实验10 细胞融合
细胞融合实验报告
一．实验目的1.了解并掌握细胞融合的方法2.了解细胞融合技术及其在生命科学中所起的作用3.掌握化学融合法，了解电融合法及CRY-3细胞融合仪的使用二．实验原理两个或两个以上的细胞合并成一个双核或多核细胞的现象称为细胞融合，也称细胞杂交，在自然情况下的受精过程即属这种现象。
诱导细胞融合的主要方法有：病毒诱导融合，化学融合剂诱导融合和电融合。
1. 病毒诱导融合：有许多种类的病毒能介导细胞融合，最常用的是灭活的仙台病毒（HVJ），为RNA病毒。
病毒诱导细胞融合的过程有：首先是细胞表面吸附许多病毒粒子，接着细胞发生凝集，几分钟至几十分钟后，病毒粒子从细胞表面消失，而就在这个部位邻接的细胞的细胞膜融合，胞浆相互交流，最后形成融合细胞。
2. 化学融合剂诱导融合：化学融合剂主要有高级脂肪酸衍生物、脂质体、钙离子、水溶性高分子化合物、水溶性蛋白质和多肽，其中最常用的是聚已二醇（PEG）。
PEG用于细胞融合至少有两方面的作用：①可促使细胞凝结；②破坏互相接触处的细胞膜的磷脂双分子层，从而使相互接触的细胞膜之间发生融合，进而细胞质沟通，形成一个打的双核或多核融合细胞。
3. 电融合：是指细胞在电场中极化成偶极子，并沿着电力线排列成串，然后用高强度、短时程的电脉冲击穿细胞膜而导致细胞融合。
主要过程包括：1.制备原生质体：微生物及植物细胞有坚硬的细胞壁，需要用酶将其降解，而动物细胞无需要去壁处理。
2.诱导细胞融合：两种亲本细胞的悬浮液调到一定密度，滴入高浓度的聚乙二醇（PEG）诱导融合，或用物理方法如电刺激促进融合。
3.筛选杂合细胞：在特定的筛选培养基上，让杂合细胞有选择地生长，除去其他未融合的细胞。
细胞融合技术在基因定位、基因表达产物、肿瘤诊断核治疗、生物新品种培育及单克隆抗体技术等领域有着非常广泛的应用前景。
单克隆抗体技术就是通过细胞融合技术发展起来的，在生命科学研究核应用方面产生了重大影响。
三．实验结果与分析讨论融合细胞的观察实验中发现大部分的融合都是3个细胞的融合，两个相互融合的很少基本没有找到。
实验-细胞融合
实验4 细胞融合〔实验目的〕1、了解细胞融合的原理2、掌握PEG介导细胞融合过程的操作〔实验原理〕聚乙二醇（PEG）分子能使细胞凝集，改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处的细胞膜脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞间接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，使细胞发生融合。
〔试剂材料〕1、仪器：倒置显微镜、水浴锅2、试剂（1）0.85%生理盐水（2）GKN液NaCl 8g, KCl 0.4g, Na2HPO4.2H2O 1.77g, NaH2PO4. H2O 0.69g, 葡萄糖2g，酚红0.01g，溶于1000ml重蒸水中。
（3）50%PEG液临用前配制，50g PEG4000，在沸水浴中加热，冷却至50℃时加入预热至50℃的50ml GXN 液，混匀，37℃备用。
3、材料：鸡红细胞悬液〔内容方法〕1、抗凝的鸡血，加入4倍体积的0.85%生理盐水，为血细胞储备液，4℃冰箱可保存一周2、鸡血储备液1ml，加入4ml生理盐水，混匀后1200r/min离心5min，去上清，再加入生理盐水同样条件下离心一次。
血细胞沉淀加入10mlGKN液制成鸡血细胞悬液3、取悬液进行计数，用GXN将红细胞稀释至3-4×107个/毫升浓度。
4、取稀释好的红细胞悬液1ml，加入0.5ml 50%PEG混匀，37℃/39℃温浴20-30min。
5、加入GKN溶液至8ml，37℃温浴20min。
6、1200r/min离心5min，沉淀用GKN溶液再洗一次。
7、收集沉淀，涂片，镜检。
也可采用下面方法：1、细胞生理盐水洗涤后用GKN溶液制成5%悬液2、红细胞悬液1ml，1200r/min离心5min，去上清。
3、细胞沉淀用手指轻弹使细胞疏松，再逐滴滴加50%PEG溶液0.5ml，1分钟之内加完，边滴加边轻晃细胞，使PEG与血细胞混合4、混合物在37℃温浴2min。
