兰花组织培养精编版
兰花组织培养
一、兰花无性快速繁殖 二、 快速繁殖的影响因素 三、兰花脱毒植株的鉴定
一、兰花无性快速繁殖
原球茎发生体系是兰花唯一有效的大规模无性繁殖方法。该方法是 1960年法国学者G.Morel开创的，促使了兰花工业的形成，获得巨 大的经济效益。 （一）培养程序 外植体 诱导形成原球茎 原球茎大量增殖 分化为小 植株 生根壮苗培养 温室栽培 室外栽培 （二）取材和处理 兰花茎尖、叶片、花器官、种子等都可作为外植体进行培养，诱 导再生植株。茎尖是细胞分裂最活跃的部分，是较容易诱导，培养 成功率高的部位。在兰花茎尖培养时，首先从生长健壮的植株上切 取10cm长的茎尖，去掉苞叶，用加有适量洗涤剂的自来水洗净， 在超净工作台上用75％酒精消毒数秒，无菌水冲洗4~5次，再用5 ％漂白粉消毒约10min或用4~5min，无菌水冲洗4~5次后备用。 在叶片培养中，应选择带有嫩叶的花梗。
三、兰花脱毒植株的鉴定
目前，国内外检测兰花病毒主要采用生物学检测、电 镜检测、血清学检测和分子生物学检测等方法。例如：三 抗夹心酶联免疫吸附法（three antibodies sandwichELISA TAS-ELISA)检测建兰花叶病毒（CymMV）、双抗 夹心酶联免疫吸附法(double antibodies sandwich-ELISA DAS-ELISA)检测齿兰环斑病毒（ORSV）;或用抗建兰花 叶病毒（CymMV）的单克隆抗体，建立检测蝴蝶兰病样 的免疫斑点法（dot-ELISA）和组织印迹法（tissue blotELISA）
6.
苗的生长培养
较大的兰花个体才便于移栽，新形成的小苗必须移入较大的培养 容器内，生长到 一定大小时才能移栽，一般是将1cm的幼苗转移 到壮苗培养基上培养到10cm米高，方可移栽。
兰花组织培养完整版本
❖ 2． 清热凉血，养阴润肺，治干咳久嗽， 肺咯血。
❖ 3． 疏肝解郁，调和气血，治头晕目弦， 神经衰弱。
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生物学特性
❖ 1.热带兰不同属的兰花对温度要求不同，分 高温型、稍高温型、低温型三种类型。
❖ 2.地生兰比附生兰要求更多的水分，春夏要 求水分充足。
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外植体(培养部位)
种类
新芽芽尖 休眠芽
茎的隐芽
特点
成功率高，但分离技术高 成活率一般，分离技术简单， 易污染， 难分离，成活率同休眠芽
花梗
繁殖效率差，成本高
兰属植物的组织培养以茎尖为最
常用的材料。 精品课件
采取茎尖
❖ 茎尖是分生组织最为活跃的生长点。 ❖ 选择健壮植株，将外层的叶和鞘叶剥去，把
❖ 同样，再行分割；重新培养。在几个月之内， 就会获得大量的原球体。
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分化培养
❖ 把切割的原球体放在液体培养基中， 放在旋转培养床上进行旋转培养。
❖ 当其小块组织稍为长大后，转接在分 化的培养基上，让它分化根和芽。
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试管苗移植
❖ 当原球体组织分化根和芽，逐渐长大之后， 就成为幼小植株。
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兰 花 欣 赏
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兰 花 欣 赏
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兰花花语
兰花的花语：淡泊,高雅 。 兰花的品种有很多，据不完全统计， 全世界有2万多个兰花的品种，其中比 较出名的有蝴蝶兰、兰花、蕙兰等。 其实，它们各自有各自的花语，但是， 兰花总的花语就是淡泊，高雅
