细胞工程实验课题
细胞工程学实验课件ppt.ppt
三、植物细胞培养基的种类
在100多年的植物组织、器官和细胞离体培养研究中，研 制开发了数十种适宜不同植物、不同组织、不同细胞生长发育 的培养基配方，但多数培养基是在几种普遍应用的培养基上演 变而来的，其中应用最为广泛的仍为MS培养基。植物组织培 养基早期的建立，如White提出的根培养基和Gautheret提出的 愈伤组织培养基，都是由先前的用于整体植物栽培的营养液发 展而来的。以后所有的各种培养基又都是在White培养基和
（二）MS完全培养基的配制
以配制1 000mL MS完全培养基为例，配制全过程如下： 1、在洁净的不锈钢（或搪瓷）容器中加入1/2终体积
（500mL）的蒸馏水； 2、按上表内容规定的量，精确吸取各种母液，依次加入到
盛有1/2终体积蒸馏水的不锈钢（或搪瓷）容器中，记录 此时的总体积。注意：母液不能混合后加入，也不能同 时加入，必须依次缓慢加入，且要一边加入一边搅拌， 以免造成电解质局部浓度过高而发生沉淀反应； 3、根据培养目的及要求，加入所需量的各种生长调节物
细胞工程学实验内容
★ 实验一 植物细胞培养基的种类及配制 ★ 实验二 植物愈伤组织的诱导 ★ 实验三 植物愈伤组织细胞的培养
实验一 植物细胞培养基的种类及配制
一、实验目的
1、了解植物细胞培养基的种类及营养要求。 2、掌握MS培养基的配制方法。
二、实验材料
1、Байду номын сангаас验设备：高压灭菌锅、电子分析天平、pH计、超净 工作台。
一、实验目的
通过对长春花叶片愈伤组织的诱导，分析生长素和细胞分 裂素对长春花叶片离体培养的作用，熟练掌握植物组织离体培 养培的基本操作技术，了解植物组织在离体培养条件下脱分化 的条件及特点。
3、中等无机盐含量培养基：中等无机盐含量培养基中， 大量元素约为MS培养基的一半，微量元素种类减少，但含量 较MS的高，适合于花药培养。主要有Nitsch培养基和NT培养 基。
植物细胞工程综合大实验
植物细胞工程综合大实验（一）——培养基配制和无菌操作一、实验目的与要求熟练掌握器皿的洗涤MS培养基的配制分装培养基和物品的高压灭菌实验室的消毒灭菌植物材料的取材及流水冲洗无菌操作材料的培养观察二、实验原理植物细胞的全能性。
三、仪器设备与器具电子天平、移液枪、冰箱、高压锅、超净工作台、三角瓶、烧杯、容量瓶、培养皿、搪瓷缸、镊子、解剖刀、酒精灯、试剂瓶、玻璃棒、线绳、pH试纸、封口膜、试管刷、洗涤剂、打火机等。
四、实验材料彩云阁茎段（用于诱导愈伤组织）茎节（用于诱导芽）五、实验方法与步骤（一）器皿的洗涤一般器皿有培养物但未污染的器皿有培养物且污染的器皿（二）MS培养基的配制分装1、MS培养基母液的配制母液A-F，每组配制A-E 100ml、F 50ml0.1%升汞的配制75%酒精的配制6-BANAA2、MS培养基的配制按每人配制100ml，分5小瓶。
过程如下；每组按1L配制，先取容器内加70%的蒸馏水；加入蔗糖30g/L；量取母液A-F；加入PGR（自己设计）；用容量瓶定容；用0.1-1N NAOH或HCl调整pH5.6-5.8；每人分100ml；加琼脂粉8g/L；分装到5个小三角瓶中、封口。
（三）培养基和物品的高压灭菌培养基、无菌水（每组至少5瓶）、空瓶（每组至少2个）、烧杯（每组至少1个）、培养皿（每组至少一套）、接种工具（2套），包好或者分好以备高压灭菌。
高压锅的使用。
（四）实验室的消毒灭菌75%的酒精擦拭超净工作台内表面，新洁尔灭水进行超净工作台外表面、培养架表面、墙壁及其他房间表面的擦拭。
（五）植物材料的取材及流水冲洗选取适宜的彩云阁茎节及茎段，切割成适宜大小后放在流水下冲洗。
