荧光偏振与荧光偏振免疫分析法
荧光偏振与荧光偏振免疫分析法
荧光偏振与荧光偏振免疫分析法【摘要】本文简单介绍了荧光偏振原理和荧光偏振免疫分析（FPIA）的原理，并就荧光偏振及FPIA在环境、食品安全、医疗卫生和蛋白质研究等方面的实际应用进行了简单介绍和举例。
【关键词】荧光偏振免疫分析应用从1852年，Stokes首次提出“荧光（fluorescence）”一词，人们对荧光现象的研究就不断深入，并发展出了荧光分析技术，荧光分析是指利用一些物质被电磁辐射激发后产生反映该物质特性的荧光而对该物质进行定性定量分析的方法。
随着相关理论和仪器的发展，荧光分析的手段和技术水平也不断发展，现在荧光分析以其高灵敏度、高选择性、低样品用量、方法简便等诸多优点，在化学、医药、环境、信息、生命科学等领域被人们广泛使用。
基于荧光偏振发展的荧光偏振免疫分析法是荧光分析中一个重要的组成部分。
一、荧光偏振原理荧光偏振的原理最初是1920年由Perrin建立的。
溶液中荧光分子受偏振光激发，如激发时分子保持静止，则发射的荧光仍有偏振性，且如分子分子旋转或翻转，发射荧光的偏振平面会不同于激发光偏振平面。
虽然实际测量常得消偏振的荧光，但荧光偏振技术有着重要应用[1]。
荧光偏振光强度P定义为：P=（I⊥-I∥）/（I⊥+I∥）其中，I⊥和I∥表示荧光子被激发后，发射光在垂直和水平方向上的强度。
对于荧光偏振仪器，检测到的荧光强度：P=（Ivv-G×Ivh）/（Ivv+G×Ivh）式中，下标分别代表起偏器和检偏器方向，v为垂直方向，h为水平方向，G 为校正因子，G=Ihv/Ihh。
荧光偏振光强度P与测定体系中各因素的关系可用Perrin方程表示:（1/P-1/3）=1/P0+（1/P0+1/3）（RT/V）(τ/η)其中，P0为极限荧光偏振光强度，R为气体常数，T为绝对温度，V为摩尔分子体积，τ为荧光寿命，η为溶液的粘度。
由上式知当溶液的温度和粘度都固定时，P值主要取决于荧光子的分子体积。
免疫荧光介绍
免疫荧光介绍免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。
它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。
很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位.它是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团，再用这种荧光抗体(或抗原）作为探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体)。
利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位。
一、基本原理及特点：免疫荧光技术是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗体，再用这种荧光抗体（或抗原)作为探针检测组织或细胞内的相应抗原(或抗体）。
在组织或细胞内形成的抗原抗体复合物上含有标记的荧光素,利用荧光显微镜观察标本,荧光素受外来激发光的照射而发生明亮的荧光(黄绿色或橘红色）,可以看见荧光所在的组织细胞，从而确定抗原或抗体的性质、定位，以及利用定量技术测定含量。
该技术的主要特点是：特异性强、敏感性高、速度快.主要缺点是：非特异性染色问题尚未完全解决,结果判定的客观性不足，技术程序也还比较复杂。
荧光免疫法按反应体系及定量方法不同，还可进一步分做若干种.与放射免疫法相比，荧光免疫法无放射性污染，并且大多操作简便,便于推广。
国外生产的TDM用试剂盒，有相当一部分即属于此类，并且还有专供TDM荧光偏振免疫分析用的自动分析仪生产。
