细胞因子溶解分装
融解生长因子配比方法

融解生长因子配比方法融解生长因子配比方法融解生长因子(Recombinant Growth Factors)是一类在生物医学领域中广泛应用的重要生物活性物质,能够促进细胞的增殖、分化和修复。
在临床和实验室研究中,正确的融解生长因子配比方法对于保证实验结果的准确性和可重复性至关重要。
本文将介绍一种常用的融解生长因子配比方法,以帮助读者正确地进行实验操作。
一、材料准备在进行融解生长因子配比之前,首先需要准备以下材料:1. 融解生长因子:根据实验需求选择合适的融解生长因子,确保其纯度和活性。
2. 无菌注射用水:用于稀释融解生长因子。
3. 无菌注射器和注射针头:用于准确地量取融解生长因子和无菌注射用水。
二、融解生长因子配比方法以下是一种常用的融解生长因子配比方法:1. 将融解生长因子的冻干粉末取出,并用无菌注射器量取所需的融解生长因子量。
注意,在操作过程中要保持无菌环境,避免外界污染。
2. 将融解生长因子注入无菌注射用水中。
注射用水的量应根据实验需求和融解生长因子的浓度来确定。
一般情况下,建议按照融解生长因子的说明书中推荐的浓度进行配比。
3. 轻轻摇晃或轻轻旋转混合液,使融解生长因子充分溶解在无菌注射用水中。
避免剧烈摇晃或搅拌,以免损害融解生长因子的活性。
4. 检查混合液的透明度和均匀性。
如果发现有悬浮物或不均匀的现象,应重新配制融解生长因子溶液。
5. 将配制好的融解生长因子溶液分装到无菌试管或其他适合的容器中,尽量避免反复冻融,以保持其活性。
三、注意事项在进行融解生长因子配比的过程中,需要注意以下事项:1. 严格遵守无菌操作规范,确保实验环境的洁净和无菌。
2. 根据实验需求和融解生长因子的浓度来确定配比比例,避免过量或不足。
3. 避免剧烈摇晃或搅拌融解生长因子溶液,以免损害其活性。
4. 配制好的融解生长因子溶液应尽快使用,避免长时间存放。
结论融解生长因子配比方法是进行生物医学实验中的重要步骤,正确的配比方法能够保证实验结果的准确性和可重复性。
细胞因子检测试剂盒的原理与应用

细胞因子检测试剂盒的原理与应用细胞因子是一类可溶性蛋白质分子,能够调节和调控细胞间的通讯,参与调节免疫反应和炎症反应等生理过程。
细胞因子在细胞生物学研究和临床试验中具有重要作用。
细胞因子检测试剂盒是一种常用的实验工具,用于检测和量化细胞因子的含量和活性。
下面将从原理和应用两个方面介绍细胞因子检测试剂盒。
一、细胞因子检测试剂盒的原理细胞因子检测试剂盒的原理主要分为几个步骤:细胞培养、处理样本、荧光标记以及检测。
首先,细胞培养是细胞因子检测试剂盒的基础,可以使用细胞培养技术获得大量的细胞。
不同的细胞因子需要不同的细胞系进行检测。
其次,在处理样本的过程中,需要对样本进行预处理,以提取细胞因子并去除杂质。
对于细胞培养上清液或组织样本,可以通过离心等操作去除细胞和细胞碎片。
对于血液样本,可以通过离心或其他方法去除红细胞和凝块。
然后,荧光标记是细胞因子检测试剂盒中非常重要的一步。
荧光标记可以使用特异性的抗体或荧光染料。
抗体可以与细胞因子发生特异性结合,并用荧光染料进行标记。
荧光标记后的细胞因子可用于检测和定量。
最后,检测是细胞因子检测试剂盒的最后一步。
常用的检测方法有酶联免疫吸附实验(ELISA)、流式细胞术以及生物成像等。
ELISA是一种将细胞因子与特异性抗体结合测定的方法,具有灵敏度高、特异性好等特点。
流式细胞术可用于分析单个细胞的细胞因子含量和产生细胞因子的细胞类型。
生物成像可以通过引入荧光染料或放射性示踪剂进行成像,实现对细胞因子的可视化定量。
二、细胞因子检测试剂盒的应用细胞因子检测试剂盒在许多生物领域有广泛的应用,包括免疫学、癌症研究、炎症反应、药物开发等。
在免疫学研究中,细胞因子检测试剂盒可用于定量分析和表征不同细胞因子的生物学功能。