（六）无菌操作演示。
（七）材料的培养观察接种完的材料放在培养室的培养架上进行培养。
培养初期每天观察一次，持续1周。
之后每2-3天观察一次。
统计指标：污染率（%）= （污染的外植体个数／接种外植体的总数）×100%。
陕师大细胞工程实验报告
一、实验目的1. 掌握细胞工程的基本原理和实验技术。
2. 学习细胞培养、细胞融合、基因工程等细胞工程技术的操作方法。
3. 培养学生的实验操作能力和科学思维。
二、实验原理细胞工程是利用现代生物技术手段，对细胞进行改造、培养和应用的一门新兴学科。
本实验主要涉及以下原理：1. 细胞培养：在适宜的培养条件下，使细胞在体外生长、繁殖，为后续实验提供细胞材料。
2. 细胞融合：将两个或多个细胞合并成一个细胞的过程，可用于基因转移、细胞治疗等。
3. 基因工程：通过分子生物学技术对基因进行改造，实现特定性状的表达。
三、实验材料、试剂和仪器设备1. 实验材料：人胚胎肾细胞（HEK293）、小鼠成纤维细胞（NIH3T3）、小鼠血清、胰蛋白酶、DMSO等。
2. 试剂：DMEM培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素、Hoechst 33342染料等。
3. 仪器设备：细胞培养箱、倒置显微镜、离心机、PCR仪、凝胶成像系统等。
四、实验步骤1. 细胞培养（1）将HEK293和NIH3T3细胞分别接种于培养瓶中，置于细胞培养箱中培养。
（2）待细胞长满瓶底后，用胰蛋白酶消化细胞，按1:1的比例将两种细胞混合。
（3）将混合细胞接种于新的培养瓶中，继续培养。
2. 细胞融合（1）将混合细胞培养至对数生长期，加入适量的聚乙二醇（PEG）诱导细胞融合。
（2）将融合细胞接种于新的培养瓶中，继续培养。
（3）用Hoechst 33342染料检测融合细胞。
3. 基因工程（1）设计并合成目的基因的引物，进行PCR扩增。
（2）将扩增的目的基因克隆到载体上。
（3）将重组质粒转化到HEK293细胞中。
（4）用荧光素酶报告基因检测目的基因的表达。
五、实验结果与分析1. 细胞培养HEK293和NIH3T3细胞在培养过程中生长良好，细胞形态规则，细胞活力较高。
2. 细胞融合Hoechst 33342染料检测结果显示，部分细胞核融合，表明细胞融合实验成功。
3. 基因工程荧光素酶报告基因检测结果显示，目的基因在HEK293细胞中成功表达。
细胞工程大实验
仲恺农业工程学院课程学习报告课程名称：细胞工程大实验学期：2008-2009学年第一学期实验一培养基母液和培养基的配制实验二水稻及胡萝卜再生体系的建立实验三悬浮细胞体系的建立实验四植物遗传转化实验五原生质体游离与培养实验六植物快速繁殖实验七玉米幼胚接种院系：生命科学学院班级：姓名：学号：实验一 培养基母液和培养基的配制摘要为了避免每次配制培养基都要对几十种化学药品进行称量，应该将培养基中的各种成分，按原量10倍、100倍或1000倍称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做母液。
这样，每次配制培养基时，取其总量的1/10、1/100、1/1000，加以稀释，即成培养液。
各种混合液（母液）或单独配制药品，均应放入冰箱中保存，以免变质、长霉。
至于蔗糖、琼脂等，可按配方中要求，随称随用。
关键词培养基母液、培养基、无机盐、有机物、激素、附加物前言本实验的目的是要学习并掌握培养基母液配制的方法和培养基配制的方法，掌握不同物质浓度按比列稀释和转化的计算方法。