由于一般荧光测定中的本底较高等问题，荧光免疫技术用于定量测定有一定困难。
新发展了几种特殊的荧光免疫测定，与酶免疫测定和放射免疫分析一样，在临床检验中应用。
免疫荧光实验的主要步骤包括细胞片制备、固定及通透（或称为透化）、封闭、抗体孵育及荧光检测等.细胞片制备（通俗的说法是细胞爬片)是免疫荧光实验的第一步，细胞片的质量对实验的成败至关重要，原因很简单,如果发生细胞掉片，一切都无从谈起.这一步关键的是玻片（Slides or Coverslips）的处理以及细胞的活力，有人根据成功经验总结出许多有益的细节或小窍门,非常值得借鉴。
临床检验主管检验师临床免疫学和免疫检验-荧光免疫技术 复习资料汇编
临床检验主管检验师临床免疫学和免疫检验-荧光免疫技术复习资料汇编一、概述荧光物质在吸收激发光的能量后，使原来处于基态的电子跃迁到激发态，当其回复至基态时，激发态的电子以发射光的形式释放出能量，这种发射光称为荧光。
（一）荧光荧光物质在吸收激发光的能量后，使原来处于基态的电子跃迁到激发态，当其回复至基态时，激发态的电子以发射光的形式释放出能量，这种发射光称为荧光。
荧光物质（二）其他荧光物质铕（Eu3＋）为三价稀土镧系元素，其螯合物经激发后也可发射特征性的荧光，激发光波长范围宽，发射光波长范围窄，荧光衰变时间长，最适合用于时间分辨荧光免疫测定。
二、荧光抗体技术荧光抗体技术是以荧光素标记抗体，与切片中组织或细胞抗原反应，经洗涤分离后，在荧光显微镜下观察呈现特异性荧光的抗原抗体复合物及其部位。
荧光抗体技术包括荧光抗体制备、标本制作、荧光抗体染色和荧光显微镜检查等内容。
（一）荧光抗体的制备1.抗体要求：用于标记的抗体应该具有高特异性和高亲和力。
2.荧光素要求：①与蛋白质结合后不易解离，而未结合者易于清除；②荧光效率高；③荧光色泽与背景组织对比鲜明；④不影响蛋白质原有的生化与免疫性质；⑤标记方法简单、安全无毒；⑥与蛋白质的结合物稳定，易于保存。
3.抗体的荧光素标记：搅拌法和透析法。
4.荧光素标记抗体的纯化：去除未结合的游离的荧光素。
可采用透析法或层析分离法。
5.荧光抗体的鉴定：荧光素与蛋白质的结合比率（组织切片的荧光抗体染色以F/P＝1.5为宜，用于活细胞染色以F/P＝2.4为宜）、抗体效价、抗体特异性。
6.荧光抗体的保存：小量分装，-20℃冻存可保存1～2年。
真空干燥后可长期保存。
稀释后的抗体不宜长时间保存，在4℃可保存1～3天。
（二）标本的制作临床标本主要有组织、细胞和细菌三大类。
制作标本要力求保持抗原的完整性、切片要求尽量薄、干扰物质要充分洗去、安全。
（三）荧光抗体染色与结果判断1.直接法用特异荧光抗体直接滴加于标本上，使之与抗原发生特异性结合。
荧光偏振分析方法
荧光偏振分析方法偏振荧光光谱是最常见的一种分析方法。
它是通过测量样品在不同偏振光激发下的荧光发射光谱来获得样品的偏振特性。
实验中，可以使用偏振片对入射光进行偏振，然后收集样品的荧光发射光，再通过偏振分析系统分析荧光光的偏振状态。
通过比较不同偏振光下的荧光发射强度和偏振度，可以得到样品的荧光偏振特性，并进一步推断样品的结构和性质。
荧光偏振成像是一种非常重要且有潜力的分析方法。
它可以提供样品内部的空间分辨荧光偏振特性信息。
在实验中，可以使用荧光显微镜和偏振成像系统对样品进行观察和分析。
通过在不同偏振方向下收集样品的荧光图像，可以获得样品的荧光偏振信息，并进一步研究样品的分子排列和组装状态。
荧光偏振分析方法在生物科学、材料科学和化学等领域具有广泛的应用。
在生物科学中，荧光偏振分析可以用于研究生物大分子（如蛋白质和核酸）的折叠和结构变化。
在材料科学中，它可以用来研究液晶材料和光电材料的结构和性质。
在化学中，它可以用来研究化学反应的动力学和机理。