通过测定细胞因子的含量和活性,可以了解免疫细胞之间的相互作用和调节机制。
同时,在疫苗研究和免疫治疗中,细胞因子检测试剂盒也起到了重要的作用。
通过定量细胞因子的表达水平和作用机制,可以评估和优化免疫治疗的效果。
重组细胞因子溶解稀释液套装说明书

Toll Free: 400 6721 600 (China Only) Website: 重组细胞因子溶解稀释液套装I. 产品信息目录号: PK002 规 格: 1 kit 保 存: 2 - 8℃ 效 期: 一年 II. 产品简介本细胞因子溶解稀释套装外观为无色澄清透明的液体,无明显异物,无菌,适用于细胞因子的溶解和稀释,使用方便,操作简单,可高效溶解并稳定保存相应的细胞因子。
请根据细胞因子说明书选择合适的溶解液和稀释液,并严格按照说明书要求进行溶解、稀释、分装和冻存。
III. 试剂盒组分本套装内包含溶解液和稀释液两个组分:1. 溶解液为下列产品之一,用于相应细胞因子的溶解。
2. 稀释液用于重溶细胞因子的稀释 (瓶标为10 ml ,实验时请以实际量取为准)。
IV.使用方法1. 使用前将套装中的试剂恢复至室温。
2. 细胞因子蛋白开盖前以10,000 - 12,000 rpm 离心30 - 60秒或3,000 rpm 离心5 - 10分钟,加入适量说明书指定的溶解液,严格按照说明书所述方法进行溶解,不可涡旋振荡。
3. 重溶后的细胞因子短期保存:2 - 8℃保存一周;长期保存:加入适量稀释液进行稀释,终浓度不低于10 μg/ml ,轻轻吹吸混匀,分装冻存于-20℃或-80℃。
目录号 产品名称规格PS0021 磷酸钠缓冲液 (Sodium Phosphate) 5 mM pH 7.4 1 ml PS0031 柠檬酸盐缓冲液 (Citric Acid) 10 mM pH 3.0 1 ml PS0041 醋酸溶液 (Acetic Acid) 100 mM 1 ml PS0051 Tris 缓冲液 (Tris) 5mM pH 7.61 ml PS0061 1×PBS 缓冲液 (Phosphate Buffer Solution, PBS) pH 7.2 1 ml PS0071 磷酸钠缓冲液 (Sodium Phosphate) 5 mM pH 7.2 1 ml PS0081 磷酸钠缓冲液 (Sodium Phosphate) 5 mM pH 7.6 1 ml PS0091 磷酸钠缓冲液 (Sodium Phosphate) 5 mM pH 7.8 1 ml PS0101 5 mM HCl (pH 3.0)1 ml PS0111 磷酸钠缓冲液 (Sodium Phosphate)10 mM pH8.0 1 ml PS0121磷酸钠缓冲液 (Sodium Phosphate)10 mM pH7.51 ml目录号 产品名称规格Toll Free: 400 6721 600 (China Only) Website: VI. 注意事项1.不同产品、甚至不同生产批次的同一产品,溶解方法可能有所不同。
细胞因子常识

重组细胞因子概述一、细胞因子的概念细胞因子(cytokine)是由机体多种细胞分泌的小分子蛋白质,通过结合细胞表面的相应受体发挥以调节免疫应答为主的生物学作用。
细胞因子具有非常广泛的生物学活性,包括促进靶细胞的增殖和分化,增强抗感染和细胞杀伤效应,促进或抑制其它细胞因子和膜表面分子的表达,促进炎症过程,影响细胞代谢等。
二、细胞因子的特征1、低分子量;一般为<60kD的多肽或糖蛋白。
多以单体形式存在,少数为二聚体,三聚体。
2、天然细胞因子由抗原、丝裂原或其他刺激物活化的细胞所分泌,通过旁分泌(paracrine)、自分泌(autocrine)或内分泌(endocrine)方式在局部发挥短暂作用。
3、一种细胞因子可由多种细胞产生,同一种细胞可产生多种细胞因子。
