PEG诱导细胞融合
PEG诱导细胞融合
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7. PEG诱导细胞融合一般与
搭配使用。
A. NaCl B. KCl C. CaCl 2 D. AlCl 3
二、简答题 1.简述动物细胞融合的一般过程。 2.简述PEG诱导细胞融合的优缺点。
分泌抗体 杂交瘤细胞 长命
一、细胞融合的概念和目的
• 细胞融合：自然或人为条件下，两个或两 个以上细胞相互接触，发生膜融合、胞质 融合和核融合形成融合细胞的现象。
• 目的：获得杂种优势
二、细胞融合的一般过程
凝集 膜融合 质融合 核融合
细胞膜的结构模式图
三、PEG的性质
• 中文名称：聚乙二醇 • 用于细胞融合的分子量:1000－6000 • 使用浓度:30－60％。 • PEG的处理时间:时间较短 • PEG分子量和浓度越大，其融合率越高，但它的细
22peg可使细胞膜的脂类分子发生重排排开膜蛋白并作用于膜磷脂极性基团和细胞膜表面蛋白使膜磷脂的表面电位下降同时使膜糖蛋白的排阻体积减少最终使膜出现缺口
第五章 细胞融合与杂交
分泌抗体 短命
脾细胞 (B淋巴细胞)
长命 不分泌抗体
骨髓瘤 细胞
1984年Nobel医学奖
Köhler和Milstein, 1975
胞毒性和粘度也随之增大。源自四、PEG促融合作用机理1、PEG含有大量醚键，可吸附溶液中大量的 自由水，使细胞凝集。 2、PEG可使细胞膜的脂类分子发生重排，排 开膜蛋白，并作用于膜磷脂极性基团和细胞 膜表面蛋白，使膜磷脂的表面电位下降，同 时使膜糖蛋白的排阻体积减少，最终使膜出 现缺口。
实验四 PEG诱导细胞融合
实验四 PEG诱导细胞融合（注：设计性试验）一、实验目的1、了解PEG诱导细胞融合的基本原理。
2、通过PEG诱导鸡红细胞之间的融合实验米初步掌握细胞融合技术二、实验原理两个或两个以上的细胞合并为一个双核或多核细胞的现象称为细胞融合。
在自发或人工诱导下均可发生。
自然情况下的受精过程即属于这种现象。
不同种细胞的融合也叫做细胞杂交。
基本过程包括细胞融合形成异核体、异核体通过细胞有丝分裂进行核融合、最终形成单核的杂种细胞。
20世纪30年代，科学家们相继在肺结核，天花，水痘，麻疹等疾病患者的病理组织中观察到多核细胞。
50年代开始人工细胞融合的研究。
60年代初，日本学者冈田（Okada）首次使用仙台病毒诱导动物细胞融合。
70年代后，逐渐采用化学融合剂（如PEG），由于具有使用方便、活性稳定、容易制备和控制等优点，已成为人工诱导细胞融合的主要手段。
80年代初出现了电融合技术，逐渐应用于科学研究。
诱导细胞融合的方法有三种：生物方法（如病毒诱导融合法）、化学方法（如聚乙二醇PEG诱导融合法）、物理方法（如电场诱导融合法）。
本实验利用PEG诱导细胞融合。
聚乙二醇分子能减少细胞间的游离水，促使细胞聚集；破坏或者改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，使细胞发生融合。
三、实验材料（一）、试剂：1、Alsver’s液：葡萄糖2.05g，柠檬酸钠0.80g，NaCl 0.42g，溶于100ml蒸馏水中。
2、0.85％生理盐水3、GKN溶液：NaCl 8g、KCl 0.4g、Na2HPO4·2H2O 1.77g、Na2HPO4·H2O 0.69g，葡萄糖2g，酚红0.01g，溶于1000ml蒸馏水中。
4、35％PEG液：实验前临时配制，根据需要称取定量PEG（Mw=4000），放入刻度试管或刻度离心管内，在沸水浴中加热，使其熔化，待冷却至50℃时，加入预热至50℃的GKN液，混匀。
PEG诱导鸡血细胞融合实验方法比较
PEG诱导鸡血细胞融合实验方法比较PEG（聚乙二醇）介导的鸡血细胞融合实验是一种常用的细胞学实验方法，用于研究细胞融合、基因转移、病毒感染等现象。
在这个实验中，PEG起到促进融合的作用。
