细胞生物学实验一
1-细胞生物学实验
如镜台测微尺1mm处(全长)与目镜测微尺75 刻度(150小格)重合，则:
目镜测微尺每小格的实际长度=
1 150
mm
=0.0067mm=6.7μm
④同样的方法标定高倍镜下目镜测微尺 每小格的实际长度
计算公式如下:
目镜测微尺每小格的实际长度
镜台测微尺长度 ＝
目镜测微尺格数
＝ 30×10μm 200
(4)测量细胞并计算核质比
五、实验操作
1. 取猪肝1g，放入小烧杯中，加4ml 0.25M蔗糖缓冲液， 将组织剪成约1mm立方的小块。
2. 将剪碎的组织移入匀浆器的外管中，再将内管（带柄 的活塞）插入外管中，缓慢而均匀地施力，上下旋转拉 动，匀浆7-10分钟，然后用六层纱布过滤回洗净的原烧 杯中。（这两步操作略）
3. 每组取1个5ml离心管，加入匀浆液2ml，2000rpm离 心10分钟。（每组1管）
许多酸性染料不易穿过活细胞的质 膜进入细胞内，却能渗入死亡的细胞 内，使其着色，以此来鉴别死活细胞。
2.方法 取酵母悬液一滴于洁净玻片上，滴一滴0.2％亚甲基
蓝染液，加盖片，2分钟后于显微镜下观察细胞。
3.结果 死细胞被染成蓝色，活细胞不着色。
实验作业
画图记录细胞吞噬实验所见结果
实验三
细胞核与线粒体的 分级分离
实验内容
实验一、细胞的形态结构与显微测量 实验二、细胞生理活动的实验观察 实验三、细胞核与线粒体的分级分离 实验四、细胞分裂的形态观察 实验五、细胞原代培养 实验六、细胞计数及死活细胞的鉴定 实验七、综合设计性实验
实验一
细胞的形态结构与显微测量
实验目的
(一) 观察并了解细胞的基本形态。 (二)掌握临时制片和显微绘图的方法。 (三)了解显微测微尺的原理及使用方法
细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告篇一实验教师：xxx所在学校：xxx中学目的要求：1练习徒手切片2认识叶片的结构3画叶片的表皮细胞和保卫细胞材料用具：新鲜叶片（如菠菜、槐树、蚕豆的叶片），显微镜，双面刀片（两片、并在一起、一侧用胶布粘牢）、镊子、载玻片、盖玻片、叶片的永久切片、盛有清水的培养皿、滴管、吸水纸、碘液、纱布、毛笔、小木板。
方法步骤方法与步骤要点注意事项（一）练习徒手切片，制作叶片横切片的临时切片1将新鲜的叶片平放在小木板上。
2右手捏紧并排的两片刀片，沿着图中虚线的方向，迅速切割。
3把刀片夹缝中存在的切下的薄片放入盛有清水培养皿中。
要多切几次（每切一次，刀片要蘸一下水）。
4用毛笔蘸出较薄的一片，制成临时切片。
叶片下面要垫上小块木板，以防损坏桌面。
刀片要捏紧，切割速度要快，注意安全。
为了便于观察，载玻片的水滴中可以同时放几片叶的横切片，选择切得较薄的一片用来观察。
（二）观察叶片的结构1．用显微镜先观察叶片横切面的临时切片，再观察叶片的永久横切片。
2．观察时注意分清时的表皮、叶肉和叶脉。
仔细观察上、下表皮细胞的`区别（三）观察叶片的下表皮1．用镊子撕下一小块叶片的下表皮，制成临时装片。
2．用显微镜进行观察，下表皮细胞的形态是什么样子的，下表皮上有没有气孔？撕取下表皮时，一定要薄，否则影响观察效果。
注意观察气孔的结构。
（四）画图在下面空白处画出下表皮上一对保卫细胞及周围的几个表皮细胞，这一对保卫细胞要详细画，周围的细胞只需勾出轮廓。
画图时，要真实、实事求是。
讨论与交流1．保卫细胞的结构特点对植物的蒸腾作用有什么意义？2．从结构上看，叶片有哪些方面是适于接受阳光的？细胞生物学实验报告篇二一、实验目的1. 初步学会观察植物细胞质壁分离和复原的方法。
2. 理解植物细胞发生渗透作用的原理。
二、实验原理当细胞液的浓度小于外界溶液的浓度时，细胞液中的水分就透过原生质层进入外界溶液中，使细胞壁和原生质层都出现一定的收缩。
细胞生物学实验(本科生)实验内容
