实验四 PEG介导的细胞融合
PEG促细胞融合实验报告
题目：PEG促细胞融合一．实验目的:1.掌握细胞融合的方法2.学习使用PEG促进细胞融合的方法和步骤二．实验原理1.细胞融合：在自然条件下或用人工方法（生物的、物理的、化学的）使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。
由于体外培养的细胞很少会发生自发融合融合频率大约在10−4-10−6之间，因此要采用生物、化学或物理的方法人为地促使细胞融合。
2.促进细胞融合的方法a)生物方法：病毒（Sendai virus，Newcastle disease virus，Vaceine virus）b)化学方法：聚乙二醇、盐类融合剂、二甲亚砜（DMSO）、甘油-醋酸酯、油酸盐、脂质、Ca2+配合物等。
PEG相对分子质量在200-6000均可用作细胞融合剂。
普遍认为聚乙二醇分子能改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，从而使细胞发生融合。
在众多的化学试剂中，PEG应用最为广泛，因PEG液比病毒更易制备和控制、活性稳定、使用方便、而且促进细胞融合的能力更强。
c)物理方法：电融合:电处理融合法是20世纪80年代发展起来的细胞融合技术，是融合率大为提高。
电脉冲作用时引起膜结构局部扰乱，出现小孔洞。
而相对的脂双层间分子在范德华力作用下，形成脂分子桥。
由于连接处的细胞膜表面曲率大，处于高张力状态，在热力学上是不稳定的，所以最终导致两细胞逐渐融合成一个圆形的大球状细胞。
与ⅣG法比较，电融合法融合率高：重复性强：诱导仅发生在质膜接触部位，对细胞或原生质体伤害小：融合是在同步状态下进行，活细胞数目多；装置精巧，方法简单，可在显微镜下观察或录象融合过程：免去PEG诱导后的洗涤过程，诱导过程可控制性强。
三．实验材料及设备1.实验材料：a)50%PEG混合液b)鸡红细胞悬液c)生理盐水d)Hanks溶液2.实验设备：a)普通光学显微镜b)载玻片若干，注射器c)酒精灯、恒温水浴锅d)离心管若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等四．实验方法及步骤1.制取鸡血红细胞悬液2.取细胞悬液1mL，移入10mL离心管，加入4mL0.85%生理盐水混匀。
实验-细胞融合
实验4 细胞融合〔实验目的〕1、了解细胞融合的原理2、掌握PEG介导细胞融合过程的操作〔实验原理〕聚乙二醇（PEG）分子能使细胞凝集，改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处的细胞膜脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞间接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，使细胞发生融合。
〔试剂材料〕1、仪器：倒置显微镜、水浴锅2、试剂（1）0.85%生理盐水（2）GKN液NaCl 8g, KCl 0.4g, Na2HPO4.2H2O 1.77g, NaH2PO4. H2O 0.69g, 葡萄糖2g，酚红0.01g，溶于1000ml重蒸水中。
（3）50%PEG液临用前配制，50g PEG4000，在沸水浴中加热，冷却至50℃时加入预热至50℃的50ml GXN 液，混匀，37℃备用。
3、材料：鸡红细胞悬液〔内容方法〕1、抗凝的鸡血，加入4倍体积的0.85%生理盐水，为血细胞储备液，4℃冰箱可保存一周2、鸡血储备液1ml，加入4ml生理盐水，混匀后1200r/min离心5min，去上清，再加入生理盐水同样条件下离心一次。
血细胞沉淀加入10mlGKN液制成鸡血细胞悬液3、取悬液进行计数，用GXN将红细胞稀释至3-4×107个/毫升浓度。