4、需通过与靶细胞表面相应受体结合后发挥其生物学效应。
5、具有高效性、多效性、叠性、拮抗性、协同性和网络性。
三、细胞因子的分类1、白细胞介素(interleukin,IL-s)最初是指由白细胞产生又在白细胞间发挥作用的细胞因子。
2、干扰素(interferon,IFN)最早发现的细胞因子,有干扰病毒感染和复制的能力。
分α、β和g三种类型。
3、肿瘤坏死因子超家族(tumor necrosis factor,TNF)1975年发现的一种能使肿瘤发生出血坏死的物质。
4、集落刺激因子(colony-stimulating factor,CSF)指能够刺激多能造血干细胞和不同造血祖细胞增殖分化,在半固体培养基中形成相应细胞集落的细胞因子。
包括G-CSF(粒细胞)、M-CSF(巨噬细胞)、GM-CSF(粒细胞、巨噬细胞)、Multi-CSF(多重)(IL-3)、红细胞生成素(EPO)、干细胞生长因子(SCF)、血小板生成素(TPO)等。
5、趋化因子(chemokine)主要功能是招募血液中的单核细胞、中性粒细胞、淋巴细胞等进入特定的淋巴器官和组织以及感染发生的部位。
白介素6(IL-6)细胞因子,真的很神奇

⽩介素6(IL-6)细胞因⼦,真的很神奇⽩介素6 ( IL-6) 是⼀种多效细胞因⼦,通过调节免疫和炎症反应在宿主防御中发挥重要作⽤。
IL-6主要由巨噬细胞、T 淋巴细胞、B淋巴细胞产⽣,在机体发⽣炎症反应或感染时,病毒、内毒素、肿瘤坏死因⼦等多种细胞因⼦可诱导机体产⽣IL-6。
IL-6⽣物学作⽤主要体现在诱导B细胞分化产⽣免疫球蛋⽩,促进T细胞增殖⽣长,增强⾎细胞的分化及其抗瘤效应,促进⾻髓造⾎⼲细胞增殖等。
IL-6是细胞因⼦⽹络中的重要成员,在急性炎症反应中处于中⼼地位,IL-6产⽣后诱导产⽣C反应蛋⽩(CRP)和降钙素原(PCT)⽣成,与炎症性疾病及感染程度直接相关。
IL-6能更快的诊断早期炎症及预警脓毒症的发⽣。
另外,IL-6半衰期要短于CRP和PCT,能更快的反应抗⽣素治疗的效果,更好的反应患者的预后。
同时,IL-6可以作为细胞因⼦风暴中疾病严重程度和预后指标的⽣物标志物,其表达优于TNF-α和IL-1。
⼤量的研究结果表明IL-6是⼀种细胞因⼦风暴的合适靶分⼦。
(IL-6在机体中的反应)如果是想将研究IL-6,Abbkine的IL-6细胞因⼦可以考虑:【IL6】重组⼈⽩介素6,PRP100120;【IL6】重组⼩⿏⽩介素6,PRP100371细胞因⼦储存建议:冻⼲粉形式的细胞因⼦⾮常稳定,在-20 ℃ 或-80 ℃ 条件下可保存数年。
冻⼲粉在使⽤前需进⾏溶解,然后以液体形式加到培养基中。
溶解后的细胞因⼦在4℃仅能短期保存 (约 1周)。
如想长期保存,需要先配制成稀释液(其中必须含有载体蛋⽩,如 0.1% BSA,5%HSA,或 10% FBS),然后分装冻存于-20℃或-80℃。
⼀定要避免反复冻融,因每次冻融均会引起蛋⽩的部分失活。
SDS-PAGE分析结果:。
细胞因子的生产流程_解释说明以及概述

细胞因子的生产流程解释说明以及概述1. 引言1.1 概述细胞因子是一类具有重要调节功能的蛋白质分子,它们在机体内起着介导细胞间相互通讯、调节免疫反应以及参与炎症过程等多种生物学过程的作用。
随着对细胞因子功能的深入研究和相关领域的发展,越来越多的科学家开始关注细胞因子的生产流程,并努力寻找更有效、高纯度的制备方法。
1.2 文章结构本文将从以下几个方面详细探讨细胞因子的生产流程:首先,我们将介绍什么是细胞因子及其分类,以便读者对其有一个基本的认识。
然后,我们将解释细胞因子的作用机制,以揭示其在机体内起到调节与激活免疫反应等方面的关键作用。
接下来,我们将详细说明细胞因子的生产过程,包括其生物合成路径、制备和纯化方法以及质量控制与评价标准。