在配制培养基前，先配制单一化合物母液可以提高称量的准确性并减少多次称量的麻烦，配制多种培养基都需要的同一种母液，放置冰箱中保存，用时按比例稀释即可。
培养基实际一是一个人工模拟的植物生长、发育环境，在植物组织培养过程中，外植体生长所必需的营养万分生长因子、理化环境等主要同培养基提供。
不同材料对培养基的要求不尽相同，适当地设计和选用培养基，对组织培养取得成功是至关重要的。
另外，组织培养物的脱分化、分化等状态的调控，次生代谢物的产出等都要通过调节培养基成分来实现。
一 材料与方法步骤（一）试剂培养基母液（以MS 为例）：NH 4NO 3；KNO 3 ；CaCl 2.2H 2O ；MgSO 4.7H 2O ；KH 2PO 4；(NH4)2SO 4；H 3BO 3；KI ；MnSO 4.H 2O ；ZnSO 4.7H 2O ；NaMoO 4.2H 2O ；CuSO 4.5H 2O ；CoCl 2.6H 2O ；Na 2EDTA.2H 2O ；FeSO4. 7H2O ；甘氨酸；盐酸吡哆醇；盐酸硫氨素；烟酸；肌醇；2，4—D ；6—BA ；NAA 培养基：1N HCl ；1N KOH ； 标准pH 溶液（25℃下，pH4.01和pH6.08的标准溶液各100ml ）；蔗糖；琼脂；水解蛋白酶；谷氨酰胺；脯氨酸。
《细胞工程》 学历案
《细胞工程》学历案一、课程目标通过本课程的学习，学生能够：1、理解细胞工程的基本概念和原理，包括细胞全能性、细胞培养、细胞融合等。
2、掌握细胞工程的主要技术和方法，如植物组织培养、动物细胞培养、细胞融合技术等。
3、了解细胞工程在农业、医药、工业等领域的应用和发展前景。
二、课程内容（一）细胞工程的基本概念和原理1、细胞全能性定义：细胞具有发育成完整个体的潜能。
举例：植物的组织培养、动物的细胞核移植。
2、细胞培养植物细胞培养：培养基的成分、培养条件、细胞生长特点。
动物细胞培养：培养基的特点、培养过程、细胞贴壁和接触抑制现象。
3、细胞融合定义：两个或多个细胞合并成一个细胞的过程。
诱导细胞融合的方法：物理法（离心、振动、电刺激）、化学法（聚乙二醇）、生物法（灭活的病毒）。
（二）细胞工程的主要技术和方法1、植物组织培养过程：外植体的选择和消毒、愈伤组织的诱导、芽和根的分化、试管苗的移栽。
应用：快速繁殖优良品种、脱毒苗的培育、细胞产物的工厂化生产。
2、动物细胞培养原代培养和传代培养的概念和方法。
细胞株和细胞系的区别。
动物细胞培养的应用：生产生物制品、检测有毒物质、医学研究。
3、细胞融合技术单克隆抗体的制备过程：免疫小鼠、获取B淋巴细胞、细胞融合、筛选杂交瘤细胞、克隆化培养和抗体检测。
单克隆抗体的优点和应用。
（三）细胞工程的应用1、在农业上的应用培育优良品种：转基因植物、杂交水稻。
植物脱毒：利用茎尖组织培养脱除病毒。
2、在医药上的应用生产生物制品：疫苗、抗体、生长因子等。
细胞治疗：干细胞治疗、免疫细胞治疗。
3、在工业上的应用生产天然产物：香料、色素等。
生物发酵：利用细胞工程改良微生物菌种。
三、学习资源1、教材：《细胞工程》（教材作者，出版社，出版年份）2、在线课程：课程名称 1、课程名称 23、学术期刊：《细胞工程学报》、《生物技术通报》四、学习活动1、课堂讲授教师讲解细胞工程的基本概念、原理和技术方法，通过实例帮助学生理解。
细胞工程实验内容
细胞工程实验（生物技术大实验二）安排
一、实验内容：
实验一、杂交瘤抗体制备录像观看和培养基的配制
实验二、小鼠饲养层细胞和小鼠免疫脾细胞的制备
实验三、细胞原代培养：组织块法
实验四、免疫脾细胞与骨髓瘤细胞的融合技术
实验五、融合细胞的培养及的观察
实验六、动物细胞的传代
实验七、细胞的冻存和复苏
实验八、细胞活性的MTT法检测