4、取稀释好的红细胞悬液1ml，加入0.5ml 50%PEG混匀，37℃/39℃温浴20-30min。
5、加入GKN溶液至8ml，37℃温浴20min。
6、1200r/min离心5min，沉淀用GKN溶液再洗一次。
7、收集沉淀，涂片，镜检。
也可采用下面方法：1、细胞生理盐水洗涤后用GKN溶液制成5%悬液2、红细胞悬液1ml，1200r/min离心5min，去上清。
3、细胞沉淀用手指轻弹使细胞疏松，再逐滴滴加50%PEG溶液0.5ml，1分钟之内加完，边滴加边轻晃细胞，使PEG与血细胞混合4、混合物在37℃温浴2min。
5、加入GKN 2ml，37℃温浴5min。
6、1200r/min离心5min，去大部分上清，沉淀涂片，晾干后观察。
实验四 PEG诱导细胞融合
实验四 PEG诱导细胞融合（注：设计性试验）一、实验目的1、了解PEG诱导细胞融合的基本原理。
2、通过PEG诱导鸡红细胞之间的融合实验米初步掌握细胞融合技术二、实验原理两个或两个以上的细胞合并为一个双核或多核细胞的现象称为细胞融合。
在自发或人工诱导下均可发生。
自然情况下的受精过程即属于这种现象。
不同种细胞的融合也叫做细胞杂交。
基本过程包括细胞融合形成异核体、异核体通过细胞有丝分裂进行核融合、最终形成单核的杂种细胞。
20世纪30年代，科学家们相继在肺结核，天花，水痘，麻疹等疾病患者的病理组织中观察到多核细胞。
50年代开始人工细胞融合的研究。
60年代初，日本学者冈田（Okada）首次使用仙台病毒诱导动物细胞融合。
70年代后，逐渐采用化学融合剂（如PEG），由于具有使用方便、活性稳定、容易制备和控制等优点，已成为人工诱导细胞融合的主要手段。
80年代初出现了电融合技术，逐渐应用于科学研究。
诱导细胞融合的方法有三种：生物方法（如病毒诱导融合法）、化学方法（如聚乙二醇PEG诱导融合法）、物理方法（如电场诱导融合法）。
本实验利用PEG诱导细胞融合。
聚乙二醇分子能减少细胞间的游离水，促使细胞聚集；破坏或者改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，使细胞发生融合。
三、实验材料（一）、试剂：1、Alsver’s液：葡萄糖2.05g，柠檬酸钠0.80g，NaCl 0.42g，溶于100ml蒸馏水中。
2、0.85％生理盐水3、GKN溶液：NaCl 8g、KCl 0.4g、Na2HPO4·2H2O 1.77g、Na2HPO4·H2O 0.69g，葡萄糖2g，酚红0.01g，溶于1000ml蒸馏水中。
4、35％PEG液：实验前临时配制，根据需要称取定量PEG（Mw=4000），放入刻度试管或刻度离心管内，在沸水浴中加热，使其熔化，待冷却至50℃时，加入预热至50℃的GKN液，混匀。
PEG诱导的细胞融合实验
【实验操作】
4、 PEG介导融合：用手指轻弹离心管底部，使沉 淀松散，然后将离心管放在37ºC水浴中； 吸取预 热至37℃的50％PEG 0.5ml ，逐滴加入到细胞沉 淀中，边加边振摇浑匀，使细胞在50％PEG 中总 时间控制在90秒之内；
PEG诱导的细胞融合实验
细胞融合（cell fusion）
• 又称细胞杂交（cell hybridization），是指 两个或两个以上的细胞合并成一个细胞的 现象。
用细胞融合方法培育的薯番茄
细胞融合抗盐碱耐干旱葡萄新品种
细胞融合生产 单克隆抗体
细胞融合的诱导
1、病毒诱导：如仙台病毒（Sendaivirus） ，主要用于动
• 了解聚乙二醇诱导细胞融合的原理与技术； • 学会鉴别： 1、鸡红细胞 2、小鼠腹水瘤细胞 二、实验器材 普通离心机 水浴锅：50ºC，37ºC 计数板
三、实验试剂
1、180IU/ml肝素钠生理盐水溶液 2、Hanks溶液 3、50％PEG：将10gPEG加入带盖离心管中，
融合细胞核数 ×100％ 融合细胞核数＋未融合的细胞核数
【注意事项】
• 保持PEG温度，否则易凝固 • PEG处理时间不宜过长，否则会造成细胞