最后,我们将概述细胞因子在医学上及生物技术和药物研发领域中的应用,并探讨未来发展趋势与挑战。
1.3 目的本文旨在向读者提供关于细胞因子生产流程的全面介绍与解释,帮助读者深入了解细胞因子的制备过程、质量控制以及其在医学和药物研发中的重要性。
同时,本文也将展望细胞因子研究的未来发展方向,为科学家们进一步推动该领域的突破提供参考。
2. 细胞因子的生产流程2.1 什么是细胞因子细胞因子是一类可以在细胞之间传递信号的蛋白质分子,它们在机体中起着调节、调解和传导免疫、炎症等多种生理过程的重要作用。
细胞因子能够调控免疫系统的功能以及各种不同类型的细胞的发育、增殖和分化。
2.2 细胞因子的分类根据其作用方式和效应对象,细胞因子可以被分为多个不同的类别,如干扰素(IFN)、白介素(IL)、肿瘤坏死因子(TNF)以及趋化因子等。
每种细胞因子都有其特定的结构和生物学功能,并参与到调节免疫反应、促进组织修复和抵抗感染等多个生理过程中。
2.3 细胞因子的作用机制细胞因子主要通过与其受体结合来发挥作用。
当一个特定类型的细胞需要接收某种信号时,这种指定类型的受体会与相应的细胞因子结合,并激活一系列信号传导途径。
细胞因子溶解方法

细胞因子溶解方法
PeproTech细胞因子中不含载体蛋白(Carrier Protein)或其他添加剂(如BSA、HAS或蔗糖等),并且通常以最少量的盐来进行冻干处理,因此微量的细胞因子在冻干过程中会沉积于管内,形成很薄或不可见的蛋白层。
所以我们建议在收到产品后,务必在开盖前先离心,使粘在管盖或管壁上的蛋白聚集于管底(此时能否见到白色沉淀均属正常现象)。
1.离心:高速离心 (10, 000 rpm) 20-30 秒,或低速离心 (2, 000 rpm) 5 分钟。
2.溶解(Reconstitution):用去离子水或其它缓冲液(根据说明书要求进行选择)溶解至说明书要求的浓度 (一般为 0.1-1.0 mg/mL,如10ug的产品,需用10uL-100uL的去离子水或缓冲液溶解)。
溶解时不可振荡,避免因化学键的断裂造成蛋白失活,可加入适当的溶剂轻摇并静置一段时间,待细胞因子完全溶解后使用。
溶剂的选择:
1)要求用去离子水溶解的产品,务必不可用盐溶液,避免过高的盐浓度造成蛋白不可逆的析出;
2) 要求用盐溶液溶解的产品,请依照说明书上的浓度,同样也是为了避免过高的盐浓度。
3.分装和贮存(Aliquot and Storage):蛋白溶解后可根据自己的实验需要进一步稀释成工作液,稀释可用RPMI 1640、DMEM或PBS等溶液,其中最好含有5-10%的FCS (小牛或胎牛血清)或0.5 %的BSA(牛血清白蛋白)来稳定蛋白。
工作液在4℃可保存1周,如需长期保存,则需分装冻存于-20℃ (注意:不可冻存于-80℃)。
分装时每管中工作液的体积最好是一次实验的用量,以实现每次实验用完一只工作液,避免反复冻融引起蛋白活性的降低。
组织内细胞因子提取_概述及解释说明

组织内细胞因子提取概述及解释说明1. 引言1.1 概述细胞因子是一类在生物体内发挥重要生理功能的蛋白质分子。
它们由多种不同类型的细胞合成并释放,常通过与特定受体结合以调控免疫反应、促进细胞增殖和分化、调节炎症反应等各种生物学过程。
然而,由于细胞因子在体内含量较低且易降解,为了深入研究和应用这些生物活性分子,我们需要运用有效的技术方法来从组织样本中提取并测量这些细胞因子。
1.2 文章结构本文将首先介绍细胞因子提取的原理,包括对细胞因子定义与功能的阐述以及常用的细胞因子提取方法概述和其在各个应用领域中的意义。
接着,我们将详述组织内细胞因子提取的技术过程,包括组织样本采集与处理、提取方法选择与优化以及测量及分析技术。
随后,我们将讨论组织内细胞因子提取过程中遇到的困难与挑战,包括样本污染和损伤问题、技术限制及改进方向以及数据解读与结果验证难题。
