Mutation Analysis of AVPR2 and AQP2 Gene in Chinese Patients with Congenital Nephrogenic Diabete
AMPKα2基因多态性与2型糖尿病及脂联素、抵抗素的关系
基础医学与临床 Basic ＆ Clinical Medicine
文章编号： 1 0 0 1 -6 3 2 5 （ 2 0 1 1 ） 1 2 -1 3 6 6 -0 5
December 2011 Vol． 31 No． 12
研究论文
பைடு நூலகம்
AMPKα2 基因多态性与 2 型糖尿病及脂联素、抵抗素的关系
刘婧星，任建功* ，孙保生，罗 晖，胡雪剑，张文博
（ 兰州大学 第二医院 糖尿病 2 科，甘肃 兰州 730030）
摘要：目的 研究甘肃地区汉族人群 AMPKα2 基因多态性与 T2DM、胰岛素抵抗及血清脂联素、抵抗素水平的关系。
方法 选取 T2DM 患者 188 例和非糖尿病正常人群 179 例，用聚合酶链反应 － 限制性片段长度多态性（ PCR-RFLP） 法，检测 AMPK-rs2796516G / A 基因型。用酶联免疫法（ ELISA） 测定血清脂联素、抵抗素浓度，以及测定血糖、血脂、 胰岛素（ INS） 。结果 T2DM 和正常人群中均存在 AMPK-rs2796516 位点 G / A 基因突变，二组间基因型构成比及等 位基因频率均有差异。T2DM 患者中 AMPK-rs2796516G / A 基因多态性与胰岛素抵抗、血脂代谢、血清脂联素及抵 抗素水平等明显相关，与 G / G、G / A 组相比，A / A 组 HOMA-IR 明显增高，TG、TC 及 LDL 增高，血清脂联素水平减 低，抵抗素水平增高。结论 甘肃地区汉族人群 AMPK-rs2796516 基因多态性与 T2DM 及血清脂联素、抵抗素水平有 明显相关性。
Abstract： Objective To investigate the association among AMPKα2 subunit gene polymorphism in Han People from Gansu and type 2 diabetes mellitus（ T2DM） ，insulin resistance （ IR） and plasma resistin and adiponectin． Methods 188 patientes with T2DM（ case group） and 179 healthy persons（ control group） were enrolled． A SNP rs-2796516（ G ＞ A） in AMPKα2 subunit gene was genotyped in all the subjects enrolled using PCR and restriction fragment length polymorphism（ RFLP） ． ELISA technique was employed to determine the plasma adiponectin and resistin concentration． At the same time the fasting blood glucose，insulin and blood lipid were detected． Results There was polymorphism of AMPK-rs2796516 in both T2DM and normal subjects． There was significant difference of genotype constituent ratio and A allele frequency in two groups． In case group，AMPKα2 subunit gene polymorphism was significantly related to insulin resistance，blood lipid and the concentration of plasma adiponectin and resistin． Compared with GG and GA group，the concentration of serum TG，TC，LDL，resistin were higher in AA group，the concentration of serum adiponectin was lower in AA group． Conclusions The polymorphism of AMPKrs2796516G / A was revelant with T2DM，the concentration of plasma adiponectin and resistin． Key words： 5'-AMP-activated protein kinase（ AMPK） ； type 2 diabetes mellitus （ T2DM） ； resistin； adiponectin
雌激素受体α基因PvuⅡ多态性与慢性乙型肝炎患者干扰素-α早期应答的相关性研究
（ ０８ ）ｔａ ０Ｏ ｉ ｐ ａ ｄ ７２ ｉ Ｐ ｇ ｎ ｔｐ ｇｏ ｐ （ ００ ） ｗ ｉ ｎ ｉ ｅ ｈ ｏ ｉｅ ｅｐ ｎ ｅ ｏ ７ ．％ ｈ ｎ ４ ．％ ｎ Ｐ ｎ ３ ．％ ｎ Ｐ ｅ ｏｙ ｅ ｒｕ Ｐ＜ ．５ ， ｈｌ ｅｔ ｒ ｔｅ ｃ ｍｂｎ ｄ ｒｓ ｏ ｓ ｎ ｒ ｅ ｈ
【 ｓ ａｔ Ｏｂｅ ｔ ｅ Ｔ ｎｅｔ ａ ｈ ｅａ ｏｓｉ ｅｗ ｅ ｓｏｅ ｅ ｅｔ ｇｎ ｏ ｍｏｐ ｉ ｓａ ｄ Ａｂｔ ｃ 】 ｒ ｊｃｉ ｏｉｖｓｇｔ ｔｅｒｌｔ ｎｈ ｂｔｅｎ ｅｔ ｇｎ ｒ ｐｏ ｖ ｉ ｅ ｉ ｐ ｒ ｃ ｒ ｅ ｅ ｐｌ ｒｈｓ ｎ ｙ ｍ
ｓｒｇ ｎ ｒｃ ｐｏ ｔｏｅ ｅ ｅ ｔｒ仅 （ Ｓ ） ｅ ｅ ｗ ｒ ｎ ｌｚｄ ｎ ０ ｎ ｉｅ ｐ ｔ ｎ ｓ ｉ ｈｏ ｉ ｅ ａｉｓ Ｂ ｒｃ ｉｉｇ ｉｔｒ ｒｎ Ｅ Ｒ１ ｇ ｎ ｅｅ ａ ａｙｅ ｉ １ ０ ａｖ ａｉ ｔ ｔ ｃ ｒｎｃ ｈ ｐ ｔｉ ｅ ｅｖｎ ｎｅ ｅｏ － ｅ ｗ ｈ ｔ ｆ
后早期应答率的重要因素之一。
研究提示 Ｐ ｕ ｖ Ⅱ多态性检测可能是预测慢性乙型肝炎患者干扰素一【 ０治疗
【 关键词 】 慢性乙型肝炎 ； 雌激素受体 ； 基因多态性 ； 干扰素一 早期应答 ；
ｄ ｉ ０３ ６ ／ｉ ｎ １ ７ — ０ ９ ０ ００ ． ９ ｏ： ． ９ ． ｓ ．６ ２ ５ ６ ． １ ． ０ １ ９ ｊｓ ２ ４ ０
ＨＢｅ ｄ ｓ ｐ ｅ ｒ ｎ ｅ ｒ ｅ ｏ ｏ ｖ ｒ ｉｎ ｍｏ ｇ Ｐ． ｐ ｎ Ｐ ｇ ｎ ｔ ｐ ｏ ｐ ｈ ｄ ｏ ｓｇ ｉ ｃ ｎ ｄ ｆ ｒ ｎ ｅ （ Ａｇ ｉａ ｐ ａ ａ ｃ ｏ ｓ ｒ ｃ ｎ ｅ ｓｏ ａ ｎ Ｐ Ｐ ａ ｄ Ｐ ｅ ｏ ｙ ｅ ｇ ｕ ｓ ａ ｎ ｉｎ ｆ ａ ｔ ｉ ｅ ｅ ｃ ｒ ｉ Ｐ＞
CancerCell陈佩文博士等发现巨噬细胞与肿瘤细胞的互惠共生作用揭示新的抗肿瘤靶点
CancerCell陈佩⽂博⼠等发现巨噬细胞与肿瘤细胞的互惠共⽣作⽤揭⽰新的抗肿瘤靶点遗传学家在果蝇⾝上发现⼀种⼗分有趣的现象：当两个特定基因同时失活突变会导致果蝇死亡，⽽单独⼀个基因突变却⽆致命性伤害。
1946年，科学家将这种现象定义为“合成致死”（synthetic lethality）效应。
在沉寂51年后，1997年癌症⽣物学家提出将这⼀理念应⽤到癌症治疗。