实验九、原生质体的分离技术
实验十、原生质体的收集与纯化
实验十一、原生质体的培养与观察
实验十二、AO/EB双染荧光显微镜观察细胞凋亡
二、实验分组（见后）
三、各组做实验的时间安排
*注意：本实验是连续性的大实验，由于学生操作能力不同，每一小小组（2～3人）所用的时间不一样，因此所做实验在次序和时间上会有些变化，实验也会穿插进行。
要求学生在实验时间段里听从安排。
四、地点：10-404～406;10-407～409
第三、第四和第五大组分组及超净工作台安排
09生技(行)
6.28～
7.1（上午8点开始）
注意事项
1．每个大组再分5个小组，每小组的小组长负责实验工具的领取及用后干净归还。
2．超净工作台用完后收拾干净。
3．实验结果的观察时间另行通知。
4．实验结果观察结束后，把自己小组的培养瓶等洗干净归还。
细胞工程教案
细胞工程教案教案标题：细胞工程教案教案目标：1. 了解细胞工程的概念和背景知识；2. 掌握细胞工程的基本原理和技术；3. 实施细胞工程实验，并解释实验结果；4. 培养学生的实验操作能力和科学思维。
教案步骤：一、导入（5分钟）1. 向学生简单介绍细胞工程的定义和相关背景知识；2. 引导学生讨论和思考细胞工程的应用领域。
二、知识讲解（15分钟）1. 详细讲解细胞工程的基本原理和技术，包括细胞培养、基因编辑和细胞重编程等；2. 给予学生示意图和实例，让他们更好地理解相关概念。
三、实验演示（20分钟）1. 展示一个简单的细胞工程实验，如基因转染；2. 详细解释实验过程和步骤；3. 强调安全操作和实验室规范。
四、实验操作（30分钟）1. 学生分组进行实验操作；2. 指导学生正确使用实验仪器和试剂；3. 督促学生记录实验过程和结果。
五、结果解释和讨论（15分钟）1. 学生根据实验结果，进行数据分析和解释；2. 引导学生深入思考实验结果的意义和可能的应用。
六、扩展活动（15分钟）1. 引导学生展开与细胞工程相关的研究性课题或小组讨论；2. 鼓励学生提出自己的观点和创新想法。
七、总结（5分钟）1. 让学生总结今天学到的关于细胞工程的知识；2. 解答学生的问题，并强调细胞工程的潜在应用和意义。
教案评估：1. 老师观察学生在实验操作过程中的技能和实验室的安全意识；2. 检查学生对细胞工程相关知识的理解和应用。
教案备注：1. 教师应提前准备好实验所需的材料和设备，并确保实验室的安全性；2. 鼓励学生积极参与实验操作和讨论，并引导他们思考细胞工程在当前和未来的应用前景；3. 注意实验操作过程中的实验室安全规范和个人卫生习惯。
《细胞工程》实验指导书
实验指导书课程：细胞工程授课专业：生物工程、生物技术主编：徐艳实验一实验室的概况与培养基母液的配制一、实验目的：熟悉植物细胞工程实验室的基本结构、必须的基本设备及其用途与作用方法，掌握配制培养基母液的基本技能。
二、材料与用具：1、药品：生长调节类物质、无机盐类、有机化合物等。
2、用具：分析天平、移液管、量筒、培养瓶、烧杯、冰箱、母液瓶等。
三、教学时数：4课时。
四、实验内容：（一）实验室的基本结构及主要设备：1、洗涤室：水槽、工作台、蒸馏水器等功能：器皿及材料洗涤；蒸馏水制备。
2、消毒室：高压蒸汽灭菌锅、烘箱等功能：器皿的干燥；器皿及培养基的消毒。
3、试剂室：试剂柜、冰箱功能：存放试剂及器皿。
4、准备室：工作台、天平、水浴锅、电炉、显微镜及各种玻璃仪器、金属仪器等功能：培养基药品称量、配制、分装、灭菌；材料预处理；培养材料的观察分析。
5、接种室（含缓冲室）：超净工作台、接种箱等功能：无菌操作。
6、培养室：培养架、摇床等功能：培养物的控制培养。
7、驯化移栽室：如温室、大棚等功能：试管苗的驯化移栽。