本文将对常用的PEG诱导鸡血细胞融合实验方法进行比较。
1.直接混合法：直接混合法是最简单直接的方法，将两种不同细胞类型的细胞直接混合，加入PEG处理后，通过细胞的融合产生融合细胞。
实验步骤：a.将两种不同类型的鸡血细胞分别培养至对数生长期。
b.将细胞收集、洗涤后，按照一定比例混合在一起。
c.在混合细胞悬液中加入PEG，进行处理。
d.处理后的细胞悬液进行培养。
优点：简单快捷，操作方便。
缺点：融合效率低，融合细胞的纯度较低，难以鉴定融合细胞。
2.等渗处理法：等渗处理法使用PEG使两个细胞类型的渗透压基本相等，减小由于渗透压差带来的融合细胞死亡的可能性。
实验步骤类似于直接混合法，不同之处在于在混合前要将细胞分别处理加入等量的PEG。
优点：可以减少融合细胞死亡的可能性。
缺点：融合效率仍然较低，难以确保融合细胞的纯度。
3.高瓶底法：高瓶底法是一种间接融合法，将两种细胞性的细胞分别培养到八倍增生指数时接种于两个高菌瓶内，将角质层去除，用高菌瓶口与高速离心的纺棉花轻摩转盘瓶底，离心至指定g数。
因离心后双方菌瓶接触，菌体外膜断裂，细胞在瓶壁内微小空间聚集，有利于融合。
实验步骤：a.将两种不同类型的鸡血细胞分别培养至八倍增生指数。
b.将细胞收集后接种于两个高菌瓶内。
c.去除角质层，将高菌瓶口与高速离心的纺毛轻摩转盘瓶底。
d.将菌瓶离心至指定g数。
优点：融合效率较高，融合细胞纯度较高。
缺点：操作复杂，需要使用专用设备。
4.电熔法：电熔法是利用电场将两种细胞融合的方法。
通过电熔法可以达到融合效率较高的效果。
实验步骤：a.将两种不同类型的鸡血细胞分别培养至对数生长期。
b.将细胞收集后接种于电熔腔中。
c.设置一定的电场参数，通过电场产生的作用使细胞融合。
PEG促进细胞融合的原理
PEG促进细胞融合的原理人教2019版高中生物学选择性必修三P37提到，人工诱导细胞融合用到聚乙二醇（PEG）：那么，聚乙二醇（PEG）为什么能促进细胞融合呢？聚乙二醇（PEG）：1.聚乙二醇分子能改变各类细胞的生物膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，从而使细胞发生融合，从而形成杂种细胞。
2.PEG的水溶性强，在液相介质中，其分子表面的醚键带有微弱的负电荷，在Ca2+离子的参与下，可将带正电的表面蛋白或带负电荷的糖蛋白通过Ca2+桥相连，从而使细胞发生聚集、融合。
在50%PEG中，自由水消失，可导致细胞脱水而引起质膜结构变化和细胞融合。
PEG用于细胞融合中的优点为：通用性强，可用于动、植物和微生物各种细胞；比仙台病毒等易制备和控制；活性稳定，使用方便。
例、下列有关细胞工程的叙述，正确的是（）A.PEG是促细胞融合剂，可直接诱导植物细胞融合B.用原生质体制备人工种子，要防止细胞破裂C.骨髓瘤细胞经免疫处理，可直接获得单克隆抗体D.核移植克隆的动物，其线粒体DNA来自供卵母体解析：本题考查植物体细胞杂交技术、核移植等技术及应用，意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系，形成知识网络结构的能力；能运用所学知识，对生物学问题作出准确判断的能力．1、植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较：项目细胞融合原理细胞融合方法诱导手段用途植物体细胞杂交细胞膜的流动性，（细胞的全能性）用酶解法去除细胞壁后诱导原生质体融合离心、电刺激、聚乙二醇等试剂诱导克服远缘杂交不亲和，获得杂交植株动物细胞融合细胞膜的流动性用胰蛋白酶处理使细胞分散后，诱导细胞融合离心、电刺激、聚乙二醇、灭活病毒等试剂诱导制备单克隆抗体的技术之一2、杂交瘤细胞的特点：既能大量增殖，又能产生特异性抗体．3、体细胞核移植：又称体细胞克隆，作为动物细胞工程技术的常用技术手段，即把体细胞移入去核卵母细胞中，使其重组并能发育为新的胚胎，这个胚胎最终发育为动物个体．用核移植方法获得的动物称为克隆动物．PEG是促细胞融合剂，但是不能直接诱导植物细胞融合，植物细胞需要先去除细胞壁形成原生质体才能融合，A错误；制备人工种子，需要用完整植物细胞，借助于植物组织培养技术来实现，不需用原生质体，B错误；能产生抗体的是浆细胞，骨髓瘤细胞不能产生抗体，C错误；、核移植克隆的动物，需要供核一方和供质一方（一般用处于减数第二次分裂中期的卵细胞的细胞质），其线粒体DNA来自供卵母体，D正确．故选：ABC．。
