保健用品毒理学评价程序与检验方法——人体皮肤斑贴试验
一次性使用卫生用品毒理学试验方法
一次性使用卫生用品毒理学试验方法1 试验方法皮肤刺激试验、眼刺激试验、阴道黏膜刺激试验和皮肤变态反应试验方法按GB/T 38496 和《消毒技术规范》（2002年版）中相应的试验方法进行。
固体产品的样品制备方法按照E.2进行。
注1：用于皮肤刺激试验中的空白对照为：生理盐水和斑贴纸。
注2：在皮肤变态反应中，诱导处理和激发处理所用的剂量保持一致。
2 样品制备2.1 皮肤刺激试验和皮肤变态反应试验以横断方式剪一块斑贴大小（2.5 cm×2.5 cm）的产品。
干性产品，如尿布、妇女经期卫生用品，用生理盐水润湿后贴到皮肤上，再用斑贴纸覆盖。
湿性产品可以按要求裁剪合适的面积，直接贴到皮肤上，再用斑贴纸覆盖。
2.2 眼刺激试验2.2.1 干性产品以横断方式剪取足够重量的产品，先测定产品的“吸收容量”，即每克产品所吸收的浸提液总量；以同样方式剪取同样重量的产品，除产品的“吸收容量”外，再按1.0 g/10.0 mL的比例加入灭菌生理盐水进行浸提，密封于萃取容器中搅拌后置于37 ℃±1 ℃下24 h。
冷却到室温，搅拌后析取样液备检。
2.2.2 湿性产品在进行眼刺激试验的当天，挤出产品里的挤出液作为试样。
2.3 阴道黏膜刺激试验2.3.1 干性产品以横断方式剪取足够重量的产品，先测定产品的“吸收容量”，即每克产品所吸收的浸提液总量；以同样方式剪取同样重量的产品，除产品的“吸收容量”外，再按1.0 g/10.0 mL的比例加入灭菌生理盐水进行浸提，密封于萃取容器中搅拌后置于37 ℃±1 ℃下24 h。
冷却到室温，搅拌后析取样液备检。
2.3.2 湿性产品在进行阴道黏膜刺激试验的当天，挤出产品里的挤出液作为试样。
3 判定标准以GB/T 38496和《消毒技术规范》（2002年版）的相应部分作为试验结果判定原则。
斑贴实验操作流程
斑贴实验操作流程一、斑贴实验的准备1.1 材料准备斑贴试验可是个挺重要的事儿呢，那材料可得准备齐全喽。
首先得有斑试器，这就像是斑贴实验的小房子，能把测试的物质好好地装起来。
还有测试的物质，这就像一个个小演员，要等着登台表演呢。
凡士林也是必不可少的，它就像个小助手，能帮助把那些不太好贴的物质变得容易操作。
另外，剪刀、记号笔这些小工具也不能少，就像打仗的小兵，虽然不起眼，但缺了可不行。
1.2 患者准备咱得先跟患者唠唠嗑，把斑贴实验是咋回事儿给人家讲清楚。
就像给朋友介绍个新东西一样，得让患者心里有底。
患者的皮肤得是干净、干燥、没有破损的，要是皮肤破破烂烂的，那这实验可就没法好好做啦，就像在坑坑洼洼的地上盖房子，肯定不结实。
二、斑贴实验的操作过程2.1 斑试器的准备把斑试器拿出来，这时候得小心点儿，就像捧着个宝贝似的。
如果是多腔室的斑试器，要检查每个腔室是不是完好无损的，可不能有漏网之鱼。
要是有破损的，那测试物质可就会乱跑，这实验就乱套了，就像一群没头的苍蝇到处乱飞。
2.2 测试物质的放置把测试物质按照规定的量放到斑试器里，这得像个细心的工匠一样，多一点少一点都不行。
要是放多了，可能会对患者皮肤刺激太大；放少了呢，又可能检测不出来。
这就叫过犹不及啊。
放好之后，用凡士林把开口封好，就像给小房子盖个屋顶，让测试物质老老实实待在里面。
2.3 斑试器的粘贴把斑试器贴到患者皮肤上，要贴得稳稳当当的。
这就像给皮肤贴上一个小补丁，要贴得严丝合缝。
贴的时候要注意方向，不能歪歪扭扭的，就像种树得把树扶正了一样。
一般贴在患者的上背部或者前臂内侧，这些地方的皮肤比较适合做实验，就像选演员得选合适的角色一样。
