药物长期毒性实验设计原则课件
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长期毒性作用及其试验方法演示文稿
☆在吸入给药时，猴是首先推荐的动物，因为它在 呼吸系统的解剖学和生理学方面比其它动物更接 近人类。
☆如研究计划生育用药，应选择猴或其他大动物。
Beagle犬：原产英国，纯种小猎兔犬 Beagle犬的特点：体型小,毛短,性情温和,亲人,抗病力强
缺点：价格昂贵
二、实验动物
2. 起始月(周)龄 一般选择较年轻的或正处于生长发育阶段的动物。
长期毒性作用及其试验方 法演示文稿
第一节 基本概念和目的 第二节 试验设计原则及方法
第一节
基本概念和目的
一、定义
长期毒性试验是指试验动物连续多日接触较大 剂量的药物所引起的中毒效应，为观察这种中毒效 应而设计的毒理学试验称之为长期(慢性)毒性试验。
急性毒性试验
是为观察和评价急性毒性的有害作用或中毒反应 而设计的一种毒理学试验。研究药物一次或24小 时内多次给予受试药物后，一定时间内所产生的 毒性反应。
一、一般原则和要求
总体原则 选用两种实验动物 三个剂量 给药途径应与临床拟用途径相同
一、一般原则和要求
总体原则 选用两种实验动物
至少在两种动物体上进行，兼顾雌雄性别。
一、一般原则和要求
总体原则
三个剂量
剂量至少分为高、中、低三个档次。 高剂量组应能充分反映药物的毒性， 低剂量组不出现毒性反应。 同时设一溶剂 ( 或赋形剂 ) 对照组或 已知药物毒性对照组。
第二节
试验设计原则及方法
一、一般原则和要求
基本原则 全面、严谨、合理 整体性 随机、对照、重复
一、一般原则和要求
基本原则 整体性
长期毒性试验不能与药效学、药代动 力性和其他毒理学研究割裂，试验设 计应充分考虑其他药理毒理研究的试 验设计和研究结果。长期毒性试验的 结果应该力求与其他药理毒理试验结 果互为印证、说明和补充。
☆如研究计划生育用药，应选择猴或其他大动物。
Beagle犬：原产英国，纯种小猎兔犬 Beagle犬的特点：体型小,毛短,性情温和,亲人,抗病力强
缺点：价格昂贵
二、实验动物
2. 起始月(周)龄 一般选择较年轻的或正处于生长发育阶段的动物。
长期毒性作用及其试验方 法演示文稿
第一节 基本概念和目的 第二节 试验设计原则及方法
第一节
基本概念和目的
一、定义
长期毒性试验是指试验动物连续多日接触较大 剂量的药物所引起的中毒效应，为观察这种中毒效 应而设计的毒理学试验称之为长期(慢性)毒性试验。
急性毒性试验
是为观察和评价急性毒性的有害作用或中毒反应 而设计的一种毒理学试验。研究药物一次或24小 时内多次给予受试药物后，一定时间内所产生的 毒性反应。
一、一般原则和要求
总体原则 选用两种实验动物 三个剂量 给药途径应与临床拟用途径相同
一、一般原则和要求
总体原则 选用两种实验动物
至少在两种动物体上进行，兼顾雌雄性别。
一、一般原则和要求
总体原则
三个剂量
剂量至少分为高、中、低三个档次。 高剂量组应能充分反映药物的毒性， 低剂量组不出现毒性反应。 同时设一溶剂 ( 或赋形剂 ) 对照组或 已知药物毒性对照组。
第二节
试验设计原则及方法
一、一般原则和要求
基本原则 全面、严谨、合理 整体性 随机、对照、重复
一、一般原则和要求
基本原则 整体性
长期毒性试验不能与药效学、药代动 力性和其他毒理学研究割裂，试验设 计应充分考虑其他药理毒理研究的试 验设计和研究结果。长期毒性试验的 结果应该力求与其他药理毒理试验结 果互为印证、说明和补充。
长期毒性作用及其试验方法
超过 90 天的试验 啮齿类动物每组至少 40 只（雌雄各 20 只）； 非啮齿类每组 8~10 只（雌雄各 4~5 只）。
2020/5/7
34
二、实验动物
3. 性别及数量
（2）数量
90 天以内的试验 啮齿类动物每组至少20只（雌雄各 10 只）；
《非啮指齿导类原每组则4》~6 ：只（一雌般雄大各鼠2~为3只雌）、；雄各30只，
环境因素
酮症酸中毒
室内温度 湿度 光照 通风条件 饮水质量
饲料或饲料配方