最后,我们将总结主要观点和发现,并分析研究的局限性和不确定性,展望未来研究方向和潜在应用价值。
1.3 目的本文旨在全面介绍组织内细胞因子提取的原理、方法和应用,并探讨其中存在的困难与挑战,为相关研究者提供指导和帮助。
同时,通过对该领域的深入了解,我们也希望为未来研究方向提出建议并展望其潜在应用价值。
2. 细胞因子提取的原理:2.1 细胞因子的定义与功能:细胞因子是一类由多种细胞合成和释放的蛋白质信号分子,它们在机体内发挥着调节免疫反应、细胞增殖和分化、炎症反应等重要生物学功能。
细胞因子可以根据其作用机制分为许多不同的类型,如生长因子、凋亡相关因子、细胞黏附分子等。
2.2 细胞因子提取方法概述:细胞因子的提取过程通常涉及到样本采集、组织处理和蛋白质分离纯化。
样本采集应注意使用无菌技术,并尽量避免污染和损伤,以保证得到可靠的结果。
组织处理主要包括细胞破碎(如超声波破碎或冻融法)和蛋白质溶解(如盐溶解或有机溶剂萃取)。
而蛋白质分离纯化则可选择电泳技术、色谱技术或亲和层析等方法。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
摘要:我们知道,PeproTech的所有细胞因子和蛋白均为冻干粉,这使得运输非常便捷,只要常温即可。
冻干粉在使用前需进行溶解,然后以液体形式加到培养体系或注射入动物体内。
溶解步骤非常关键,因溶解不好会导致细胞因子或蛋白的失活,这也是很多用户在实际使用中经常遇到的问题。
我们知道,PeproTech的所有细胞因子和蛋白均为冻干粉,这使得运输非常便捷,只要常温即可。
而且,细胞因子和蛋白冻干粉非常稳定,在-20℃或-80℃条件下可保存数年。
冻干粉在使用前需进行溶解,然后以液体形式加到培养体系或注射入动物体内。
溶解步骤非常关键,因溶解不好会导致细胞因子或蛋白的失活,这也是很多用户在实际使用中经常遇到的问题。
那么,应该如何进行正确的溶解呢?下面我们以Recombinant Human IL-4 (重组人IL-4,产品编号:200-04)的说明书为例,对细胞因子或蛋白的溶解方法进行详细的阐述。
拿到重组人IL-4的说明书后,您会发现有一段关于Reconstitution(重悬)的叙述,这段内容含有溶解相关的所有信息。
1. Centrifuge the vial prior to opening.第1步:开盖前离心试剂管PeproTech的细胞因子或蛋白冻干粉装盛在塑料管中,为无菌包装。
冻干粉在运输过程中可能会因颠簸而漂散并粘贴于管壁或管盖上,所以在打开塑料瓶盖前,需将冻干粉通过离心收集到管底,以便用很小体积的液体即可将冻干粉完全溶解。
有很多用户会问一个问题,即应该用多少转速、多长时间离心试剂管,才能达到良好的收集效果?答:有些小型高速离心机(多为进口品牌)的面板上有一个Spin键,按了此键后,离心机会自动快速上升到其最大速度(10000rpm或12000rpm),上升到最高点后速度即刻下降,直至停止旋转,整个过程大约30s。
这个Spin键足以很好的将细胞因子或蛋白收集到管底。
但有些实验室没有这样的高速离心机,只有最高转速为4000-4500rpm的离心机。
这种情况下,需3000-3500rpm离心5min,也能达到类似的效果。
2. Reconstitute in water to a concentration of 0.1-1.0 mg/ml. Do not vortex.第2步:用无菌水重悬至0.1-1.0 mg/ml,不可振荡。
这个步骤即为溶解步骤,非常重要。
1) 一定要用推荐的溶液重悬(或溶解)冻干粉用于溶解细胞因子或蛋白的溶液千差万别。
