生化检验项目校准课件
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生化检验(肝功)PPT课件
ALT <42U/L(37℃) (酶速率法) AST/ALT 1.15左右
.
9
.
10
.
11
谷丙转氨酶(ALT)
检测原理 ALT+L-丙氨酸+α-酮戊二酸
丙酮酸+L-谷氨酸
丙酮酸+NADH
L-乳酸+NAD+
LDH
在340nm处检测NADH的吸收峰来推算 血清中ALT的浓度
.
12
谷草转氨酶（AST）
并伴有高脂血症
.
15
3、肝硬化
取决于肝细胞坏死和肝纤维化程度
肝硬化病变累及线粒体时，多数AST升高 程度可超过ALT（肝细胞中，AST80%存在于线粒体中）
4、原发性肝癌
ALT可轻度升高或正常，提示可能并发 肝坏死，预后严重
5、其他疾病
AST升高如急性心肌梗死、右心
功能不全、肌营养不良、溃疡性结
.
25
附注：
应空腹采血，避免脂血引起反应液浑浊， 轻度溶血对本法无影响，但是明显溶血可 使测定结果偏低。血液标本和标准液应避 免阳光直照，防止胆红素的光氧化。胆红 素对光的敏感度与温度有关，血标本应避 光置冰箱保存。标本保存冰箱可稳定3天， -70℃暗处保存可稳定3个月。
.
26
总蛋白（TP）测定
检测原理 AST +天门冬氨酸 + α-酮戊二酸
草酰乙酸+ L-谷氨酸 草酰乙酸+NADH MDH L-苹果酸+ NAD+
在340nm处检测NADH的吸收峰来推算 血清中AST的浓度
.
13
临床意义
1、急性病毒性肝炎 ALT、AST均升高， 急性肝炎早期，AST/ALT<1 重症肝炎临终期会出现“酶胆分离”
.
9
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10
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11
谷丙转氨酶(ALT)
检测原理 ALT+L-丙氨酸+α-酮戊二酸
丙酮酸+L-谷氨酸
丙酮酸+NADH
L-乳酸+NAD+
LDH
在340nm处检测NADH的吸收峰来推算 血清中ALT的浓度
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12
谷草转氨酶（AST）
并伴有高脂血症
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15
3、肝硬化
取决于肝细胞坏死和肝纤维化程度
肝硬化病变累及线粒体时，多数AST升高 程度可超过ALT（肝细胞中，AST80%存在于线粒体中）
4、原发性肝癌
ALT可轻度升高或正常，提示可能并发 肝坏死，预后严重
5、其他疾病
AST升高如急性心肌梗死、右心
功能不全、肌营养不良、溃疡性结
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25
附注：
应空腹采血，避免脂血引起反应液浑浊， 轻度溶血对本法无影响，但是明显溶血可 使测定结果偏低。血液标本和标准液应避 免阳光直照，防止胆红素的光氧化。胆红 素对光的敏感度与温度有关，血标本应避 光置冰箱保存。标本保存冰箱可稳定3天， -70℃暗处保存可稳定3个月。
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26
总蛋白（TP）测定
检测原理 AST +天门冬氨酸 + α-酮戊二酸
草酰乙酸+ L-谷氨酸 草酰乙酸+NADH MDH L-苹果酸+ NAD+
在340nm处检测NADH的吸收峰来推算 血清中AST的浓度
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13
临床意义
1、急性病毒性肝炎 ALT、AST均升高， 急性肝炎早期，AST/ALT<1 重症肝炎临终期会出现“酶胆分离”
演示文稿生化检验项目校准
logit-log4p对数函数法中的一种，适用于浓度升 高而吸光度表现为收束的工作曲线。
样条函数法（spline）：是将每一标准液测定的 吸光度连接起来（点对点），形成一个完整曲线 ，即为曲线拟合。该曲线拟合优于折线法校准。
•logit-logXp与样条函数法
•抛物线型(左下图)，则多考虑用logic方法拟合。 •曲线类型不确定时，或校准曲线类型如图12-37所示 的S型非线性校准类型，则多考虑Splain方法拟合。
K因数法适用的分析方法有一点终点法，两点 终点法，两点速率法，多点速率法。
