细胞工程实验报告
2021 细胞工程实验报告
2021 细胞工程实验报告细胞工程试验报告要求：1、因需上报细胞工程实验成绩，实验报告要求每人一份。
2、请使用实验报告纸、手写（不能打印）。
实验1 细胞培养室的设置和无菌操作一、【实验原理】细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作，避免微生物及其他有害因素的影响。
一般标准的细胞培养室应包括配液室、准备室和培养室。
三室既相互连接又相对独立，各自完成培养过程中的不同操作。
二、【实验目的】①了解培养室的设置和设备。
②学习无菌概念和无菌操作要领。
三、【操作步骤】1．实验室设置（1）配液室（2）准备室（3）培养观察室（4）储藏室（5）清洗灭菌室 2．实验室常用设备（1）准备室的设备（2）配液室的设备（3）细胞培养室的设备 3．无菌操作（1）无菌室的灭菌：①紫外灯无人时就要打开；②进无菌室要穿无菌服、戴帽子和口罩；③每周清洗消毒一次；④所用物品要以外科手术方式严格消毒；—1—⑤室内台面要要保持洁净，做完实验后，用75％酒精或千分之三新洁尔灭棉球擦拭超净工作台的台内、边台的台面、倒置显微镜的载物台等；⑥所用物品要一次性准备好；⑦瓶口要用酒精火焰消毒；⑧尽量减少出入。
（2）实验人员的无菌准备：①肥皂洗手②穿好隔离衣③酒精棉球擦手四、【实验报告】画出本细胞培养室的草图，标明各室的必需设备。
（1）准备室的设备①双蒸馏水蒸馏器②酸缸③烤箱④高压锅：玻璃器皿、解剖用具、部分液体、塑料器具等灭菌。
不同物品其有效灭菌压力和时间不同。
⑤储品柜1：放置未消毒物品。
⑥储品柜2：放置已消毒物品。
⑦包装台：灭菌前的包装用。
准备室注意事项：①预防蒸馏器被烤干。
②放置水池中的水渗出。
③勿将酸液溅到衣物或地面。
④勿将高压锅排气阀和安全阀堵塞。
⑤已消毒物品应与未消毒物品分柜存放。
（2）配液室的设备①天平（扭力天平和电子天平）：称量用②pH计：③磁力搅拌器：①超净工作台：超净工作台的种类很多，有单面单人、单面双人、双面双人或双面四人等，其工作原理是利用鼓风机，使通过高效滤气的空气，徐徐通过台面，这样使工作环境中具无菌而均匀的空气。
细胞合成工程实验报告
实验日期： 2023年11月15日实验地点：生物技术实验室实验目的：1. 掌握细胞合成工程的基本原理和操作技术。
2. 学习如何利用基因工程技术改造细胞，使其能够合成特定的化合物。
3. 通过实验验证改造细胞的合成能力。
实验原理：细胞合成工程是利用基因工程技术，将具有特定功能的基因导入细胞中，使细胞能够合成特定的化合物。
通过调节基因表达，可以控制细胞合成产物的产量和质量。
实验材料：1. 实验细胞：大肠杆菌（E. coli）2. 基因构建工具：DNA连接酶、限制性内切酶、质粒载体等3. 实验试剂：DNA模板、引物、PCR试剂、抗生素等4. 实验仪器：PCR仪、电泳仪、离心机、培养箱等实验步骤：一、基因克隆与构建1. 设计并合成引物，用于扩增目的基因。
2. 使用PCR技术扩增目的基因。
3. 使用限制性内切酶切割目的基因和质粒载体。
4. 将目的基因与质粒载体连接，形成重组质粒。
5. 将重组质粒转化大肠杆菌，筛选阳性克隆。
二、细胞培养与转化1. 将阳性克隆接种于含有抗生素的培养基中，培养过夜。
2. 收集菌液，制备感受态细胞。
3. 将重组质粒与感受态细胞混合，进行电转化或化学转化。
4. 在含有抗生素的培养基中培养转化细胞，筛选阳性克隆。
三、基因表达与产物检测1. 将阳性克隆接种于含有诱导剂的培养基中，诱导基因表达。
2. 收集培养液，进行蛋白质检测。
3. 使用SDS-PAGE电泳分析蛋白质条带，确定目标蛋白的表达。
四、产物纯化与鉴定1. 对目标蛋白进行纯化，去除杂质。
2. 使用Western blot等方法鉴定纯化蛋白。
实验结果：1. 成功构建了重组质粒，并转化大肠杆菌。
2. 通过PCR和测序验证了重组质粒的正确性。
3. 通过SDS-PAGE电泳和Western blot检测，成功表达了目标蛋白。
4. 对目标蛋白进行纯化，并鉴定了其特性。