“合成致死”是⼀种针对癌症细胞的治疗理念。
基于此原理设计的第⼀个抗癌药物PARP（多聚ADP核糖聚合酶）抑制剂Olaparib于2014年获得FDA批准。
2019年6⽉10⽇，MD Anderson癌症中⼼的Ronald A. DePinho教授（MD安德森癌症中⼼前院长，陈佩⽂博⼠为论⽂第⼀作者）团队在Cancer Cell发表⽂章Symbiotic macrophage-glioma cell interactions reveal synthetic lethality in PTEN null glioma，创造性地将“合成致死”理念扩展到癌症细胞和肿瘤微环境的互惠共⽣作⽤体系中，并以此鉴定出新的癌症治疗靶点。
胶质母细胞瘤（Glioblastoma multiforme, GBM）是⼀种最常见的，致死性极⾼的脑部肿瘤。
⽬前针对这种癌症⼏乎没有任何有效的治疗⼿段，确诊患者平均⽣存期只有12到15个⽉，其中不到5%能存活5年。
遗传学实验证明GBM的发⽣主要与三类信号通路的改变有关，包括RTK/RAS/PI3K/PTEN，P53/ARF/MDM2和RB/CDKN2A信号通路。
但是因为肿瘤细胞的遗传不稳定性和异质性，针对这些信号通路的治疗在临床试验中均以失败告终。
肿瘤微环境的遗传背景稳定，且受癌症细胞调控，是⼀个⼗分有前景的肿瘤治疗⽅向。
本⽂作者⾸先分析了GBM病⼈的样本，发现在这些主要遗传改变的信号通路中，PTEN突变或缺失与肿瘤微环境密切相关。
藏系绵羊乙酰辅酶A合成酶2基因的生物信息学分析
南 学 学报 自 学 ｆ Ｓ ｗｅｔ 民 Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆＳ ｕ ｈ ｅ ｔＵ ｉ ｅｒ ｉ ｆ ｒ ａｉ ｎａ ｉ ｅ Ｎ ａ ｕ ａ ｃｅ ｃ ｏ ｒａ ｏ ｏ ｔ ｗ ｓ Ｕｎｖ ｓ ｔ ｏ Ｎ ｔ ｓ ｙ ｏ ｌ ｉ ｔｓ ｔ ｒ ｌ ｉｎ ｅＥｄ ｔ ｎ Ｓ ｉｏ ｉ
１ 实 验方 法 ． ２
１ ． 藏 系绵羊瘤 胃组织总 Ｒ Ａ 的提取与鉴定 从液氮中取出藏系绵羊瘤 胃组织样 品大约 ５ ． ０ ｇ 剪碎后 ．１ ２ Ｎ ０１ ｍ ， ０ 移入预先加入 ｌ ｌｒ ｏ 试剂的研钵， Ｔｉ ｌ ｍ ｚ 研磨至细胞完全裂解， 用移液枪吸取 ｌ ｌ １ ｍ 的经 Ｄ Ｐ 至 ． ｌ ｍ ５ Ｅ Ｃ水处理的 Ｅ ｐ 管 中， 室温静置 ５ ｉ左右， ２ ０ｒｍ４ ｍｎ １００ ， ｐ ℃离心 １ｍ ｎ 上层液体移入另一 Ｅ 管， ０ｉ ， ｐ 加入 Ｏ ｍ 氯仿， ． ｌ ５ 震荡 １ｓ 室温 ５，
１ 材 料与方法
１１ 实验 材 料 ．
１ ． 实验动物 在 四川省阿坝州阿坝县取藏系绵羊（ ，１ １ 贾乐类群） 公母各三只， 屠宰后立即采集瘤 胃组织， 剪切 成米粒大小， 包于锡箔纸内迅速置于液氮中带回实验室备用．
１ ． 实验主要试剂和仪器 Ｔｉ ｌ Ｎ ｉ ｌ ） Ｒ Ａ提取试剂； Ｙ － ６ ，２ １ ｒ ｏ Ｒ Ａｓ Ｐｕ 等 Ｎ ｚ（ ｏ ｓ Ｄ Ｙ３ 稳压稳流电泳仪（ ． 北京六一仪器厂 产） Ｇ Ｌ Ｄ Ｃ ０ ０ ； Ｅ Ｏ ２ ０ 凝胶成像系统（ 美国 ＢＯ Ｒ Ｄ公司） Ｗ Ｐ Ｂｏ ａｅ Ｉ －Ａ ； Ａ ｉ ｖ 核酸蛋 白检测仪（ ｗ 英国 Ｂｏｈｏ 公 司） ｉ ｒｍ ｃ ； Ｉｕ ｉ ｉｅ ０ 基 因测序仪（ ｌ ｍｎ ＨＳｑ ００ ｌ ａ ２ 美国 Ｉｕ ｎ 公司生产） ｌｍｉ ｌ ａ ．
基于ippg技术的生理参数检测综述
0引言对心率、心率变异性、呼吸率、血氧饱和度等生理参数的检测在现代医学体系中扮演着重要角色。
除了传统的健康评估、疾病诊断等医疗场景，生理参数检测也在运动效能评估、疲劳监测、心理评价等研究领域发挥着重要作用。
生理参数检测通常通过电极或传感器直接接触人体进行实现，比如将Ag/AgCl 电极粘贴在患者胸口，捕捉心脏生物电信号；将感光元器件紧贴在患者皮肤表面，获得目标人体的血氧饱和度等。
这种接触式检测方法具有很高的准确性和稳定性，是现阶段临床领域检测生理参数的主要方式。
随着社会和科技的进步，生理参数检测的应用场景日趋丰富，也逐渐暴露出接触式检测方法的局限性：首先，某些检测对象不适合接触传感器，如具有开放性伤口（大面积烧伤或溃疡等）的患者、婴幼儿等；其次，一些应用环境不方便传感器触及人体，比如灾害或战场应急救援中搜寻幸存者；最后，接触式检测方法长时间使用，容易引起受试者不适。
因此，非接触式检测方法受到很多研究者的关注。
非接触式检测方法是指检测设备与目标间隔一定距离，在对目标无约束情况下，通过外来能量媒介或感应目标生物信息获得生理信号[1]。
该方法可为目标提供轻松舒适的检测环境，能够弥补接触式检测方法在某些场合的应用短板。
非接触式检测方法中常用超声波、电磁波、光波作为媒介。
超声波的应用主要基于多普勒原理。
邢旭东等[2]研制了一种高精度呼吸监测装置，用于CT放疗定位时对患者呼吸状态的监测，提高CT检查的成功率。
韩国延世大学Min等[3]使用240kHz超声波实现了人体呼吸率的远距离测量，并对比热电偶方法证明了测量结果的准确性。
生物雷达是利用电磁波基于IPPG技术的生理参数检测综述张煜，刘保真*，单聪淼，牟锴钰（中国航天员科研训练中心，北京100094）[摘要]介绍了成像式光电容积描记（imaging photoplethysmography，IPPG）技术的研究背景和生物学基础，从视频处理、容积波信号提取、生理参数计算3个方面分析了基于IPPG技术检测生理参数的技术流程和研究现状。
电喷雾质谱法研究谷胱甘肽与L型芳香性氨基酸非共价复合物_
Vo.l 30高等学校化学学报No .52009年5月CHEM I CAL J OURNAL OF CH I NESE UN I VERSI T I E S869~875电喷雾质谱法研究谷胱甘肽与L 型芳香性氨基酸非共价复合物储艳秋1,戴兆云2,蒋公羽1,郑松柏2,陈 玺2,丁传凡1(1.复旦大学化学系激光化学研究所,上海200433;2.复旦大学附属华东医院,上海200040)摘要 为探索谷胱甘肽和L 型芳香性氨基酸的非共价相互作用,将一定化学剂量比的还原型C -谷胱甘肽分别与L 型芳香性氨基酸(包括苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸)在室温和生理p H 条件下混合后,温育1h ,生成非共价复合物,并使反应完全.电喷雾质谱测量结果揭示谷胱甘肽和L 型芳香性氨基酸反应可以生成非共价复合物.在二级串级质谱M S 2测得的复合物碎片离子峰中,除芳香性氨基酸离子峰外,还包括谷胱甘肽及其它再次碎裂产生的b 2和y 2碎片离子,进一步确认了非共价复合物的形成.紫外光谱也证实了电喷雾质谱的实验结果.为避免严重的离子化效率差异和质谱信号的相互抑制作用,定量评估了谷胱甘肽和酪氨酸的相互作用,结果显示反应物的初始浓度应该选择在5@10-5~3100@10-4m o l/L 范围内.用质谱滴定法测定了谷胱甘肽与3个芳香性氨基酸非共价复合物的解离常数,结果表明,谷胱甘肽复合物的稳定性按T yr ,T rp和Phe 次序依次增大.关键词 L 型芳香性氨基酸;谷胱甘肽;非共价复合物;质谱滴定法;解离常数中图分类号 O 657163;O 64114 文献标识码 A 文章编号 0251-0790(2009)05-0869-07收稿日期:2009-01-15.基金项目:国家自然科学基金(批准号:25027004)资助.