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兰花
❖ 兰花属兰科，是单子叶植物，为多年生草本，亦叫 胡姬花。由于地生兰大部分品种原产中国，因此兰 花又称中国兰，绍兴是兰花的故乡。
兰花组培实验报告
兰花组培实验报告1. 实验目的通过组织培养技术，实现兰花的无性繁殖，加速繁殖速度，提高兰花的经济价值。
2. 实验材料与方法2.1 材料- 真兰属兰花种苗- 高葡萄糖培养基- 植物生长调节剂- 消毒酒精、消毒器具2.2 方法1. 准备工作台和培养瓶，对工作台和培养瓶进行消毒处理。
2. 从健康的兰花种苗上剪取茎秆，长度约为2-3厘米。
3. 将茎秆表皮剥去，取内部的茎骨，切成1-2毫米长的组织块。
4. 将组织块置于消毒的高葡萄糖培养基上，加入适量植物生长调节剂。
5. 将培养瓶密封并置于暗处，温度控制在25-28摄氏度，光照强度为2000-3000勒克斯。
6. 观察培养过程，通常在3-4周后，组织块开始呈现出小苗的形态。
7. 将小苗转移到含有较低濃度植物生长调节剂的培养基上，继续培养。
3. 实验结果与分析经过3个月的培养，成功培育出大量的兰花幼苗。
观察发现，这些幼苗生长良好，根系发达，叶片翠绿。
与传统的兰花繁殖方法相比，组织培养技术显著地加快了兰花的繁殖速度。
利用组织培养技术可以同时繁殖多个兰花品种，加大了兰花生产的规模。
4. 实验总结与展望本次实验通过兰花的组织培养技术，成功实现了兰花的无性繁殖。
组织培养技术具有繁殖速度快、突破品种限制、容易获得大批量无病毒种苗等优势。
未来，可以进一步研究优化培养基的配方，进一步提高兰花幼苗的成活率和生长速度。
此外，也可以尝试引入基因工程技术，通过基因转化的方式培育抗病虫害、提高花期持久性等优良特性的兰花品种。
5. 参考文献[1] 王明. 组织培养技术在兰花生产中的应用[J]. 浙江农业科学, 2006(4):79-80.[2] 谢丽. 兰花组织培养技术的研究进展[J]. 南兰科技, 2012(6): 42-43.。
兰花组培(1)
春兰组织培养春兰是地生兰常见的原种，多产于温带，主要分布在中国，是中国的特产。
以江苏、浙江所产春兰为贵，福建、广东、四川、云南、安徽、江西、甘肃、台湾等地亦有出产。
兰花是中国的名花之一，有悠久的栽培历史，多进行盆栽，作为室内观赏用，开花时有特别幽雅的香气，花期2到4月，为室内布置的佳品，其根、叶、花均可入药。
1植物名称春兰（大富贵）2材料带1-2个叶原基的茎原锥（中间部位侧芽成活率也高），茎尖适用于复轴生长类型的兰花3培养条件（1）茎原锥诱导培养基：1/2MS+6-BA 3.0mg/L+NAA0.5mg/L（2）丛生芽诱导及增殖培养基：MS+NAA 0.2mg/L +6-BA2.0 +椰汁100g/L，（3）壮苗培养基：1/2MS培养基+6-BA 0.5+NAA0.05+活性炭2g/L+椰汁100g/L（4）生根培养基：3g/l花宝3号+IBA0.5g/L+2g/l活性炭以上培养基，蔗糖浓度（1），（2），（3）为2.0%，（4）为5.0%，琼脂7.0g/L,PH 5.3,培养温度（26±2）℃，连续光照12h/d，光照度为2000lx。
4生长与分化情况4.1 原球茎诱导培养将大约3cm长且生长健壮的幼芽从母株上采下，自来水冲洗1h，去掉外部叶片，先用75%酒精消毒30s，再用零点0.1%升汞溶液，消毒10min，无菌水冲洗6到8次。
用消毒滤纸吸干表面水分，接种到培养基（1）中。
4.2 丛生芽诱导培养与增殖培养：将获得的原球茎转接入新鲜培养基（2）中培养，20d时由原球茎上长出绿色丛生芽，将从生芽转入新鲜培养基（2）中继续培养，30d为一个继代增殖周期。
4.3 幼苗的生长与生根将丛生芽接到新鲜培养基（3）中，丛生芽逐渐长大成苗，将其切割成单个苗接入培养基（4）中进行生根培养。
最佳切割方式为掰开。
4.4 炼苗与移栽移栽时特别注意要提前将瓶盖打开。
让组培苗适应一下外界的环境，两天后再将小苗取出，洗净根部琼脂，载入湿润，但拧不出水的水苔中，不需盖膜保湿，保持环境温度20到25摄氏度即可成活率达90%，待新根长出后再浇水。