线性校准（Linear）：其反应为线性（直线） ，一般只需一个校准品进行校准。
非线性法：又称非直线性校准法 非线性法包 括logit-log法、指数函数法、样条函数法等 方法 Logit-log3p对数函数法中的一种，适用于浓 度升高而吸光度表现为收束的工作曲线。P表 示参数之意，由3个参数（S1Abs、k、a）参与 计算。S1Abs表示试剂空白，K表示校准所得斜 率，a表示近似常数。
案例分析
一、现象： 某品牌HCY试剂（仪器：雅培 C8000），校准无法通过
，出现“校准失败”的报警。 试剂参数为：Primary wavelength：340nm；
Secondary wavelength：700nm； Main read time：31-33； Blank read time：26-28； Sample volume：10ul； R1 reagent volume：185ul； R2 reagent volume：50ul； Calibration method：Spline； 校准品个数设置：3；
（优选）生检验项目校准
校准：在规定条件下，为确定测量仪器(或 测量系统)所指示的量值，或实物量具(或参考 物质)所代表的值，与对应的由标准所复现的量 值之间关系的一组操作。
生化检测原理 ppt课件
原因： 如果是新试剂，检查试剂复溶及混匀情况 检查样品针和试剂针. 样品或试剂上有气泡 光源灯或比色杯老化 混匀不佳
PPT课件
23
Sensitivity limit(灵敏度限制)
该数值标识出空白和 c.f.a.s之间的单位浓度吸光度变化 差异的最大值和最小值 .
在终点法的生化项目校准中，最小吸光度变化是必须检 测的标准 Sen:
在非单色光的条件下， 由于待测物质在各个波段下 吸光系数 K 的不同，造成相 关曲线也出现不同程度的偏 离。 实际上，理论上的单色 光是不存在的，我们所做的 只能是让入射光的光谱带宽 尽可能的小，要尽可能的靠 近单色光。
PPT课件
5
为什么仅适用一定范围内？
Lambert-Beer Law在有解 离、缔合、生成络合物或溶剂 化等会对比尔定律产生偏离。 解离是偏离朗伯-比尔定律 的主要化学因素，当溶液浓度 （大于0.01mmol/L）改变， 解离程度也会发生变化，吸光 度与浓度的比例关系便发生变 化，导致偏离朗伯-比尔定律。
常见报警类型
Duplicate Limit Sensitivity Limit Calibration Limit Standard Limit Standard Absorbance Standard Error
潜在原因 加样不准 (样本、试剂)，搅拌 (P)，反应杯光 源老旧，环境， 电压 校准品、水点污染，试剂，校准品单位更改 未更改数值 cfas和水空白，加样不准，系统水，光源灯
PPT课件
3
Lambert-Beer Law的适用范围：
(1) 入射光为平行单色光且垂直照射.
(2) 吸光物质为均匀非散射体系.
(3) 吸光质点之间无相互作用. (4) 辐射与物质之间的作用仅限于光吸收,无荧光和光化学现象发生. (5) 待测物在一定溶度范围之内.
PPT课件
23
Sensitivity limit(灵敏度限制)
该数值标识出空白和 c.f.a.s之间的单位浓度吸光度变化 差异的最大值和最小值 .
在终点法的生化项目校准中，最小吸光度变化是必须检 测的标准 Sen:
在非单色光的条件下， 由于待测物质在各个波段下 吸光系数 K 的不同，造成相 关曲线也出现不同程度的偏 离。 实际上，理论上的单色 光是不存在的，我们所做的 只能是让入射光的光谱带宽 尽可能的小，要尽可能的靠 近单色光。
PPT课件
5
为什么仅适用一定范围内？
Lambert-Beer Law在有解 离、缔合、生成络合物或溶剂 化等会对比尔定律产生偏离。 解离是偏离朗伯-比尔定律 的主要化学因素，当溶液浓度 （大于0.01mmol/L）改变， 解离程度也会发生变化，吸光 度与浓度的比例关系便发生变 化，导致偏离朗伯-比尔定律。
常见报警类型
Duplicate Limit Sensitivity Limit Calibration Limit Standard Limit Standard Absorbance Standard Error
潜在原因 加样不准 (样本、试剂)，搅拌 (P)，反应杯光 源老旧，环境， 电压 校准品、水点污染，试剂，校准品单位更改 未更改数值 cfas和水空白，加样不准，系统水，光源灯
PPT课件
3
Lambert-Beer Law的适用范围：
(1) 入射光为平行单色光且垂直照射.