尽管荧光偏振分析方法具有重要的研究价值，但在实际应用中仍面临一些挑战。
一方面，荧光偏振分析需要高度精密的仪器设备和复杂的数据处理方法，对实验条件和样品质量都有一定的要求。
另一方面，荧光偏振分析只能提供间接的结构和性质信息，需要通过与其他实验方法（如核磁共振和X射线衍射）相结合使用，以得到更全面和准确的结果。
综上所述，荧光偏振分析方法是一种重要的研究工具，可以提供样品的结构和性质信息。
它在生物科学、材料科学和化学等领域有广泛的应用前景。
虽然面临一些挑战，但随着技术的不断发展，荧光偏振分析方法将在科学研究和应用中发挥越来越重要的作用。
传统检测方法
传统检测方法光谱法紫外可见分光光度法(UV)紫外-可见分光光度法是在190~800nm波长范围内测定物质的吸光度。
当光穿过被测物质溶液时,物质对光的吸收程度随光的波长不同而变化。
因此,通过测定物质在不同波长处的吸光度,并绘制其吸光度与波长的关系图即得被测物质的吸收光谱。
物质的吸收光谱具有与其结构相关的特征性。
因此,可以通过特定波长范围内样品的光谱与对照光谱的比较,或通过确定最大吸收波长,测量两个特定波长处的吸收比值而鉴别物质。
此方法快速,简便,重现性好。
可用来检测重金属铅。
原子发射光谱法(AES)AES是利用物质在热激发或电激发下,每种元素的原子或离子发射特征光谱来判断物质的组成,而进行元素的定性与定量分析的。
耿广善等[1]用电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-AES)测定土壤中的重金属,此检测中铅的仪器检出限为0.0218μg/mL,方法检出限为0.0299μg/mL,工作曲线拟合系数达0.9995,相对标准偏差2.0%,回收率为104.4%。
原子吸收光谱法(AAS)原子吸收光谱是基于待测元素的基态原子蒸汽对其特征谱线的吸收,由特征谱线的特征性和谱线被减弱的程度对待测元素进行定性定量分析的一种仪器分析的方法。
原子吸收光谱法该法具有检出限低,准确度高,选择性好,分析速度快,应用范围广等优点。
王文光等[2]采用原子吸收光谱法对葵花籽样品中的铅进行检测,在0~80μg/L之间方法线性关系良好,相关系数为0.9995,RSD在1.75%~4.21%之间,回收率在90.0%~98.6%之间。
原子荧光光谱法(AFS)AFS的基本原理是基态原子吸收合适的特定频率的辐射而被激发至高能态,而后激发过程中以光辐射的形式发射出特征波长的荧光。
原子荧光光谱分析法具有很高的灵敏度,校正曲线的线性范围宽,能进行多元素同时测定。
曹军等[3]研究了微波消解-原子荧光光谱法连续测定铜精矿中铅的最佳实验条件,提出了原子荧光光谱仪连续测定铜精矿中铅的方法。
免疫分析方法在毒品检测中的应用与进展
免疫分析方法在毒品检测中的应用与进展摘要：文章综述了免疫分析方法在毒品检测中的应用及其发展，并分别对放射免疫法、酶标免疫分析法、荧光偏振免疫分析法、免疫胶体金技术在毒品检测中的应用进行了论述。
关键词：毒品检测；免疫分析方法毒品问题已成为全世界面临的重大社会问题之一，常见的毒品包括安非他明、甲基安非他明、吗啡、盐海洛因、蒂芭因、那可汀、罂粟碱和可待因。
有关于毒品检测的问题迫切需要解决。
在毒品分析的过程中，相应分析检测技术得到了极大的发展，各种检测技术的应用为吸毒者的认定、戒毒治疗过程的监测以及以后的监督提供了严格的科学依据。
而国内外陆续报道关于毒品的多种检测方法，多是需要依赖一些价格昂贵的检测仪，这就限制了毒品犯罪案件的现场快速检验。
而免疫学检测方法恰能在这方面实现对毒品的检测。
本文对免疫分析方法在毒品检测中的应用与进展做一简要综述。
1免疫分析技术在毒品检测中的发展免疫分析技术按其在毒品分析中的应用和发展历经了3个阶段。
酶联免疫吸附法是第一代免疫检测方法。