5、加入GKN 2ml，37℃温浴5min。
6、1200r/min离心5min，去大部分上清，沉淀涂片，晾干后观察。
细胞融合实验报告
细胞融合实验报告细胞融合是一种重要的生物学实验技术，通过将两个不同细胞的质膜融合在一起，使它们的细胞质混合，从而产生新的细胞。
本实验旨在探究细胞融合对细胞生长和功能的影响，为细胞生物学研究提供实验依据。
首先，我们选择了两种不同类型的细胞进行融合实验，一种是小鼠胚胎成纤维细胞，另一种是人类胃腺癌细胞。
这两种细胞具有不同的形态和生长特性，我们希望通过它们的融合，观察新细胞的特性变化。
实验过程中，我们采用了聚乙烯醇融合剂将两种细胞进行融合处理，然后将融合后的细胞进行培养。
在培养的过程中，我们观察到融合后的细胞呈现出明显的形态变化，细胞质内出现了新的结构，并且细胞的生长速度也有所增加。
接着，我们对融合后的细胞进行了功能性实验。
结果显示，融合后的细胞在细胞分裂和增殖方面表现出了更活跃的特性，且对外界环境的适应能力也有所提高。
这表明，细胞融合可以增强细胞的生长和功能，为细胞的应用研究提供了新的可能性。
在实验的过程中，我们还发现了一些有趣的现象。
比如，融合后的细胞在形态上呈现出了中间态，既有小鼠胚胎成纤维细胞的形态特征，又具有人类胃腺癌细胞的特性。
这为我们深入研究细胞融合的机制提供了有益的线索。
综合以上实验结果，我们得出结论，细胞融合可以显著影响细胞的形态和功能，使其表现出新的特性。
这对于细胞生物学的研究具有重要意义，也为细胞治疗和再生医学领域提供了新的思路和方法。
总之，本实验通过对细胞融合的观察和分析，揭示了细胞融合对细胞生长和功能的影响，为细胞生物学领域的研究提供了新的启示。
希望本实验结果能够为相关领域的研究工作提供参考，推动细胞融合技术的进一步应用和发展。
细胞融合实验报告
细胞融合实验报告
本实验旨在探究细胞融合对细胞生长和功能的影响，为了达到这一目的，我们进行了一系列的实验操作和数据分析。
在实验中，我们选取了两种不同类型的细胞进行融合，并观察了融合细胞的形态特征、生长情况以及功能表现。
首先，我们以显微镜观察了融合细胞的形态特征。
结果显示，融合细胞的形态呈现出明显的异质性，既有细胞A的特征，也有细胞B的特征，这表明细胞融合后细胞的形态会发生明显的改变，产生新的细胞类型。
其次，我们进行了细胞生长曲线的测定。
通过对融合细胞和单一细胞的生长情况进行比较，我们发现融合细胞的生长速度明显快于单一细胞，这说明细胞融合可以促进细胞的生长和增殖。
随后，我们对融合细胞的功能进行了评估。
实验结果显示，融合细胞在某些功能上表现出了明显的增强，例如对外界刺激的响应能力和分泌功能。
这表明细胞融合可以提高细胞的功能表现，使其具有更强的适应能力和生存竞争力。
最后，我们对融合细胞进行了基因表达谱的分析。
结果显示，融合细胞的基因表达谱发生了明显的改变，一些基因的表达水平显著上调或下调，这说明细胞融合会引起基因表达的重新编程，从而影响细胞的功能和特性。
综上所述，本实验结果表明，细胞融合对细胞的形态、生长和功能都产生了明显的影响，这为我们进一步探究细胞融合的机制和应用提供了重要的实验依据。
希望通过我们的努力，能够为细胞融合领域的研究和应用做出更多的贡献。
细胞融合实验报告
细胞融合实验报告细胞融合实验报告引言：细胞融合是一种重要的生物学研究方法，通过将两个或多个不同种类的细胞融合在一起，可以获得新的细胞群体，进而探索细胞之间的相互作用以及其对生物体的影响。
本实验旨在通过细胞融合实验，探索细胞融合对细胞生长、形态和功能的影响。
材料与方法：1. 细胞培养基：含有足够营养物质的培养基，如DMEM。
2. 细胞：选择两种不同的细胞，如肺癌细胞株A549和正常肺细胞株HBE。
3. 细胞培养器具：培养皿、离心管、吸管等。
4. 融合剂：聚乙二醇（PEG）等。
实验步骤：1. 细胞准备：将A549和HBE细胞分别培养至对数生长期，用PBS洗涤细胞，离心收集。
2. 细胞融合：将A549和HBE细胞按照一定比例混合，加入融合剂（如PEG），轻轻摇晃混合，静置一段时间。
