细胞融合实验报告
生物物理融合实验报告
一、实验目的1. 了解生物物理融合实验的基本原理和方法。
2. 掌握利用生物物理技术进行细胞融合的操作步骤。
3. 分析细胞融合实验的结果，探讨细胞融合对细胞形态和功能的影响。
二、实验原理细胞融合是指两个或多个细胞通过质膜融合形成单个双核或多核细胞的现象。
生物物理融合实验是一种常用的细胞融合方法，通过物理或化学方法使细胞质膜发生融合，从而实现细胞间的物质交换和基因重组。
本实验采用聚乙二醇（PEG）作为融合剂，利用PEG的高分子量和亲水性，使细胞质膜发生融合。
PEG作为一种无毒、无害的生物相容性物质，在细胞融合实验中具有广泛的应用。
三、实验材料1. 细胞：鸡红细胞、小鼠成纤维细胞等。
2. 试剂：Alsver液、0.85%生理盐水、GKN液、50%PEG液等。
3. 器材：显微镜、离心机、水浴箱、离心管、滴管、载玻片、盖玻片等。
四、实验步骤1. 制备细胞悬液：将鸡红细胞和小鼠成纤维细胞分别制成细胞悬液，调整细胞浓度为1×10^6个/mL。
2. 预处理细胞：将细胞悬液在37℃水浴中预热10分钟，使细胞膜处于松弛状态。
3. 融合处理：将两种细胞悬液等体积混合，加入50%PEG液，混匀后立即加入0.85%生理盐水终止反应。
4. 分离细胞：将融合后的细胞悬液离心，弃去上清液，收集沉淀。
5. 洗涤细胞：用0.85%生理盐水洗涤沉淀，重复2次。
6. 制片观察：将洗涤后的细胞制成涂片，用姬姆萨染色，在显微镜下观察细胞融合情况。
五、实验结果1. 鸡红细胞与小鼠成纤维细胞在PEG诱导下发生了融合，形成双核或多核细胞。
2. 融合细胞的形态发生了变化，细胞体积增大，细胞核数目增多。
3. 融合细胞的功能也发生了改变，如小鼠成纤维细胞的生长速度和代谢能力有所提高。
六、实验讨论1. 本实验结果表明，PEG是一种有效的细胞融合剂，可以用于鸡红细胞与小鼠成纤维细胞的融合。
2. 细胞融合实验的结果表明，细胞融合可以改变细胞的形态和功能，为研究细胞生物学和分子生物学提供了新的方法。
细胞融合实验报告
一．实验目的1.了解并掌握细胞融合的方法2.了解细胞融合技术及其在生命科学中所起的作用3.掌握化学融合法，了解电融合法及CRY-3细胞融合仪的使用二．实验原理两个或两个以上的细胞合并成一个双核或多核细胞的现象称为细胞融合，也称细胞杂交，在自然情况下的受精过程即属这种现象。
诱导细胞融合的主要方法有：病毒诱导融合，化学融合剂诱导融合和电融合。
1. 病毒诱导融合：有许多种类的病毒能介导细胞融合，最常用的是灭活的仙台病毒（HVJ），为RNA病毒。
病毒诱导细胞融合的过程有：首先是细胞表面吸附许多病毒粒子，接着细胞发生凝集，几分钟至几十分钟后，病毒粒子从细胞表面消失，而就在这个部位邻接的细胞的细胞膜融合，胞浆相互交流，最后形成融合细胞。
2. 化学融合剂诱导融合：化学融合剂主要有高级脂肪酸衍生物、脂质体、钙离子、水溶性高分子化合物、水溶性蛋白质和多肽，其中最常用的是聚已二醇（PEG）。
PEG用于细胞融合至少有两方面的作用：①可促使细胞凝结；②破坏互相接触处的细胞膜的磷脂双分子层，从而使相互接触的细胞膜之间发生融合，进而细胞质沟通，形成一个打的双核或多核融合细胞。
3. 电融合：是指细胞在电场中极化成偶极子，并沿着电力线排列成串，然后用高强度、短时程的电脉冲击穿细胞膜而导致细胞融合。
主要过程包括：1.制备原生质体：微生物及植物细胞有坚硬的细胞壁，需要用酶将其降解，而动物细胞无需要去壁处理。
2.诱导细胞融合：两种亲本细胞的悬浮液调到一定密度，滴入高浓度的聚乙二醇（PEG）诱导融合，或用物理方法如电刺激促进融合。