此例中的重组人IL-4需用水溶解,而重组人IL-2 (产品编号:200-02)则需用100mM Acetic Acid (醋酸)溶解,重组人TGF-beta1 (产品编号:100-21)需用10mMCitric Acid (柠檬酸),pH3.0溶解,重组人FGF-basic(产品编号:100-18B)需用5mMTris,pH7.6溶解,重组人FGF-10(产品编号:100-26)需用5mMSodium Phosphate(磷酸钠),pH7.4溶解,重组IL-13(产品编号:200-13)需用20mMMHCl溶解。
(注:即使同一重组细胞因子或蛋白,不同批次的溶解方法也可能有所不同,因此上面的叙述仅供参考。
具体应该如何溶解应以相应批次的官方说明书为准)。
经常有用户会问,为什么会有这么多种溶解方法?答:我们知道,蛋白的溶解性与很多因素有关,其中比较重要的是pH值和离子强度。
PeproTech的细胞因子或重组蛋白在出厂前均经严格测试,说明上所标明的溶解液是能够将该细胞因子或重组蛋白完全溶解的液体。
如果您所用的溶解液的pH值和离子强度与说明书中所标明的不符,很多时候会造成细胞因子或重组蛋白不能完全溶解或者根本无法溶解,这样所配得的细胞因子或重组蛋白必然活性不够或丧失。
有不少用户没注意说明书上的描述,而是根据习惯,直接用PBS或培养液(1640或DMEM等)等溶解细胞因子或蛋白的冻干粉。
这样做可以吗?答:有时可以,要看具体情况。
PeproTech的大多数细胞因子或蛋白冻干粉的溶解液不是PBS,此时千万不能用PBS或培养液直接来溶解,具体原因在上面已经叙述过。
而有部分细胞因子,如重组人KGF(产品编号:100-19)和重组人FGF-23(产品编号:100-52)等,说明书上的溶解液即为1x PBS,此时用PBS溶解完全没问题,那么用培养液溶解也是可以的,不过最好还是用先用PBS溶解,然后再用培养液稀释。
2) 一定要溶解到指定的浓度。
蛋白在一定的浓度范围内可以保持良好的稳定性,这个范围就是说明书上所标明的浓度范围,该例为0.1-1.0 mg/ml。
这个浓度范围对于不同的细胞因子或重组蛋白是不同的。
如重组人FGF-6(产品编号:100-30)为0.5-1.0mg/ml,而重组人Activin B(产品编号:120-15)则一定要是0.5mg/ml。
高于或低于该浓度范围会有什么问题呢?答:首先,细胞因子或蛋白会不稳定,即很容易出现活性下降的现象。
其次,高于这个浓度范围,可能会超过该蛋白的最大溶解浓度,即蛋白无法完全溶解。
再者,高于或低于该浓度范围,蛋白可能会出现聚集(aggregation),最终结果还是部分蛋白未溶解,导致蛋白活性的减弱。
3) 一定不能振荡(vortex)。
这里所说的振荡是指用涡旋仪进行快速振荡。
有用户会问,若想保证溶解液与冻干粉充分混匀,以实现细胞因子或重组蛋白的完全溶解,该怎么办呢?答:多数细胞因子或重组蛋白的冻干粉是非常容易溶解的,一般我们用移液枪的枪头轻吹几下,即可使细胞因子或重组蛋白完全溶解。
对于不易溶解的细胞因子或蛋白,PeproTech会在说明书中进行备注(Note)。
如在重组人IL-13(产品编号:200-13)的说明书中您会看到:Slow to dissolve (缓慢溶解),在重组人IL-11(产品编号:200-11)的说明中会看到:This solution is slow to dissolve.(该溶液溶解缓慢)。
这种情况下,您最好能将要溶解的细胞因子或重组蛋白放在水平摇床(shaker)上低速摇一段时间,促使细胞因子或重组蛋白完全溶解。
有些蛋白,如重组人IL-13 Variant (产品编号:200-13A)虽然难溶,但却不需用摇床来加速溶解。
其说明书上的备注为:Allow the reconstituted vial to sit at 4℃forat > 2 hours before use. (将重悬液在4℃静置2小时以上)3. This solution can be stored at 2-8℃for up to 1 week.第3步:该重悬液在2-8℃最长可保存1周。