（二）培养基母液的配制：1、MS基本培养基母液：各成分单独称量、单独溶解后混合定容①大量元素母液：10倍，1L注意：CaCl2.2H2O易与其他成分反应产生沉淀；②微量元素母液：100倍，0.5L③铁盐母液：100倍，0.5L注意：两者等体积溶解后混合，且需80℃水浴1h充分螯合，等待冷却后定容；④有机母液：100倍，0.5L2、激素类母液的配制：①1mg/ml的6－BA 50ml：先用0.1mol∕L的 HCL或NaOH溶解后再加水定容；②0.1mg/ml的NAA 50ml：先用少量0.1mol∕L的NaOH溶解后再加水定容。
注：精度要求精确到小数点后三位。
（三）培养器皿的洗涤：1、对污染的培养器皿先进行消毒灭菌处理；2、清除残渣，用清水洗净，浸泡于合成洗涤剂中6-24小时；3、用洗涤刷洗涤，并用自来水冲洗干净；4、用烘箱烘干或晾干，存放于防尘橱内备用。
植物细胞工程的教案
植物细胞工程的教案教案标题：探索植物细胞工程教学目标：1. 了解植物细胞工程的基本概念和应用领域。
2. 掌握植物细胞工程的基本原理和实验技术。
3. 培养学生的科学探究能力和实验操作技能。
教学内容：1. 植物细胞工程的定义和发展历程。
2. 植物细胞培养的基本原理和条件。
3. 植物细胞转化的方法和技术。
4. 植物细胞工程在农业、医药和环境保护等领域的应用案例。
教学步骤：引入活动：1. 利用图片或视频展示植物细胞工程在现实生活中的应用，引起学生的兴趣和好奇心。
知识讲解：2. 讲解植物细胞工程的基本概念和发展历程，让学生了解其重要性和应用前景。
3. 介绍植物细胞培养的基本原理和条件，包括培养基组成、培养条件和培养技术等。
4. 解释植物细胞转化的方法和技术，如基因转导、遗传转化和植物组织培养等。
实验操作：5. 指导学生进行一项简单的植物细胞培养实验，如培养植物愈伤组织或植物细胞悬浮液。
6. 引导学生观察和记录实验结果，让他们亲身体验植物细胞工程实验的过程和操作技巧。
应用拓展：7. 分组讨论，让学生就植物细胞工程在农业、医药和环境保护等领域的应用案例展开讨论，并提出自己的想法和建议。
8. 鼓励学生进行小组展示，分享他们对植物细胞工程的理解和应用创意。
总结评价：9. 对学生进行知识点的总结，强调植物细胞工程的重要性和潜力。
10. 评价学生的实验操作和讨论表现，给予积极的肯定和建议。
教学资源：1. 图片或视频展示植物细胞工程的应用案例。
2. 实验室设备和材料，如培养基、植物组织和培养器具等。
3. 相关的教材、参考书和网络资源。
教学延伸：1. 鼓励有兴趣的学生参与科研项目或实习，深入了解植物细胞工程的前沿研究和应用。
2. 组织参观相关的实验室或企业，让学生亲身感受植物细胞工程的实践环境和应用现状。
注：以上教案仅供参考，具体教学内容和步骤可根据实际教学需要进行调整和修改。
《细胞工程》教案
《细胞工程》教案教案：细胞工程一、教学目标1.了解细胞工程的基本概念和发展历程。
2.理解细胞工程在生物医学领域的应用。
3.掌握细胞工程的实验技术和操作方法。
4.培养学生的实验操作能力和科学研究意识。
二、教学内容1.细胞工程的概念和发展历程2.细胞工程在生物医学领域的应用3.细胞培养技术和操作方法三、教学过程1.引入（10分钟）教师以“你了解过细胞工程吗？”为题，通过提问学生的知识储备情况，引导学生思考、探究。
2.知识点讲解（30分钟）（1）细胞工程的概念和发展历程通过PPT讲解，介绍细胞工程的定义和发展历程，包括细胞工程的起源、主要研究内容和目标，以及相关的重要突破和应用领域。