三、斑贴实验后的注意事项3.1 患者告知跟患者再好好说说注意的事儿。
告诉患者这个斑贴器可不能乱动，就像站岗的士兵不能擅离职守一样。
不能沾水，要是沾了水，就像火上浇油，可能会影响实验结果。
也不能搔抓，一搔抓这皮肤就乱了，实验结果也就不准了，这就叫前功尽弃。
保健用品毒理学评价程序与检验方法——皮肤刺激性试验
保健用品毒理学评价程序和检验方法 第4部分：皮肤刺激性试验警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。
本标准并未指出所有可能的安全问题。
使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。
1 范围本标准规定了保健用品毒理学皮肤刺激性试验评价程序。
本标准适用于保健用品毒理学皮肤刺激性试验检验方法。
2 皮肤刺激性试验检验方法2.1 材料2.1.1 动物多种哺乳动物均可被选为实验动物，首选白色家兔。
应使用成年、健康、皮肤无损伤的动物，雌性和雄性均可，但雌性动物应是未孕和未曾产仔的。
实验动物至少要用4只。
实验动物应单笼饲养，试验前动物要在实验动物房环境中至少适应3d时间。
实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。
选用常规饲料，饮水不限制。
2.1.2 受试物液态受试物一般不需稀释，可直接使用原液，膏状受试物，可直接使用原膏霜。
若受试物为固体，应将其研磨成细粉状，并用水或其它无刺激性溶剂充分湿润，以保证受试物与皮肤有良好的接触。
使用其它溶剂，应考虑到该溶剂对受试动物皮肤刺激性的影响。
受试物为强酸或强碱（pH值≤2或≥11.5），可以不再进行皮肤刺激试验。
此外，若已知受试物有很强的经皮吸收毒性，经皮LD 50小于200 mg/kg BW或在急性经皮毒性试验中受试物剂量为5000 mg/kg BW 仍未出现皮肤刺激作用也无需进行急性皮肤刺激性试验，LD 50计算见附录B。
2.1.3 仪器2.1.3.1 体重秤,精确到0.1 Kg；2.1.3.2 放大镜。
2.2 试验方法2.2.1 皮肤急性刺激试验（一次皮肤涂抹试验）皮肤急性刺激试验步骤：a)试验前约24 h，将实验动物背部脊柱两侧毛剪掉，不可损伤表皮，去毛范围左、右各约3 cm×3 cm；b)取受试物约0.5 mL（g）直接涂在皮肤上，然后用二层纱布（2.5 cm×2.5 cm）和一层硫酸纸或类似物覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定。
09-化妆品安全技术规范-人体-谈益妹
美白化妆品纳入祛斑类化妆品管理！
在《化妆品卫生规范》(2007年版）基础上补充和完善人体试验相关内容，提高适应性和可操作性； 注重和化妆品相关管理办法和要求的一致性，不断满足化妆品监管在人体安全性和功效方面的需要。
坚持科学规范的原则，概念清晰，表述明确、依据科学； 坚持统筹兼顾的原则，优先考虑产品安全性评价，兼顾产品功效性评价； 坚持继承发展的原则，稳固提高化妆品人体安全性和功效检验水平；适应当前化妆品人体检验需要，符合未来发展 方向。
加样贴敷操作流程
图1 在斑试器上做好记号
图2 撕开斑试器
图3 半固体加样
图4 液体加样
图5 斑试器贴敷
二、人体皮肤斑贴试验（5）
反应程度
± + ++ +++
评分等级
0 1 2 3 4 阴性反应
皮肤反应
可疑反应，仅有微弱红斑 弱阳性反应（红斑反应） 红斑、浸润、水肿，可有丘疹 强阳性反应（疱疹反应） 红斑、浸润、水肿、丘疹，疱疹反应可超出受试区 极强阳性反应（融合性疱疹反应） 明显红斑、严重浸润、水肿、融合性疱疹；反应超出受试区