peg诱导细胞融合原理
peg诱导细胞融合原理PEG诱导细胞融合原理。
细胞融合是指两个或两个以上的细胞融合成一个细胞的现象，它在生物学研究中具有重要的意义。
PEG（聚乙二醇）是一种常用的细胞融合剂，通过PEG诱导细胞融合可以实现不同细胞的融合，从而产生新的细胞群体。
本文将介绍PEG诱导细胞融合的原理及其在细胞生物学研究中的应用。
首先，PEG诱导细胞融合的原理是利用PEG的高渗透性和毒性，使细胞膜受到破坏，从而促使细胞融合。
在实验中，将两种不同类型的细胞分别与PEG混合，PEG能够破坏细胞膜，使得两种细胞的质膜融合在一起，形成一个新的细胞。
这种方法可以用于融合不同细胞系，或者将外源基因导入目的细胞中。
其次，PEG诱导细胞融合在细胞生物学研究中有着广泛的应用。
通过细胞融合技术，可以将两种不同类型的细胞融合在一起，从而研究它们的互补性和相互作用。
例如，将癌细胞与正常细胞融合，可以研究癌细胞的恶性特性和调控机制；将干细胞与成熟细胞融合，可以研究干细胞的分化能力和再生潜力。
此外，PEG诱导细胞融合还可以用于细胞杂交技术，将两种不同细胞的染色体融合在一起，研究染色体的配对和重组。
此外，PEG诱导细胞融合还可以用于细胞治疗和再生医学研究。
通过将患者的细胞与健康捐赠者的细胞融合，可以修复患者受损的组织和器官。
例如，将患者的干细胞与健康捐赠者的成熟细胞融合，可以使干细胞具有更强的分化能力，从而用于治疗各种疾病和损伤。
此外，PEG诱导细胞融合还可以用于再生医学研究，研究干细胞的再生潜力和分化机制，为再生医学的发展提供重要的实验基础。
综上所述，PEG诱导细胞融合是一种重要的细胞生物学技术，通过破坏细胞膜促使细胞融合，具有广泛的应用价值。
在细胞生物学研究中，PEG诱导细胞融合可以用于研究细胞互补性和相互作用，染色体配对和重组，以及细胞治疗和再生医学研究。
相信随着科学技术的不断发展，PEG诱导细胞融合技术将会在细胞生物学和医学领域发挥越来越重要的作用。
PEG法诱导细胞融合
实验十PEG法诱导细胞融合一、实验目的1.了解聚乙二醇（PEG）诱导体外细胞融合的基本原理。
2.通过PEG诱导鸡血细胞之间的融合实验，初步掌握细胞融合的基本方法。
二、实验原理细胞融合（cell fusion）又称体细胞杂交，是指用人工方法使两个或两个以上的体细胞融合成异核体细胞，随后，异核体同步进入有丝分裂，核膜崩溃，来自两个亲本细胞的基因组合在一起形成只含有一个细胞核的杂种细胞（hybrid cell）。
细胞融合技术是研究细胞遗传、基因定位、细胞免疫、病毒和肿瘤的重要手段。
依据融合过程采用的助融剂的不同，细胞融合可分为：①病毒诱导的细胞融合，如仙台病毒(hemagglutinating virus of Japan,HVJ);②化学因子诱导的细胞融合，如聚乙二醇（polyethyleneglycol ,PEG）;③电场诱导的细胞融合；④激光诱导的细胞融合。
PEG是乙二醇的多聚化合物，存在一系列不同分子量的多聚体。
PEG可改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处脂类分子发生疏散和重组，引起细胞融合。
该方法应用相对分子质量为400~6000的PEG溶液引起细胞的聚集和粘连，产生高频率的细胞融合。
融合的频率和活力与所用PEG分子质量、浓度、作用时间、细胞的生理状态与密度等有关。