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二、实验动物
4. 饲养管理
环境因素
酮症酸中毒
啮齿类动物
适宜温度室为内1温8~度27 ℃ 。 相对湿度为湿40%~7度0%。 光照宜持续光12 小时明照亮，12 小时黑暗。 通风条件良通好。风条件 所用饲料饮应符水合质动量物的营养标准。 雌饲雄动料物或应饲分料开配饲养方，每笼不宜超过 5只
一类新药：Beagle犬 二类新药：杂种狗
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23
二、实验动物
1.种类及品系
☆我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, 一 种为啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类， 首选狗。
☆在吸入给药时，猴是首先推荐的动物，因为它在 呼吸系统的解剖学和生理学方面比其它动物更接 近人类。
☆如研究计划生育用药，应选择猴或其他大动物。
原因： 1 长期毒性试验的给药期限较长；
处于生长发育阶段的动物对药物 2 的毒性反应较敏感； 3 年龄较大的动物反应性降低, 存 3 在许多发性疾病干扰试验结果。
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二、实验动物
2. 起始月(周)龄
啮齿类动物最好在断奶后不久即开始给药
药物长期毒性实验设计原则
5.2系统尸解 应对所有动物进行尸解，尸解应全面细致，为组 织病理学检查提供参考。具体脏器、组织参见下。 脑（大脑、小脑、脑干），脊髓（颈、胸、腰 段）、垂体 、胸腺、甲状腺、甲状旁腺、食管 、 唾液腺、胃、小肠和大肠、肝脏 、胆囊* 肾脏、肾 上腺、脾脏、胰腺、气管、肺、主动脉 、心脏、附 睾、睾丸、卵巢、子宫、前列腺 乳腺、坐骨神经、 膀胱、眼（眼科检查发现异常时）*、视神经*、给药 局部、骨髓、淋巴结（包括给药局部淋巴结、肠系膜 淋巴结）
如有合理的理由说明所申报的中药、天 然药物复方制剂有一定的安全性，所检查 的脏器和组织可减少为：心、肝、脾肺、 肾、脑、胃、小肠、大肠、垂 体、脊髓、 骨髓、淋巴结、膀胱、睾丸、附睾、子宫、 卵巢、胸腺、肾上腺及给药局部组织等。
5.3病理切片的检查
取得到的脏器进行病理切片的制作，制作过程 包括取材、固定、脱水与透明、浸蜡、包埋、切 片、摊片、染色、封片等过程，对病理切片进行 分析，观察药物对其的毒性反应。
高剂量组
中剂量组：LOAEL
低剂量组：NOAEL
Log[Dose]
7.观察指标 1.一般状况观察 在试验期间，应观察动物外观体征、行为活动、 腺体分泌、呼吸、粪便、摄食量、体重、给药局 部反应。 2.血液学指标 至少应观察红细胞计数、血红蛋白、白细胞 计数及其分类、血小板、网织红细胞计数、凝血 酶原时间等。当受试物可能对造血系统有影响时， 应进一步进行骨髓的检查。见表1
药物长期毒性实验设计原则
外推
一、毒理学的研究方法
急性毒性 长期毒性 特殊毒理学方法
（致突变实验、生殖毒性试验、致癌作用试 验）
长期毒性
长期毒性是指以低剂量外来化合物长期给予实验
动物接触，观察其 对实验动物所产生的毒性效应。 包括行为改变、血液、生化反应以及各器官的损 害程度等。 长期毒性试验是确定外来化合物的毒性下限，即 长期接触该化合物可以引起机体危害的阈剂量和 无作用剂量。为进行该化合物的危险性评价与制 定人接触该化合物的安全限量标准提供毒理学依 据，如最高容许浓度和每日容许摄入量等。
药物长期毒性实验设计原则
3~6只。
3.给药方式 原则上应与临床拟用药途径相同。如选择其他
的给药途径，应说明理由 4.给药频率
原则上应每天给药， 且每天给药时间相同。 试验周期长 （3个月或以上）者，也可采取每周 给药6天。特殊类型的受试物由于其毒性特点和 临床给药方案等原因，应根据具体药物的特点设 计给药频率
5.给药期限
表1血液学指标
血液学指标
●红细胞计数
●血红蛋白
●红细胞容积
●平均红细胞容积
●平均红细胞血红蛋白 ●平均红细胞血红蛋白浓 度