二、人体皮肤斑贴试验（6）
封闭斑贴试验主要修订内容
规定了合格斑试器面积（50mm2）和深度（约1mm ）
— 相对于老版方法中只规定用量来说更为科学。
去除了对试验物浓度的规定
— 产品使用说明是重要依据。
去除了结果判定
— 管理要求在技术规范中不体现。
二、人体皮肤斑贴试验（7）
方法概要（2）
人体皮肤重复性开放型涂抹试验
射最低剂量(J/m2) 或最短时间(秒)；
刺激物 刺激反应
急性刺激 累积性刺激 主观刺激（感觉）
皮肤斑贴变应原试验
皮肤斑贴变应原试验皮肤斑贴变应原试验是一种常用的诊断变态反应的方法。
它通过在皮肤上贴上含有不同变应原的贴片，观察皮肤的反应来判断患者是否对某种物质产生了过敏反应。
本文将从试验原理、适用范围、操作方法、结果解读等方面进行介绍。
一、试验原理皮肤斑贴变应原试验是一种间接诊断变态反应的方法。
在试验前，医生会选择一些常见的过敏原，如花粉、食物、药物等，将其制成含有变应原的贴片。
这些贴片会被贴在患者的皮肤上，然后观察皮肤的反应。
如果患者对某种变应原产生了过敏反应，会在皮肤上产生红斑、水肿、瘙痒等症状。
这些症状的发生是由于患者的免疫系统对变应原产生了过度反应，释放了大量的组织胺等物质，导致了皮肤的炎症反应。
二、适用范围皮肤斑贴变应原试验适用于各种类型的变态反应诊断，包括过敏性鼻炎、过敏性哮喘、过敏性皮炎等。
它可以检测出多种过敏原，如花粉、食物、药物、宠物毛发等。
但是，皮肤斑贴变应原试验并不适用于所有人。
对于那些已经出现过敏反应的患者，特别是严重的过敏反应患者，这种试验可能会引起严重的过敏反应，甚至危及生命。
因此，在进行试验前，医生需要对患者进行详细的询问和体格检查，以确定其是否适合进行试验。
三、操作方法皮肤斑贴变应原试验的操作方法相对简单。
以下是一般的操作步骤：1.选择变应原。
根据患者的病史和症状，选择相应的变应原。
2.清洁皮肤。
用酒精或其他消毒液清洁皮肤，以防止感染。
3.贴上贴片。
将含有变应原的贴片贴在皮肤上，通常是在前臂或背部。
4.等待反应。
等待15-30分钟，观察皮肤的反应。
5.观察反应。
观察皮肤上是否有红斑、水肿、瘙痒等症状。
6.解释结果。
根据皮肤的反应和患者的病史，解释试验结果。
四、结果解读皮肤斑贴变应原试验的结果通常分为三种：1.阳性反应。
皮肤上出现红斑、水肿、瘙痒等症状，表示患者对该变应原产生了过敏反应。
2.阴性反应。
皮肤上没有出现任何症状，表示患者对该变应原没有产生过敏反应。
3.假阳性反应。
皮肤上出现了症状，但并不是由于过敏反应引起的，而是由于其他原因，如皮肤划伤、感染等。
斑贴试验流程
斑贴试验流程一、斑贴试验前患者评估：1.糖皮质激素：系统用药应停药2周以上，外用停用1周以上2.抗组胺药：对本试验的影响尚有争议，多数学者依然建议停药3 d以上；3.免疫抑制剂：建议系统用药停药2周以上，外用药则停用1周以上；4.在皮炎急性期不宜作斑贴试验5.有速发型接触性反应，如，接触性荨麻疹，尤其是全身严重过敏反应(过敏症)的患者不能进行可疑变应原斑贴试验；二、操作步骤：1.先将变应原从注射器或小瓶内挤出，滴加变应原，量以能接触到皮肤又不溢出斑试器为度2.测试部位首选上背部，以上背部脊柱两侧部位最佳，也可以选上臂外侧。
3.将斑试器敷贴于受试者皮肤上，用标记笔作好标记。
4.敷贴48 h。
48 h后除去测试物，0．5 h后进行第1次判读。
在去除受试物后72～96 h进行第2次判读。
5.判读时必须注意鉴别刺激反应。
变态反应一般为可触及的(隆起性)红斑，重者可以有水疱或大疱，边界不清。