细胞生物学实验（本科生）实验内容实验一细胞的结构目的：1、熟悉实验室规范2、掌握光镜下细胞器的形态、分布特点；3、掌握临时制片法；4、学会生物绘图内容：（一）录像：临时标本片的制作（二）光镜下细胞器形态学观察：1、高尔基体（兔神经节切片）2、细胞核及核仁（蝾螈表皮装片）3、线粒体（肾小管切片）4、细胞骨架（培养肝癌细胞飞片）5、中心体*（马蛔虫受精卵切片）（二）操作：制作人口腔上皮细胞临时制片（显示活体线粒体）（三）实验报告：绘制人口腔粘膜上皮细胞实验二细胞化学细胞工程目的：1、掌握甲基绿-派洛咛染色法原理及操作技巧2、了解几种化学成分的显示方法及原理；3、观察各种化学成分在细胞中的分布；4、了解PCC原理；5、了解细胞融合及其应用；内容：（一）录象：克隆羊（二）观察：1、糖原（动物肝切片，PAS反应）2、酸性蛋白（蟾蜍血涂片，酸性固绿染色）3、酸性磷酸酶*（鼠腹腔液涂片，金属沉淀法显色）4、DNA* （小鼠睾丸切片，Feulgen反应）5、DNA、RNA*（人口腔粘膜上皮细胞涂片，吖啶橙染色，荧光显微镜观察）6、细胞融合（鸡血细胞、培养细胞）7、PCC*（Hela细胞）（三）操作：制作蟾蜍血涂片，显示DNA、RNA（四）实验报告：甲基绿-派洛咛染色原理、步骤及结果实验三显微测量细胞的生理活动目的：1、掌握显微测量技术；2、观察细胞的生理活动；3、掌握死活细胞的鉴别方法及原理；内容：(一)录象：细胞的活动显微测量（二）观察：1、胞质环流（黑藻叶片）2、吞噬作用*（小鼠白细胞）3、吞噬作用（蟾蜍白细胞）（三）操作：1、显微测量（蟾蜍红细胞）2、死活细胞鉴别（酵母细胞）（四）实验报告：1、测量5-10个细胞的大小，计算平均值；2、计算细胞存活率。
实验四细胞增殖染色体（质）目的：1、熟悉细胞增殖的主要方式；2、掌握细胞增殖周期各期的形态学特点；3、熟悉人染色体的基本形态特征；4、掌握X染色质标本的制备方法及原理；内容：（一）观察：1、动物细胞有丝分裂（马蛔虫受精卵切片）2、植物细胞有丝分裂（洋葱根尖纵切片）3、收缩环*（肝癌细胞飞片）4、无丝分裂*（草履虫装片）5、人染色体的基本形态（人血涂片）（二）操作：1、制作有丝分裂压片（洋葱根尖）2、制作X染色质标本片（人口腔粘膜上皮细胞）（三）实验报告：绘有丝分裂图、X染色质图。
细胞生物学实验
实验一细胞膜的渗透性一、实验目的1、了解细胞膜对物质渗透的一般规律。
2、了解溶血现象及其发生机制。
二、实验原理细胞膜为一种半透膜，对物质的通透具有选择性。
当红细胞放入低渗溶液时，细胞吸水膨胀而发生溶血。
当红细胞放入含有不同溶质的等渗溶液中时，由于细胞膜对不同溶质的透性不同，细胞发生溶血的时间也会不同，故发生溶血现象时间长短可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标。
三、实验操作1、从集市买适量活鸡血，取5ml（防止污染），放入盛有20ml Alsever’s液瓶中，混匀后置冰箱保存备用（2周内使用）。
2、使用前取用Alsever’s液保存的新鲜鸡血5ml，加入8ml的0.128mol/L NaCl溶液，小心混匀，1000r/min 离心5min，如此3次洗涤，最后配成30%的鸡红细胞（CRBC）悬液。
3、取11支试管，按附表中所示测试溶液，分别取样各3ml，作出标记后，各管均加入红细胞悬液2滴，混匀后静置于室温中，观察各支试管中发生溶血的时间及变化。
四、观察结果1、试管内液体分两层：上层浅黄色，下层红色不透明为不溶血（―）,镜检红细胞完好呈双凹盘状。
2、如果试管内液体浑浊，上层带红色者，称不完全溶血（+或++），镜检部分红细胞呈碎片。
3、如果试管内液体变红色而透明者，称完全溶血（+++），镜检发现细胞全部呈碎片。
五、实验建议1、鸡血在离心时，试管均需在扭力天平上平衡。
2、目测红细胞体积或置于带刻度的离心管中，加入生理盐水配成30%的红细胞悬液。
、3、试管中有红细胞和测试溶液时，不应强力摇晃，以免造成人为的红细胞破裂。
实验报告及作业※目测判断标准：快速溶血：+++；慢速溶血：++或+；不溶血：―实验二核酸(DNA和RNA)的细胞核定位观察一、实验目的1、了解和学习两类核酸显示的原理及操作程序。