3.筛选杂合细胞：在特定的筛选培养基上，让杂合细胞有选择地生长，除去其他未融合的细胞。
细胞融合技术在基因定位、基因表达产物、肿瘤诊断核治疗、生物新品种培育及单克隆抗体技术等领域有着非常广泛的应用前景。
单克隆抗体技术就是通过细胞融合技术发展起来的，在生命科学研究核应用方面产生了重大影响。
三．实验结果与分析讨论融合细胞的观察实验中发现大部分的融合都是3个细胞的融合，两个相互融合的很少基本没有找到。
细胞融合实验报告
细胞融合实验报告细胞融合是一种重要的生物学实验技术，通过将两个不同细胞的质膜融合在一起，使它们的细胞质混合，从而产生新的细胞。
本实验旨在探究细胞融合对细胞生长和功能的影响，为细胞生物学研究提供实验依据。
首先，我们选择了两种不同类型的细胞进行融合实验，一种是小鼠胚胎成纤维细胞，另一种是人类胃腺癌细胞。
这两种细胞具有不同的形态和生长特性，我们希望通过它们的融合，观察新细胞的特性变化。
实验过程中，我们采用了聚乙烯醇融合剂将两种细胞进行融合处理，然后将融合后的细胞进行培养。
在培养的过程中，我们观察到融合后的细胞呈现出明显的形态变化，细胞质内出现了新的结构，并且细胞的生长速度也有所增加。
接着，我们对融合后的细胞进行了功能性实验。
结果显示，融合后的细胞在细胞分裂和增殖方面表现出了更活跃的特性，且对外界环境的适应能力也有所提高。
这表明，细胞融合可以增强细胞的生长和功能，为细胞的应用研究提供了新的可能性。
在实验的过程中，我们还发现了一些有趣的现象。
比如，融合后的细胞在形态上呈现出了中间态，既有小鼠胚胎成纤维细胞的形态特征，又具有人类胃腺癌细胞的特性。
这为我们深入研究细胞融合的机制提供了有益的线索。
综合以上实验结果，我们得出结论，细胞融合可以显著影响细胞的形态和功能，使其表现出新的特性。
这对于细胞生物学的研究具有重要意义，也为细胞治疗和再生医学领域提供了新的思路和方法。
总之，本实验通过对细胞融合的观察和分析，揭示了细胞融合对细胞生长和功能的影响，为细胞生物学领域的研究提供了新的启示。
希望本实验结果能够为相关领域的研究工作提供参考，推动细胞融合技术的进一步应用和发展。
细胞融合实验报告
细胞融合实验报告
本实验旨在探究细胞融合对细胞生长和功能的影响，为了达到这一目的，我们进行了一系列的实验操作和数据分析。
在实验中，我们选取了两种不同类型的细胞进行融合，并观察了融合细胞的形态特征、生长情况以及功能表现。
首先，我们以显微镜观察了融合细胞的形态特征。
结果显示，融合细胞的形态呈现出明显的异质性，既有细胞A的特征，也有细胞B的特征，这表明细胞融合后细胞的形态会发生明显的改变，产生新的细胞类型。
其次，我们进行了细胞生长曲线的测定。
通过对融合细胞和单一细胞的生长情况进行比较，我们发现融合细胞的生长速度明显快于单一细胞，这说明细胞融合可以促进细胞的生长和增殖。
随后，我们对融合细胞的功能进行了评估。
实验结果显示，融合细胞在某些功能上表现出了明显的增强，例如对外界刺激的响应能力和分泌功能。
这表明细胞融合可以提高细胞的功能表现，使其具有更强的适应能力和生存竞争力。
最后，我们对融合细胞进行了基因表达谱的分析。
结果显示，融合细胞的基因表达谱发生了明显的改变，一些基因的表达水平显著上调或下调，这说明细胞融合会引起基因表达的重新编程，从而影响细胞的功能和特性。
综上所述，本实验结果表明，细胞融合对细胞的形态、生长和功能都产生了明显的影响，这为我们进一步探究细胞融合的机制和应用提供了重要的实验依据。
希望通过我们的努力，能够为细胞融合领域的研究和应用做出更多的贡献。
细胞融合实验报告