3. 细胞培养：将融合后的细胞悬液加入含有培养基的培养皿中，放入培养箱中，以37摄氏度、5%二氧化碳的条件培养。
4. 细胞观察：在培养过程中，定期观察融合细胞的生长情况、形态变化和功能表现。
结果与讨论：通过细胞融合实验，我们观察到了一些有趣的现象。
首先，融合后的细胞在形态上呈现出不同于原始细胞的特征。
例如，融合细胞的形状可能更加不规则，细胞体积也可能发生变化。
这可能是由于融合过程中细胞膜的融合以及细胞核的合并所导致的。
其次，融合细胞的生长速度可能与原始细胞有所不同。
在我们的实验中，观察到部分融合细胞的生长速度明显加快，而另一部分则与原始细胞相比无明显差异。
这表明细胞融合可能引起细胞生长调控机制的改变，进而影响细胞的增殖速度。
此外，融合细胞的功能表现也可能发生变化。
在我们的实验中，我们发现融合细胞相比于原始细胞，对某些刺激物的反应更加敏感。
例如，在刺激物浓度相同的情况下，融合细胞可能表现出更高的细胞凋亡率或细胞迁移能力。
这提示细胞融合可能改变了细胞信号传导途径，从而影响了细胞的功能。
细胞融合作为一种重要的生物学研究方法，不仅可以帮助我们了解细胞之间的相互作用，还可以为疾病的研究提供新的思路。
细胞融合实验报告讨论
一、实验目的本实验旨在通过细胞融合技术，探讨细胞融合的基本原理、方法及其应用。
通过实验，观察细胞融合过程中细胞的行为与变化，了解不同细胞类型融合的差异，以及细胞融合在生物技术领域的应用前景。
二、实验原理细胞融合是指两个或多个细胞通过质膜融合形成单个双核或多核细胞的现象。
细胞融合技术在生物技术、医学、生物工程等领域具有广泛的应用前景。
本实验采用聚乙二醇（PEG）作为细胞融合的诱导剂，通过改变细胞膜的通透性，使细胞发生融合。
三、实验材料与方法1. 实验材料（1）细胞：小鼠胚胎成纤维细胞、鸡红细胞、人骨髓间充质干细胞等。
（2）试剂：聚乙二醇（PEG）、Hanks液、生理盐水、双蒸水等。
（3）器材：显微镜、离心机、水浴箱、离心管、滴管、载玻片、盖玻片等。
2. 实验方法（1）细胞培养：将小鼠胚胎成纤维细胞、鸡红细胞、人骨髓间充质干细胞等细胞分别培养于DMEM培养基中，置于37℃、5%CO2培养箱中。
（2）细胞融合：将细胞以1×10^6个/mL的浓度接种于培养皿中，待细胞生长至约70%融合时，加入一定浓度的PEG溶液，使细胞发生融合。
（3）观察与检测：通过显微镜观察细胞融合情况，采用流式细胞仪检测融合细胞的DNA含量，分析细胞融合的效果。
四、实验结果1. 显微镜观察在显微镜下，观察到细胞融合现象明显，部分细胞出现双核或多核现象。
2. 流式细胞仪检测流式细胞仪检测结果显示，融合细胞的DNA含量与正常细胞相似，说明细胞融合成功。
五、讨论1. 细胞融合的基本原理细胞融合是细胞生物学领域的一个重要研究方向。
细胞融合的基本原理是：通过改变细胞膜的通透性，使细胞发生质膜融合，进而实现细胞内容物的相互交换。
本实验采用PEG作为细胞融合的诱导剂，其作用机理是改变细胞膜的通透性，使细胞内物质外泄，进而促进细胞融合。
2. 不同细胞类型融合的差异本实验观察到小鼠胚胎成纤维细胞、鸡红细胞、人骨髓间充质干细胞等细胞均能发生融合。
细胞融合实验报告
姓名班级 13级生命基地班学号同组者：科目细胞生物学实验实验题目动物细胞融合【实验题目】动物细胞融合【实验目的】1.了解动物细胞融合的常用方法。
2.学习化学融合的基本操作过程。
3.观察动物细胞融合过程中细胞的行为与变化。
【实验材料与用品】1、材料鸡血红细胞2、试剂50%PEG、GKN溶液、Alsever’s细胞保存液、0.85%氯化钠溶液。
3、器材倒置显微镜、离心机、载玻片、盖玻片、离心管、废液缸、滴管等。
【实验原理】细胞融合是指在自发或者诱导条件下，两个或两个以上细胞合并为双核或者多核细胞的过程。
目前人们已经发现有很多方法可以诱导细胞融合，包括：病毒诱导融合、化学诱导融和和电激诱导融合。
1、病毒诱导融合仙台病毒、牛痘病毒、新城鸡瘟病毒和疱疹病毒等可以介导细胞的融时也可介导细胞与细胞的融合。
用紫外线灭活后，这些病毒即可诱导细胞发生融合。