●网织红细胞计数 ●白细胞计数及其分类
●血小板计数
●凝血酶原时间
3.血液生化检查 见表2
表2血液生化学指标
血液生化学指标
●天门冬氨酸转氨酶 ●丙氨酸转氨酶
●碱性磷酸酶
●γ-谷氨酰转移酶（非啮齿类动物）
二、长期毒性试验的基本目的
1.预测受试物可能引起的临床不良反应，包括 不良反应的性质、程度、剂量-反应和时间-反应关 系、可逆性等
2.预测临床试验的起始剂量和重复用药的安全 剂量范围（下图）
Biological Response
FEL: Frank Effect Level
LOAEL: Lowest Observable Adverse Effect Level NOAEL:No Observable Adverse Effect Level LOEL: Lowest Observable Effect Level NOEL: No Observable Effect Level
5.2系统尸解
应对所有动物进行尸解，尸解应全面细致，为组 织病理学检查提供参考。具体脏器、组织参见下。
脑（大脑、小脑、脑干），脊髓（颈、胸、腰 段）、垂体 、胸腺、甲状腺、甲状旁腺、食管 、 唾液腺、胃、小肠和大肠、肝脏 、胆囊* 肾脏、肾 上腺、脾脏、胰腺、气管、肺、主动脉 、心脏、附 睾、睾丸、卵巢、子宫、前列腺 乳腺、坐骨神经、 膀胱、眼（眼科检查发现异常时）*、视神经*、给药 局部、骨髓、淋巴结（包括给药局部淋巴结、肠系膜 淋巴结）
3.给药方式 原则上应与临床拟用药途径相同。如选择其他
的给药途径，应说明理由 4.给药频率
原则上应每天给药， 且每天给药时间相同。 试验周期长 （3个月或以上）者，也可采取每周 给药6天。特殊类型的受试物由于其毒性特点和 临床给药方案等原因，应根据具体药物的特点设 计给药频率
5.给药期限
表1血液学指标
血液学指标
●红细胞计数
●血红蛋白
●红细胞容积
●平均红细胞容积
●平均红细胞血红蛋白 ●平均红细胞血红蛋白浓 度
●网织红细胞计数 ●白细胞计数及其分类
●血小板计数
●凝血酶原时间
3.血液生化检查 见表2
表2血液生化学指标
血液生化学指标
●天门冬氨酸转氨酶 ●丙氨酸转氨酶
●碱性磷酸酶
●γ-谷氨酰转移酶（非啮齿类动物）
二、长期毒性试验的基本目的
1.预测受试物可能引起的临床不良反应，包括 不良反应的性质、程度、剂量-反应和时间-反应关 系、可逆性等
2.预测临床试验的起始剂量和重复用药的安全 剂量范围（下图）
Biological Response
FEL: Frank Effect Level
LOAEL: Lowest Observable Adverse Effect Level NOAEL:No Observable Adverse Effect Level LOEL: Lowest Observable Effect Level NOEL: No Observable Effect Level
5.2系统尸解
应对所有动物进行尸解，尸解应全面细致，为组 织病理学检查提供参考。具体脏器、组织参见下。
脑（大脑、小脑、脑干），脊髓（颈、胸、腰 段）、垂体 、胸腺、甲状腺、甲状旁腺、食管 、 唾液腺、胃、小肠和大肠、肝脏 、胆囊* 肾脏、肾 上腺、脾脏、胰腺、气管、肺、主动脉 、心脏、附 睾、睾丸、卵巢、子宫、前列腺 乳腺、坐骨神经、 膀胱、眼（眼科检查发现异常时）*、视神经*、给药 局部、骨髓、淋巴结（包括给药局部淋巴结、肠系膜 淋巴结）
【学习课件】第十四章-长期毒性作用及其试验方法
第十四章 长期毒性作用及其试验方法
long-term toxicity impact and test method
18.11.2020
.
1
第一节 基本概念和目的 第二节 试验设计原则及方法
18.11.2020
.
2
第一节
基本概念和目的
18.11.2020
.
3
一、定义
长期毒性作用是指药物以一定的等级剂量连续 多日给予受试动物所产生的有害作用。为观察这种 有害作用而设计的毒理学试验称之为长期毒性试验。
一类新药：Beagle犬 二类新药：杂种狗
18.11.2020
.