破坏或有多个细胞彼此融合形成巨大的合 胞体。 • 经PEG处理后加液混匀时应轻轻吹打，以 免刚刚融合的细胞分开。
【参考书】
1、《体外培养的原理与技术》第一版，薛庆 善编，科学出版社。
peg诱导细胞融合原理
peg诱导细胞融合原理PEG诱导细胞融合原理。
细胞融合是指两个或两个以上的细胞融合成一个细胞的现象，它在生物学研究中具有重要的意义。
PEG（聚乙二醇）是一种常用的细胞融合剂，通过PEG诱导细胞融合可以实现不同细胞的融合，从而产生新的细胞群体。
本文将介绍PEG诱导细胞融合的原理及其在细胞生物学研究中的应用。
首先，PEG诱导细胞融合的原理是利用PEG的高渗透性和毒性，使细胞膜受到破坏，从而促使细胞融合。
在实验中，将两种不同类型的细胞分别与PEG混合，PEG能够破坏细胞膜，使得两种细胞的质膜融合在一起，形成一个新的细胞。
这种方法可以用于融合不同细胞系，或者将外源基因导入目的细胞中。
其次，PEG诱导细胞融合在细胞生物学研究中有着广泛的应用。
通过细胞融合技术，可以将两种不同类型的细胞融合在一起，从而研究它们的互补性和相互作用。
例如，将癌细胞与正常细胞融合，可以研究癌细胞的恶性特性和调控机制；将干细胞与成熟细胞融合，可以研究干细胞的分化能力和再生潜力。
此外，PEG诱导细胞融合还可以用于细胞杂交技术，将两种不同细胞的染色体融合在一起，研究染色体的配对和重组。
此外，PEG诱导细胞融合还可以用于细胞治疗和再生医学研究。
通过将患者的细胞与健康捐赠者的细胞融合，可以修复患者受损的组织和器官。
例如，将患者的干细胞与健康捐赠者的成熟细胞融合，可以使干细胞具有更强的分化能力，从而用于治疗各种疾病和损伤。
此外，PEG诱导细胞融合还可以用于再生医学研究，研究干细胞的再生潜力和分化机制，为再生医学的发展提供重要的实验基础。
综上所述，PEG诱导细胞融合是一种重要的细胞生物学技术，通过破坏细胞膜促使细胞融合，具有广泛的应用价值。
在细胞生物学研究中，PEG诱导细胞融合可以用于研究细胞互补性和相互作用，染色体配对和重组，以及细胞治疗和再生医学研究。
相信随着科学技术的不断发展，PEG诱导细胞融合技术将会在细胞生物学和医学领域发挥越来越重要的作用。
PEG介导的细胞融合
PEG介导的细胞融合摘要：细胞融合是指两个或两个以上的细胞合并成为一个细胞的现象，也称细胞杂交，可通过自发或人工诱导实现。
本实验中主要是以小鼠的脾脏淋巴细胞为融合实验材料，通过化学方法（聚乙二醇PEG）来最终使细胞达融合，主要目的是为了探究不同浓度的PEG与细胞融合率的关系。
将小鼠脾脏取出制成脾脏淋巴细胞悬液后，分别取1毫升分装到A、B、C、D、E五根离心管中，离心后加入不同浓度的融合剂各0.5毫升，实验中设置了20%、35%、50%、65%、80%五个PEG浓度梯度，经处理之后制成玻片在高倍显微镜下观察，对视野中细胞总数和融合细胞对数进行计数，就算融合率，最终得出结果。
结果表明：在一定浓度范围内（20%-70%），细胞的融合率与PEG的浓度成正比关系；当浓度过大时，细胞融合率反而会有降低。
关键词：细胞融合；PEG；融合率；不同浓度前言：人工诱导的细胞融合，在六十年代作为一门新兴技术而发展起来。
由于它不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合，因此细胞融合技术目前被广泛应用于细胞生物学和医学研究的各个领域。
基因型相同的细胞融合成的杂交细胞称为同核体；来自不同基因型的杂交细胞则称为异核体。
细胞融合不仅可用于基础研究，而且还有重要的应用价值，在植物育种方面已经成功的有萝卜+甘蓝、粉蓝烟草+郎氏烟草、番茄+马铃薯等等。
细胞融合另一个重要应用就是制备单克隆抗体，单克隆抗体可以用作诊断试剂，治疗疾病和运载药物，具有准确，高效，简易，快速等优点。
因此，融合细胞的研究为生物学无论在基础理论上或生产实践上开辟了一条新的道路。