2、化学诱导融合很多化学试剂能够诱导细胞融合，如聚乙二醇(PEG)、二甲基亚砜、山梨醇、甘油、溶血性卵磷脂、磷脂酰丝氨酸等。
这些物质能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。
在恢复过程中想接触的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。
化学诱导方法，操作方便，诱导融合的概率比较高，效果稳定，适用于动、植物细胞，但对细胞具有一定的毒性。
PEG是广泛使用的化学融合剂。
3、电激诱导融合姓名班级 13级生命基地班学号同组者：科目细胞生物学实验实验题目动物细胞融合包括电诱导、激光诱导等。
其中，电诱导是先使细胞在电场中极化成为偶极子，沿电力线排布成串，再利用高强度、短时程的电脉冲击破细胞膜，细胞膜的脂质分子发生重排，由于表面张力的作用，两细胞发生融合。
电诱导方法具有融合过程易控制、融合概率高、无毒性、作用机制明确、可重复性高等优点。
【实验步骤】在本次实验中采用的是化学诱导融合的方法，利用PEG使鸡血红细胞发生融合。
细胞融合实验总结与反思
细胞融合实验总结与反思细胞融合实验是一种常见的生物学实验，用于研究细胞融合现象和细胞融合对细胞功能的影响。
本次实验中，我们选择了两种不同类型的细胞进行融合实验，实验结果显示成功实现了两种细胞的融合。
在实验过程中，我们遇到了一些挑战和问题，但通过改进实验方案和加强团队合作，最终获得了较好的实验结果。
首先，我们需要进行细胞培养和细胞传代的操作。
这是实验中最关键的步骤之一，也是最容易出错的步骤。
由于对特定细胞的要求比较高，我们需要仔细选择培养基和培养条件，并确保细胞的健康和稳定生长。
在传代过程中，我们需要尽量减少细胞损伤和细胞死亡，以免影响实验结果。
通过严格控制培养条件和细胞的处理方法，我们成功地培养出了足够数量的细胞进行后续实验。
其次，我们设计了细胞融合实验的方案并进行了实施。
在实验中，我们使用了聚乙二醇融合剂将两种细胞融合在一起。
这是一种常用的细胞融合方法，但在实际操作中仍然存在一定的困难。
聚乙二醇的浓度和操作温度对于融合的效果有很大的影响，我们需要进行多次试验和调整，才能找到最合适的条件。
此外，我们还需要注意融合细胞的比例和细胞密度的控制，以确保成功融合并获得可靠的实验结果。
最后，我们对融合细胞进行了鉴定和分析。
通过显微镜观察和细胞染色技术，我们确认了细胞融合的现象，并观察到了融合细胞的形态和特性的变化。
此外，我们还对融合细胞的功能进行了一些初步的测定和研究，发现融合细胞表现出了一些新的特征和功能。
虽然实验结果还需要进一步的验证和深入的研究，但这些初步的发现为进一步研究细胞融合的机制和影响提供了基础。
在本次实验中，我们学会了团队合作和及时沟通的重要性。
每个人都有自己的专长和优势，只有充分发挥各自的能力并协调合作，才能顺利完成实验任务。
此外，我们也认识到实验过程中遇到的问题和困难是正常的，重要的是要保持积极的态度和耐心，寻求解决问题的方法和途径。
经过本次实验，我们收获了实验技术的提高和科学研究的经验，对细胞融合的机制和功能有了更深入的理解，这将对我们今后的科学研究和实验工作产生积极的影响。
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② 50％的PEG溶液的配制 （每组一管）
称取3克PEG(MW=400)放入烧杯内，在酒精灯上融化之， 迅速加入3 ml预热的Hanks液混匀制成50％的PEG溶液。放入 37℃水浴中待用。
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四、实验方法与步骤
③ PEG诱导细胞融合 （每人一管）
取①中 10 ％的鸡红细胞悬液 1 ml 放入离心管中，再加
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实验 10
细胞融合
一、实验目的
1.掌握PEG体外诱导细胞融合的原理和基本方法。 2.掌握在光学显微镜下融合细胞的形态特征。
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二、实验原理