联系人简介:储艳秋,男,博士,副教授,主要从事有机分子和生物大分子质谱研究.E -ma i :l chuyq@f udan .edu .cn;丁传凡,男,博士,教授,主要从事生物质谱研究.E -ma i :l cf d i ng @fudan 在常见的氨基酸中,L 型苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸属于芳香性氨基酸.酪氨酸(Tyr)是生物体内多种分泌物的母体化合物,它与黑色素的形成有关[1].苯丙氨酸(Phe)是人体必需氨基酸,可用于氨基酸输液,抗癌药物、抗病毒药物的合成和开发以及婴幼儿的特殊奶粉及食品添加剂阿斯巴甜(Aspar -ta m e)的生产等方面,是重要的营养物质.色氨酸(Trp)是人体必需氨基酸之一,人体自身不能合成,所以必须从食物中汲取.它是重要的神经传导体5-羟色胺(Serotonin)的前体[2].L 型色氨酸对人体的生长发育及新陈代谢也起着重要的调节作用.众所周知,还原型谷胱甘肽(简称谷胱甘肽)在人体内具有活化氧化还原系统、激活巯基酶及解毒等重要的生理活性[3],并参与体内三羧酸循环和糖的代谢,促进体内产生高能量,起到辅酶作用.同时参与多种外源性及内源性有毒物质结合生成减毒物质.因此,了解谷胱甘肽在体内复杂的变化过程,对于解析谷胱甘肽的生物作用显得尤为重要.在临床上,谷胱甘肽可用于各种类型肝病的预防和治疗,对治疗病毒性肝炎和酒精性肝炎等具有较好疗效[4].除此之外,谷胱甘肽还能辅助治疗过敏性紫癜和肾性贫血等.值得一提的是,谷胱甘肽许多新的作用正在不断地被发现.例如,蛋白质(包括酶、转录因子等)可与谷胱甘肽共价结合后导致蛋白质谷胱甘肽化[5].此外,谷胱甘肽还参与细胞内负责二硫化物还原的谷氧还蛋白系统.据知,谷胱甘肽在人体血液中的浓度范围在1~3mm o l/L [6],谷胱甘肽与芳香性氨基酸相遇后可形成对生命活动有一定影响的非共价复合物,为更好地了解这些非共价复合物,建立快速、灵敏的检测方法意义重大.近些年来,质谱技术获得了广泛的应用[7~11].电喷雾质谱技术凭借其速度快、灵敏度高、样品用量低以及软电离[12]等特点,被成功地应用于定性测定蛋白质主体分子和抑制剂、辅基和核酸等客体分子的非共价作用.近年来,应用电喷雾质谱进行定量测定取得了一定的进展,Yu 等[13]用电喷雾质谱法测量了环糊精与黄酮类药物非共价复合物的结合常数,并采用傅里叶回旋共振质谱法(FTI CR-M S)测定了该复合物的键合位点.Frycak 等[14]用电喷雾质谱结合动态滴定法测量金鸡纳碱氨基甲酸酯与N -二硝基苯甲酰亮氨酸非共价复合物的解离常数.最近,L i 等[15]又成功地采用电喷雾质谱内标法定量测定了黄连中生物碱(如小檗碱、巴马汀等)的实际含量,并用毛细管电泳法进行了验证.但迄今为止,对于质谱滴定法测得的气相常数能否直接代表溶液中复合物的解离常数仍然存在一定的争论.例如,在去溶剂和离子化的过程中,某些样品离子除了产生特异性结合的配合物之外,还可能产生一些非特异性结合的配合物,导致溶液中各种质点的离子化效率产生差异以及分析试剂浓度较高等因素也会引起质谱信号的相互抑制.但人们还是不断地探索新方法和新技术,如Koner m ann 等[16]通过改变小分子配体与生物大分子键合前后的扩散系数以进行校正,然后再进行质谱测定,此外还有采用响应因子进行校正的方法[14]等.大量事实表明,只要反应体系和条件选择适当,质谱滴定法与传统的溶液分析方法相结合还是可以用来测量生物大分子和配体复合物解离常数的.如张寒琦等[17]成功地利用电喷雾质谱研究了氨基酸与人参皂苷Rb 3的非共价复合物,并测定了该复合物的解离常数.本实验室在采用电喷雾质谱法成功研究谷胱甘肽与D 型氨基酸非共价相互作用的基础上[18,19],采用上述技术探讨在生理p H 条件下谷胱甘肽与L 型芳香性氨基酸(包括苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸)产生的非共价复合物的二级或三级串级质谱,以紫外光谱进一步确认非共价复合物的生成,并采用质谱滴定法测定了复合物的解离常数.1 实验部分1.1 试剂与仪器谷胱甘肽(GSH,纯度99%)购于S ig m a 公司(美国).L 型芳香性氨基酸(简称为芳香性氨基酸),包括Phe ,Tyr 和Trp(纯度99%),购于上海朝瑞生物科技有限公司.甲醇(A.R .级)购于国药集团化学试剂有限公司.所有化学试剂均溶解于蒸馏水中,并制成110mm o l/L 储备液.PE -Sciex API Ó三重四极杆串级质谱仪(加拿大,m /z 2400),在喷雾器上施加4500V 电压,接口板电压500V.采用正离子检测模式.质谱仪的质量由聚丙二醇(PPG )校正.高纯氮气(纯度991999%)作为雾化气和帘气.雾化气和帘气的流速分别为014和016L /m i n .二级串级质谱M S 2实验所用碰撞气体为氩气(纯度99199%),采用子离子扫描进行检测.首先,由电喷雾引入的待检测离子在四级杆Q 0上进行聚焦,由Q 1选择需要碰撞的母离子.然后在Q 2碰撞池中引入一定密度的氩气,母离子和氩气在Q 2中进行碰撞,由Q 3检测碰撞解离产物.Sch e m e 1 Frag m en tati on of g l u tath i one三级串级质谱M S 3实验在接口区(Interface re -gion)解离产生感兴趣的初级碎片离子,其后步骤与MS 2相同.Q 0和碰撞池(Q 2)的电压差[n (R 2-R 0)]决定离子碰撞能量的大小(n 为电荷数),本实验中碰撞能量为30e V,碰撞气体密度(CGT)为8@1014m o lecu les/c m 2.为便于讨论,采用B ie m ann规则命名谷胱甘肽碎裂碎片[20],结果见Sche m e 1.Ag ilent 8453UV-V is 分光光度计(美国安捷伦),在室温下测定紫外光谱.混合前所有组分的浓度均为011mm ol/L ,反应物摩尔比为1B 1.溶液的p H 值由P H S-3C 精密pH 计(上海林达仪器厂)测得.1.2 实验过程将谷胱甘肽分别与Phe ,Tyr 及Trp 储备液按一定摩尔比在室温下混合,配制成一系列不同初始浓度的酸度为生理pH 6~8的混合溶液,然后放入20e 培养箱内,静置,温育1h ,使谷胱甘肽与L 型芳香性氨基酸生成非共价复合物,并使反应完全,取出后进行质谱和紫外光谱检测.在质谱检测前,先在待测样品中加入5%甲醇,以提高质谱检测的信号强度.870高等学校化学学报 V o.l 302 结果与讨论2.1 谷胱甘肽和Phe ,Tyr 及Trp 在气相中形成的非共价复合物的电喷雾质谱谷胱甘肽是由C -谷氨酰、半胱氨酰及甘氨酸组成的三肽(C -G lu -Cys -G ly),分子式为C 10H 17N 3O 6S ,分子量为307131质谱峰m /z 30812为谷胱甘肽离子峰[GS H +H ]+.图1显示了谷胱甘肽分别与芳香性氨基酸Phe ,Tyr 及Trp 形成的复合物的电喷雾质谱图.由图1可见,除了谷胱甘肽(m /z 30812)、Phe(m /z 16612)、Tyr(m /z 18212)和Trp(m /z 20512)的离子峰之外,还出现了非共价复合物的离子峰,质谱峰m /z 47315[图1(A )],m /z 48914[图1(B )]和m /z 51214[图1(C)]可以分别归属于[Phe-GS H +H ]+,[Tyr-GSH +H ]+和[Trp-GSH +H ]+.在图1(A )还出现了m /z 33113质谱峰,它可以归属于苯丙氨酸自身反应形成的二聚物[Phe-Phe+H ]+.从图1中的3个插图可以看到,生成的均为单电荷离子.