国兰的组织培养技术
FORESTRY AND ECOLOGY >花美湖南国兰的组织培养技术香独具四清（气清、色清、神清、韵清），具有高洁、清雅的特点。
兰科植物多数生长在温暖、湿润、通风、排水良好、有散射阳光的环境。
中国是兰属分布中心之一，已知的兰属植物有31种，占全球兰属的一半以上，以地生兰为主。
国兰是兰属中观赏价值较高的地生兰，其品种十分丰富，多达上千种，包括春兰、蕙兰、建兰、墨兰、寒兰等。
在20世纪以前，中国兰花主要是靠无性繁殖和到原产地采集野生种植物来供应市场。
目前我国产兰山区的兰花资源受到很大破坏，容易到达的地方兰花基本绝迹，只有在人迹罕到之处的深山才有零星分布。
兰花的繁殖可分为无性繁殖和有性繁殖两类。
无性繁殖又称营养繁殖，包括分株繁殖、扦插繁殖等传统然条件下萌发率极低。
兰花种子以随采收随播种为好。
兰花种子的播种繁殖可分为有菌播种法和无菌播种法两种。
有菌播种法是指兰花种子在自然环境中与兰菌共生也称共生萌发。
真菌能促进种子的萌发，是由于菌丝为种子内的胚和基质构建了一个通道，菌丝吸收营养输送给种子，促进了种子的糖异生及营养物质的积累。
无菌播种法是利用组织培养的方法，为兰花种子提供所需要的营养和适宜的环境，促使其萌发的一种方法。
大部分兰花种子可通过无菌萌发方式发芽，在特定培养基上种子萌发生长。
兰花的组织培养始于20世纪60年代。
1960年, 法国人莫雷尔就利用大花蕙兰的茎尖，将其分生组织诱导形成原球茎并分化成植株，为实现兰花生产的工厂化奠定了基础。
我国在兰花组织培养方面起步较晚，但发展快，不少研究者都有研究组织培养，取得了很多成果。
目前常用组织培养方法批量生产小苗，特别是热带兰花的组织培养快速繁殖比较成功。
植物组织培养技术的应用和推广对其快速繁殖、品种复壮、加快优良品种的培育、挽救珍稀濒危种类等方面起到了重要作用，对国兰的快速繁殖和资源保存均具有重要意义。
下面介绍一下国兰的组织培养技术：外植体的处理。
一般而言，凡是生长健壮、具有活性的细胞组织都可以作为外植体。
兰花组织培养(课堂PPT)
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2）将震荡器或是试管中的花梗取出，置入无菌水中，摇晃瓶身， 可重覆此一动作2～3次，但需取出花梗，置入?有无菌水的新瓶中， 藉此洗净漂白水，洗净后，以镊子取出花梗，以酒精浓度75%的酒 精棉花擦拭花梗，以梗芽生长点向下，酒精棉花擦拭由上而下单一 方向擦拭，切勿以来回的方式擦拭梗芽生长点。
使用花梗生长点来诱发出新芽体，待新芽体诱发出后，将其切
下，移植至含有激素等药物的培养基瓶中，由于移植后的芽体受到 药物的刺激，造成新的芽体从旧芽体被大量的诱发出来，也会有从 被诱发出来的新芽体再配诱发芽体出来，当这些芽体数量多到需要 移植时，就需要进行 母瓶移植至子瓶的操作，由于这些芽体都是相 连的，移植时需以刀子将相连的芽体一个一个切分开来种植， 所以， 也有人将其称为切片苗。
观赏植物 组织培养之兰花
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一、兰花组织培养常用于： 1、无性系快速繁殖； 2、茎尖培养脱毒； 3、培育新品种； 4、种质资源的保存； 5、次生代谢产物的生产。。
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2
二、常见组织培养的兰花种类
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三、兰花工业
兰科（Orchidaceae）是单子叶植物中最大的一个科，约有 450个属20000余种，在世界各地均有分布，特别是热带、 亚热带的一些国家和地区。兰花花色鲜艳，形态各异，珍 奇名贵，品位幽雅，价格昂贵，备受人们的喜爱。传统的 兰花栽培方法主要靠分株繁殖，繁殖速度慢。