这一技术已成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段。
1.材料与方法1.1实验材料：小鼠脾脏细胞1.2实验器材：10ml离心管、吸管、载玻片、盖玻片、离心机、恒温水浴锅、显微镜、解剖剪刀、镊子、培养皿、漏斗、尼龙布、1ml注射器、6#针头。
1.3试剂：PEG、D-Hanks液、蒸馏水、0.87%NH4Cl。
peg诱导细胞融合原理
peg诱导细胞融合原理
PEG诱导细胞融合原理
PEG是聚乙二醇的缩写，是一种具有高分子量的线性聚合物。
PEG在
生物学研究中被广泛应用，其中最常见的应用之一就是诱导细胞融合。
细胞融合是指将两个或多个细胞融合成一个单独的细胞。
这种技术被
广泛应用于生物学研究中，例如制备杂交瘤细胞、制备单克隆抗体和
产生转基因动物等。
PEG诱导细胞融合的原理是利用PEG分子与细胞膜相互作用，使得两个或多个不同类型的细胞在PEG存在下发生融合。
具体来说，PEG通过以下机制促进了细胞融合：
1. 破坏细胞膜结构
PEG分子可以与水形成氢键，并且可以与亲水性区域结合。
当PEG溶液与细胞接触时，它会插入到细胞表面，并破坏部分磷脂双层结构，
从而使得两个或多个不同类型的细胞暴露出其内部的细胞质。
2. 促进细胞膜的接触
PEG分子可以通过两种方式促进细胞膜的接触。
首先，PEG可以降低水的表面张力，使得两个或多个细胞之间的距离缩小。
其次，PEG可以与细胞膜表面的亲水性区域结合，从而增加了两个或多个细胞之间的吸引力。
3. 促进细胞融合
当两个或多个不同类型的细胞表面接触时，PEG会形成一个临时性的孔道，使得两个或多个细胞质混合在一起。
这些孔道很快就会关闭，并且新形成的单一细胞会拥有所有原始细胞中所包含的遗传物质和生物学特性。
总之，PEG诱导细胞融合是一种简单、有效、广泛应用于生物学研究中的技术。
它利用PEG分子与细胞膜相互作用来促进不同类型细胞之间发生融合，并且可以产生许多重要的研究工具和应用。
利用聚乙二醇(简称PEG)为媒介物进行细胞融合实验原理及步骤
利用聚乙二醇（简称PEG）为媒介物进行细胞融合
一、溶液配制
①Alsver液（同前S）
②0。
85生理盐水液
③GKN液
NaCl 8g、KCl 0.4g、Na
2HPO
4
·2H
2
O1.77g，NaH
2
PO
4
·H
2
O 0.69g，Glucose（葡
萄糖）2g，酚红 0。
01g溶于1000ml重蒸水中。
④根据实验需要，称取少量PEG（MW=4000）放入刻度试管或刻度离心管内，在沸水浴或高压蒸汽灭菌30分钟，待冷却至50℃时，加入等体积并预热至50℃的GKN液混匀。
二、融合方法
注射器内先吸入2mlAlsver液，再从翼下静脉取鸡血2ml，注入管内，再加入Alsver液6ml，使成为悬液，混匀后放在4℃下，可使用3-4天。
取以上悬液1ml0。
85%生理盐水，混匀后，以1200rpm离心5分钟，去上清液后，再以上述条件离心两次（5分钟，10分钟）。
将最后一次离心沉淀的血球去上清液，加入适量GKN液，使成10%的悬液。
取上悬液，以血球计数法计数，再以GKN液稀释至每立方毫米含红细胞3-4万个。
取以上血球悬液1ml，加入0。
5ml 15%的PEG液混匀，在常温下2-3分钟后发即可进行镜检，并计算出融合率。
融合率指在显微镜的视野内，已发生融合的细胞其细胞核的总数与此视野内所有细胞（包括已融合细胞）的细胞核总数之比。
称为融合率，通常以百分数表示，而且要进行多个视野测定，再加以平均统计，更为准确。
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实验四 PEG介导的细胞融合
一、实验目的：
（1）通过PEG介导的鸡血细胞融合实验，对体细胞融合有一个清楚的概念。
（2）初步掌握利用PEG介导动物细胞融合的实验技术。
二、实验原理：