它采用聚苯乙烯微孔板作为包被抗原或抗体的介质。
检测时步骤冗长，试剂繁多（包括抗原母液、稀释液、洗涤母液、底物液、显色液等），洗涤时微孔板须经反复甩打方可除去孔内液体，且操作不方便，容易污染周围环境且实验的重复性较差。
第二代是免疫诊断技术（渗滤法），出现于20世纪80年代末，它以斑点免疫印渍为原理，用印渍纸代替96孔聚苯乙烯微孔板固定抗原或抗体，用叠放于印渍纸下打的吸水纸吸引洗涤液。
其法灵敏度和特异性与酶联免疫法相似，但抗体用量少，且操作较简便、快速。
但由于免疫诊断的试剂仍存在着需附加几种试剂的不足，所以在20世纪90年代又出现了将免疫亲和技术、印渍术和薄层层析技术结合运用，用胶体金法研制的一种更加简便的免疫层析诊断试纸条。
使用时，只需把试纸条下端直接插入样本溶液中，2～5 min即可判断结果。
此法是目前检测毒品的最先进的免疫学方法，具有灵敏、特异、简便、快速、试剂稳定等优点，在毒品检测中有着广泛的应用前景。
荧光偏振免疫法
荧光偏振免疫法荧光偏振免疫法是一种常用的生物分析技术，可以用于检测和分析样品中的特定分子。
本文将介绍荧光偏振免疫法的原理、应用以及优缺点。
一、原理荧光偏振免疫法是基于荧光技术和免疫学原理的结合。
它利用特异性抗体与目标分子结合的能力，通过荧光标记的抗体来检测和定量目标分子。
荧光偏振免疫法的原理可以简述为以下几个步骤：首先，将样品中的目标分子与特异性抗体进行反应，形成抗原-抗体复合物。
然后，通过加入荧光标记的二抗或酶标记的二抗，使荧光物质或酶物质与抗原-抗体复合物结合。
最后，通过荧光偏振光谱仪或酶标仪来检测和测量荧光强度或酶的活性，进而定量目标分子的含量。
二、应用荧光偏振免疫法在生物医学研究和临床诊断中有着广泛的应用。
以下是一些常见的应用领域：1. 肿瘤标记物检测：荧光偏振免疫法可以检测和定量血清中的肿瘤标记物，如癌胚抗原（CEA）、前列腺特异性抗原（PSA）等，用于早期癌症的筛查和诊断。
2. 免疫组织化学：荧光偏振免疫法可以用于定位和定量组织中的特定蛋白或细胞表面标记物，如免疫组织化学染色和免疫组织化学定位。
3. 免疫荧光显微镜：荧光偏振免疫法可以用于细胞和组织的观察，通过荧光偏振显微镜观察荧光信号的方向和强度，可以获得更多的信息，如蛋白的空间分布、蛋白的定位等。
4. 荧光免疫分析：荧光偏振免疫法可以用于定量检测样品中的特定分子，如激素、细胞因子等。
通过测量荧光强度和方向，可以实现高灵敏度和高特异性的分析。
三、优缺点荧光偏振免疫法具有以下优点：1. 高灵敏度：荧光偏振光谱仪可以测量荧光信号的强度和方向，提高了测量的灵敏度。
2. 高特异性：荧光偏振免疫法利用特异性抗体与目标分子结合，具有高特异性，可以准确检测目标分子。
3. 高通量：荧光偏振免疫法可以同时检测多个目标分子，提高了检测效率。
4. 定量分析：荧光偏振免疫法可以通过测量荧光强度或酶活性来定量目标分子的含量。
然而，荧光偏振免疫法也存在一些缺点：1. 荧光标记的抗体易受到光照和温度的影响，可能导致荧光信号的变化。
免疫荧光技术(医学相关)
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目前常用于标记抗体的荧光素有以下几种：
异硫氰酸荧光 (fluorescein isothiocyanate, FITC) FITC纯品为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水和酒精 溶剂。有两种异构体，其中异构体Ⅰ型在效率、稳定性与蛋白质结合力等方面都更优良。 FITC分子量为389.4，最大吸收光波长为490～495nm，最大发射光波长为520～530nm， 呈现明亮的黄绿色荧光。FITC在冷暗干燥处可保存多年，是目前应用最广泛的荧光素。其 主要优点是人眼对黄绿色较为敏感，通常切片标本中的绿色荧光少于红色。