24
二、实验动物
1.种类及品系
☆我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, 一种为啮 齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。
☆在吸入给药时，猴是首先推荐的动物，因为它在呼吸系统 的解剖学和生理学方面比其它动物更接近人类。
☆如研究计划生育用药，应选择猴或其他大动物。
.
22
二、实验动物
1.种类及品系
☆我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, 一种为啮 齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。
Wistar大鼠 SD大鼠
18.11.2020
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23
二、实验动物
1.种类及品系
☆我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, 一种为啮 齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。
.
9
长期毒性试验与急性毒性试验 的根本差别
1
给药的期限不同
2
给药的剂量范围不同
3
18.11.2020
观察的毒效应不同
.
10
急性毒性试验是以死亡为观察终点的质反应过程
long-term toxicity impact and test method
18.11.2020
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1
第一节 基本概念和目的 第二节 试验设计原则及方法
18.11.2020
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2
第一节
基本概念和目的
18.11.2020
.
3
一、定义
长期毒性作用是指药物以一定的等级剂量连续 多日给予受试动物所产生的有害作用。为观察这种 有害作用而设计的毒理学试验称之为长期毒性试验。
一类新药：Beagle犬 二类新药：杂种狗
18.11.2020
.
24
二、实验动物
1.种类及品系
☆我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, 一种为啮 齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。
☆在吸入给药时，猴是首先推荐的动物，因为它在呼吸系统 的解剖学和生理学方面比其它动物更接近人类。
☆如研究计划生育用药，应选择猴或其他大动物。
.
22
二、实验动物
1.种类及品系
☆我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, 一种为啮 齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。
Wistar大鼠 SD大鼠
18.11.2020
.
23
二、实验动物
1.种类及品系
☆我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, 一种为啮 齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。
.
9
长期毒性试验与急性毒性试验 的根本差别
1
给药的期限不同
2
给药的剂量范围不同
3
18.11.2020
观察的毒效应不同
.
10
急性毒性试验是以死亡为观察终点的质反应过程
长期毒性作用及其试验方法演示文稿
原因： 1 长期毒性试验的给药期限较长；
处于生长发育阶段的动物对药物 2 的毒性反应较敏感； 3 年龄较大的动物反应性降低, 存 3 在许多发性疾病干扰试验结果。
2020/11/26
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二、实验动物
2. 起始月(周)龄
啮齿类动物最好在断奶后不久即开始给药
大鼠起始周龄要求在 6 ~8周龄； 如果试验周期超过3个月以上，则将起始周龄降至
2020/11/26
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一、一般原则和要求