（2）细胞工程在生物医学领域的应用通过PPT讲解，介绍细胞工程在生物医学领域的应用，包括组织工程、干细胞研究、基因治疗等方面的应用，以及未来的发展前景。
3.案例分析（20分钟）教师提供相关的细胞工程应用案例，如人工皮肤的研发、肝脏组织工程的应用等。
引导学生分析和讨论这些案例的实现原理、技术路线和可能的应用价值。
4.实验设计（30分钟）教师结合细胞培养技术的基本原理和操作方法，设计一个以细胞培养为基础的实验项目，如培养细胞株观察其生长情况或进行细胞转染实验等。
让学生分组进行实验设计，包括实验目的、实验步骤、实验条件等，并总结预计可能的结果和结论。
五、小结（10分钟）教师对本堂课进行总结，强调细胞工程的重要性和应用前景，激发学生对科学研究的兴趣和向往。
六、课后作业学生根据实验设计的内容，进行实验操作，并撰写实验报告。
要求报告中包括实验目的、实验步骤、结果和结论，并对实验过程中出现的问题进行分析和解决。
七、教学评估1.通过课堂讨论和案例分析，检测学生对细胞工程的理解和应用能力。
2.评估学生的实验操作能力和实验报告的撰写能力。
八、教学资源1.PPT课件2.实验室设备和材料3.相关的细胞工程案例资料九、教学反思本课程通过讲解细胞工程的概念和应用，结合实验设计和案例分析，旨在引导学生了解细胞工程的基本原理和实验操作方法，培养学生科学研究的兴趣和实践能力。
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盐城师范学院海洋与生物工程学院
——细胞工程实验微课题设计
细胞工程微课题实验方案
不同浓度磷元素对鱼肝细胞的活性
的影响
专业：生物技术
班级：技术14（1）班
成员：14243148杨永周14243150朱剑秋14243146 王宁14243138 胡峰
14243140 李强14243136 陈一帆
14243137 贡森森
日期：2016年11月
磷元素对鱼肝细胞活性的影响
一、实验目的
随着农业的不断高速发展，我国农村为了更高的产量施大量的氮磷钾肥，虽然极大提高了农作物的存活率，但是肥料过剩所产生的水质问题也日趋显著。
在这些问题中尤为突出的就是磷元素对水质的影响，调查发现，磷元素过多会使水富营养化从而产生水华破坏水中鱼类的生存环境导致大量鱼类死亡，所以我们今天想研究磷元素过多对鱼的细胞有什么影响，从而警醒人们关注水质安全不要过多施肥。
二、实验原理
草鱼是我国目前养殖产量最大的淡水鱼类之一，在人工养殖过程中，由于水质、饲料等因素易出现以脂肪性肝病为特征的营养性疾病。
肝脏作为鱼体最大的解毒和营养代谢器官，在营养物质的消化吸收和保障鱼体健康方面起着重要作用。
体外肝细胞分离和原代培养是研究肝细胞功能的有效方法，培养体系中的肝细胞可以很好的模拟体内肝脏的生理环境，用不同浓度的的磷化合物对其进行耐性实验，测试其生物活性。
三、实验器材
（1）设备
培养箱，超净工作台，倒置显微镜，高压蒸汽灭菌锅，低速离心机，冰箱，分析天平，细胞培养瓶8个，移液器，青霉素空瓶6个，血球计数板等。
（2）试剂
D-Hanks 液、PBS缓冲液、胰蛋白酶、牛跟腱胶原、10%胎牛血清、牛胰岛素、100 IU / mL 青霉素、100 μg / mL 链霉素，DMEM培养基，红细胞裂解液、细胞活性鉴别染液台盼蓝染色剂，不同浓度的磷酸溶液。
1：D-Hank’s液的配制称取KCl:0.1g，KH2PO4:0.03g，NaCl:4.0g，NaHCO3:0.175g，Na2HPO4`12H2O:0.04g，溶于双蒸水，混合均匀，定容至500ml，调节pH值7.0-7.4，高压蒸汽灭菌，4℃保存。