皮疹可以扩展至斑试器外，甚至沿淋巴管扩展呈细红线状，瘙痒明显。
皮疹在去除测试物以后仍然可能加重，然后逐渐消退，持续数天。
刺激性反应可以与变态反应表现完全相同。
特征性的反应包括：①表皮起皱，出现皱纹纸样外观；②干燥、脱屑；③孤立散在的丘疹；④色素性紫癜样改变；⑤边界非常清楚的红斑，比如使用方形斑试器时红斑呈边界清楚的方形，而过敏反应多呈圆形，可以扩展至斑试器外；⑥脓疱；⑦坏死或溃疡；⑧少见瘙痒，可有痛感及烧灼感；⑨皮疹在去除测试物后一般不会继续加重，至第4天多消退。
斑贴试验流程试验前患者评估（糖皮质激素、抗组胺药、免疫抑制剂、皮炎急性期不宜）↓滴加变应原，量以能接触到皮肤又不溢出斑试器为度↓部位首选上背部，以上背部脊柱两侧部位最佳，↓斑试器敷贴于皮肤上，作好标记。
↓敷贴48 h。
↓48 h后除去测试物，0．5 h后进行第1次判读。
↓在去除受试物后72～96 h进行第2次判读。
↓综合2次结果判断最后结果。
如果只能判读1次，可以让患者在敷贴48 h后自行去除测试物，24 h后就诊判读结果。
斑贴试验操作步骤
斑贴试验操作步骤
1. 准备受试物质：将可能引起过敏的受试物质，如化学物质、化妆品、金属等，配制成适当的浓度和剂型。
2. 清洁受试部位：在受试部位（通常是背部或前臂）清洁皮肤，去除油脂和污垢。
3. 贴上受试物质：将受试物质以适当的方式贴在受试部位，如使用铝制小室或斑试器，将受试物质放置在里面，然后贴在皮肤上。
4. 固定和保护斑贴：使用医用胶带或专用的斑贴固定装置，将斑贴固定在皮肤上，以防止受试物质移位或脱落。
5. 观察时间：根据受试物质的性质和试验要求，确定观察的时间，通常为24 小时或48 小时。
6. 观察和记录反应：在观察时间结束后，检查受试部位是否出现红斑、丘疹、水疱、瘙痒等过敏反应，并记录下来。
7. 结果解读：根据受试部位的反应情况，判断是否对受试物质过敏。
如果出现明显的过敏反应，可能表明对该物质过敏。
斑贴试验评分标准(纱布法)
准备 （45）
操作程序 （25）
结果观察 （25）
手法熟练 人文关怀 总分
斑贴试验评分标准（纱布法）
具体内容和评分细则
满分 得分 （分） （分）
核对姓名、性别、年龄
5
口述斑贴试验的适应症
4
口述斑贴试验的注意事项
8
跟患者沟通：介绍自己及将要进行的检查，取得合作，并向患者交代注意事项
5
带无菌手套
6
纱布的大小
5
操作部位的选择
7
将受试物置于纱布上
4
贴于受试部位
4
透明纸覆盖
4
固定边缘
4
每两个受试点之间距离（应大于 4 厘米）
4
设阴性对照
5
观察结果的时间（24～48 小时后）
5
结果判断：受试部位无反应为（-）
2
出现痒或轻度发红为（±）
2
出现单纯红斑、瘙痒为（+）
2
出现水肿性红斑、丘疹为（++）
2
出现显著红肿、伴丘疹或水疱为（+++）
2
解释：阳性反应说明患者对受试物过敏，但应排除原发性刺激或其他因素所致的假阳性反应 4
假阳性反应者将受试物除去后，皮肤表现很快消失，而真阳性反应除去受试物后 24～48 小 3
时内，皮肤表现往往可增强
阴性反应表示患者
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DB22/T 396.12—2017
保健用品毒理学评价程序与检验方法 第12部分：人体皮肤斑贴试
验
警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。
本标准并未指出所有可能得安全问题。
使用者有责任采取适当的安全和健康措施。
并保证符合国家有关法规规定的条件。
1 范围