实验讨论：本次实验成功实现了细胞合成工程的基本操作，从基因克隆、细胞转化到基因表达和产物检测，均取得了预期的结果。
陕师大细胞工程实验报告
一、实验目的1. 掌握细胞工程的基本原理和实验技术。
2. 学习细胞培养、细胞融合、基因工程等细胞工程技术的操作方法。
3. 培养学生的实验操作能力和科学思维。
二、实验原理细胞工程是利用现代生物技术手段，对细胞进行改造、培养和应用的一门新兴学科。
本实验主要涉及以下原理：1. 细胞培养：在适宜的培养条件下，使细胞在体外生长、繁殖，为后续实验提供细胞材料。
2. 细胞融合：将两个或多个细胞合并成一个细胞的过程，可用于基因转移、细胞治疗等。
3. 基因工程：通过分子生物学技术对基因进行改造，实现特定性状的表达。
三、实验材料、试剂和仪器设备1. 实验材料：人胚胎肾细胞（HEK293）、小鼠成纤维细胞（NIH3T3）、小鼠血清、胰蛋白酶、DMSO等。
2. 试剂：DMEM培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素、Hoechst 33342染料等。
3. 仪器设备：细胞培养箱、倒置显微镜、离心机、PCR仪、凝胶成像系统等。
四、实验步骤1. 细胞培养（1）将HEK293和NIH3T3细胞分别接种于培养瓶中，置于细胞培养箱中培养。
（2）待细胞长满瓶底后，用胰蛋白酶消化细胞，按1:1的比例将两种细胞混合。
（3）将混合细胞接种于新的培养瓶中，继续培养。
2. 细胞融合（1）将混合细胞培养至对数生长期，加入适量的聚乙二醇（PEG）诱导细胞融合。
（2）将融合细胞接种于新的培养瓶中，继续培养。
（3）用Hoechst 33342染料检测融合细胞。
3. 基因工程（1）设计并合成目的基因的引物，进行PCR扩增。
（2）将扩增的目的基因克隆到载体上。
（3）将重组质粒转化到HEK293细胞中。
（4）用荧光素酶报告基因检测目的基因的表达。
五、实验结果与分析1. 细胞培养HEK293和NIH3T3细胞在培养过程中生长良好，细胞形态规则，细胞活力较高。
2. 细胞融合Hoechst 33342染料检测结果显示，部分细胞核融合，表明细胞融合实验成功。
3. 基因工程荧光素酶报告基因检测结果显示，目的基因在HEK293细胞中成功表达。
细胞工程实验
实验一细胞工程实验室、器皿的洗涤与灭菌一、目的要求通过实验，培养学生良好的卫生习惯、树立组织培养的无菌意识；掌握组织培养实验室器皿的洗涤与灭菌方法。
二、材料与用具2%新洁尔灭、高锰酸钾、甲醛、70%酒精、洗涤剂、喷雾器、各种培养器皿、工作服、口罩和手套等。
三、方法步骤1、地面、墙壁和工作台的灭菌将配好的2%新洁尔灭溶液倒人喷雾器中，对地面、墙壁、角落均匀地喷务。
在喷房顶时间，注意不要让药液滴入眼睛。
2、无菌室和培养室的灭菌首先将房子关闭，然后用10ml甲醛和5g高锰酸钾的配比液进行熏蒸。
操作时要戴好口罩和手套，用甲醛与高锰酸钾配比时要注意避开烟雾。
3、培养器皿的洗涤与灭菌将培养器皿先用肥皂水或洗衣粉浸泡几小时，然后用清水冲洗，最后用三级水和一级水各冲3遍，烘干后备用。
四、实验报告1、将本次实验内容整理成实验报告2、简述组织培养实验室的灭菌过程与注意事项。
实验二:细胞培养基的配制及灭菌一、目的要求：1．了解基本设备以及有关仪器的用途与功能。
2．通过实际操作，学会洗涤剂的配制和各种器皿的清洗和灭菌方法。
3．通过掌握培养基对母液制备及常用培养基的配制和灭菌方法，为植物组织培养准备合适的营养条件。
4．每四人一组，每人接种一个三角瓶，2支试管；每两组制备一套培养基母液。
二、材料用具：每组所需器皿：50ml三角瓶×8 ；试管×16试剂瓶×5（200ml、2×1000ml、100ml、500ml）容量瓶烧杯量筒漏斗玻璃棒移液管pH试纸称量纸封口膜橡皮筋标签纸记号笔所需仪器：高压灭菌锅、烘箱、超净工作台、百分之一与万分之一天平、电炉、冰箱、所需药品：重铬酸钾、浓硫酸等、CaCl2·2H2O，KNO3，MgSO4·7H2O，NH4NO3，KH2PO4，Na2—EDTA，FeSO4·7H2O，MgSO4·4H2O，Zn SO4·7H2O，H3BO3，KI，NaMoO4·2H2O，CuSO4·5H2O，CoCl2·6H2O，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸，肌醇，蔗糖，琼脂，HCL,NaOH,酒精。