免疫荧光技术
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技术原理
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实验流程
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免疫荧光技术(immunofluorescence)
技术原理
将免疫学方法(抗原抗体特异结合)与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在 细胞内分布的方法。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出，荧光素受激 发光的照射而发出明亮的荧光（黄绿色或桔红色），可以看见荧光所在的细胞或 组织，利用定量技术测定含量，从而可对抗原进行细胞定性和定位分析。
自发荧光：组织和细胞中某些成分受激发时可发出荧光，即自发荧光。
漂白：荧光物质受激发时，其发射荧光的能力逐渐下降并最终丧失，即漂白现象。
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多激光器系统（多通道激光检测）：
在可见光范围内使用 多谱线氩离子激光器，发射波长为457nm、488nm和514nm的蓝绿光， 氦氖绿HeNe（G）激光器提供发射波长为543nm的绿光， 氦氖红HeNe（R）激光器发射波长为633nm的红光， 新的405nm的半导体激光器的出现可以提供近紫外谱线。
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荧光偏振与荧光偏振免疫分析法【摘要】本文简单介绍了荧光偏振原理和荧光偏振免疫分析（FPIA）的原理，并就荧光偏振及FPIA在环境、食品安全、医疗卫生和蛋白质研究等方面的实际应用进行了简单介绍和举例。
【关键词】荧光偏振免疫分析应用从1852年，Stokes首次提出“荧光（fluorescence）”一词，人们对荧光现象的研究就不断深入，并发展出了荧光分析技术，荧光分析是指利用一些物质被电磁辐射激发后产生反映该物质特性的荧光而对该物质进行定性定量分析的方法。
随着相关理论和仪器的发展，荧光分析的手段和技术水平也不断发展，现在荧光分析以其高灵敏度、高选择性、低样品用量、方法简便等诸多优点，在化学、医药、环境、信息、生命科学等领域被人们广泛使用。
基于荧光偏振发展的荧光偏振免疫分析法是荧光分析中一个重要的组成部分。
一、荧光偏振原理荧光偏振的原理最初是1920年由Perrin建立的。
溶液中荧光分子受偏振光激发，如激发时分子保持静止，则发射的荧光仍有偏振性，且如分子分子旋转或翻转，发射荧光的偏振平面会不同于激发光偏振平面。
虽然实际测量常得消偏振的荧光，但荧光偏振技术有着重要应用[1]。
荧光偏振光强度P定义为：P=（I⊥-I∥）/（I⊥+I∥）其中，I⊥和I∥表示荧光子被激发后，发射光在垂直和水平方向上的强度。
对于荧光偏振仪器，检测到的荧光强度：P=（I vv-G×I vh）/（I vv+G×I vh）式中，下标分别代表起偏器和检偏器方向，v为垂直方向，h为水平方向，G为校正因子，G=I hv/I hh。
荧光偏振光强度P与测定体系中各因素的关系可用Perrin方程表示:（1/P-1/3）=1/P0+（1/P0+1/3）（RT/V）(τ/η)其中，P0为极限荧光偏振光强度，R为气体常数，T为绝对温度，V 为摩尔分子体积，τ为荧光寿命，η为溶液的粘度。
由上式知当溶液的温度和粘度都固定时，P值主要取决于荧光子的分子体积。