三、实验仪器、材料和试剂（１）仪器、用具：注射器、刻度离心管、离心机、血细胞记数板、水浴锅、滴管、显微镜、烧杯、容量瓶、凹面载玻片、盖玻片、酒精灯等。
（２）材料：成年家鸡。
（３）试剂1）0.85%NaCl溶液。
2）GKN液：8.0gNaCl，0.4g KCl,1.77 g Na2HPO4·2H2O，0.69 g NaH2PO4·H2O,2.0g葡萄糖,0.01g酚红,溶于1000ml重蒸水中。
3）50%（m/v）PEG溶液：①取50gPEG （相对分子量=4 000）放入100ml瓶中，高压灭菌20min.②让PEG 冷却至50-60℃，勿让其凝固。
PEG诱导的细胞融合实验
【实验操作】
1、调整肿瘤细胞浓度：处死小鼠，抽取腹水，计数 细胞浓度，用Hanks液稀释成个107个/ml
2、配2％鸡红细胞悬液：肝素抗凝鸡血1000rpm离 心5min，去血浆；按红细胞压积用Hanks液配成2 ％悬液（约108个/ml）。
【实验目的】
• 了解聚乙二醇诱导细胞融合的原理与技术； • 学会鉴别融合细胞。
【实验材料及用品】
一、实验材料： 1、鸡红细胞 2、小鼠腹水瘤细胞 二、实验器材 普通离心机 水浴锅：50ºC，37ºC 计数板
三、实验试剂
1、180IU/ml肝素钠生理盐水溶液 2、Hanks溶液 3、50％PEG：将10gPEG加入带盖离心管中，
用细胞融合方法培育的薯番茄
细胞融合抗盐碱耐干旱葡萄新品种
细胞融合生产 单克隆抗体
细胞融合的诱导
1、病毒诱导：如仙台病毒（Sendaivirus） ，主要用于动
物细胞融合。
2、电融合：用电融合仪诱导融合，主要用于植物细 胞。
3、聚乙二醇（polythyleneglycol，PEG）诱导：分 子量200－6000都可用，以1000较好。用于诱 导植物原生质体融合和多种动物细胞融合。 优点：材料易得、操作方法简单、效果稳定。
计数200个细胞计算异细胞融合率融合细胞核数占细胞核总数的百分率融合细胞核数100融合细胞核数未融合的细胞核数peg处理时间不宜过长否则会造成细胞破坏或有多个细胞彼此融合形成巨大的合经peg处理后加液混匀时应轻轻吹打以免刚刚融合的细胞分开
PEG诱导的细胞融合实验
细胞融合（cell fusion）
peg诱导细胞融合原理
peg诱导细胞融合原理
PEG诱导细胞融合原理
PEG是聚乙二醇的缩写，是一种具有高分子量的线性聚合物。
PEG在
生物学研究中被广泛应用，其中最常见的应用之一就是诱导细胞融合。
细胞融合是指将两个或多个细胞融合成一个单独的细胞。
这种技术被
广泛应用于生物学研究中，例如制备杂交瘤细胞、制备单克隆抗体和
产生转基因动物等。
PEG诱导细胞融合的原理是利用PEG分子与细胞膜相互作用，使得两个或多个不同类型的细胞在PEG存在下发生融合。
具体来说，PEG通过以下机制促进了细胞融合：
1. 破坏细胞膜结构
PEG分子可以与水形成氢键，并且可以与亲水性区域结合。
当PEG溶液与细胞接触时，它会插入到细胞表面，并破坏部分磷脂双层结构，
从而使得两个或多个不同类型的细胞暴露出其内部的细胞质。
2. 促进细胞膜的接触
PEG分子可以通过两种方式促进细胞膜的接触。
首先，PEG可以降低水的表面张力，使得两个或多个细胞之间的距离缩小。
其次，PEG可以与细胞膜表面的亲水性区域结合，从而增加了两个或多个细胞之间的吸引力。
3. 促进细胞融合
当两个或多个不同类型的细胞表面接触时，PEG会形成一个临时性的孔道，使得两个或多个细胞质混合在一起。
这些孔道很快就会关闭，并且新形成的单一细胞会拥有所有原始细胞中所包含的遗传物质和生物学特性。
总之，PEG诱导细胞融合是一种简单、有效、广泛应用于生物学研究中的技术。
它利用PEG分子与细胞膜相互作用来促进不同类型细胞之间发生融合，并且可以产生许多重要的研究工具和应用。