生物技术细胞工程实验报告
课程学习报告课程名称：细胞工程大实验实验一培养基母液和培养基的配置实验二胡萝卜再生体系的建立实验三水稻再生体系的建立实验四水稻悬浮细胞系的建立及胚状体的诱导与观察实验五水稻遗传转化实验六烟草的组织培养实验七百合组织培养实验八原生质体游离、融合与培养实验九玉米幼胚再生系统的建立实验十植物快速繁殖实验1 培养基母液和培养基的配制摘要：培养基是供植物离体培养组织或细胞赖以生存的营养基质，相当于人公配制的“土壤“，在植物组织培养过程中，外植体生长所必需的营养成分、生长因子、理化环境等主要由培养基提供。
为了避免每次配制培养基都要对几十种化学药品进行称量，应该将培养基中的各种成分，按原量10倍、100倍或1000倍称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做母液。
这样，每次配制培养基时，取其总量的1/10、1/100、1/1000，加以稀释，即成培养液。
关键词：培养基母液、培养基、无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质、有机附加物培养基实际一是一个人工模拟的植物生长、发育环境。
在植物组织培养过程中，外植体生长所必需的营养万分生长因子、理化环境等主要同培养基提供。
在植物组织培养中，选用适当的培养基，是组织培养成功与否至关重要的因素。
不同植物材料对培养基的要求不尽相同，进行一系列的预培养和筛选是很必要的。
由于离体的培养材料不像完整植物体那样具有自我平衡的能力，所以在配制培养基时，离子失衡或某种物质过量都可能导致培养物生长不良或导致死亡。
另外，组织培养物的脱分化、分化等状态的调控，次生代谢物的产出等都要通过调节培养基成分来实现。
本实验的目的是要学习并掌握培养基母液和培养基配制的方法，掌握不同物质浓度按比例稀释和转化的计算方法。
1 材料与方法步骤1.1试剂培养基母液（以MS 为例）：NH 4NO 3；KNO 3 ；CaCl 2.2H 2O ；MgSO 4.7H 2O ；KH 2PO 4；(NH4)2SO 4；H 3BO 3；KI ；MnSO 4.H 2O ；ZnSO 4.7H 2O ；NaMoO 4.2H 2O ；CuSO 4.5H 2O ；CoCl 2.6H 2O ；Na 2EDTA.2H 2O ；FeSO4. 7H2O ；甘氨酸；盐酸吡哆醇；盐酸硫氨素；烟酸；肌醇；2，4—D ；6—BA ；NAA培养基：1N HCl ；1N KOH ； 标准pH 溶液（25℃下，pH4.01和pH6.08的标准溶液各100ml ）；蔗糖；琼脂；水解蛋白酶；谷氨酰胺；脯氨酸。
细胞及细胞工程实验
实验一细胞的凝集反应一、实验目的了解细胞膜的表面结构；二、实验原理凝集素是一类可逆结合特异糖基的蛋白质，能与细胞外被的寡糖链相连接，使细胞发生凝集。
三、实验用品1 ．器材: 显微镜、天平、载玻片、滴管、离心管、烧杯、10ml移液管、试管、试管架2 ．材料: 土豆块茎、2％鸡血红细胞3 ．试剂: 抗凝血剂（3.8%柠檬酸钠）、PBS缓冲液（pH 7.4 0.2mol/L Na2HPO4 49ml + 0.2mol/L NaH2PO4 51ml, PBS缓冲液一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用）、0.17mol/L氯化钠。
四、实验步骤1２％鸡血红细胞悬液制备取已加抗凝剂的新鲜鸡血1 mL，加等量生理盐水轻轻混匀后2000 r/min离心５min，重复3次，按红细胞压积用生理盐水配成２％鸡血红细胞悬液（淡红色）。