(2) 吸光物质为均匀非散射体系.
(3) 吸光质点之间无相互作用. (4) 辐射与物质之间的作用仅限于光吸收,无荧光和光化学现象发生. (5) 待测物在一定溶度范围之内.
生化检验质控方法之大全PPT课件
生化检验质控方法之 大全
2021
1
定义：
质量控制（quality control，QC）是利 用现代科学管理的方法和技术检测分析过程 中的误差，控制与分析有关的各个环节，确 保实验结果的准确可靠。也称为实验室质量 保证。
2021
2
专业发展
1947年Sundeman首先调查发现不同实验室对同一份标本的
目前中国尚未确立各项目的总允许误差，可 参考美国（表４-１）和欧洲（表４-２）．
2021
23
最佳变异和常规变异的设定
最佳变异(optimal conditions variance OCV)表示实 验室在最佳条件下测定项目所能达到的最好精密 度水平。 常规变异(routine conditions variance RCV)表示实 验室在常规条件下测定项目所能达到的精密度水 平。 RCV<2OCV 或 RCV 接 近 OCV 时 ， 可 接 受 ； RCV>2OCV时，不可接受．二者是反映实验室工 作水平的基础指标，也是开展室内质控工作的基 础工作。
2．建立标准化操作规程
标准化操作规程（standard operational procedure，SOP）包括仪器使用及维护的操 作规程，试剂、质控品、标准品等使用的操 作规程和每个检验项目的操作规程等。
2021
14
3．仪器的检定与校准
对本实验室的相关仪器如分光光度计、
量具、自动生化分析仪以及其它测定仪器等
④瓶间CV%酶类应小于2%，其它应小于1% 。
⑤冻干品复溶后稳定，2～8℃时不少于24小时，－20℃时不 少于20天；某些不稳定成分（如BIL，ALP等）在复溶后4小时 的变异应小于2%
⑥在实验室的有效期应在一年以上。Leabharlann ⑦合理的成本。2021
2021
1
定义：
质量控制（quality control，QC）是利 用现代科学管理的方法和技术检测分析过程 中的误差，控制与分析有关的各个环节，确 保实验结果的准确可靠。也称为实验室质量 保证。
2021
2
专业发展
1947年Sundeman首先调查发现不同实验室对同一份标本的
目前中国尚未确立各项目的总允许误差，可 参考美国（表４-１）和欧洲（表４-２）．
2021
23
最佳变异和常规变异的设定
最佳变异(optimal conditions variance OCV)表示实 验室在最佳条件下测定项目所能达到的最好精密 度水平。 常规变异(routine conditions variance RCV)表示实 验室在常规条件下测定项目所能达到的精密度水 平。 RCV<2OCV 或 RCV 接 近 OCV 时 ， 可 接 受 ； RCV>2OCV时，不可接受．二者是反映实验室工 作水平的基础指标，也是开展室内质控工作的基 础工作。
2．建立标准化操作规程
标准化操作规程（standard operational procedure，SOP）包括仪器使用及维护的操 作规程，试剂、质控品、标准品等使用的操 作规程和每个检验项目的操作规程等。
2021
14
3．仪器的检定与校准
对本实验室的相关仪器如分光光度计、
量具、自动生化分析仪以及其它测定仪器等
④瓶间CV%酶类应小于2%，其它应小于1% 。
⑤冻干品复溶后稳定，2～8℃时不少于24小时，－20℃时不 少于20天；某些不稳定成分（如BIL，ALP等）在复溶后4小时 的变异应小于2%
⑥在实验室的有效期应在一年以上。Leabharlann ⑦合理的成本。2021
医学生化临床检验精品PPT课件
清(白)蛋白（A） 溴甲酚绿法 40-55 g/l
球蛋白（G） G=STP-A 20-30 g/l
原理：在PH8.6的碱性环境中， 清蛋白带负电荷，向阳极泳动， 球蛋白带正电荷，但因等电点和 相对分子量的差异，泳动速度不 一而得以分离从阳极依次……..