细胞融合实验报告细胞融合实验报告引言：细胞融合是一种重要的生物学研究方法，通过将两个或多个不同种类的细胞融合在一起，可以获得新的细胞群体，进而探索细胞之间的相互作用以及其对生物体的影响。
本实验旨在通过细胞融合实验，探索细胞融合对细胞生长、形态和功能的影响。
材料与方法：1. 细胞培养基：含有足够营养物质的培养基，如DMEM。
2. 细胞：选择两种不同的细胞，如肺癌细胞株A549和正常肺细胞株HBE。
3. 细胞培养器具：培养皿、离心管、吸管等。
4. 融合剂：聚乙二醇（PEG）等。
实验步骤：1. 细胞准备：将A549和HBE细胞分别培养至对数生长期，用PBS洗涤细胞，离心收集。
2. 细胞融合：将A549和HBE细胞按照一定比例混合，加入融合剂（如PEG），轻轻摇晃混合，静置一段时间。
3. 细胞培养：将融合后的细胞悬液加入含有培养基的培养皿中，放入培养箱中，以37摄氏度、5%二氧化碳的条件培养。
4. 细胞观察：在培养过程中，定期观察融合细胞的生长情况、形态变化和功能表现。
结果与讨论：通过细胞融合实验，我们观察到了一些有趣的现象。
首先，融合后的细胞在形态上呈现出不同于原始细胞的特征。
例如，融合细胞的形状可能更加不规则，细胞体积也可能发生变化。
这可能是由于融合过程中细胞膜的融合以及细胞核的合并所导致的。
其次，融合细胞的生长速度可能与原始细胞有所不同。
在我们的实验中，观察到部分融合细胞的生长速度明显加快，而另一部分则与原始细胞相比无明显差异。
这表明细胞融合可能引起细胞生长调控机制的改变，进而影响细胞的增殖速度。
此外，融合细胞的功能表现也可能发生变化。
在我们的实验中，我们发现融合细胞相比于原始细胞，对某些刺激物的反应更加敏感。
例如，在刺激物浓度相同的情况下，融合细胞可能表现出更高的细胞凋亡率或细胞迁移能力。
这提示细胞融合可能改变了细胞信号传导途径，从而影响了细胞的功能。
细胞融合作为一种重要的生物学研究方法，不仅可以帮助我们了解细胞之间的相互作用，还可以为疾病的研究提供新的思路。
细胞融合实验报告讨论
一、实验目的本实验旨在通过细胞融合技术，探讨细胞融合的基本原理、方法及其应用。
通过实验，观察细胞融合过程中细胞的行为与变化，了解不同细胞类型融合的差异，以及细胞融合在生物技术领域的应用前景。
二、实验原理细胞融合是指两个或多个细胞通过质膜融合形成单个双核或多核细胞的现象。
细胞融合技术在生物技术、医学、生物工程等领域具有广泛的应用前景。
本实验采用聚乙二醇（PEG）作为细胞融合的诱导剂，通过改变细胞膜的通透性，使细胞发生融合。
三、实验材料与方法1. 实验材料（1）细胞：小鼠胚胎成纤维细胞、鸡红细胞、人骨髓间充质干细胞等。
（2）试剂：聚乙二醇（PEG）、Hanks液、生理盐水、双蒸水等。
（3）器材：显微镜、离心机、水浴箱、离心管、滴管、载玻片、盖玻片等。
2. 实验方法（1）细胞培养：将小鼠胚胎成纤维细胞、鸡红细胞、人骨髓间充质干细胞等细胞分别培养于DMEM培养基中，置于37℃、5%CO2培养箱中。
（2）细胞融合：将细胞以1×10^6个/mL的浓度接种于培养皿中，待细胞生长至约70%融合时，加入一定浓度的PEG溶液，使细胞发生融合。
（3）观察与检测：通过显微镜观察细胞融合情况，采用流式细胞仪检测融合细胞的DNA含量，分析细胞融合的效果。
四、实验结果1. 显微镜观察在显微镜下，观察到细胞融合现象明显，部分细胞出现双核或多核现象。
2. 流式细胞仪检测流式细胞仪检测结果显示，融合细胞的DNA含量与正常细胞相似，说明细胞融合成功。
五、讨论1. 细胞融合的基本原理细胞融合是细胞生物学领域的一个重要研究方向。