2 土豆凝集素制备土豆２克切成薄片后加10 ml PBS，浸泡0.5-2 h（写具体时间，80min）3 细胞凝集反应制备不同浓度梯度的红细胞液：取1ml已制备好的2%的鸡血细胞悬液，通过系列稀释将血细胞悬液制备成不同浓度：在1ml的试管上编号为2%；在标号2%的试管中取0.5ml于另一只试管中，在试管中加入0.5ml生理盐水，混合均匀并编号1%；在1%的试管中取0.5ml的细胞悬液于另一只试管中，并加入0.5ml的生理盐水，混合均匀编号0.5%；梯度稀释制备不同浓度的土豆悬浮液：取1ml的土豆凝集素悬浮液原液于其中一只试管中，并编号1×；另取0.5ml的土豆悬浮液原液于另一只试管中，加入0.5ml的PBS缓冲液，并编号0.5×；再取一只试管，加入1ml的PBS缓冲液，并编号0×；土豆凝集素１滴、２％鸡血红细胞液１滴载玻片上混匀，静置２０min（写实际时间，5min）思考题：1、生理盐水可以用蒸馏水代替吗？为什么？不能用蒸馏水代替。
生理盐水的渗透压与血浆的渗透压相当，用生理盐水是为了维持渗透压，保持细胞正常形态,防止发生细胞破裂。
动物细胞工程实习报告
动物细胞工程实习报告一、实习背景及目的动物细胞工程是一门综合性学科，涉及生物学、医学、生物工程等多个领域。
本次实习旨在让我们了解动物细胞工程的基本原理和技术方法，提高我们的实验操作能力，为今后的科研和工作打下坚实基础。
二、实习内容与过程1. 实习前的准备在实习开始前，我们参加了为期一周的理论学习，学习了动物细胞工程的基本原理、技术方法和实验操作流程。
同时，我们还学习了实验室安全知识，了解了各种实验仪器的作用和操作方法。
2. 实习过程实习过程中，我们分为若干小组，每组负责一个实验项目。
以下是本次实习的几个主要实验项目：（1）动物细胞培养我们使用了体外培养的人胚肝细胞作为实验材料，通过添加适当的培养基、血清等物质，保持了细胞的生长和增殖。
在实验过程中，我们学会了使用细胞计数器进行细胞计数，掌握了细胞培养的基本技术。
（2）动物细胞融合我们采用了电融合法将两种不同类型的动物细胞进行融合，观察了融合后的细胞特性。
通过这个实验，我们了解了细胞融合的原理和方法。
（3）动物细胞核移植我们进行了动物细胞核移植实验，将一个细胞的细胞核移入另一个去核的细胞中，观察了重组细胞的发育情况。
这个实验让我们认识了动物细胞核移植技术及其在生物工程中的应用。
（4）动物细胞载体构建我们利用质粒载体将目的基因导入动物细胞，观察了目的基因在细胞内的表达。
这个实验让我们了解了基因工程的基本原理和方法。
3. 实习成果通过本次实习，我们掌握了动物细胞培养、细胞融合、核移植、基因导入等技术方法，了解了动物细胞工程在生物科研和医学领域的应用。
同时，我们的实验操作能力和团队协作能力得到了提高。
三、实习体会与总结本次实习让我们对动物细胞工程有了更深入的了解，实验过程中的每一个步骤都离不开理论知识的支持。
同时，实践操作也让我们发现了理论知识的不足，促使我们更加努力地学习。
此外，实习过程中的团队协作也让我们学会了与他人共同解决问题，提高了我们的综合素质。
植物细胞工程实验报告
植物细胞工程实验报告学院：农学院班级： 07生物技术（2）班姓名：袁峰学号： B0704091时间： 2009年11月指导老师：莫庭辉老师目录实验一、培养基母液的配制实验二、培养基的配制与灭菌实验三、香蕉吸芽的组织培养实验四、烟草叶片的消毒、接种和培养实验五、柱花草外植体的消毒、接种和培养实验六、木薯外植体的消毒、接种和培养实验七、桉树外植体的消毒、接种和培养实验八、玉米不成熟胚的消毒、接种和培养实验九、花生成熟胚的消毒、接种和培养实验十、水稻盾片的消毒、接种和培养实验十一、洋葱的组织培养（自选实验）植物细胞工程实验一、实验目的1、了解植物组织培养技术的基本原理。
2、掌握植物材料灭菌、接种和培养。
3、学习培养基的配制与灭菌。
二、实验原理根据植物细胞具有全能性的特点，在人工的控制条件下，将植物的任何器官、组织或细胞，放在人工合成的培养基中进行培养，使其生长、分化并形成完整植株。
实验一、培养基母液的配制一、实验目的掌握培养基母液的配制。