总体原则
给药途径应与临床拟用途径相同
口服给药大鼠一般常用灌胃，灌胃的容量为 每天1~2ml/100g，也可将受试药物混在饲料或水 中给予，但要保证每只动物按规定剂量在一定时 间内服入，静脉注射大鼠时可采用腹腔代替，各 剂量组采用等容量不等浓16
一、一般原则和要求
总体原则 选用两种实验动物 三个剂量 给药途径应与临床拟用途径相同
2020/11/26
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一、一般原则和要求
总体原则 选用两种实验动物
至少在两种动物体上进行，兼顾雌雄性别。
2020/11/26
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一、一般原则和要求
总体原则
三个剂量
剂量至少分为高、中、低三个档次。 高剂量组应能充分反映药物的毒性， 低剂量组不出现毒性反应。 同时设一溶剂 ( 或赋形剂 ) 对照组或 已知药物毒性对照组。
长期毒性作用及其试验方法演示 文稿
优选长期毒性作用及其试验方法
第一节 基本概念和目的 第二节 试验设计原则及方法
2020/11/26
3
第一节
基本概念和目的
2020/11/26
4
一、定义
长期毒性试验是指试验动物连续多日接触较大 剂量的药物所引起的中毒效应，为观察这种中毒效 应而设计的毒理学试验称之为长期(慢性)毒性试验。
长期毒性作用及其试验方法PPT课件
2019/5/30
9
基本概念和目的
二、目的与意义
观察在试验动物长期重复给药的情况下，了解药物有无 蓄积作用，试验动物能否产生耐受性，试验动物会出现 哪些毒性反应，其剂量效应关系如何，涉及哪些组织， 主要靶器官是什么，损害的性质和程度如何，损害是否 可逆等；
观察在给试验动物长期重复给药的情况下，初步估计不 出现毒性作用的最大耐受量和出现毒性作用的最小剂量， 为拟定人用药的安全剂量提供参考。
2019/5/30
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基本概念和目的
长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异：
1. 给药的期限不同。
急性毒性试验为一次性给药或 24 小时内 多次给药；
长期毒性试验为连续多日接触一定剂量给 药，给药期限为临床用药的 3-4 倍时间。
对长期毒性试验各国之间无统一的时间规定。
2019/5/30
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基本概念和目的
2019/5/30
10
第二节 试验设计原则及方法
2019/5/30
11
试验设计原则及方法
一、一般原则和要求
1.二种动物：啮齿类（大鼠） + 非啮齿（比格犬） 2.三个剂量：高、中、低三个档次，高剂量组充分 反映药物的毒性，低剂量组不出现毒性反应。 3.至少4组：溶剂 ( 或赋型剂 ) 对照组或已知药 物毒性对照组。 4.给药途径应与临床拟用途径相一致。 5.符合《中华人民共和国药品管理法》，执行“药 物非临床研究质量管理规范”。
长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异：
1. 给药的期限不同。 2. 给药的剂量范围不同。
急性毒性试验为一次性大剂量给药 长期毒性试验为低剂量长期积累
2019/5/30
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基本概念和目的
【学习课件】第十四章-长期毒性作用及其试验方法
2021/7/6
51
在选择适宜的剂量时还应考虑到： ①药物在体内的生物蓄积作用。对于高蓄 积性药物应适当减少其剂量，否那么在长期毒 性试验完毕时各剂量均有可能出现毒性作用； ②药物是否有可能被特殊的酶所“解毒〞或 “活化增毒〞，而这些酶又是否易被药物本身 所诱导或抑制。 ③药物在消化道中的稳定性。与胃肠道内容 物有亲和性的药物，那么应酌情增加剂量。
为说明毒性作用的量—效关系，在上述 两个剂量之间插入一个(或多个)中间剂 量。
2021/7/6
49
亚慢性毒性试验根底
最大剂量：选择90天试验中体重增长不到10%的剂量； 中剂量：1/4最大剂量； 低剂量：1/8最大剂量。
2021/7/6
50
最高剂量组的根本要求