由此可见,谷胱甘肽与芳香性氨基酸反应后,导致非共价复合物的生成.Fig .1 E SI m ass sp ec tra for co mp lexes of gl u tath ione w ith Phe ,Tyr or Trp[GSH ]is at a fi xed con cen trati on of 110@10-4mo l/L .(A)[Phe]=210@10-4m ol/L ;(B)[Tyr]=118@10-4m ol/L;(C )[T rp]=218@10-4m ol/L .Fig .2 M S 2spectra of non -covalent co mp lexes of gl u tath ione w ith Phe ,Tyr or Trp(A)Phenylal an i n e ;(B)t yrosi n e ;(C)tryp t ophan .为进一步确认谷胱甘肽能够与芳香性氨基酸形成非共价复合物,对[GSH +L+H ]+前驱体离子进行了碰撞诱导解离(C I D )实验(L 为Phe ,Ty r 或Trp).图2显示了将谷胱甘肽与Phe ,Tyr 或T r p 形成的复合物作为前体母离子的二级串级质谱M S 2实验结果.在图2(A)中,来自于前体离子(m /z 47315)的断裂碎片离子m /z 16612和30812可以分别归属于[Phe+H ]+和[GSH +H ]+的分子离子峰.除此之外还观察到m /z 为17712,23113和28915的碎片离子峰,它们可以分别归属于谷胱甘肽碎裂后产生的y 2,b 2和b 3碎片离子,其中b 3为谷胱甘肽C 端羧基脱去羟基后的产物.谷胱甘肽进一步碎裂并产生y 2,b 2和b 3碎片离子的现象也出现在图2(B)和(C )中.为了确认m /z 17712碎片离子峰为谷胱甘肽碎裂后产生的y 2,又进行了三级串级质谱M S 3实验,即将GS H-Phe 复合物源内解离产生的y 2离子再次在Q 2碰撞池内碰撞解离,结果在谱图中发现了y 1离子(m /z 为7612,谱图在此没有列出).同样,在图2(B )中,来自于前体离子(m /z 48914)的断裂碎片离子m /z 18213和30812可以分别归属于[Tyr+H ]+和[GS H +H ]+的分子离子峰.在图2(C )中,来自于前体离子(m /z 51314)的断裂碎片离子m /z 20512和30812可分别归属于[T r p+H ]+和[GSH +H ]+的分子离子峰.根据图2的实验结果可以看到,断裂后的碎片离子一般为[L+H ]+(L 为芳香性氨基酸)、[GSH +H ]+以及谷胱甘肽进一步碎裂产生的y 2,b 2和b 3碎片离子,即断裂位点容易发生在谷胱甘肽与芳香性氨基酸结合部位,这可能与非共价复合物中非共价键的键能相对较弱有关.与此同时,谷胱甘肽也容易再次发生进一步碎裂.图2串级质谱871N o .5储艳秋等:电喷雾质谱法研究谷胱甘肽与L 型芳香性氨基酸非共价复合物实验结果进一步确认了谷胱甘肽与芳香性氨基酸反应可以形成非共价复合物的结论.F ig .3 Q uan titive evaluation of interat i on s of g l u tath ionew ith tyrosine104c (Tyr)/(m ol #L -1):a .0;b .1;c .3; d. 5.Inset :C o mp arion of ESI -M S s i gnal intens ities of [M +H ]+ofTyr ,Tyr in the presence ofGSH at a m ol ar rati o of 1B 1or at a fi xed concentrati on of 3@10-4m ol/L .Inset presents the depend ence of the ES I -M S s i gnal i ntens ities f or [M +H ]+ofTyr ,Ph e and GSH on concen trations i n aqueou s sol u -ti on,respecti vel y .cp s represen t s coun t per second .文献[17]结果表明,由于氨基酸为两性物质,所以它们的离子化效率较低.液相中不同的质点在电喷雾的离子化过程会产生差异,分析试剂浓度过高或质子亲和势相差过大等因素均会引起测定信号的相互抑制作用,而离子化效率的差异和质谱信号的相互抑制作用是影响电喷雾质谱测量复合物解离常数准确度的两个主要因素[18].因此,定量地评估谷胱甘肽系列氨基酸的相互作用显得尤为重要.图3比较了Tyr 和Tyr 与GSH 的摩尔比为1B 1以及Ty r 与浓度为3@10-4m ol/L GS H 3种溶液的电喷雾质谱强度.由图3插图可见,Tyr 和Phe 质谱峰强度随着浓度的增加呈线性单调上升趋势,揭示它们的离子化效率较高;而Tyr 的斜率小于Phe ,表明它们的离子化效率略有差异.谷胱甘肽呈现饱和特征的结果表明它的离子化效率会随浓度的上升而略有下降.由图3可以看到,当Tyr 浓度在5@10-5~3@10-4m o l/L 范围内,加入谷胱甘肽后没有明显的信号抑制现象出现.然而,当Tyr 浓度高于3@10-4m ol/L 时,开始出现小的信号抑制现象.尽管如此,比较谷胱甘肽与Tyr 相同摩尔比时的信号下降程度可见,Tyr 在GSH 浓度固定为3@10-4m o l/L 时的质谱信号强度下降相对较少.2.2 质谱滴定法测定非共价复合物的解离常数由图3可见,采用质谱滴定法可测量谷胱甘肽和芳香性氨基酸配体形成的复合物的解离常数,两种反应物的初始浓度应选择在5@10-5~3100@10-4m o l/L 范围内,这样可避免严重的质谱信号相互抑制作用.此外,应选择离子化效率与谷胱甘肽接近的氨基酸研究体系,以免引入测量误差.由于电喷雾离子化的时间很短[21],对化学平衡不会产生明显影响[22].文献[23]中假设:(1)复合物从液相转移到气相的过程中不会发生分解反应;(2)溶液中各种质点的质谱峰强度正比于其液相中的平衡浓度;(3)液相中主体分子、配体分子和复合物具有相同的离子化效率.基于上述3个基本假设,即可推得主体分子和单一配体分子形成复合物的解离常数公式.在谷胱甘肽和芳香性氨基酸配体的体系中,只形成了单一配体的复合物,没有生成混合配体的复合物,自身聚合形成的低聚物的质谱峰强度也较弱,不会对计算结果产生明显影响,因此可将公式简化为K d1=(1-a 1)([L]0-[G ]0a 1)a 1(1)式中,K d 为解离常数,[G ]0和[L]0分别代表谷胱甘肽和配体芳香性氨基酸的初始浓度,a 1数值可通过GL +和G +质谱峰的强度计算得到.a 1=[GL][G ]0=I GLI G +I GL(2)式中,I GL 和I G 分别代表复合物GL 和谷胱甘肽G 质谱峰的强度,[GL]为复合物GL 的平衡浓度.通过系列质谱图中获得的各种质点的质谱峰的相对强度,可由式(2)计算出a 1,将a 1及两种反应物的系列初始浓度代入式(1),即可计算出谷胱甘肽与Phe ,Tyr 和Trp 复合物的解离常数K d 值,计算结果列于表1~表3.通过计算获得的Phe ,Ty r 及Trp 复合物的相对标准偏差(RSD )分别为317,515和411.由于本实验采用的是质谱静态滴定法,即配制一系列已知浓度的反应物混合溶液,然后用质谱872高等学校化学学报 V o.l 30法测定溶液离子化以后的各种质点的质谱强度来计算复合物的解离常数,所以要获得较好的精密度,首先必须选好待测反应物的浓度范围,从而采用质谱信号相对稳定的浓度范围进行测定;其次必须控制好测定时的温度、压力以及质谱仪器参数等条件.