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• 贮藏和运输困难，易带病毒，严重阻碍了在世界范围内的 流通。用兰花的种子也可以进行繁殖，但发芽率及低，仅 5%左右，很难满足生产需要。组织培养用于兰花的快繁 已取得了快速进展。从20世界60年代开始用茎尖培养方 法繁殖兰花，到70年代就基本解决了兰属组织培养快速 繁殖的关键技术，并很快发展成为从20世界60年代开始 用茎尖培养方法繁殖兰花，到70年代就基本解决了兰属 组织培养快速繁殖的关键技术，并很快发展成为现代化兰 花工业。目前已有进70个属数百种兰花可用组织培养方 法进行繁殖，兰花生产工厂也分布在世界各地。
兰花的组织培养
兰花的组织培养张婷婷20081070175摘要: 对兰花的组织培养进行了综述。
着重阐述了兰花组织培养中组织培养程序、外植体的选择、培养基与激素的选择、培养方式和培养条件的研究进展情况。
关键词: 兰花; 组织培养; 外植体; 培养基兰科(Orchidaceae) 是有花植物中最大的一个科, 约有800 属, 25 000～30 000 种, 广泛分布于全球各地。
兰花是整个兰科植物的总称, 常见的有春兰、蕙兰、建兰、蝴蝶兰、石斛、卡特兰, 文心等, 其花具有极高的欣赏价值和经济价值。
有些种类如天麻等则具有极高的药用价值。
兰花的组织培养始于20世纪60 年代。
Morel[1]采用大花蕙兰的茎尖, 在含有细胞分裂素的KC 培养基上进行培养, 茎尖分生组织膨大形成原球茎, 并分化出根和叶, 首次获得兰花无病毒小植株。
目前大约已有60 余属数百种兰花可以用组织培养的方法进行繁殖。
1 组织培养程序与外植体选择种子、胚形态建成途径用于兰花离体繁殖的外植体材料很多, 通常选择有新芽、幼叶、茎尖等。
茎尖是最早用于兰花快速繁殖的外植体。
大花蕙兰(Cymbidium) 、嘉德丽亚兰(Cattleya) 、石斛兰(Dendrobim) 蝴蝶兰( Phalaeanopsis) 、文心兰(Oncidium) 等首先在茎尖培养中取得成功[2]。
侧芽的应用也很广泛, 一般认为带1～2 个叶原基的茎原椎成活率高, 中间部位侧芽成活率及生长率较高。
但因为有的兰花只生一茎,摘取茎尖就有可能丧失母株, 因此, 人们在更大范围内寻找外植体。
用叶片作外植体可以减轻或避免对母株的伤害。
大多数以叶片为外植体的成功报道是取试管苗的幼叶为培养材料, 从成熟植株上取幼叶为外植体培养成功的报道不多。
有研究指出: 蝴蝶兰试管苗幼叶原球茎发生率可达90%, 而成熟叶对诱导反应极弱[。
这可能是由于成熟植物组织向培养基中释放高浓度的抑制生长物质, 严重影响兰花组织的存活。
兰花组织培养
结语：
目前蝴蝶兰组培快繁大多以植物幼嫩部分为外植体 ,而 采用成苗的器官或组织诱导脱化分化的研究很少、难 度很大 。
现今关于蝴蝶兰的组培快繁和栽培生理的研究较多 ,有 关新品种的选育研究很少 。 我国栽培的蝴蝶兰新品种主要依靠从国外引进 ,市场上 多为陈旧品种。 兰花的组培有很重要的现实意义
兰花幼叶比老叶的诱导率高、叶中部比叶顶和叶基部 的诱导率高,叶片不切割比切割的诱导率高,诱导培养条 件为培养温度25℃、光强500 lx ,每天光照 16h。 黑 暗或低温(20℃ )不能诱导原球茎。
研究认为6 - BA是决定叶片原球茎发生的主要因子,无 附加 6 - BA 则诱导不出原球茎;6 - BA浓度为1～3 mg/ L 时叶片原球茎诱导率低,叶片上出现的原球茎颗 粒少,但个体比较大;随着6 - BA浓度的升高,原球茎诱 导率也升高,但个体较小,其中以6 - BA 5mg/ L 的诱 导效果为佳,浓度太高容易出现玻璃化现象导致原球茎 变褐死亡。
多 ,萌发越快 ,生长越好。
蝴蝶兰无菌播种培养的培养条件一般为温度22～28 ℃,光照强度1 000～3 000 lx ,每天光照10～18 h。
（2）培养基和激素要求： 采用合适的培养基是蝴蝶兰种子萌发的关键 ,一般MS 培养基即可使种子萌发 ,但萌发所需的时间、萌发率及 小苗长势不同。不同的蝴蝶兰品种对培养基的要求也 不同。 培养基中添加适量的椰子汁、蛋白胨、香蕉汁等营养 物质,对蝴蝶兰种子萌发和生长都有明显的促进作用; 添加适量活性炭可防止褐变,对幼苗成长有利,但对种子 萌发无明显影响。