仅出现轻度毒性，不改变试验动物的正常寿命， 或至少在给药的前四分之一时间内不影响动物的体 质，外观无异常，可有血清酶活力的改变或轻度体重 增长抑制〔＜10%〕。
2021/7/6
46
我国药政部门关于一般药物重复给药毒性试验期限的规定
临床拟用 给药时间
﹤5天 ﹤2周
毒性试验期限
啮齿类动物
非啮齿类动物
2周
2周
1月
1月
2-4周
3月
3月
1-3月
﹥3月
6月 6月
6月 9月
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我国药政部门关于一般药物重复给药毒性试验期限的规定
临床拟用 给药时间
﹤5天 ﹤2周
原因： 1 长期毒性试验的给药期限较长；
处于生长发育阶段的动物对药物 2 的毒性反应较敏感；
年龄较大的动物反应性降低, 存在 3 许多自发性疾病干扰试验结果。
2021/7/6
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各3~6只。
3.给药方式 原则上应与临床拟用药途径相同。如选择其他
的给药途径，应说明理由 4.给药频率
原则上应每天给药， 且每天给药时间相同。 试验周期长 （3个月或以上）者，也可采取每周 给药6天。特殊类型的受试物由于其毒性特点和 临床给药方案等原因，应根据具体药物的特点设 计给药频率
5.给药期限
●尿素氮
●肌酐
●总蛋白
●白蛋白
●血糖
●总胆红素
●总胆固醇
●甘油三酯
●钠离子浓度
●钾离子浓度
●氯离子浓度
●肌酸磷酸激酶
4、体温、眼科检查、尿液检查、心电图检查
非啮齿类动物还应进行体温、眼科检查、尿液 检查、心电图检查等。见表3
表3 非啮齿类动物尿液分析指标
非啮齿类动物尿液分析指标
●尿液外观
●比重
●pH值 ●尿蛋白
一、毒理学的研究方法
• 急性毒性 • 长期毒性 • 特殊毒理学方法 （致突变实验、生殖毒性试验、致癌作用试
验）
长期毒性
• 长期毒性是指以低剂量外来化合物长期给予实验 动物接触，观察其 对实验动物所产生的毒性效应 。包括行为改变、血液、生化反应以及各器官的 损害程度等。
• 长期毒性试验是确定外来化合物的毒性下限，即 长期接触该化合物可以引起机体危害的阈剂量和 无作用剂量。为进行该化合物的危险性评价与制 定人接触该化合物的安全限量标准提供毒理学依 据，如最高容许浓度和每日容许摄入量等。
●尿糖 ●尿胆红素
●尿胆原
●酮体
●潜血
●白细胞
5、系统尸解和组织病理学检查
5．1脏器系数 应对脏器进行称重，并计算脏器系数。脏器 系数=脏器湿重/动物总体重，具体见表4 表4长期毒性试验中需称重并计算脏器系数的器官
长期毒性试验中需称重并计算脏器系数的器官
●脑 ●肝脏 ●脾脏 ●肾上腺 ●睾丸 ●子宫
Log[Dose]
3.推测受试物重复给药的临床毒性靶器官或靶组织
4.提示临床试验中需重点监测的指标
5.其它 毒作用的敏感检测指标和生物学标志 毒作用机制研究 受试物的毒物动力学和代谢研究 中毒的解救措施
三、长期毒性动物实验设计内容
1.受试物 长期毒性试验的受试物应能充分代表临床试
验受试物和上市药品，因此受试物应采用制备工 艺稳定、符合临床试用质量标准规定的样品，一 般用中试样品，并注明受试物的名称、来源、批 号含量（或规格） 、保存条件及配制方法等
如有合理的理由说明所申报的中药、天 然药物复方制剂有一定的安全性，所检查 的脏器和组织可减少为：心、肝、脾肺、 肾、脑、胃、小肠、大肠、垂 体、脊髓、 骨髓、淋巴结、膀胱、睾丸、附睾、子宫 、卵巢、胸腺、肾上腺及给药局部组织等 。
2.实验动物
• 啮齿类，常用6-9周龄大鼠； • 非啮齿类，常用6-12月龄Beagle 犬或猴。 • 健康、体重均一，雌性应未孕，动物雌雄各半。 • 当临床拟用于单性别时，可采用相应性别的动物。 • 每组动物的数量应能够满足试验结果的者猴可为雌、雄
根据药物的给药疗程确定给药期限： 单次给药：2周 ≤2周 1个月 ≤1个月 1或3个月 ≤3个月 3或6个月 ≤6个月 6或9个月
＞6个月 6或9个月
6.给药剂量
三个剂量组：高、中、低+空白组 低剂量组原则上应高于动物药效学试验的等效 剂量或预期的临床治疗剂量的等效剂量。高剂量 组原则上应使动物产生明显的毒性反应，甚至可 引起少量动物死亡（对于毒性较小的中药，可尽 量采用最大给药量）。在高、低剂量之间至少应 再设一个中剂量组。
●心脏 ●肺脏 ●肾脏 ●胸腺 ●附睾 ●卵巢