本标准规定了保健用品毒理学人体皮肤斑贴试验评价程序。
本标准适用于保健用品毒理学人体皮肤斑贴试验检验方法。
2 人体皮肤斑贴试验目的
检测受试物引起人体皮肤不良反应的潜在可能性。
3 试验基本原则
3.1 选择合格的志愿者作为试验对象。
3.2 应用特制的斑试材料进行人体斑贴试验。
3.3 根据保健用品的不同性质，斑贴试验时可选用保健用品原物、或将其稀释成不同浓度作为受试物。
3.4 要求先完成动物多次皮肤刺激试验并出具书面证明， 然后方可安排人体斑贴试验。
3.5 受试者的选择
3.5.1 选择18～60岁符合试验要求的志愿者作为受试对象，人数不少于30例。
3.5.2 不能选择有下列情况者作为受试对象：
a)近一周适用抗组胺药或近一个月内使用免疫抑制剂者；
b)近两个月内受试部位应用任何抗炎药物者；
c)受试者患有炎症性皮肤病临床未愈者；
d)胰岛素依赖性糖尿病患者；
e)正在接受治疗的哮喘或其它慢性呼吸系统疾病患者；
f)在近6个月内接受抗癌化疗者；
g)免疫缺陷或自身免疫性疾病患者；
h)哺乳期或妊娠期妇女；
i)双侧乳房切除或双侧腋下淋巴结切除者；
j)在皮肤待试部位由于疤痕、色素、萎缩、鲜红斑痣或其它瑕疵而影响试验结果的判定者；
k)参加其它的临床研究者；
l)体质高度敏感者；
m)非志愿参加者或不能按试验要求完成规定内容者。
4 试验方法
1
DB22/T 396.12—2017
4.1 皮肤封闭性斑贴试验
4.1.1 选用合格斑试材料，将受试材料放入斑试器内，用量约为0.03 g（固体）或0.03 mL（液体，可滴加在斑试器所附的滤纸片上置于斑试器内）。
受试物为稀释后的保健用品时，对照孔为空白对照（不置任何物质），对照孔内使用该保健用品的稀释剂。
将加有受试物的斑试器用无刺激胶带贴敷于受试者的背部或前臂曲侧，用手掌轻压使之均匀的贴敷于皮肤上，持续24 h。
4.1.2 去除受试物斑试器后间隔30 min，待压痕消失后观察皮肤反应。
如结果为阴性，与斑贴试验后24 h和48 h分别再观察一次。
按表1皮肤反应分级标准记录反应结果。
表1 皮肤封闭型斑贴试验皮肤反应分级标准
反应强度 评分等级 皮肤反应
﹣ 0 阴性反应
± 1 可疑反应，仅有微弱红斑
﹢ 2 弱阳性反应(红斑反应)：红斑、浸润、水肿、可有丘疹
﹢﹢ 3 强阳性反应(疱疹反应)：红斑、浸润、水肿、丘疹、疱疹；反应可超出
受试区
﹢﹢﹢ 4 极强阳性反应(融合性疱疹反应)：明显红斑、严重浸润、水肿、融合性
疱疹；反应超出受试区
4.2 重复性开放型涂抹试验
4.2.1 以前臂屈侧作为受试部位，面积3 cm×3 cm ,受试部位应保持干燥，避免接触其他外用制剂。
4.2.2 将受试物每天2次均匀地涂抹或贴于受试部位，连续7天，同时观察皮肤反应，在此过程中如出现3分或以上的皮肤反应时，应根据具体情况决定是否继续试验。
4.2.3 皮肤反应按表2重复性开放涂抹试验皮肤反应判定标准进行观察，并记录结果。
表2 皮肤重复性开放涂抹试验皮肤反应判断标准表
反应强度 评分等级 皮肤反应临床表现
﹣ 0 阴性反应
± 1 微弱红斑、皮肤干燥、皱褶
﹢ 2 红斑、水肿、丘疹、风团、脱屑、裂隙
﹢﹢ 3 明显红斑、水肿、水疱
﹢﹢﹢ 4 重度红斑、水肿、大疱、糜烂、色素沉着或色素减退、痔疮样改变
4.3 结果评价
30例受试者中出现2级皮肤不良反应的人数多于2例（除臭产品斑贴试验2级皮肤不良反应的人数多于5例），或出现任何1例3级或3级以上皮肤不良反应时，判定受试物对人体有不良反应。
如人体斑贴试验表明受试物为轻度致敏原，可做出禁止生产和销售的评价。
皮肤斑贴致敏强度见表3。
2。