利用PEG介导动物细胞融合的原理到目前为止还没有完全定论。
学者们一般认为，PEG改变各类细胞的膜结构，使两细胞相互接触部位的膜脂双层中磷脂分子发生疏散，进而使其结构发生重排，再加上膜脂双层的相互亲和以及彼此间表面张力的作用，引起相邻的重排质膜在修复时相互合并在一起，使两细胞的胞质沟通，从而造成相互接触的细胞之间发生融合。
利用PEG介导细胞融合，其融合效果受以下几种因素的影响。
1、PEG的分子量与浓度
细胞融合效果与PEG的分子量及其浓度成正比；但PEG得分子量越大、浓度越高，对细胞的毒性也就越大。
为了兼顾二者，在实验时常常采用的PEG分子量一般为1000-4000，浓度一般为40%-60%。
2、PEG的pH值
经验证，PEG的pH值在8.0-8.2之间融合效果最好。
3、PEG的处理时间
处理时间越长，融合效果越好，但对细胞的毒害作用也就越大。
故一般将处理时间限制在1分钟之内。
本实验中那个细胞融合后无需继续培养，故处理时间可适当放宽至数分钟。
4、融合时的温度
由于生物膜的流动性与温度成正比，故细胞的融合效果也与温度成正比。
因此，为了获得更好的融合效果，在细胞可能承受的温度范围内可适当提高处理的温度。
对于哺乳动物的细胞，一般采用的温度为38℃-40℃。
本实验所用材料为鸡的血细胞，这是因为：①鸡血细胞具有细胞核，便于对融合细胞进行鉴别；②实验材料便宜、易得。
细胞融合与否，可通过观察细胞内核的数目来进行鉴别。
细胞内只有1个核，定为未融合细胞；有2至多个核，定为融合细胞。
三、实验用品：
1、材料：新鲜鸡血；
2、试剂：
（1）Alsever液：葡萄糖（2.05g）枸椽酸钠（0.8g）氯化钠（0.42g）重蒸水（至100mL）
（2）生理盐水（0.85%）
（3）GKN液：氯化钠（8g）氯化钾（0.4g） Na2HPO4•2H2O（1.77g）
Na2HPO4•H2O（0.69g）葡萄糖（2g）酚红（0.01g）
溶于1000mL重蒸水中
（4）50%PEG液（现用现配）：根据实验需要，称取适量PEG（Mr.4000）放入刻度离心管内，在酒精灯上将其融化，待冷却至50℃，加入等体积的已预热的GKN液并充分混匀。
3、器材：
（1）主要设备：普通离心机、普通光学显微镜。
（2）小型器材：100mL量筒，滴管，10mL刻度离心管，载玻片、盖玻片。
四、实验方法：
（1）注射器内先吸入2mL Alsever液，在从活鸡的翼下静脉抽取鸡血2mL，注入试管内，再加入Alsever液6mL，使之成为1：4悬液，混匀后放在4℃冰箱中，可使用3-4天。
（该步骤已经提前完成）
（2）取出上述悬液1mL加入0.85%生理盐水4mL，混匀后，1200r/min离心5分钟，除去上清液后，在以上述离心速率重复离心两次（第一次5分钟，第二次10分钟），以达到去除细胞表面黏附物质的目的。
（3）去除上清液后，将最后一次离心沉降的血球，加入适量GKN液（2mL），使之成为10%的细胞悬液。
（4）去上述调整后的血球悬液1mL，加入0.5mL 50%的PEG液混匀，吸取1-2滴，滴到一干净的载玻片上，在常温下2-3分钟后即可加上盖玻片进行镜检，并计算出融合率。
五、实验结果：
经PEG处理后，在显微镜下，可观察到未融合的单核细胞，融合后的双核细胞和融合后的多核细胞。
细胞的融合率指在显微镜的视野内，已发生融合的细胞的核的总数与此视野内所有细胞的细胞核总数之比。
六、分析与讨论：
1、本实验中所用的PEG融合方法能否用于植物细胞？为什么？
答：不能。
植物细胞有细胞壁，细胞膜在细胞壁的阻碍下不能相接触，PEG无法破解这层细胞壁则无法介导其细胞融合会阻碍细胞膜融合。
应事先用纤维素酶和果胶酶处理，将植物细胞壁去除，提取其中的原生质体才可进行细胞融合。
2、本实验的材料为什么不用兔子或小鼠的血细胞？
答：因为兔子和小鼠都是哺乳动物，而哺乳动物的成熟血细胞没有细胞核，细胞融合后不便于进行实验结果的观察。