细胞融合是用人工的方法
使两个或以上的细胞融合 成异核细胞。异核细胞可 进入有丝分裂，使来自两 个亲本细胞的基因组合在 一起，形成只含一个细胞 核的杂种细胞。
① 鸡血细胞悬液的制备
从家鸡的翼根静脉采血制备抗凝全血。加入 4 倍体积的阿 氏血液保存液，制成红细胞储备液，保存于 4℃。（已完成） 取鸡血细胞储备液1 ml，1200rpm离心5 min，弃去上清 液。按红细胞压积，加入 10 倍体积的 Hanks 溶液轻轻悬浮细 胞，制成10%鸡血细胞悬液，备用。（每组一管）
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四、实验方法与步骤
⑥ 计算细胞融合率
细胞融合率是指在显微镜的视野内，已发生融合的细胞 其细胞核总数与该视野内所有细胞的细胞核总数之百分比。
视野内融合细胞的核数 融合率 = ×100％ 视野内细胞的总核数
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五、注意事项
1. 高Ca2+浓度能够提高细胞融合率。有些抗凝剂中含有和Ca2+ 结合的化合物，与血液中的Ca2+形成难解离的可溶性络合物， 导致血液中的Ca2+ 浓度降低，故起抗凝血作用，但同时会造
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二、实验原理
• PEG溶液作为助融剂可 改变各类细胞的膜结构， 使两细胞接触点处脂类 分子发生疏散和重组， 引起细胞融合。
细胞融合的频率和活力与所用 PEG的分子质量、浓度、作用时间 以及细胞的生理状态及密度等有关。用分子质量为400～ 6000的
PEG溶液可引起细胞的聚集和粘连，产生高频率的细胞融合。
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四、实验方法与步骤
⑤ 细胞悬液的制备
用吸管轻轻吹打细胞团数次，使细胞团分散，1000rpm 离心5 min，使细胞完全沉降。弃去上清液，加1 ml Hanks 液，悬浮细胞团，混匀。
⑥ 染色和镜检
吸取细胞悬液，在凹面载玻片上滴 1 滴，加入1 滴瑞氏染 液混匀，染色5 min后盖上盖玻片，在显微镜下观察细胞融合 情况（区分细胞融合与细胞重叠）。
入5 ml的Hanks溶液混匀，1000rpm离心5 min，小心弃去上 清，用指弹法将细胞团块弹散。
吸取1 ml 37℃温热的50%PEG溶液② ，在1分钟内，慢
慢沿着离心管壁逐滴加入，边加边轻摇离心管，使PEG与细 胞混匀，然后在37℃水浴中静置1-2 min。
④ 终止PEG作用 （每人一管）
缓慢加入 5 ml Hanks 液，轻轻吹打混匀，于 37℃水浴中 静置5 min。
成细胞的融合率较低。
2. 必须严格控制 PEG 的作用时间，通常处理细胞 1 ～ 2min 。 PEG和二甲基亚砜（DMSO）并用，可以提高细胞的融合率。
3. 融合细胞继续培养就变成一个杂种细胞，它的染色体数不是
两核的倍数，因为一些染色体会逐渐消失。
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六、实验报告
• 1. 绘制你所观察到的融合细胞。 • 2. 选取5个随机视野进行观察，计算融合率。 • 3. 请写出细胞融合基本原理及应用。
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三、实验材料、仪器和试剂
1.材料：成年家鸡。 2.主要仪器：
注射器、刻度离心管、离心机、水浴锅、滴管、 显微镜、烧杯、容量瓶、凹面载玻片、盖玻片、酒 精灯等。
3.主要试剂：
阿氏血液保存液、Hanks溶液、50%（W/V）PEG400溶液、瑞氏染液。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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四、实验方法与步骤