5.2系统尸解
应对所有动物进行尸解，尸解应全面细致，为组 织病理学检查提供参考。具体脏器、组织参见下。
脑（大脑、小脑、脑干），脊髓（颈、胸、腰 段）、垂体 、胸腺、甲状腺、甲状旁腺、食管 、 唾液腺、胃、小肠和大肠、肝脏 、胆囊* 肾脏、肾 上腺、脾脏、胰腺、气管、肺、主动脉 、心脏、附 睾、睾丸、卵巢、子宫、前列腺 乳腺、坐骨神经、 膀胱、眼（眼科检查发现异常时）*、视神经*、给药 局部、骨髓、淋巴结（包括给药局部淋巴结、肠系膜 淋巴结）
(2)实验结果的可重复性：
3.随机原则 为了减少个体差异这种非处理因素的干
扰，应于实验前将实验动物依统计学原则 进行随机分组，以此达到尽可能降低非处 理因素的混杂效应，从而提高每组动物间 均衡性的目的。
二、长期毒性试验的基本目的
1.预测受试物可能引起的临床不良反应，包括 不良反应的性质、程度、剂量-反应和时间-反应关 系、可逆性等
一、试验设计遵循三原则
1.对照原则 在动物实验中，要求相比较的各组间动物的种类、 性别、年龄、体重等尽可能地一致。对照组与实 验组同等重要，两组的动物数应相等。
(1)空白对照：又称正常对照 (2)标准对照：又称有效对照或阳性对照 (3)组间对照： (4)自身对照：
2.重复原则
(1)足够的实验样本数：
Biological Response
高剂量组 中剂量组：LOAEL 低剂量组：NOAEL
Log[Dose]
7.观察指标
1.一般状况观察
在试验期间，应观察动物外观体征、行为活动、 腺体分泌、呼吸、粪便、摄食量、体重、给药局 部反应。
2.血液学指标
至少应观察红细胞计数、血红蛋白、白细胞 计数及其分类、血小板、网织红细胞计数、凝血 酶原时间等。当受试物可能对造血系统有影响时， 应进一步进行骨髓的检查。见表1
2.预测临床试验的起始剂量和重复用药的安全 剂量范围（下图）
Biological Response
FEL: Frank Effect Level
LOAEL: Lowest Observable Adverse Effect Level NOAEL:No Observable Adverse Effect Level LOEL: Lowest Observable Effect Level NOEL: No Observable Effect Level
表1血液学指标
血液学指标
●红细胞计数
●血红蛋白
●红细胞容积
●平均红细胞容积
●平均红细胞血红蛋白 ●平均红细胞血红蛋白浓 度
●网织红细胞计数 ●白细胞计数及其分类
●血小板计数
●凝血酶原时间
3.血液生化检查 见表2
表2血液生化学指标
血液生化学指标
●天门冬氨酸转氨酶 ●丙氨酸转氨酶
●碱性磷酸酶
●γ -谷氨酰转移酶（非啮齿类动物）
3.给药方式 原则上应与临床拟用药途径相同。如选择其他
的给药途径，应说明理由 4.给药频率
原则上应每天给药， 且每天给药时间相同。 试验周期长 （3个月或以上）者，也可采取每周 给药6天。特殊类型的受试物由于其毒性特点和 临床给药方案等原因，应根据具体药物的特点设 计给药频率
5.给药期限
●尿素氮
●肌酐
●总蛋白
●白蛋白
●血糖
●总胆红素
●总胆固醇
●甘油三酯
●钠离子浓度
●钾离子浓度
●氯离子浓度
●肌酸磷酸激酶
4、体温、眼科检查、尿液检查、心电图检查
非啮齿类动物还应进行体温、眼科检查、尿液 检查、心电图检查等。见表3
表3 非啮齿类动物尿液分析指标
非啮齿类动物尿液分析指标
●尿液外观
●比重
●pH值 ●尿蛋白
一、毒理学的研究方法
• 急性毒性 • 长期毒性 • 特殊毒理学方法 （致突变实验、生殖毒性试验、致癌作用试
验）
长期毒性
• 长期毒性是指以低剂量外来化合物长期给予实验 动物接触，观察其 对实验动物所产生的毒性效应 。包括行为改变、血液、生化反应以及各器官的 损害程度等。
• 长期毒性试验是确定外来化合物的毒性下限，即 长期接触该化合物可以引起机体危害的阈剂量和 无作用剂量。为进行该化合物的危险性评价与制 定人接触该化合物的安全限量标准提供毒理学依 据，如最高容许浓度和每日容许摄入量等。
●尿糖 ●尿胆红素
●尿胆原
●酮体
●潜血
●白细胞
5、系统尸解和组织病理学检查
5．1脏器系数 应对脏器进行称重，并计算脏器系数。脏器 系数=脏器湿重/动物总体重，具体见表4 表4长期毒性试验中需称重并计算脏器系数的器官
长期毒性试验中需称重并计算脏器系数的器官
●脑 ●肝脏 ●脾脏 ●肾上腺 ●睾丸 ●子宫