在配置培养基之前，为了方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。
当配置培养基时，只需按预先计算好的量吸取母液。
二、实验试剂与仪器设备1、药品试剂：母液、蔗糖、卡拉胶（或琼脂）、NaOH溶液、HCl溶液、无菌水、NAA、BA、IAA、2，4-D等。
2、仪器设备：电子天平、量筒、PH试纸、培养瓶、解剖刀、酒精灯、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、药勺、超净操作台、铁架、镊子等。
三、实验内容（一）母液的配制1、大量元素母液的配制无机盐中大量元素母液，按照培养基配方的用量，把各种化合物扩大20倍，用感量为0.01g的扭力天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解.溶解时在每只烧杯中加入30-40mL重蒸馏水，置于酒精灯上,加热使其溶解(注意温度不可过高，60-70℃)。
溶解后，在1000mL量筒中，混合后用重蒸馏水定容到1000mL。
淮师大细胞工程实验
实验室安全守则一般规定1、上课第一天请先熟悉环境，察看紧急冲洗站、洗眼站、灭火器、急救箱及安全梯等的位置，牢记“安全”是进行任何实验最重要的准则。
2、在实验室內请穿着实验服，避免穿凉鞋、拖鞋。
留有长发者，戴帽套将头发捲入套內，或以橡皮筋束于后，以防止引火危险或污染实验。
3、在实验室内禁止吸烟、饮食、化妆、嚼口香糖、嬉戏奔跑，食物饮料勿存放于实验室的冰箱中，实验桌上勿堆放书包、书籍、衣服及杂物等。
4、所有实验仪器、耗材、药品等均属实验室所有，不得带出实验室。
每组分配的仪器、耗材请确定清点与保管，课程结束后如数清点缴回。
公用仪器请善加爱惜使用，实验前后，请把工作区域清理擦拭，并随时保持环境卫生。
5、实验前详阅实验内容，了解实验细节的原理及操作规程，注意上课所告知的注意事项。
实验进行中有任何状况或疑问，随时发问，切勿私自变更实验程序。
打翻任何药品试剂及器皿时，请随即清理。
实验后，确切记下自己的结果，严禁抄袭，确定关闭不用的电源、水、酒精灯及煤气等。
6、睡眠不足、精神不济或注意力无法集中，请立即停止实验。
实验时间若延长，请注意时间的管制及自身的安全，不可自行逗留实验室过夜。
7、实验完毕，请清理实验室、倒垃圾、灭菌、关闭灯光及电源，离开实验室前记得洗手。
8、任何意外事件应立即报告师长，并应熟知相关的应急措施。
药品1、使用任何药品，请先看清楚标示、注意事项，翻阅物质安全资料表，查明是否对人体造成伤害，使用完毕请放回原位。
2、新配制的试剂请清楚注明内溶物、浓度、注意事事项及配制日期，为避免污染，勿将未用完的药剂倒回容器内。
3、挥发性、腐蚀性、有毒溶剂（如甲醇、丙酮、醋酸、氯仿、盐酸、硫酸、-mercaptoethanol、酚等）要在通风橱中戴手套量取配制，取用完后随即盖好盖子，若不小心打翻试剂，马上处理。
4、有毒、致癌药剂例如acrylamide（神经毒）、ethidium bromide（突变剂）、SDS、秋水仙素请戴手套及口罩取用，并勿到处污染，脱下手套后，应养成洗手的好习惯。
植物细胞工程实验 (修改版)
植物细胞工程实验一 培养基母液的制备一、实验目的与意义学习和掌握培养基母液的配制方法。
在配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。
当配制培养基时，只需要按预先计算好的量吸取母液即可。
二、实验器材电子天平（称量为0.0001g ）、电子天平（称量为0.01g ）、烧杯（500ml 、100ml 、50ml ）、容量瓶（1000ml 、100 ml 、50 ml 、25 ml ）、细口瓶（1000 ml 、100 ml 、50 ml 、25 ml ）、药勺、玻璃棒、电炉。