采用质谱动态滴定法[14]在线(On -li n e)连续进样,进一步改进实验方法,以避免因多次配制溶液而引入偶然误差.Table 1D issociati on constan t of co mp lex of gl u tath ione w ith Phe*104[G]0/(m ol #L -1)104[L]0/(m ol #L -1)I G I GL a 1K d1/(mm ol #L -1)110011002311315011320157021001100241231301120015512100015032102120106401540210001307512311010390153321000140821041201048015902150014095124180104801553Average 01556SD 0102RSD(%)317*I represents the rel ative i on i n tens i ty of differen t speci es ;SD :standard d evi ati on;RSD:rel ati ve standard dev i ation .T ab le 2 D iss oc i ation con stan t of co m p lex of glu tath i on e w ith Tyr*104[G]0/(m ol #L -1)104[L]0/(m ol #L -1)I G I GL a 1K d1/(mm ol #L -1)115001558512216010296116511501110721141201055111741150017770102180103841178115001666512216010384115011500188451021201046611651150019924111130105131168Average1167SD 01093RSD(%)515*I represents the rel ative i on i n tens i ty of differen t speci es ;SD :standard d evi ati on;RSD:rel ati ve standard dev i ation .T ab le 3 D issociation con stant of co m p l ex of glutath i on e w ith Trp*104[G]0/(m ol #L -1)104[L]0/(m ol #L -1)I G I GL a 1K d1/(mm ol #L -1)1100110048112180105511161210001805012212010421116221000160551011801031611632100014072111150102041172210001201001111101010811622100111070123190105271178Average 1166SD 01069RSD(%)411*I represents the rel ative i on i n tens i ty of differen t speci es ;SD :standard d evi ati on;RSD:rel ati ve standard dev i ation .通过比较可见,K d1(Tyr ,1167mm ol/L)>K d1(Trp ,1166mm o l/L)>K d 1(Phe ,01556mm o l/L),即Phe 与谷胱甘肽形成的复合物的键合强度比Tyr 或T r p 的复合物的要大.前文[18]曾经报道,氨基酸和细胞色素c 非共价结合的作用力主要为氢键,可以推测Phe 与谷胱甘肽非共价复合物较大的键合作用的原因可能同Phe 的苯基比Tyr 或T r p 具有更小的空间位阻、容易与谷胱甘肽接近并形成氢键有关.与文献[18]值比较可知,在相同条件下测得的谷胱甘肽和D 型Phe 形成的复合物的解离常数K d1(D -Phe ,1107mm ol/L)大于谷胱甘肽和相应的L 型氨基酸复合物的解离常数K d1(L -Phe ,01556mm o l/L).由此可见,谷胱甘肽和L 型Phe 形成的复合物的稳定性要大于谷胱甘肽与相应的D 型氨基酸.2.3 谷胱甘肽和Phe ,Tyr 及Trp 在溶液中形成的非共价复合物的紫外光谱紫外光谱(UV )作为一种传统的溶液分析测试方法,具有操作简便、分析快速等优点,可以作为一种辅助技术定性地确认非共价复合物在液相中的生成[24,25],比较谷胱甘肽和芳香性氨基酸Phe ,Ty r 及Trp 混合并反应前后吸收曲线的变化,并判断是否发生化学反应.在图4(A)和(B)的紫外光谱中可以873N o .5储艳秋等:电喷雾质谱法研究谷胱甘肽与L 型芳香性氨基酸非共价复合物观察到,在Tyr 和Trp 的紫外吸收曲线中,波长范围240~290n m 出现较强的吸收峰,可以推测该峰由芳香环的P y P *跃迁引起的;Tyr 和Trp 中分别含有具有n 电子杂原子的基团,如)OH 和)NH,在接近200nm 的位置出现吸收峰,该吸收峰应该是由n y R *跃迁引起的.在图4(A )紫外光谱中,谱线a 和b 分别表示谷胱甘肽和Phe 的吸收曲线,谱线c (虚线)为Phe 和谷胱甘肽刚混合时按吸收定律加和的计算值(用作对比),谱线d 为反应物混合后1h 的吸收曲线.从图4(A)中可以看到,在190~300nm 区域内,谷胱甘肽没有明显的吸收峰,Phe 的吸收峰在190nm 处,将谱线d 与谱线c 比较后可以看到,反应后混合物的吸收曲线发生了细微的变化,即最大吸收峰由190nm 偏移到192nm,移动了2nm,与此同时,吸收峰形状发生了细微的变化.这一现象说明了将Phe 和谷胱甘肽混合并反应后,紫外光谱不是反应物的简单叠加,而有新的物质生成,即进一步确认了在液相中两者反应后有GSH-Phe 复合物生成.Fig .4 UV s p ectroscop ies of G SH and m ixtures of G SH w ith Phe(A ),Tyr(B )or T rp (C)a .GS H;b .Ph e(A),Tyr(B ),T rp(C );c .m i xture ;d .comp lex .从图4(B)中可以看到,反应后混合物(谱线d )的紫外光谱也不是反应物GSH 和Tyr 的简单叠加(谱线c ),其最大吸收峰由194n m 红移到200nm,移动了6nm ,与此同时,吸收峰形状也发生了明显的变化,它证实了在液相中,Tyr 和谷胱甘肽反应后有复合物生成.类似地,在图4(C )中,由谷胱甘肽和Trp 混合后最大吸收峰由192nm 经移到195nm,移动了3nm ,同样地,它也证实了在液相中谷胱甘肽和Trp 反应后有复合物生成.参 考 文 献[1] Fer n stro m J .D .,Fer n stro m M.H..J .Nutrition[J],2007,137(6):1539s )1547s [2] Le F l och N .,S eve B..L ivest ock Science[J],2007,112(1/2):23)32[3] Geer C.B .,Stas ko N. A.,Rus I . A.,et a l ..B io m acro m ol ecu l es[J],2008,9(7):1876)1882[4] Z HANG Fan(张帆),W ANG X -i M ei (王喜梅),DENG Tong -M ei(邓同美).Ch i nese J .C li n i calH epat o l ogy(临床肝胆病杂志)[J],2006,(01):58)59[5] H uang Z .,P i nto J .T .,Deng H.,e t al ..B i oche m.Phar m aco.l [J],2008,75(11):2234)2244[6] Dai Z .Y.,Chu Y.Q.,W u B.,et a l ..Acta Phar m co.l S i n .