荧光偏振光强度与荧光物质受激发时分子转动速度成反比，所以小分子物质在溶液中旋转速度快，P值较小；大分子物质在溶液中旋转速度较慢，P值较大[2]。
二、荧光偏振免疫技术原理荧光偏振免疫方法(fluorescence polarization immunoassay, FPIA)依据荧光标记抗原和其抗原抗体结合物之间荧光偏振程度的差异，用竞争性方法直接测量溶液中小分子的含量[2]。
在反应体系内加入未标记抗原（待测抗原）和一定量用荧光素标记的小分子抗原，使二者与特异性大分子抗体竞争结合。
当待测抗原浓度高时，大部分抗体被其结合，荧光素标记的抗原多呈游离的小分子状态，小分子在液相中转动速度较快，测量到的荧光偏振程度也较低。
反之，大部分荧光素标记抗原与抗体结合，形成大分子的抗原抗体复合物，检测到的荧光偏振程度也较高。
荧光偏振程度与待测抗原浓度呈反比关系，利用这一原理，可以精确地得知样品中待测抗原的相应含量。
FPIA还可以对抗体进行检测。
三、荧光偏振与荧光免疫偏振技术的应用由相关原理可以看出，荧光偏振和FPIA技术很适合研究分子间相互作用，可用于评价pH、温度、盐浓度等对分子结合的影响，同时这项技术低毒、灵敏、快速、样品可重复利用等优势，被广泛应用于环境监测、食品安全监督、疾病诊疗和化学、生命科学的相关分析中。
1、环境监测FPIA在环境监测中有着重要应用，具有高灵敏度，高精确度，检验过程简单等优势。
例如，丁草胺丁草胺，即2-氯-N-(2,6-二乙基苯基)-N-(丁氧甲基)乙酰胺，是水稻等农作物种植中常用的高效除草剂，丁草胺进入水体会造成污染，尤其对鱼类呈高毒性，所以对丁草胺的检测十分重要。
而传统的各种检测技术都存在灵敏度不佳、耗时、成本高等缺点，相比下FPIA则显示出巨大优势。
Hongtao Lei等人用荧光标记物3-(2-((butoxymethyl)(2,6-diethylphenyl)amino)-2-oxoethyl- thio)-N-(6-(3-(3',6'-dihydroxy-3-oxo-3H-spiro[isobenzofuran -1,9'-xanthene]-5-y1) thioureido)hexylpropanamide (Tracer C) 等对丁草胺进行荧光偏振免疫分析，取得了良好结果[3]。
2、食品安全在食品安全检验方面，FPIA技术也展示了同样的优势：灵敏、快速。
奥比沙星（Orbifloxacin, ORB），即1-环丙基-5,6,8-三氟-7-(顺式-3,5-二甲基哌嗪)-1,4-二氢-4-氧代喹啉-3-羧酸，是第三代喹诺酮类抗菌药物，对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均具有较好的抑制作用，一直被作为重要的兽药而广泛使用，在食品中残留的ORB的检测也显得十分必要。
Tiejun Mi，Xiao Liang等人使用荧光标记物LOM-BDF对牛奶中的奥比沙星进行FPIA分析，检测限可达3.9ng/ml，IC50达24.5ng/ml（Z’=0.81）[4]。
另外，粮食及其制品中的真菌霉素也可以使用FPIA进行检验，尤其适合大量粮食样品的快速检验。
但FPIA在这方面的进一步应用还需要解决许多问题，比如相比酶联免疫分析（enzymelink immunosorbent assay，ELISA）等传统技术，其灵敏度仍有待提高，ORB需要发展专门的仪器和试剂等，但FPIA技术展现出的前景是十分乐观的[5]。
在其它农药、兽药及一些小分子，如阿特拉津、本菌灵等的检验中FPIA发挥着巨大作用，有实力发展为该领域的主要技术手段之一[6]。
3、医疗卫生医疗诊断中常常需要对生物样本中某一或某几个物质进行定性或定量的检测，FPIA技术便可大显身手。
例如，凝血酶的检测在临床和基础研究中都有重要意义。