不定芽增殖研究
通过蝴蝶兰的茎尖、幼苗等外植体直接诱导不定芽的 产生 ,再切割丛生芽进行繁殖是蝴蝶兰快速繁殖的一种 新途径。不定芽增殖率较低 ,但能保持母株性状 ,操作 也比较容易 ,成功率高。 研究报道在较低温度(24 ℃)和较高浓度 6 - BA 中蝴 蝶兰花梗侧芽能诱导产生花葶 ,将花葶切片成 1～2 mm 后接种在 MS +NAA 0. 5 mg/ L + 6 - BA 5 mg/ L 培养基上可诱导不定芽 ,培养基添加的糖浓度 以 15 g/ L 为宜。
兰花组织培养
兰花组织培养1、As orchids in roots, stems, leaves, pedicels, and seed tissue culture efficiency are reviewed, tissue culture of orchid is introduced in the culture medium, plant hormones, sucrose and other physical and chemical factors and progress of external conditions.1、就目前兰花在根、茎、叶、花梗和种子等方面的组织培养效率作简要综述,介绍了兰花组织培养在培养基、植物激素、蔗糖等理化因子及外界条件方面的研究进展。
2、To promote the development of the orchid industry, from the orchids in vitro rapid propagation, the seeds germinate aseptic seedling, cross breeding, embryo culture and mutation breeding research, etc., are reviewed in this paper the application of plant tissue culture technique in the orchid breeding, and the orchid industry in China in the future was prospected.2、为促进兰花产业发展,从兰花的离体快速繁殖、种子无菌发芽育苗、杂交育种胚培养及诱变育种研究等方面,综述了植物组织培养技术在兰花繁育中的应用,并对未来我国兰花产业进行了展望。
3、On tissue culture of orchid is the history and progress are briefly reviewed, emphatically expounds the explantmaterials, culture medium, hormone factors such as external implant culture, the influence of the original bulb proliferation and bud differentiation, and introduces the orchid seed germination in vitro technology, orchid protoplast culture, protoplast fusion and gene engineering research progress3、对兰花组织培养的历史和进展作了扼要综述 .着重阐述了外植体取材、培养基、激素等因素对外植体培养、原球茎增殖及芽分化的影响 ,并介绍了兰花种子离体萌发技术、兰花原生质体培养、原生质体融合及基因工程的研究进展情况。
兰花组织培养及其应用
１９ ， ９２ 增殖方式 ） 包括诱导拟原球体 （ ｏｏｏｍｌ ｅ ｉｓ ＰＢ） ｉ ｅ ｐ ｔ ｒ－ｉ ｂｄｅ， ｓ（ ｈｉ ｒ ｃ ｋ ｏ Ｌ Ｉ ｓ ｔ