2：DMEM培养基的配制：血清的灭活：常用小牛血清，新鲜血清要在56℃水浴灭活30min，再经抽滤分装，即可加入培养基中；吸取配制好的青霉素、链霉素加入到50mlDMEM培养基中（不含小牛血清及双抗），再吸取5ml灭活的小牛血清和2ml 双抗加入培养基中混匀，小牛血清的含量为10%,置于4℃冰箱待用。
4：配置磷酸溶液母液，实验时候稀释成所需的浓度。
实验动物：市场售卖的鱼
四实验内容
（1）实验材料处理
1 用适当的方法促死实验所用的两条鱼，将刚死的的鱼用75%酒精浸泡30s，使其消毒，然后转移到超净工作台，倒T解剖，取出鱼肝，剥干净后用配置好的D-Hanks冲洗，然后用消毒后的剪刀剪成肉糜。
剪成肉糜之后转移到灭菌的离心管内酶解消化（加入3ml 0.25%的胰蛋白酶），消化好后在37℃水浴锅内预热，20℃水浴酶解1min后摇匀。
摇匀后在离心机上500r离心5min，弃上清后5000r离心5min之后加入500微升完全培养基，均匀加入到消毒的五个细胞培养瓶培养48h。
2 培养48h后加入不同浓度的磷酸溶液
我国对于水中p含量有以下的标准
一类(以P计)小于0.02mg/l(湖,库0.01)二类(以P计)小于0.1mg/l(湖,库0.025)
三类(以P计)小于0.2mg/l(湖,库0.05)四类(以P计)小于0.3mg/l(湖,库0.1)
五类(以P计)小于0.4mg/l(湖,库0.2)
实验可选择0.2mg/l，0.8mg/l，1.6mg/l，2mg/l的浓度梯度加入培养基培养24h后观察，与培养之前先观察未胁迫培养之前的细胞拍照做对比（一定设置对照组）。
（2）肝细胞活力的测定
细胞悬液与细胞活性鉴别染液台盼蓝染色剂按1∶9 体积比混合，4 min 后于血球计数板上计数，并在显微镜下观察: 活细胞圆形透明，死细胞染成蓝色，用活细胞占计数细胞中的百分比表示细胞活力。
计算公式: 细胞存活百分率= 4大格活细胞数/ ( 4大格活细胞数+ 死细胞数) ×100 % 。
预期效果：在高浓度的磷酸溶液培养后，细胞形态皱缩死亡，数目减少，得出结论高浓度的磷酸对鱼肝细胞活力有抑制作用。
（3）MTT法测定不同时间鱼肝细胞A值
1：接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000-10000个细胞（细胞浓度的问题见后面的注意事项）接种到96孔板，每孔体积200ul.
2: 培养细胞：同一般培养条件，培养3-5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。
3：呈色：培养3-5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS配制，pH=7.4)10ul.
继续孵育4 h，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。
每孔加100ul DMSO，振荡10min，使结晶物充分融解。
4：比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线
草鱼肝细胞增殖能力随时间延长呈现一定规律的变化。
A值总体上呈现先增长后趋于稳定直至降低的趋势。
24～48 h 阶段A值有显著性增加( P＜0.05)，72～120 h 期间A值相对稳定，144h时 A 值显著性降低(P＜ 0.05 )。
五实验结果
观察时发现细胞密度过低，未能出现预期的细胞形态，查询资料得知此现象为细胞培养出现大量死亡，通过仔细分析实验失败的原因有以下几点：
1 胰蛋白酶配制时染菌
2 操作人员在操作时不注意无菌操作（比如在超净工作台操作时将细胞取出工作台）
3 培养基配制时染菌受到污染。