2、了解细胞中DNA和RNA的分布。
二、实验原理细胞内的DNA主要分布在细胞核内，RNA主要存在于细胞质中。
甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同：甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。
试验1细胞大小测定
《细胞生物学》实验（养殖：1——3；生技、海科：1——6）实验一细胞器的分离、提取与测量【目的】掌握叶绿体分离的一般原理和方法，学习用测微尺测量细胞与细胞器大小的测定方法，并了解应用荧光显微镜方法观察叶绿体荧光现象。
【原理】叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器，能发生特有的能量转换。
利用低速离心机可以分离叶绿体，其分离在等渗溶液(0.35 mol／L氯化钠或0.4mol／L蔗糖溶液)中进行，目的是为了防止渗透压的改变引起叶绿体的损伤。
将匀浆液在1000r／min离心，去除其中的组织残渣和一些未被破碎的完整细胞，然后，3000 r／min离心，可获得沉淀的叶绿体(混有部分细胞核)。
在室温下进行分离要迅速。
用显微测微尺可以直接测量细胞大小，精确度较高。
显微测微尺分为物镜测微尺和目镜测微尺2种。
目镜测微尺是1块小玻璃圆片(可放人目镜内，其大小正好卡人目镜筒内)，在圆片正中央刻有1cm长的直线，直线上均匀分为100小格或50小格，每小格的长度，随目镜和物镜的放大倍数而变动。
物镜测微尺是一块特制的玻璃载片，载片中央刻有一条1mm长的直线，均匀地刻分为100个小格，每小格为1／100mm (为10μm)，用一小圆形玻璃盖片封盖着，物镜测微尺较目镜测微尺小格的间距精确，通过目镜测微尺测量细胞与细胞器的大小(小格数)，然后换以物镜测微尺校测小格数的精确数值，即为测量的细胞与细胞器大小结果。
某些物质在一定短波长的光(如紫外光)的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光)，这种光就称为荧光。
若停止供能荧光现象立即停止。
有些生物体内的物质受激发光照射后，可直接发出荧光(称为自发荧光)，如叶绿素的火红色荧光。
有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光(称为间接荧光)，如叶绿体吸附吖啶橙后可发橘红色荧光。
【材料】菠菜叶片。
【实验用品】1．试剂：蒸馏水，0.35 mol／L氯化钠溶液，0.01% 吖啶橙。
细胞生物学实验 (1)
结构特点：
a.光源：最好采用单色光，因为光的速度，折射率，和干涉现象 由于波长的不同而有差异。一般镜检可使用普通光。
b.目镜：要带有十字线的目镜。
c.聚光镜：为了取得平行偏光，应使用能推出上透镜的摇出式聚 光镜。
d.伯特兰透镜：聚光镜光路中的辅助部件，这是把物体所有造成 的初级相放大为次级相的辅助透镜。它可保证用目镜来观察在 物镜后焦平面中形成的干涉图样。
3 、材料：
兔肝， 蟾蜍， 洋葱鳞莖、黄豆幼苗根尖
实验步骤：
样品的制备→染色→观察
作业：
绘出你所观察到的动植物液泡及线 粒体
设计性实验：细膜的通透性
原理
细胞膜是细胞与外界环境进行物质交换的结构。 可选择性地让某些物质进出细胞，各种物质出 入细胞的方式是不同的，如水分子可以按照物 质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗 透压高的一侧扩散，以至于在高渗环境中，动 物细胞会失水而收缩；在低渗环境中，动物细 胞会吸水膨胀直至破裂。
结构特点：
相差物镜、具有环状光阑的转盘聚光器、合轴调中望远镜和绿色的 滤光片。
使用方法 :