ａ． １９ Ｌｎ １８ 、以 芽 ｌ ９ ； ， ６ 及以 体增殖方式 行繁殖。以 银浸溃 ， ８ ｉ ９ ） 进 硝酸 花梗节
或添加于培养墓中，可降低蝴蝶兰花梗培养时的揭化，并可提高组织培养效率
花无菌 播种、 墓、 调节 糖类、 培养 生长 剂、 及其它因 对 子 蝴蝶兰 及文心兰 再生之
影响．
１前言 ．
台 湾南部为蝴蝶兰的原生地之一， 其它原生地分布于菲 律宾群岛、 澳洲、 新 几内 亚、印 马来西亚、 尼、 泰国、 越南、中国云南、四川、 海南岛等区 全球 域， 约有 ５ 个原生种。过去二十多年以 ０ 来，由于民间 趣味者的 栽培及育种， 加上水 墙温室 及新栽培技术的引 使台湾地区的 进， 蝴蝶兰生产形成一个重要产业， 其产 值约为每年 ３－０ ０４ 亿元台币 （ ２０） 李、 ０２．主要市 场在日 本、美国、中国大陆、 欧洲等国家。 蝴蝶兰之品 种种类 相当 主要由 多， 蝴蝶兰 Ｐａｓｎｐｉ 及该 属（ ｌｅｏｓ习、 ｈ 属与朵丽兰属（ ｒｔ ）杂交之属间杂种 （ ｒｔ ｎｐｉ 目 Ｄ ｉ ｏ ｉ ｓ Ｄ ｉ ｏｓｓ． 前蝴蝶兰盆花在 ｏ ｓ ｅ ） 荷兰 及美国盆花市场均已 跃居领先地位， 荷兰之蝴蝶兰 公司 更积极投入组织培养 量产及品 种选育； 而台湾在过去由 科研机构或大学 进行之蝴蝶兰相关研究， 着重 于开花调节 （ 李啤、 ９６ １８ ）及栽培管理技术， 组织培养或无菌播种及幼苗生长虽
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• 初代培养 • 无菌处理
• 继代培养（增殖培养）
壮苗培养
生根培养
炼苗（移栽驯化）
组培中可能出现的问题
• 污染
• 变异
• 玻璃化
• 褐化
• 黄化
蝴 蝶 兰 组 织 培 养
蝴蝶兰花梗生长点组织培养
使用花梗生长点来诱发出新芽体，待新芽体诱发出后，将其切 下，移植至含有激素等药物的培养基瓶中，由于移植后的芽体受到 药物的刺激，造成新的芽体从旧芽体被大量的诱发出来，也会有从 被诱发出来的新芽体再配诱发芽体出来，当这些芽体数量多到需要 移植时，就需要进行 母瓶移植至子瓶的操作，由于这些芽体都是相 连的，移植时需以刀子将相连的芽体一个一个切分开来种植， 所以， 也有人将其称为切片苗。
接种实验
一、接种准备工作 1、超净工作台开紫外灯照射10-20min送风 2、外植体消毒（继代培养采用已建立的无菌培
养物作为材料） 3、工具消毒 二、接种操作 1、用消毒工具、器皿，切取铁皮石斛幼茎段
2cm 2、接种环烧红，沾一下培养基 3、镊取茎段插于培养基中
• 茎段各的时诱期导时的间培在5养~1条1天件之间
IBA
BA
NAA
土豆汁
香蕉汁 IAA
生根培养基的设计 生根培养基
1/2MS+NAA0.2~0.5mg/L+香蕉汁20%+活性炭2.0%【pH值5.2~5.6】
取MS母液： IV25ml,5ml,5ml,5ml, 5ml; 激素母液： NAA2~5ml
蔗糖：30g 琼脂：6.8g 香蕉汁：200ml 活性炭：20g
继代培养基的设计 增殖培养基
MS+BA0.5ml+NAA0.2+土豆汁10%~20% 【pH值5.2~5.6】
取MS母液： IV50ml,5ml,5ml,5ml, 5ml; 激素母液： BA5ml,NAA2ml
蔗糖：30g 琼脂：6.8g 土豆汁150ml
增殖培养将建立的无菌系中的小苗转入增殖培养基中进行增殖 培养。增殖培养基以MS为基本培养基，添加不同浓度的生长 调节剂BA、NAA、IAA、IBA及土豆汁和香蕉汁等附加物。
铁皮石斛的组织培养技术路线 外植体 培养基
丛生芽
生根发育
完整植株
初代培养基的设计 诱导培养基
MS+BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖3%+琼脂6.8%【pH值5.2~5.6】
MS母液： I-V50ml,5ml,5ml,5ml 5ml。 激素母液：
BA10ml,NAA5ml
蔗糖：30g 琼脂：6.8g