细胞融合的基本原理是：通过改变细胞膜的通透性，使细胞发生质膜融合，进而实现细胞内容物的相互交换。
本实验采用PEG作为细胞融合的诱导剂，其作用机理是改变细胞膜的通透性，使细胞内物质外泄，进而促进细胞融合。
2. 不同细胞类型融合的差异本实验观察到小鼠胚胎成纤维细胞、鸡红细胞、人骨髓间充质干细胞等细胞均能发生融合。
动物细胞融合实验实验报告
动物细胞融合实验实验报告
实验目的：1、了解动物细胞融合的常用方法
2、学习化学融合的基本操作过过程
3、观察动物细胞融合过程中的细胞行为和变化
实验材料：鸡血红细胞、50%PEG溶液、0.85%氯化钠溶液、显微镜、离心机、载玻片、盖玻片等
实验原理：聚乙二醇（PEG）能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。
在恢复过程中相接触的细胞由于接口处脂质双分
子层的互相亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。
实验步骤：1、取鸡血，离心后去除上清液，以0.85%氯化钠溶液制成5%~10%的悬液
2、加入GKN液4ml，混匀
3、加入14滴PEG液，静置3~5min后混匀，放于显微镜下观察
实验结果：显微镜下可观察到有些细胞发生质膜融合
分析与讨论：细胞融合的应用有微生物原生质体融合构成新菌株、利用原生质体融合和培养技术培育新植物、细胞杂交瘤技术与单克隆抗体、用于基因定位和绘制人类基因
图谱、用于生产树突状细胞抗肿瘤疫苗、用于动物育种、用于细胞疗法等。
细胞融合实验报告
姓名班级 13级生命基地班学号同组者：科目细胞生物学实验实验题目动物细胞融合【实验题目】动物细胞融合【实验目的】1.了解动物细胞融合的常用方法。
2.学习化学融合的基本操作过程。
3.观察动物细胞融合过程中细胞的行为与变化。
【实验材料与用品】1、材料鸡血红细胞2、试剂50%PEG、GKN溶液、Alsever’s细胞保存液、0.85%氯化钠溶液。
3、器材倒置显微镜、离心机、载玻片、盖玻片、离心管、废液缸、滴管等。
【实验原理】细胞融合是指在自发或者诱导条件下，两个或两个以上细胞合并为双核或者多核细胞的过程。
目前人们已经发现有很多方法可以诱导细胞融合，包括：病毒诱导融合、化学诱导融和和电激诱导融合。
1、病毒诱导融合仙台病毒、牛痘病毒、新城鸡瘟病毒和疱疹病毒等可以介导细胞的融时也可介导细胞与细胞的融合。
用紫外线灭活后，这些病毒即可诱导细胞发生融合。
2、化学诱导融合很多化学试剂能够诱导细胞融合，如聚乙二醇(PEG)、二甲基亚砜、山梨醇、甘油、溶血性卵磷脂、磷脂酰丝氨酸等。
这些物质能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。
在恢复过程中想接触的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。
化学诱导方法，操作方便，诱导融合的概率比较高，效果稳定，适用于动、植物细胞，但对细胞具有一定的毒性。
PEG是广泛使用的化学融合剂。
3、电激诱导融合姓名班级 13级生命基地班学号同组者：科目细胞生物学实验实验题目动物细胞融合包括电诱导、激光诱导等。
其中，电诱导是先使细胞在电场中极化成为偶极子，沿电力线排布成串，再利用高强度、短时程的电脉冲击破细胞膜，细胞膜的脂质分子发生重排，由于表面张力的作用，两细胞发生融合。
电诱导方法具有融合过程易控制、融合概率高、无毒性、作用机制明确、可重复性高等优点。
【实验步骤】在本次实验中采用的是化学诱导融合的方法，利用PEG使鸡血红细胞发生融合。