[J],2008,29(6):759)771[7] HUANG Xi n (黄鑫),SONG Feng -Ru i (宋凤瑞),L I U Zh-iQ i ang(刘志强),et a l ..Act a Ch i m .S i n.(化学学报)[J],2008,66(9):1059)1066[8] YAN Cun -Yu(闫存玉),YU B i ao(俞飚),L I U Shu-Y i ng(刘淑莹),et a l ..Ch i n.J .Ana.l Che m.(分析化学)[J],2008,36(7):910)914[9]C hen H.W.,Zhang J .,Zhang X .,et al ..J .M ass Spectro m.[J],2007,42(8):1045)1056[10] H ou K .Y .,W ang J .D .,L iH.Y..Rapid Co mmun.M ass Spectrom.[J],2007,21(22):3554)3560[11] HU B in(胡斌),CHEN Lan-H ui(陈兰慧),HUAN Yan-Fu (郇延富),et a l ..Che m.J .C hinese Un ivers i ti es(高等学校化学学报)[J ],2008,29(5):912)915[12] LI U Yue(刘悦),L I U Zh-iQ i ang(刘志强),LI H u-iL i n(李慧琳),e t a l ..Ch e m.J .Ch i nes e U n i vers ities(高等学校化学学报)[J],2008,29(9):1727)1735[13] Yu Z .,Cu iM.,Yan C.Y.,et a l ..Rap i d Co mmun.M ass Spectro m.[J],2007,21:683)690[14] Frycak P .,Schug K..Ana.l Che m.[J],2007,79(14):5407)5413[15] LIW e,i SONG Feng -ru ,i LI U Zh -i q i ang ,e t al ..Che m.Res .Ch i n ese Un i versiti es [J],2008,24(2):162)166[16] C l ark S .M.,Koner m ann L ..Ana.l Che m.[J],2004,76(23):7077)7083[17] QU Chen-L i ng(渠琛玲),Z HANG H an -Q i (张寒琦),Z HANG Hu a -Rong(张华蓉),e t al ..Che m.J .Ch i neseU n i vers ities(高等学校化学学报)[J],2008,29(9):1721)1726874高等学校化学学报 V o.l 30[18] CHU Y an -Q i u(储艳秋),P AN T i ng -T i ng(潘婷婷),DA I Zhao -Yun(戴兆云),et a l ..Acta Phys .Ch i m .S i n .(物理化学学报)[J],2008,24(11):1981)1987[19] PAN T i ng -T i ng(潘婷婷),CHU Y an -Q i u (储艳秋),ZHO U M i ng -Fei(周鸣飞),et a l ..A cta Ch i m .S i n.(化学学报)[J],2008,66(22):2462)2468[20] Pai zs B.,Suhai S..M ass Spectro m.Rev .[J],2005,24(4):508)548[21] LI U L ,i Z HAO X iao -p i ng ,Z HU D -i f eng .,e t al ..Che m.Res .Ch i n ese Un i versiti es [J],2008,24(4):420)426[22] Z HANG H ua -Rong(张华蓉),Z HANG H an -Q i (张寒琦),W ANG Yu-Tang(王玉堂),e t a l ..Ch e m.J .Ch i nes e U nivers ities(高等学校化学学报)[J],2006,27(11):2061)2065[23] Zh ang H.R.,Chen G .,W ang L.,et a l ..In t .J .M ass Spectro m.[J],2006,252:1)10[24] BA I L-iFei(白立飞),ZHANG H a-iTao(张海涛),ZHANG H an -Q i (张寒琦),et a l ..Sp ectros c .Spect .Ana.l (光谱学与光谱分析)[J ],2007,27(11):126)130[25] L B Na(吕娜),Z H ENG Yong -Y ong(郑永勇),L I Jian -Q i (李建其),et a l ..Ch i nese J .An a.l Che m.(分析化学)[J],2009,37(2):199)204Studies on Non -covalent Co m plexes of G l utath i one w ithL -A ro m atic Am ino Acids by E lectrosprayIonization M ass Spectrom etryC HU Yan -Q iu 1*,DA I Zhao -Yun 2,JI A NG Gong -Yu 1,Z H ENG Song -Ba i 2,C H EN X i 2,D I N G Chuan -Fan1*(ser Che m istry Ins titute ,Che m istry D epart m ent ,Fudan University,Shanghai 200433,China ;2.H uadong H osp ital Affiliated w ith F udan Universit y,Shanghai 200040,China )Abst ract To explore the non -covalen t interacti o n bet w een reduced tripepti d e g lutath i o ne and L -aro m atic a m -i no ac i d s ,a sto ich i o m e try of reduced C -g lutathione and three L -aro m atic a m ino aci d s ,inc l u d i n g pheny lalan i n e ,tyr osine and tryptophan w ere m i x ed respectively ,and t h en i n cubated at roo m te m perat u re and physiolog ical p Hconditions for 1h to reach the equ ilibri u m.The e lectrospray i o nization m ass spectro m etry (ESI -M S)results i n dica te that g l u tathione and three L -aro m atic a m i n o ac i d s