三、实验药品NH 4NO 3、KNO 3、CaCl 2·2H 2O 、MgSO 4·7H 2O 、KH 2PO 4、KI 、 H 3BO 3、 MnSO 4·4H 2O 、 ZnSO 4·7H 2O 、 Na 2MoO 4·2H 2O 、CuSO 4·5H 2O 、CoCl 2·6H 2O 、FeSO 4·7H 2O 、Na 2-EDTA·2H 2O 、肌醇 、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B 6)、盐酸硫胺素(维生素B 1)、甘氨酸。
四、实验步骤每种母液均配制500ml ，各成分的质量如下： 1、大量元素母液的配制表1 MS 培养基大量元素母液制备序号 药品名称培养基浓度（mg/L ）扩大20称量(mg)备注1 NH 4NO 3 1650 16500 蒸馏水定容至500ml2 KNO3 1900 19000 3 CaCl 2·2H 2O 440 44004 MgSO 4·7H 2O 370 37005 KH 2PO 41701700各成分按照表1培养基浓度含量扩大20倍，用称量为0.01g 的电子天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。
后用蒸馏水定容到500ml 的容量瓶中，即为20倍的大量元素母液。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
原理，实验步骤或实验方法，实验结果与分析，注意事项，实验感悟
实验一培养基母液的配制
一、实验目的
通过配置MS培养基母液，掌握母液的配置和保存方法
二、实验原理
配置培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配置，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配置即可。
三、实验材料、试剂和仪器设备
1.试剂
NH
4NO
3
,KNO
3
,KH
2
PO
4 ,
CaCl
2
·2H
2
O ,MgSO
4
·7H
2
O,FeSO
4
·7H
2
O
Na
2-EDTA,MnSO
4
·4H
2
O,ZnSO
4
·7H
2
O,
,
KI,CuSO
4
·5H
2
O,CoCl
2
·6H
2
O,肌醇，甘氨酸，
盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸，蒸馏水NAA,6-BA
2.仪器设备
电子天平，烧杯（50ml、100ml、500ml、1000ml）量筒（1000ml、100ml、25ml），容量瓶(1000ml、500ml、100ml)，试剂瓶，玻璃棒数支，药芍，称量纸等。
四、实验步骤
1 大量元素母液的配制
先用量筒称量适当蒸馏水放入500ml烧杯中，按照配方表中用量依次分别称取：
NH
4NO
3
,KNO
3
, KH
2
PO
4 ,
MgSO
4
·7H
2
O, CaCl
2
·2H
2
O，待第一种化合物完全溶解后再
加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液转移至500ml容量瓶中，用蒸馏水定容至500ml，然后转移至细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。
2 微量元素母液的配制
按照配方表中用量用电子天平依次称取MnSO
4·4H
2
O, ZnSO
4
·7H
2
O
H3BO3
, KI, Na
2
MoO
4
·2H
2
O，CuSO
4
·5H
2
O, CoCl
2
·6H
2
O,按制备母液I的方法逐个
溶解，转移至容量瓶中，然后定容至500ml，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。
3铁盐母液的制备
把FeSO
4·7H
2
O和Na
2-
EDTA分别置于适量蒸馏水中，加热搅拌使之完全溶解，保
持加热，把FeSO
4倒入Na
2-
EDTA溶液中并搅拌，接近沸腾时停止加热，冷却后调
PH到5.5，将溶液转移至500ml容量瓶中，用蒸馏水定容至500ml，转入细口试剂瓶中，用力振荡1～2min，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。