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聚乙二醇介导的细胞融合
2012年2月19星期一
陈倩倩（118627140313）同作者：郑梦璐谢雨后赵松
1、文摘
细胞能不受种属的局限可实现种间生物体细胞的融合,使远缘杂交成为可能,因而是改造细胞遗传物质的有力手段。
它的意义在于从此打破了仅仅依赖有性杂交重组基因创造新种的界限,扩大了遗传物质的重组范围。
但融合后获得的杂种细胞具有染色体异倍性,致使细胞株的遗传性不稳定、植株不育性、畸形、生育迟缓等不符合育种要求的性状出现,直接利用杂种细胞作育种材料目前还有许多障碍。
细胞融合技术避免了分离、提纯、剪切、拼接等基因操作,在技术和仪器设备上的要求不像基因工程那样复杂,投资少,有利于广泛开展研究和推广,有着重大的实践意义,正得到科学界的日益重视。
自从20世纪70年代Kao和Michayluk用聚乙二醇( PEG, polyethyleneglycol) 诱导大麦、大豆等植物原生质体融合后PEG 法诱导细胞融合以其容易制备、活性稳定、不需要特别的仪器设备、操作简便等优点, 被普遍地应用于生物、遗传、医药等研究领域. 高体积分数、高相对分子质量的PEG会对细胞产生毒性,是限制其被广泛应用的瓶颈, 此外,由于该方法涉及的影响因素较多, 进一步加大了获得理想细胞融合率的难度.本实验主要研究PEG的浓度和细胞浓度对细胞融合率的影响。
2、背景介绍
细胞融合现象最初是在动物细胞中发现的。
1958年日本学者阅田善雄用紫外光灭活的仙台病毒在体外诱导艾氏腹水红纲胞相互融合。
1965年他和Harris等在此基础上各自分别采用灭活的仙台病毒,诱导产主了第一个种间融合并培养成活。
一年后Yerganzan又进一步使用仙台病毒获得了能够增殖的杂种细胞。
后来Littlefield 用缺陷型细胞HGPRT-XTK-细胞杂交,用HAT 选择培养基选出杂种细胞,开创了细胞工程的新纪元,继而推动了整个生物工程的发展。
1975年英国科学家Milestein 和Kohler在体细胞杂
交基础上创立了B淋巴细胞杂交瘤技术,他们将在体外不能长期生存的经绵羊红细胞免疫过的小鼠脾细胞（B淋巴细胞）与在体外能迅速增殖的小鼠骨髓溜细胞在聚乙二醇（PEG）或汕台病毒的作用下融合而产生杂交瘤细胞,所得杂交瘤细咆承袭了两种亲代细胞的遗传特性,既保存了瘤细胞在体外迅速增殖传代的能力,又继承了免疫细胞合成和分泌的能力,即能分泌抗绵羊红细胞的抗体。
该技术被誉为免疫学的一次革命其创建者荣获1984年诺贝尔医学和生理学奖。
B细胞杂交瘤可在体外大量培养,也可接种到小鼠腹腔中繁殖。
自1975年以来,世界各国科学家采用B细胞杂交瘤技术已制备出万余种单抗,其中绝大部分为小鼠墓抗。
所谓单抗就是指培养单个杂交瘤细胞使之无性生殖形成细胞集落（称为克隆）,由这些细胞所产生的只能识别和对付一种抗原的特导性抗体就称为单克隆抗体,即单抗。
单抗于八十年代处已领尤商品化，现已有百余种诊断试剂和数种治疗剂投放市场。
目前,单抗新兴产业正在形成。
随着B 淋巴细胞杂交瘤技术的建立和发展,B淋巴细抱杂交瘤技术也发展起来了。
早在1977年就有T细胞杂交瘤的报道,但有功能的、能分泌各种因子的T细胞杂交瘤的报道则始于1978年,如抗原特异的抑制因子,制造T细胞杂交瘤技术的基本操作过程和B细咆杂交瘤技术相似,只是用于融合的细胞是激活或抗原致敏的T 细胞和酶缺陷型的淋巴瘤细胞。
目前,由于技术上的限制,T 细胞杂交瘤还未能发挥其固有的潜能,所以,虽然这项技术开展的时间不短,但收到的成效却不如B细胞杂交瘤那么显著.