1）将蝴蝶兰的花梗由植株上剪下，如果已开花的部份可以剪下?弃， 留下未开花的节，再将花梗裁剪适当长度，再将包覆在梗节生长点 外的苞片，小心的剥除，勿伤及生长点，置入超音波震荡器中，以 稀释的漂白水溶液消毒。如无震荡器时，可置入装有稀释过的漂白 水溶液的试管中，手动的大力摇晃试管，也可达到消毒的目的。
将切面为45度端插入培养基中
塞子消毒后塞住瓶口 瓶口处再以酒精灯消毒，覆盖上铝箔纸避免感染
成功长出新株体
消毒不彻底瓶内发霉
铁皮石斛的组织培养
铁皮石斛，为兰科多年生附生草本植物。生于海拔 达1600米的山地半阴湿的岩石上，喜温暖湿润气 候和半阴半阳的环境，不耐寒。一般均能耐－ 5℃的低温。石斛可分为黄草、金钗、马鞭等数 十种，铁皮石斛为石斛之极品，它因表皮呈铁绿 色而得名。
生根培养将丛生芽无菌操作切下单株放在 生根培养基中于适宜条件下培养，约1~2 周后即生根，以长成完整植株。
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外植体的选择
优选1年生铁皮石斛植株上生长健壮的茎段
1 接种小芽苗多易于在苗基部形成丛生芽。 2 苗的高度为1～2cm时,丛生芽增殖倍数最高数。 3 生长发育健壮苗优先
观赏植物 组织培养之兰花
一、兰花组织培养常用于： 1、无性系快速繁殖； 2、茎尖培养脱毒； 3、培育新品种； 4、种质资源的保存； 5、次生代谢产物的生产。。
二、常见组织培养的兰花种类
三、兰花工业
兰科（Orchidaceae）是单子叶植物中最大的一个科，约有 450个属20000余种，在世界各地均有分布，特别是热带、 亚热带的一些国家和地区。兰花花色鲜艳，形态各异，珍 奇名贵，品位幽雅，价格昂贵，备受人们的喜爱。传统的 兰花栽培方法主要靠分株繁殖，繁殖速度慢。
外植体的处理
Text 1
摘去叶片和 膜质叶鞘， 剪成约2cm 长带节的小 段。
Text 2
用洗洁剂 清洗后置 流水下冲 20~30 min。
Text 3
在超净工作台上 用75%的酒精消 30s0.1%HgCl2 灭菌5min后，用 无菌水冲洗5~6 次，放入垫有干 无菌滤纸的培养 皿中，以吸去多 余水分，茎段两 端各切 0.2~0.3cm。
兰花组培的外植体
• 种子
• 茎尖
• 茎段
• 叶片
•根
兰花组培的途径
• 原球茎ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ径
种子萌发时先是胚的膨大,种皮破裂,40天时肉眼可见浅 黄色的原胚呈球状,称为原球茎.。兰花茎尖等外植体在 组培中也可诱导产生原球茎，并且原球茎还可以切割成 若干小块，分别形成新的若干原球茎丛。
兰花的组织培养过程
• 贮藏和运输困难，易带病毒，严重阻碍了在世界范围内的 流通。用兰花的种子也可以进行繁殖，但发芽率及低，仅 5%左右，很难满足生产需要。组织培养用于兰花的快繁 已取得了快速进展。从20世界60年代开始用茎尖培养方 法繁殖兰花，到70年代就基本解决了兰属组织培养快速繁 殖的关键技术，并很快发展成为从20世界60年代开始用 茎尖培养方法繁殖兰花，到70年代就基本解决了兰属组织 培养快速繁殖的关键技术，并很快发展成为现代化兰花工 业。目前已有进70个属数百种兰花可用组织培养方法进行 繁殖，兰花生产工厂也分布在世界各地。
2）将震荡器或是试管中的花梗取出，置入无菌水中，摇晃瓶身， 可重覆此一动作2～3次，但需取出花梗，置入?有无菌水的新瓶中， 藉此洗净漂白水，洗净后，以镊子取出花梗，以酒精浓度75%的酒 精棉花擦拭花梗，以梗芽生长点向下，酒精棉花擦拭由上而下单一 方向擦拭，切勿以来回的方式擦拭梗芽生长点。
（3）将花梗两端切除 芽尖端切90度另一端则呈45度斜切
一般来说，以花梗生长点来进行组织培养，分生数量约在20棵 以上，称之为花梗苗，若是以花梗生长点来进行组织培养，分生数 量在20棵以上，就称为分生苗。而花梗苗与分生苗这两者它们都是 属于无性繁殖。在理论上，遗传的特性与原植株的特性是一样的， 但是却因为培养基的比例调配或是药物的刺激，常常会发生整批分 生的植株 在形态上与原植株不同的情况。 花梗生长点组织培养具体操作：