4有机化合物母液的制备
按配方表中用量依次称取：维生素B, 烟酸, 甘氨酸，用蒸馏水溶解后定容后，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。
5植物生长物质母液制备
NAA母液:准确称取20mg,先少量95%乙醇引溶后加水定容至100ml,即配制成
0.2mg/ml的NAA母液，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。
6–BA母液配制方法相似，浓度为2mg/ml。
五、试验结果分析及注意事项
配制母液时注意药品只能出不能进。
实验二培养基的配制与灭菌
一、实验目的
学习母液法配制培养基以及掌握培养基灭菌的方法
二、实验原理
组织培养所用的培养基含有植物生长所必需的各类营养物质，同时也是微生物繁殖的极好场所，因此必须对培养基灭菌处理，以确保无菌操作的顺利进行。
三、实验材料、试剂和仪器设备
1.试剂：琼脂，蔗糖，蒸馏水，1mol/L NaOH,各类母液
2.仪器设备：电子天平，烧杯，量筒，移液管，玻璃棒，药芍，称量纸，PH试纸，锥形瓶瓶等。
四、实验步骤
1.将所需的各种母液按顺序放好，将洁净的各种玻璃器皿放在指定位置
2 .取50ml烧杯一个，将大量、有机、肌醇、镁盐，钙盐、按配方表中的用量依次称取并倒入烧杯中。
3 .取 50ml烧杯一个，将微量和铁盐按配方表中的用量称取并倒入烧杯中。
4.取瓷盆一个，加入300ml蒸馏水，置于电磁炉上加热，称量琼脂6克，白砂糖40 克，依次倒入瓷盆中，待琼脂和白砂糖完全溶解后，将称量好的所有母液倒入瓷盆中，用玻璃棒不断搅拌，并定容至 1 L。
5 .用1mol/L NaOH调PH 至 5.8
6. 把培养基分装到广口瓶中，用牛皮纸包扎好，待灭菌。
7.培养基灭菌
五、试验结果分析及注意事项
配制培养基前先大致估计一下药品数量，不够时提前配制。
培养基灭菌时注意要放干净冷空气。
实验三愈伤组织的诱导
一、实验目的
通过实验，初步掌握外植体材料消毒及在超净工作台上接种的方法与注意事项二、实验原理
植物细胞具有全能型，其外植体接种在无菌的人工培养基上，能长成完整的无菌植株。
三、实验材料、试剂和仪器设备
超净工作台、培养基，大号镊子，剪刀，酒精灯，喷雾器
四、实验步骤
1.准备打开超净工作台，用紫外灯烧2h,关闭紫外灯，将灭菌溶液，无菌水，豌豆，大烧杯等放入超净工作台，在台上点燃2个酒精灯。
2.灭菌在超净工作台上取经浸泡处理的豌豆，先用84消毒液摇晃清洗清洗3次，每次5分钟，后用0.5%HgCI摇晃清洗，处理2次，每次5分钟。
后用无菌水摇晃清洗3次。
3.接种将灭菌处理好的材料在超净工作台上用镊子靠近酒精灯的外焰放入倾斜的锥形瓶杯中，每个瓶内装5粒豌豆，接种过程中锥形瓶应一直保持倾斜，直到
接种完毕盖上棉塞。
4.接种完毕后，用棉线绑好用铅笔标上制作人编号。
五、试验结果分析及注意事项
注意事项：做本次实验时在豌豆灭菌时注意升汞、酒精灭菌时间应严格注意，过长会对种子活性造成影响
实验图片见图1。
实验四组织培养芽、根诱导
一、实验目的
通过诱导豌豆根、茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法
二、实验原理
细胞全能性，已经分化的植物细胞在适宜条件下可脱分化形成愈伤组织。
三、实验材料、试剂和仪器设备
超净工作台、无菌豌豆苗、培养基、剪刀、喷雾器
四、实验步骤
准备歩骤同实验三
接种在超净工作台外用酒精将装无菌豌豆苗的锥形内灭菌。
用灭菌后的弯头剪刀分别剪取长势良好，无病菌污染的豌豆的根、茎、叶每个锥形内各接一种，每种接3瓶。
标记将接种好的锥形瓶标记，根为R,叶L,茎S。
标记好后放置在暗处。
五、试验结果及注意事项
注意事项 1、接种根时注意取接近根尖但不能直接是根尖部分
2、接种时总体为接种材料大小越少越好，越有利于愈伤组织的形成
3、接种时可以适当按压材料使之更有利于愈伤组织的形成。