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科目细胞生物学实验实验题目动物细胞融合日期2013.03.07 姓名*** 系年级2011级生物基地学号***实验一利用聚乙二醇为媒介物进行细胞融合摘要细胞融合(cell fusion)是在自发或人工诱导下，两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。
基本过程包括细胞融合形成异核体(heterokaryon)、异核体通过细胞有丝分裂进行核融合、最终形成单核的杂种细胞。
诱导细胞融合的方法有三种：生物方法（病毒）、化学方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（离心，震动，电刺激）。
某些病毒如：仙台病毒、副流感病毒和新城鸡瘟病毒的被膜中有融合蛋白（fusion protein），可介导病毒同宿主细胞融合，也可介导细胞与细胞的融合，因此可以用紫外线灭活的此类病毒诱导细胞融合。
化学和物理方法可造成膜脂分子排列的改变，去掉作用因素之后，质膜恢复原有的有序结构，在恢复过程中便可诱导相接触的细胞发生融合。
关键词细胞融合；人工诱导；PEG前言人工诱导的细胞融合，在六十年代作为一门新兴技术而发展起来。
由于它不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合，因此细胞融合技术目前被广泛应用于细胞生物学和医学研究的各个领域。
基因型相同的细胞融合成的杂交细胞称为同核体（homokaryon）；来自不同基因型的杂交细胞则称为异核体（heterokaryon）。
细胞融合不仅可用于基础研究，而且还有重要的应用价值，在植物育种方面已经成功的有萝卜+甘蓝、粉蓝烟草+郎氏烟草、番茄+马铃薯等等。
细胞融合另一个重要应用就是制备单克隆抗体，单克隆抗体可以用作诊断试剂，治疗疾病和运载药物，具有准确，高效，简易，快速等优点。
因此，融合细胞的研究为生物学无论在基础理论上或生产实践上开辟了一条新的道路。
这一技术已成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段。
一．实验目的1.了解动物细胞融合的常用方法及原理。
2.掌握利用PEG为介导物对细胞进行诱导融合的方法。
3.观察动物细胞融和过程中细胞的行为和变化。
二．实验原理化学融合剂聚乙二醇(polyethylene glycol，PEG)是乙二醇的多聚化合物，是存在一系列不同分子量的多聚体。
PEG可诱导细胞间的融合，主要有两方面的原因：第一，PEG可以破坏和干扰各类细胞的膜结构，使两细胞相互接触部位的膜脂双层中磷脂分子发生疏散，进而使其结构发生重排，再加上膜脂双层的相互亲合以及彼此间表面张力的作用，引起相邻的重排质膜在修复时相互合并在一起,使两细胞的胞质沟通,从而造成相互接触的细胞之间发生融合。
第二，PEG 可与水分子借氢键结合，在高浓度的PEG 溶液中自由水消失，导致细胞脱水而发生质膜结构的变化，引起细胞融合。
为了发挥PEG 促进细胞融合的效力，必须采用较高浓度的PEG 溶液，但在高浓度PEG 溶液下，细胞可能因脱水而受到显著的破坏。
因此，选择合适的分子量、浓度及作用时间是PEG 融合技术的关键。
利用PEG诱导细胞融合,其融合效果受以下几个因素的影响：1.PEG的分子量：细胞融合效果与PEG的分子量成正比，但PEG的分子量越大，对细胞的毒性就越大。
在实验时常常采用的PEG分子量一般为800~1000。
2. PEG的浓度：细胞融合效果与PEG的浓度成正比，但PEG的浓度越高，对细胞的毒性就越大。
在实验时常常采用的PEG浓度一般为40~60%。
3.PEG的pH值：经验证，PEG的pH值在8.0~8.2之间融合效果最好。
4.PEG的处理时间：处理时间越长，融合效果越好,但对细胞的毒害也就越大。
故一般将处理时间限制在1~5分钟。