用说明书上推荐的溶液将细胞因子或重组蛋白重悬到推荐的浓度后,细胞因子或重组蛋白可放置在2-8℃,即冰箱的冷藏室。
在这种条件下,细胞因子或重组蛋白的活性最长可保持1周。
这对一个周期为5-7天的实验,如DC(树突状细胞)的诱导成熟是足够的。
在此期间,只要每次从冰箱里吸取一定量的细胞因子或重组蛋白溶液加入到培养体系内即可。
其实,说明书上推荐的浓度对于一般的实验来讲是比较高的。
所以用户通常会将该溶液进一步稀释后再放在4℃保存,待1周内用完。
如进行稀释,必须遵照下面第4步的方法,即需用含载体蛋白的溶液进行稀释,否则稀释后的细胞因子或重组蛋白很容易会粘附在管壁或瓶壁上,使得溶液中的细胞因子或重组蛋白的浓度下降,细胞因子或重组蛋白的总活性则大为减弱。
4. For extended storage, it is recommended to further dilute in a buffer containing a carrier protein (example 0.1% BSA) and store in working aliquots at -20℃to -80℃.第4步:如要长期保存,则需用含载体蛋白(如0.1% BSA,或10% FBS,或5% HSA)的溶液进一步稀释,然后分装冻存于-20℃至-80℃。
如果一个实验周期长于一周,或配制的细胞因子或重组蛋白一次用不完,我们就需对细胞因子或重组蛋白进行长期保存。
方法是:将已重悬的细胞因子或蛋白用含载体蛋白,如0.1% BSA(牛血清白蛋白),10% FBS(胎牛血清),5% HSA(人血清白蛋白)的溶液将重悬液进一步稀释,然后分装冻存于-20℃至-80℃,即常规冰箱的冷冻室或超低温冰箱中。
经常有人会在细胞因子或重组蛋白冻干粉用推荐的溶液重悬后直接分装冻存于-20℃至-80℃,这样可以吗?答:不行。
我们知道,塑料管壁对多数蛋白均有很好的吸附作用,也就是说溶液中的蛋白很容易粘附在管壁。
粘附后,蛋白是很难与管壁分离的。
做过ELISA 实验的人都知道,ELISA的包被抗体(Capture antibody)就是通过这种粘附作用包被到酶标板上的。
载体蛋白,如1% BSA,10% FBS (胎牛血清)和5% HSA等的主要作用是预先封闭塑料管壁上的蛋白结合位点,使细胞因子或重组蛋白不会粘附于管壁。
如果在细胞因子或重组蛋白冻干粉用推荐的溶液重悬后不用含载体蛋白的溶液进一步稀释,而直接分装冻存,则溶液中的大部分细胞因子或重组蛋白均会粘附到管壁上,导致溶液中实际溶解的细胞因子或重组蛋白的浓度大为降低,最终表现为细胞因子或重组蛋白活性的下降。
因此,在分装冻存前,一定要用含载体蛋白的溶液将重悬液进一步稀释。
稀释后的细胞因子或重组蛋白可为任意浓度,因大量的载体蛋白可以保证低浓度细胞因子或重组蛋白仍然维持较高的稳定性。
那么,含载体蛋白的溶液指的是什么溶液呢?水可以吗?答:水不可。
该溶液通常是指pH近中性,有一定缓冲能力的缓冲液,如PBS,培养液(RPMI1640, DMEM等)等。
还有一个经常被问及的问题,即在做无血清培养或动物的体内实验时,细胞因子中不能含有BSA,FBS或HSA等动物或人的蛋白,要想长期保存细胞因子或重组蛋白该怎么办呢?答:一种方法是订购PeproTech的小包装(size A)细胞因子或重组蛋白,每次使用一只,用后即废弃。
如觉得该方法过于浪费,则可用海藻糖(Trehalose)作为载体,用含海藻糖的溶液来稀释已重悬的细胞因子或重组蛋白,然后分装冻存。
总之,为保证细胞因子或重组蛋白冻干份在重悬后仍能保持良好的生物活性,必须按照说明书中Reconstitution的方法严格操作。
蛋白有价,实验无价,愿大家珍惜每次实验机会,严谨认真,每次均能得到预期的实验结果!。