蔡晓坤，徐顺清等人使用荧光标记的凝血酶配适分子G-15D，在37℃，PBS缓冲液条件下对人血样本中的凝血酶进行了直接检测，阈值可达0.09IU/ml[7]。
对药物在人体中代谢的研究也可以用到FPIA技术。
Erik Mannaert和Paul Daenens就利用FPIA检测尿液样本中N-Desmethylzopiclone含量，在相关实验条件下，检测限可至30ng/ml，展现了实际应用的广阔前景[8]。
4、蛋白质研究前文已经提到荧光偏振及FPIA技术适合研究分子间相互作用，由此，在对蛋白质的结构、运动、变性，以及蛋白质小分子抑制剂和相关药物靶点筛选等进行研究的过程中，人们也将目光投向这一检测方法[9]、[10]。
荧光偏振与荧光偏振免疫技术是既成熟又有着巨大发展空间的检测技术，FPIA技术有其灵敏、快速、样品量少等优点，但在实际应用中仍有荧光标记物不易找、仪器要求较高等诸多问题。
这也体现了在仪器分析中，没有哪一种方法是完美和万能的，根据实际需要选择合适手段进行检测才能扬长避短，得到良好的实验结果。
而不断改进、完善已有技术，发展新的技术是仪器分析领域始终不变的主题。
【参考文献】[1]许金钩，王本尊.荧光分析法[M].3版.北京科学出版社，2006.[2]朱广华，郑洪，鞠先.荧光偏振免疫分析技术的研究进展[J].分析化学,2004 32(1):102-106.[3]Hongtao Lei, Gang Xue. Fluorescence polariza as a tool for the detection of a widely used herbicide, butachlor, in polluted waters[J].Analytical Methods，2011,3,2334.[4]Tiejun Mi，Xiao Liang.. Development and optimization of a fluorescence polarization immunoassay for orbifloxacin in milk[J].Analytical Methods，2014,6,3849.[5]王战辉，米铁军，沈建忠.荧光偏振免疫分析检测粮食及其制品中的真菌毒素研究进展[J].中国农业科学，2012，45(23):4862-4872.[6]王战辉，张素霞，沈建忠，Sergei A Eremin.荧光偏振免疫分析在农药和兽药残留检测中的研究进展[J].光谱学与光谱分析，2007 27(11):2299-2306.[7]蔡晓坤，徐顺清，张志仁，刘志伟，鲁文红.一种基于适配分子的偏振荧光检测法[J].分析化学，2002 30(3):352-354.[8]Erik Mannaert，Paul Daenens. Development of a Fluorescence Polarization Immunoassay for the Routine Detection of N-Desmethylzopiclone in Urine Samples. Analyst，1996，121，857.[9]Tina L.Mann，Ulrich J.Krull. Fluorescence polarization spectroscopy in protein analysis[J].Analyst, 2003 128:313-317.[10]Markus Hafner, Elena Vianini. Displacement of protein bound aptamers with small molecules screened by fluorescence polarization[J].Nature，2008 3(4):579-587。