could for m non-cova lent co m plexes ,respectively .The pri m ary frag m ent ions of co m plexes obta i n ed fro m MS 2in a tande m m ass spectro m eter i n cluded aro m atic a m i n o ac i d ,g l u tathione as w ell as its y 2,b 2,wh ich confir m ed the resu lts of ES I -M S .M oreover ,in UV spec -troscop ies ,the d iscrepancy bet w een co m p lexes and reactants also con fir m ed t h e for m ation o f co m plexes i n aqueous so lution .To avo id disti n ct i o nization effic iency d iscrepancy and si g na l suppression i n ESI -M S m eas -ure m en ts ,the i n teracti o n bet w een g lutath i o ne and L -Tyrosi n e w as evaluated quantitatively ,w hich revea led tha tt h e reactant concentrati o n shou l d range fro m 5@10-5to 3100@10-4m o l/L.The dissoc iation constants o f t h ree co mp lexes w ere deter m i n ed usi n g m ass spectr o m etric titrati o n m ethod ,the ca lculation results revealed t h at t h e stab ilities of co m plexes for m ed by g l u tathione and three L -aro m atic a m ino ac i d s i n creased gradua lly acco r d i n g to the order o f tyrosi n e ,tryptophan and phenyla lanine .K eywords L -A ro m atic a m ino ac i d s ;G lutath i o ne ;Non -covalen t co m plexes ;M ass spectro m etric titration m ethod ;D issociation constants(Ed .:A,G )875N o .5储艳秋等:电喷雾质谱法研究谷胱甘肽与L 型芳香性氨基酸非共价复合物。
血清血管紧张素Ⅱ和一氧化氮水平与老年慢性心力衰竭病人认知功能障碍的相关性
血清血管紧张素Ⅱ和一氧化氮水平与老年慢性心力衰竭病人认知功能障碍的相关性程清;徐艳;陈国飞;邓心悦【期刊名称】《实用老年医学》【年(卷),期】2024(38)2【摘要】目的探讨血清血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和一氧化氮(NO)水平与老年CHF病人认知功能障碍的相关性,分析AngⅡ、NO对CHF病人认知功能障碍的预测价值。
方法选择2020—2022年我院心内科收治的86例老年CHF病人,根据MoCA评分分为认知功能障碍组(MoCA评分<26分)和认知功能正常组(MoCA评分≥26分)。
收集病人一般资料,检测血清AngⅡ、NO水平,采用Pearson相关系数描述血清AngⅡ、NO水平与MoCA评分的相关性,采用Logistic回归分析老年CHF病人发生认知功能障碍的影响因素,并采用ROC曲线分析血清AngⅡ、NO对老年CHF病人认知功能障碍的预测价值。
结果认知功能障碍组受教育年限>12年比例、LVEF、血清NO水平均低于认知功能正常组,血清AngⅡ水平高于认知功能正常组(P<0.01);Logistic回归分析结果显示,LVEF、NO是老年CHF病人发生认知功能障碍的保护因素,AngⅡ是危险因素;血清AngⅡ、NO对老年CHF病人的认知功能障碍具有预测价值,且二者联合应用的效能更优,灵敏度和特异度分别为82.69%和85.29%。
结论老年CHF病人血清AngⅡ水平升高、NO水平降低,且与认知功能障碍有关,AngⅡ、NO联合检测对老年CHF病人发生认知功能障碍具有较好的预测价值。
【总页数】5页(P132-135)【作者】程清;徐艳;陈国飞;邓心悦【作者单位】苏州市中西医结合医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R541.6【相关文献】1.老年慢性心力衰竭病人血清和肽素水平与炎症因子和心室重构的相关性2.老年腔隙性脑梗死病人尿液AD7c-NTP及血清C反应蛋白与血管性轻度认知功能障碍的相关性3.老年2型糖尿病伴阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征病人血浆NGAL及内皮素-1水平与认知功能障碍的相关性研究4.老年性认知功能障碍患者中医证候与认知水平及血清VitD3的相关性研究5.老年慢性心力衰竭患者血清8-羟基脱氧鸟苷和锰超氧化物歧化酶水平与认知功能障碍的相关性研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
鸭β-防御素-2基因的克隆测序与组织表达分析
Ａｂ ｔａ ｔ ｓ ｒ ｃ ：Ｄ ｕ ｋ— ｖ ｃ Ａ ＢＤ ２ ｇ ｎ ａ ｌ ｎｅ ｒ ｍ ｈｅ ｌｖ ｒ ｏ ｃ ｂ Ｔ— ｅ ｅ ｗ ｓ ｃ ｏ ｄ ｆ ｏ ｔ ｉ ｅ ｆ ｄｕ ｋ ｙ Ｒ ＰＣＲ ． Ｔ ｈ ｅ ｔ ｆ ａ ｐｌ ｅ ｅ ｌ ｎｇ ｈ ｏ ｍ ｉ ｄ ｆ
（ １．Ｃｏｌｅ ｅ ｏｆＢｉ ｏｇｙ，Ｆｏ ｈａ ｃ ｅ ｅ ａ ｄ Ｔ ｅ ｈｎｏ ｏ ｌｅ ｌ ｇ ｏｌ ｓ ｎ Ｓ ｉｎｃ ｎ ｃ ｌ ｇｙ Ｃｏ ｌｇｅ，Ｆｏｓ ａ ５２ ３１，Ｃｈｉ ｈ ｎ ８２ ｎａ；
２ ．Ｃ ｌ ｇ ｆＡｎ ｍａ ｃｅ ｃ ，Ｓ ｕ ｈ Ｃｈ ｎ ｒｃ ｌｕ ａ ｉｅ ｓｔ ，Ｇｕ ｎ ｚ ｏ １ ６ ２，Ｃｈ ｎ ） ｏ ｌ ｅｏ ｉ ｌ ｉｎ ｅ ｏ ｔ ｉ ａＡｇ ｉｕ ｔ ｒ ｌＵｎ ｖ ｒ ｉ ｅ Ｓ ｙ ａ ｇｈ ｕ５ ０ ４ ｉａ
பைடு நூலகம்
Ｋｅ ｒ ｓ Ｂｄ ｆ ｎ ｉ ｙｗｏ ｄ ：— ｅｅ ｓｎ；ｄ ｃ ｕ ｋ；ａ ｔ ｃ ｏ ｉｌ ｅ ｔｄ ｓ ｅ ｅｅ ｐ ｅ ｓｏ ｎ ｉ ｒ ｂ ａ ｐ ｉｅ ；ｇ ｎ ｘ ｒ ｓ ｉｎ ｍｉ ｐ
防御 素是 一类 古 老 的 内源 性抗 菌 多 肽 ， 泛存 广
ｐａ ｃ ｅ ｓ，ｐｒ ｅ ｒｃ ｕｓ ｏ ｓ ｈａ ｕｓ， ｇ ｚ ａ ｄ， ｔ ｇｕ ｎ ｒａ ｏｖ ｎｔ ｉｕｌ ， ｅ ｏｐ ｇ ｉｚ ｒ ｏｎ ｅ， ｓ ａ ｌ ｎｔ ｓ ｉ ｅ， ｏｖ ｒ ｍ ｌ ｉ ｅ ｔｎ ａ ｙ， ｓ ｎ ａ ｕｓ ｌ ｈｏ ｅ ｋｉ ｎｄ ｍ ｃｅ ｓ ｗ ｄ ｎｏ ｄ ｔ ｃ ａ ｅ ｌ ｖ ｌｏ ｅ ｅ ｔ ｂｌ ｅ ｅ ｆｄｕｃ — ｖ ｋ Ａ ＢＤ ２ ．
Ｃ ｉｅ ｅＪ ｕ ｎ ｌ ｆ ｔ ｒ ａ ｙＭｅ ｉ ｎ ｈｎ ｓ ｏ ｒ ａ ｏ ｅｉ ｒ ｄｃ ｅ Ｖｅ ｎ ｉ