相差装置为多功能系列显微镜中的附属装置．与普通显微镜配合使用。 (1) 相差装置的调换安装卸下普通显微镜使用的聚光器，将环状光阑装 在聚光器支架上，把绿色滤光片放在上面，它可吸收红色和蓝色光，使 波长范围小的单色光线进行照明，并有吸热作用，能使相差观察获得良 好的效果。再从转换器上旋下普通物镜，换上相差物镜。
实验目的
了解细胞膜的渗透性及各种物质进入细胞的速度。
实验器材与材料
1、器材
烧杯、试管、移液管等
2、试剂
氯化钠、氯化铵、草酸铵、硫酸钠、甘油、乙醇、丙醇等。
3、材料
血 、半透膜、洋葱、鸡蛋等
细胞生物学实验材料
实验一荧光显微镜的原理和使用实验二叶绿体的分离与荧光观察实验三线粒体的活体染色与观察实验四细胞膜的通透性实验五 DNA的细胞化学——Feulgen反应实验六植物染色体标本的制备和观察实验七细胞计数实验八植物细胞骨架的光学显微镜观察实验九植物原生质体的分离和活性鉴定实验十环境因素诱变染色体改组的观察实验一荧光显微镜的原理和使用一、实验目的了解荧光显微镜的构造及其维护方法；掌握荧光显微镜的使用方法和使用中的注意事项。
二、实验原理荧光显微镜是选择由高压汞灯或类似光源发出一定波长的激发光，激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，观察细胞某种特异成分的分布状态的显微镜。
与普通光学显微镜一样，荧光显微镜也有物镜、目镜、调焦装置、光源、聚光器、载物台、镜身等组成部分。
所不同的是，荧光显微镜增加了激发光源和滤片系统，它投射到样品上的是特定波长的激发光而不是普通的可见光。
在激发光的作用下，样品中的荧光物质产生图1荧光显微镜发射光（即荧光）。
因此，荧光显微镜观察到的是样品中能产生荧光的部分所呈现的荧光映象，普通光学显微镜则是整个样品的可见光透射和折射影像。
某些物质在—定短波长的光（如紫外光）的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光)，这种光就称为荧光。
若停止供能荧光现象立即停止。
有些生物体内的物质受激发光照射后直接发出荧光，称为自发荧光（或直接荧光），如叶绿素的火红色荧光和水质素的黄色荧光等。
有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光，这种荧光称为次生荧光（或间接荧光），如叶绿体吸附吖啶橙后可发桔红色荧光。
利用荧光显微镜对可发荧光物质进行检测时，将受到许多因素的影响，如温度、光、淬灭剂等。
因此在荧光观察时应抓紧时间，有必要时立即拍照。
三、实验用品荧光显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、解剖刀、0.01%吖啶橙染色液（acridine orange）、蒸馏水、水葫芦叶片四、实验内容与方法（一）荧光显微镜的构造1、基本装置荧光显微镜的基本装置是由普通光学显微镜加上一些附件（如荧光光源、激发滤片、二向色镜和阻断滤片等）的基础上组成的。
细胞生物学实验指导
细胞生物学实验指导实验一、显微镜的结构与使用方法一、实验目的1.认识显微镜的构造2.学会独立操作显微镜二、仪器和材料显微镜、擦镜纸、装片三、实验内容1.学生按编号把自己的显微镜取出，放在试验台上，在教师的指导下熟悉显微镜各部分的构造及用途，然后进行操作练习。
先用低倍镜进行对光联系，使视野明亮而均匀。
如果使用双筒目镜，还应学习目镜间距的调节。
在转换高倍物镜观察，此时应注意它的视野亮度与低倍物镜有无区别？并思考通过哪几种方法调节使得高倍物镜的视野达到要求的亮度。
2.取已制备好的装片进行观察：按低倍镜使用步骤和方法进行操作练习。
注意要使观察到的像向前移动时，玻片标本应向那个方向移动？欲使观察到的像向右移动时，拨片标本应向那个方向移动？3.观察制备好切片：细胞核、中心体、胞间连丝、有丝分裂、减数分裂、高尔基体等。
4.观察完毕后，按正规要求取下玻片，把显微镜收好。
四、作业绘制2-3中细胞结构实验二、Feulgen反应显示DNA（一）实验目的1．掌握临时制片法。
2．熟悉Feulgen反应的原理及操作步骤。