5.融合时的温度：由于生物膜膜的流动性与温度成正比，故细胞的融合效果也与温度成正比。
为了获得更好的融合效果,在细胞可能承受的温度范围内可适当提高处理的温度。
对于哺乳动物的细,一般采用的温度为38~40℃。
本实验所用材料为鸡的血细胞，这是因为:1).鸡血细胞具有细胞核，便于对融合细胞进行鉴别；2).实验材料便宜、易得。
细胞融合与否，可通过观察细胞内核的数目来进行鉴别。
细胞内只有一个核，为未融合细胞；有二个至多个核，为融合细胞。
三．实验材料1.材料用Alsever液悬浮的鸡血红细胞2.器材普通光学显微镜、离心机、离心管、滴管、载玻片、盖玻片。
3.试剂Alsever 液(pH7.4)、0.85％生理盐水、GKN 液、50％PEG四．实验步骤1.取鸡血2ml+2ml Alsever液，再加入6ml Alsever液，混匀后制悬液（4℃下保存）。
（已由老师完成）2.取上步中所得悬液1ml+4ml 0.85％的NaCl溶液，进行以下离心处理：1200r/min离心5min。
3.将上步的沉降血球（去上清液后，约0.1-0.2ml），加入GKN液至1-2ml，使之成10%的细胞悬液。
4.取上述10%的血球悬液1ml，加入3ml GKN液，使每毫升含血球15000000个，即1.5×107个/ml。
5.取步骤4中所得悬液，按以下三种方式进行混匀，滴片，2-3min后观察：（1）1ml+0.5ml 50%的PEG液（这一管标记为1号）；（2）0.5ml+0.5ml 50%的PEG液（这一管标记为2号）；（3）0.5ml+1ml 50%的PEG液（这一管标记为3号）。
观察在不同PEG液浓度下的细胞融合情况，并说明，细胞融合率是否随着PEG 液浓度的升高而逐渐提高。
五．实验结果1.细胞融合观察：2.不同PEG浓度下，细胞融合率的比较：据实验观察比较：1ml+0.5ml 50%的PEG诱导的细胞融合率与0.5ml+0.5ml 50%的PEG诱导的细胞融合率都很低，而0.5ml+1ml 50%的PEG诱导的细胞融合率明显高于前两组。
于是，可得出结论：在一定的PEG浓度范围内，随PEG浓度的升高，细胞的融合率随之升高。
六．结果分析从实验结果可知，鸡血红细胞之间出现了不同程度的融合现象，并且随着PEG浓度的升高，融合率也随之提高。
总体来说融合率还是不错的。
主要原因如为：PEG的分子量、浓度、与PH值较为适合诱导细胞的融合，与鸡血红细胞悬浊液接触时间适宜，向混合液中吹气泡，使PEG与鸡血红细胞充分接触，以至于达到了比较高的细胞融合率。
由于PEG的作用，一些细胞发生变形，因为PEG有凝集作用，红细胞发生多细胞的凝集反应。
七．注意事项1.放置离心管的时候一定要对称放置，这样才能转起来，保证不偏；2.开启离心机的时候一定要将盖子盖上，保证安全；3.在制备鸡血红细胞时要反复离心洗涤制备的鸡红细胞液以清洗掉杂质；4.仔细标记好试管，以免出错；5.镜下观察时要注意区分重叠细胞和融合细胞；※6.PEG加到细胞悬液中2-3min后，用滴管向内部吹气，使PEG与细胞悬液均匀混合，以达到比较高的融合率；7.PEG对细胞融合的作用效果与毒害作用随着分子量的增加而增大，实验中由于不要求对融合的细胞进行进一步的培养，可以选择分子量较大的PEG，本实验中PEG分子量为4000。
8.PEG对细胞融合的作用效果和毒害作用随着浓度的增加而增大。
在实验过程中一般采用40%-60%浓度的PEG溶液，PEG 的浓度以50%为好。
9.PEG的PH值应控制在8.0~8.2之间。
八．实验心得通过本次实验，我懂得了聚乙二醇诱导细胞融合的原理和方法，并成功的完成了实验。
细胞融合是生物学中一项基本的实验技能，是未来从事有关生物方面的研究所必备的基本素养。
在实验过程中，我体会到了其中的乐趣，也激发了我对科学研究的热情。
上了这次实验课，我受益匪浅。
PS：单克隆抗体的制备及应用单克隆抗体的制备1、免疫动物免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。