气相色谱_质谱法同时测定动物尿样中莱克多巴胺和克伦特罗_百度(精)
收稿日期:2005206215;修回日期:2005211229基金项目:浙江省重点科技攻关项目(No.2005C 22029资助作者简介:应永飞(1977~,男(汉族,浙江仙居人,硕士,从事兽药残留分析的研究。
E 2mail :yyf1001@第27卷第2期2006年5月质谱学报Journal of Chinese Mass Spectrometry SocietyVol.27No.2May 2006气相色谱2质谱法同时测定动物尿样中莱克多巴胺和克伦特罗应永飞1,皮雄娥2,吴平谷3,陈慧华1,朱聪英1,陆春波1(1.浙江省畜产品质量安全检测中心,浙江杭州310020;2.浙江省农业科学院植物保护与微生物所,浙江杭州310021;3.浙江省疾病预防控制中心,浙江杭州310020摘要:建立了固相萃取2气相色谱2质谱法(SPE 2GC/MS 同时测定动物尿样中的莱克多巴胺和克伦特罗的方法。
试样中的药物经乙酸乙酯提取后,经SL H 固相萃取柱净化,氮吹至干,衍生化后进行气相色谱2质谱测定。
两种药物的检出限均为0.3μg/L ,定量限均为1.0μg/L ,线性范围为0.02~1.0μg/mL 。
加标浓度在4.0~20.0μg/L 范围内,莱克多巴胺加标回收率为78.6%~101.2%,批内相对标准偏差≤7.0%;克伦特罗加标回收率为92.3%~112.2%,批内相对标准偏差≤6.9%。
关键词:固相萃取2气相色谱2质谱法;莱克多巴胺;克伦特罗;残留量;动物尿样中图分类号:O657.63;R974.3文献标识码:A 文章编号:100422997(200602274205Simultaneous Determination of R actopamine and Clenbuterol R esiduesin Animal U rine with G as Chromatography 2Mass SpectrometryYIN G Y ong 2fei 1,PI Xiong 2e 2,WU Ping 2gu 3,CH EN Hui 2hua 1,ZHU Cong 2ying 1,L U Chun 2bo 1(1.A nimal Products Qualit y Testing Center of Zhej iang Province ,H angz hou 310020,China;2.I nstitute of Plant Protection and Microbiolog y ,Zhej iang A cademic of A g riculture S cience ,H angz hou 310021,China;3.Disease Prevent and Cont rol Center of Zhej iang Province ,H angz hou 310020,ChinaAbstract :A new solid p hase ext raction 2gas chromatograp hy 2mass spectrometry (SPE 2GC/MS met hod for simultaneous determination of ractopamine and clenbuterol in animal urine was reported.The drugs were ext racted wit h et hyl acetate f rom sample.The ext raction was evaporated at 40℃.After t he residue was dissolved in et hyl acetate ,it was p urified by passing t hrough SL H solid 2p hase ext raction (SPE cart ridges.The eluate was evaporated by nit rogen blow and derivatizated wit h BSTFA ,and t hen assayed by GC/MS.The limit s o f detection (LOD were 0.3μg/L ,and t he limit s of quantitation (LOQ were 1.0μg/L.The calibration curves were linear between 0.02μg/mL and 1.0μg/mL for ractopamine and clenbuterol.Recoveries of ractopamine andclenbuterol were 78.6%2101.2%and 92.3%2112.2%,and t he int ra 2relative standard deviation (n =5less t han 7.0%and 6.9%,re 2spectively ,at spiked levels of 4.0~20μg/L.K ey w ords:solid p hase ext ractio n2gas chromatograp hy2mass spect rometry(SPE2GC/MS; ractopamine;clenbuterol;residues;animal urine莱克多巴胺和克伦特罗属于β2兴奋剂,具有促进动物体内营养物质由脂肪组织向肌肉组织转移的作用。
家族性青少年高尿酸血症肾病一例并文献复习
家族性青少年高尿酸血症肾病一例并文献复习王倩;田梅【摘要】目的报道1例由尿调制素(UMOD)基因外显子3的杂合突变而导致家族性青少年高尿酸血症肾病(FJHN)的家系,以期引起更多学者对FJHN的关注和重视.方法回顾性分析1例FJHN先证者的临床特征、实验室检查及该家系其他成员相关的临床资料,并检测先证者及其父亲的UMOD编码基因变异情况.结果先证者的临床表现为年幼发病、显著性高尿酸血症、关节炎和痛风石,为FJHN典型的临床表现.家系调查显示家系中多人有高尿酸血症临床表现,其中1人死于该病,在先证者家庭中鉴定出在UMOD基因编码的第3外显子上第586碱基出现G/A嵌合子变异(c.586G>A),使氨基酸序列第196位天冬酰胺取代天冬氨酸(p.D196N),该突变在我国尚无报道.结论 FJHN可能与UMOD编码基因位第3外显子上第586碱基突变相关,对有显著高尿酸血症、痛风,尤其是高尿酸家族史的患儿,应考虑FJHN可能性,通过UMOD基因的检测,尽早确诊、避免误诊、漏诊.【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2019(030)002【总页数】4页(P238-241)【关键词】家族性青少年高尿酸血症肾病;高尿酸血症;尿调节素;儿童【作者】王倩;田梅【作者单位】遵义医学院附属医院肾病风湿科,贵州遵义 563099;遵义医学院附属医院肾病风湿科,贵州遵义 563099【正文语种】中文【中图分类】R725.7家族性青少年高尿酸血症肾病(familial juvenile hyperuricemic nephropathy，FJHN)是一种罕见的常染色体显性遗传疾病[1]，其特征为高尿酸血症、痛风性关节炎、间质性肾炎和慢性肾衰竭。
高尿酸血症是由于尿酸盐在近端小管中的运输障碍导致尿酸盐的分泌排泄减少。
慢性间质性肾炎通常在青少年时期出现，当肾功能不全进展时尿液浓缩功能受到影响[2]。
肾功能损害通常发生在15～40岁，10～20年内导致终末期肾病(end stage renal disease，ERSD)。