Log[Dose]
3.推测受试物重复给药的临床毒性靶器官或靶组织
4.提示临床试验中需重点监测的指标
5.其它 毒作用的敏感检测指标和生物学标志 毒作用机制研究 受试物的毒物动力学和代谢研究 中毒的解救措施
三、长期毒性动物实验设计内容
1.受试物 长期毒性试验的受试物应能充分代表临床试
验受试物和上市药品，因此受试物应采用制备工 艺稳定、符合临床试用质量标准规定的样品，一 般用中试样品，并注明受试物的名称、来源、批 号含量（或规格） 、保存条件及配制方法等
如有合理的理由说明所申报的中药、天 然药物复方制剂有一定的安全性，所检查 的脏器和组织可减少为：心、肝、脾肺、 肾、脑、胃、小肠、大肠、垂 体、脊髓、 骨髓、淋巴结、膀胱、睾丸、附睾、子宫 、卵巢、胸腺、肾上腺及给药局部组织等 。
2.实验动物
• 啮齿类，常用6-9周龄大鼠； • 非啮齿类，常用6-12月龄Beagle 犬或猴。 • 健康、体重均一，雌性应未孕，动物雌雄各半。 • 当临床拟用于单性别时，可采用相应性别的动物。 • 每组动物的数量应能够满足试验结果的者猴可为雌、雄
根据药物的给药疗程确定给药期限： 单次给药：2周 ≤2周 1个月 ≤1个月 1或3个月 ≤3个月 3或6个月 ≤6个月 6或9个月
＞6个月 6或9个月
6.给药剂量
三个剂量组：高、中、低+空白组 低剂量组原则上应高于动物药效学试验的等效 剂量或预期的临床治疗剂量的等效剂量。高剂量 组原则上应使动物产生明显的毒性反应，甚至可 引起少量动物死亡（对于毒性较小的中药，可尽 量采用最大给药量）。在高、低剂量之间至少应 再设一个中剂量组。
●心脏 ●肺脏 ●肾脏 ●胸腺 ●附睾 ●卵巢
5.2系统尸解
应对所有动物进行尸解，尸解应全面细致，为组 织病理学检查提供参考。具体脏器、组织参见下。
脑（大脑、小脑、脑干），脊髓（颈、胸、腰 段）、垂体 、胸腺、甲状腺、甲状旁腺、食管 、 唾液腺、胃、小肠和大肠、肝脏 、胆囊* 肾脏、肾 上腺、脾脏、胰腺、气管、肺、主动脉 、心脏、附 睾、睾丸、卵巢、子宫、前列腺 乳腺、坐骨神经、 膀胱、眼（眼科检查发现异常时）*、视神经*、给药 局部、骨髓、淋巴结（包括给药局部淋巴结、肠系膜 淋巴结）
(2)实验结果的可重复性：
3.随机原则 为了减少个体差异这种非处理因素的干
扰，应于实验前将实验动物依统计学原则 进行随机分组，以此达到尽可能降低非处 理因素的混杂效应，从而提高每组动物间 均衡性的目的。
二、长期毒性试验的基本目的
1.预测受试物可能引起的临床不良反应，包括 不良反应的性质、程度、剂量-反应和时间-反应关 系、可逆性等
一、试验设计遵循三原则
1.对照原则 在动物实验中，要求相比较的各组间动物的种类、 性别、年龄、体重等尽可能地一致。对照组与实 验组同等重要，两组的动物数应相等。
(1)空白对照：又称正常对照 (2)标准对照：又称有效对照或阳性对照 (3)组间对照： (4)自身对照：
2.重复原则
(1)足够的实验样本数：
Biological Response
高剂量组 中剂量组：LOAEL 低剂量组：NOAEL
Log[Dose]
7.观察指标
1.一般状况观察
在试验期间，应观察动物外观体征、行为活动、 腺体分泌、呼吸、粪便、摄食量、体重、给药局 部反应。
2.血液学指标
至少应观察红细胞计数、血红蛋白、白细胞 计数及其分类、血小板、网织红细胞计数、凝血 酶原时间等。当受试物可能对造血系统有影响时， 应进一步进行骨髓的检查。见表1
2.预测临床试验的起始剂量和重复用药的安全 剂量范围（下图）
Biological Response
FEL: Frank Effect Level
LOAEL: Lowest Observable Adverse Effect Level NOAEL:No Observable Adverse Effect Level LOEL: Lowest Observable Effect Level NOEL: No Observable Effect Level
表1血液学指标
血液学指标
●红细胞计数
●血红蛋白
●红细胞容积
●平均红细胞容积
●平均红细胞血红蛋白 ●平均红细胞血红蛋白浓 度
●网织红细胞计数 ●白细胞计数及其分类
●血小板计数
●凝血酶原时间
3.血液生化检查 见表2
表2血液生化学指标
血液生化学指标
●天门冬氨酸转氨酶 ●丙氨酸转氨酶
●碱性磷酸酶
●γ -谷氨酰转移酶（非啮齿类动物）