一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。
抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。
2、细胞融合采用眼球摘除放血法处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。
将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。
在聚乙二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。
3、选择性培养选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基。
在HAT培养基中，未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，不能利用补救途径合成DNA而死亡。
未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。
只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶，并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性，因此能在HAT培养基中存活和增殖。
4、杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。
通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。
采用灵敏、快速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。
经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。
5、单克隆抗体的大量制备单克隆抗体的大量制备重要采用动物体内诱生法和体外培养法。
(1)体内诱生法取Balb/c小鼠，首先腹腔注射0.5ml液体石蜡或降植烷进行预处理。
1-2周后，腹腔内接种杂交瘤细胞。
杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖，并产生和分泌单克隆抗体。
约1-2周，可见小鼠腹部膨大。
用注射器抽取腹水，即可获得大量单克隆抗体。
(2)体外培养法将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。
在培养过程中，杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体，收集培养上清液，离心去除细胞及其碎片，即可获得所需要的单克隆抗体。
但这种方法产生的抗体量有限。
近年来，各种新型培养技术和装置不断出现，大大提高了抗体的生产量。
单克隆抗体的应用1．检验医学诊断试剂作为检验医学实验室的诊断试剂，单克隆抗体以其特异性强、纯度高、均一性好等优点，广泛应用于酶联免疫吸附试验、放射免疫分析、免疫组化和流式细胞仪等技术。
并且单克隆抗体的应用，很大程度上促进了商品化试剂盒的发展。
目前，应用单克隆抗体制作的商品化试剂盒广泛应用于：①病原微生物抗原、抗体的检测；②肿瘤抗原的检测；③免疫细胞及其亚群的的检测；④激素测定；⑤细胞因子的测定。
单克隆抗体对抗原的识别，与多克隆抗体有很大的不同。
不同试剂盒因使用的单克隆抗体不同，识别抗原的位点不同，导致检测结果有一定差异。
因此，标准化问题还需要进一步研究。
2．蛋白质的提纯单克隆抗体是亲和层析中重要的配体。
将单克隆抗体吸附在一个惰性的固相基质（如Speharose 2B、4B、6B等）上，并制备成层析柱。