最近研究表明,细胞融合与病毒和细胞之间的融合以及细胞内的膜泡融合有许多相似之处, 即带包被的病毒( 或细胞) 通过转膜病毒蛋白介导与宿主细胞的细胞膜进行融合。
I 类病毒融合蛋白包括流感病毒红血球凝集素( HA) 和人类免疫缺陷病毒包被蛋白,它们都具有相似的结构域, 即都具有a- 螺旋结构。
病毒和细胞之间正是通过这些蛋白来完成融合过程( 伴随有构象的变化)的。
细胞内的膜泡融合也是如此, 其相关融合蛋白包括GTPases 及SNARE家族。
因此推测细胞融合采用相似的机理。
然而细胞融合蛋白并不全具有a- 螺旋结构, 提示a- 螺旋并非融合所必需。
3、材料和方法
3.1材料
• 用Alsver液悬浮的鸡血细胞
• Alsver溶液，
• 0.85% 的生理盐水，
• GKN溶液，
• 50% 的聚乙二醇溶液
3.2工具和仪器
• 盖玻片，载玻片，离心管，试管，吸管，显微镜，离心机
3.3实验步骤
1.向1 ml血细胞悬液中加入 4 ml 0.85% 生理盐水，清洗细胞，1000-1200 r/min离心5min。
弃上清。
2. 重复第一步一到两次。
3. 细胞沉淀中加GKN溶液至 2 ml ，混匀。
4. 加0.5ml的混合液到1.5ml的GKN溶液中，充分混匀。
红细胞的密度应该是 1.5×107/ml。
将这一管标记为A。
5. 将0.5ml的液体移到另一个管B中，加1.0ml GKN溶液，充分混匀。
B管中血细胞的浓度变成5.0×106/ml.
6. 按照下表，将A、B中的溶液平均分成三份，分别标记为A1-3 和B1-3 共设立6组每组各含有 0.5 ml 细胞悬液。
PEG
0%17%33%
RBC/ml
5.0×106A-1A-2A-3
1.7×106B-1B-2B-3
7. GKN溶液1, 0.5 and 0ml分别加到第6步中标记的1，2 和3号管中。
然后各管中加0, 0.5 and 1 ml 50% PEG溶液至总体积为2ml。
8. 在室温下静置2-3 min，然后镜检。
9. 将红细胞悬液涂片，在光镜下观察细胞融合情况。
寻找融合细胞并计算融合率。
4、结果
实验记录如下图
分组A-1A-2A-3B-1B-2B-3
004012融合
数
统计
505050505050数
0.000.000.080.000.020.04
融合
率
由上述结果可知：
1.由单独的A组（或B组）内部相互对照可知，在细胞浓度相同的情况下，PEG浓度越大诱导细胞融合率越高。
2，由A－3、B－3组相互对照可知，在相同浓度的PEG的情况下，细胞浓度越大诱导细胞融合率越高。
而矛盾的是，比较A-2、B-2组相互对照结果却正好相反。
5、讨论
1，通过这次实验可以看出，诱导细胞融合成功的因素一方面与诱导剂的浓度有关，在一定的范围内诱导剂PEG的浓度越高，诱导成功率越高；另一方面与细胞的浓度有关，相互接触的细胞才有可能进行融合，因此，在一定的范围内，细胞的浓度越高诱导成功率越高。
2，对于结果2的矛盾可能原因是因为细胞融合本身就是概率事件，而且这次实验仅仅只是一次实验统计的结果，所以结果并不具有代表性。
因此尽管看似矛盾的结果，实际上并不矛盾。
要得到更加明确的结果，需要对更多相同的实验统计得到的结果进行分析。
3，通过这次试验我知道，一次实验的结果并不值得信赖，需要多次统计检验才能获得相对而言比较接近事实的结果。
6、参考文献
1，李秀兰、姜曰水聚乙二醇诱导细胞融合影响因素菏泽学院学报 1673-2103(2007)05-0079-04
2，周显青细胞融合的研究和发展淄博师专学报第二期1995年6月。
3，李保华细胞融合研究进展安徽农业科学,Journal of Anhui Agri . Sci .2008,36(15) :6187- 6188,6207。