糖更不稳定，培养基需添加葡萄糖一般都在灭菌后再兑换。
实在要添加葡萄糖那么灭菌温度一般控制在108~110左右，120度灭出来的就有一定程度的碳化了。
所以用蔗糖更简单
动物细胞只能吸收葡萄糖，二糖蔗糖是无法吸收的。
以蔗糖为植物培养基碳源有两个原因:
1.抑制杂菌生长.细菌等不能直接以蔗糖为碳源,故可起抑制其生长的作用
2.蔗糖被植物细胞利用机理目还无定论.主要有以下两个学说(1)植物细胞先以次级主动运输的方式在细胞内外形成质子梯度,然后蔗糖就会利用这个梯度被吸收进细胞.
(2).植物的细胞壁中含有能分解蔗糖的相关酶,蔗糖先在细胞膜外被分解为单糖,然后这些单糖再以主动运输的方式进入细胞,从而被细胞利用.。