3．观察细胞中DNA的分布。
（二）实验原理Feulgen在1924年发明一种对DNA特异的组织化学染色反应，故称Feulgen反应。
DNA经酸（1mol/L HCl）水解后，DNA分子中的嘌呤和脱氧核糖连接的配糖键被打开，脱氧核糖的一端释放出醛基，并在原位与Schiff试剂反应形成特异性的紫红色产物。
该产物能特异地吸收峰值为550~570nm的光波。
并且在一定的浓度范围内，对550~570nm光波的吸收值与DNA 含量成正比关系，既符合化学计量学关系。
此法既可定位用于细胞或组织化学染色反应，观察DNA的分布，又可用显微分光光度计和图像分析仪对细胞或组织中DNA的含量进行定量分析。
紫红色的产生，是由于反应产物的分子内含有醌基，醌基是一个发色团，所以具有颜色。
对照组或采取不经盐酸处理，或预先用热三氯醋酸或DNA酶处理，抽提去细胞中的DNA而得到阴性反应。
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3、物镜及使用 （1）物镜的种类 ①消色差物镜（无标志）
②复消色差物镜（金属外壳表有 “APOCHRAMATIC”or“APO”）
③莹石物镜（fluoite objective F1） ④平场物镜（plan objective） 外壳标有“P1.APO”、“PLAN”、 “P1“。其中“P1.APO”效果最佳。
常识:
分辨力区分两个点最小距离的能力. 公式:
分辨距离= 0.61波长/物镜镜口率（nm)
物镜镜口率=n.sin a/2 n-物镜与标本之间的折射率＜1.6 如:空气为1,干燥 物镜镜口率＜1,一般为0.05—0.95; 水为1.33,水浸
物镜镜口率为0.1—1.25;油浸物镜（香柏油1.515)镜 口率最大,近1.5
实验一 几种特殊显微镜的原理与 使用演示
刘 军
一、实验目的
了解普通光学显微镜、相差显微 镜、暗视野显微镜、荧光显微镜的工作 原理及正确的操作方法。
通过演示及学生的操作，达到正确 选择和使用各种光学显微镜的操作。
二、实验原理
1、相差显微镜的工作原理 2、暗视野显微镜工作原理 3、荧光显微镜工作原理（略）
（2）物镜外壳标志
①物镜消色差程度 如：APO、F1、P1、P1 APO
②放大倍数 如：4×；10×；20×；40×等
③数值孔径 n.A；N.A.；num.APert等表示。常与放大倍 数在一起，如：10/0.25；40/0.65；100/1.25 ④标准机械筒长
160mm or 170mm ⑤需用盖玻片的情况 如：160/0.17（盖玻片为0.17mm）；160/；160/0等 ⑥物镜与被检样品间的介质情况 如“OIL“、”W“等
三、技术环节：
暗视野成像原理
1、普通显微镜的光路合轴 （1）聚光器的调中
注：显微镜的光路，除聚 光器和光源外，无需调整。
①聚光器升至最高位置。 ②开启光源。 ③将被检样品放在载物台上，用低倍镜 聚焦。 ④缩小视野光阑，在显微镜的视野看到 模糊的视野光阑图象。
⑤微降聚光器，使视野光阑图象清晰聚 焦。 ⑥调整两个调中螺杆，推动聚光器，使 缩小的视野光阑图象调至视野中心。 ⑦开放视野光阑，使多边形的周边与视 野的外缘相接。 ⑧使聚光器回复顶点位置。
（3）相差显微镜部件
具有环状光阑的转盘聚光器、相差 物镜、合轴调中望远镜和绿色滤色镜。
见下图：
3、作业
结合课堂讲授，说明三种特殊显微 镜与普通光学显微镜结构的不同；原 理。
常识:
分辨力区分两个点最小距离的能力. 公式:
分辨率 D = 0.61 λ/N . sin α / 2
λ: 光源波长; α: 物镜镜口角; N: 介质折射率
2、光源的调中
光源灯安装在灯室的灯座上。其位置可 由灯室上的垂直和水平调节螺丝控制，使灯 丝图象位于视野中心。灯丝观察： （1）视野光阑口的滤光镜座上，放一磨砂玻 璃用于观察灯丝象的位置，至调中止。 （2）在物镜后焦面上，待样品聚焦后，从镜 筒中取下目镜，在物镜的视野中，可见灯丝 图像，借以调节位置。