血 清 蛋 白 质
血 清 蛋 白 电 泳
白/球比值 (A/G) 1.5-2.5:1
血清总胆红素（STB）
应用J-G方法，使用茶碱和甲醇作为溶
剂，以保证血清中结合胆红素与非结
合胆红素完全被溶解，并与重氮盐试
剂起快速反应，即为STB。
参考值
新生儿 0～1天 34～103μmol/L
可溶性结合胆红素
1～2天 103～171μmol/L 不溶性非结合胆红素
CB
3～5天 68 ～137μmol/L
升高程度判断黄疸类型
STB ↑UCB ↑ ↑溶血性黄疸 STB ↑CB ↑ ↑胆汁淤积性黄疸 STB ↑UCB ↑ CB ↑ 肝细胞性黄疸
判断有无黄疸、黄疸程度（STBμmol/L）
隐形黄疸 轻度黄疸 中度黄疸 重度黄疸
17.1-34.2 34.2-171 172-342 >342
① ③ 胆红素
临床意义
急性肝炎，GGT中度升高， 慢性肝炎、肝硬化的非活动 期时，酶活性正常，若GGT 持续升高，提示病情恶化。
非病毒非性肝病 如酒精性肝炎、药物性肝炎、脂肪肝和肝癌等，转氨酶轻度上 升或正常，ALT/AST<1;酒精性肝病时AST可显著升高,ALT几乎 接近正常.
14
ALT、AST的临床意义
血清氨基转移酶测定（3）
肝硬化 转氨酶活性取决于肝细胞坏死程度，终末期转氨酶正常或 降低
球蛋白（G） G=STP-A 20-30 g/l
原理：在PH8.6的碱性环境中， 清蛋白带负电荷，向阳极泳动， 球蛋白带正电荷，但因等电点和 相对分子量的差异，泳动速度不 一而得以分离从阳极依次……..
血 清 蛋 白 质
血 清 蛋 白 电 泳
白/球比值 (A/G) 1.5-2.5:1
血清总胆红素（STB）
应用J-G方法，使用茶碱和甲醇作为溶
剂，以保证血清中结合胆红素与非结
合胆红素完全被溶解，并与重氮盐试
剂起快速反应，即为STB。
参考值
新生儿 0～1天 34～103μmol/L
可溶性结合胆红素
1～2天 103～171μmol/L 不溶性非结合胆红素
CB
3～5天 68 ～137μmol/L
升高程度判断黄疸类型
STB ↑UCB ↑ ↑溶血性黄疸 STB ↑CB ↑ ↑胆汁淤积性黄疸 STB ↑UCB ↑ CB ↑ 肝细胞性黄疸
判断有无黄疸、黄疸程度（STBμmol/L）
隐形黄疸 轻度黄疸 中度黄疸 重度黄疸
17.1-34.2 34.2-171 172-342 >342
① ③ 胆红素
临床意义
急性肝炎，GGT中度升高， 慢性肝炎、肝硬化的非活动 期时，酶活性正常，若GGT 持续升高，提示病情恶化。
非病毒非性肝病 如酒精性肝炎、药物性肝炎、脂肪肝和肝癌等，转氨酶轻度上 升或正常，ALT/AST<1;酒精性肝病时AST可显著升高,ALT几乎 接近正常.
14
ALT、AST的临床意义
血清氨基转移酶测定（3）
肝硬化 转氨酶活性取决于肝细胞坏死程度，终末期转氨酶正常或 降低
生化检验项目校准
冰冻产品的处理步骤：从-70℃或-20℃冰箱中取出 样本，置室温（18-25）℃下平衡，使之完全融化 ，温和混匀。 冻干产品的复溶步骤： 从冰箱中取出样本，置室 温（18-25）℃下平衡，并放置在水平桌面上，轻 拍小瓶，以确保所有物质已沉淀在该小瓶底部，小 心拔开胶塞，采用已校准的移液管沿瓶壁缓慢精确 加入规定体积的去离子水，压胶塞到原位后置室温 下使之完全溶解，温和混匀。 应按厂家提供说明书操作。
LUZHOU PEOPLE’S HOSPITAL
校准后的验证
•校准后用校准品当样本进行测试，看其值与定值 之间的差异 •测定室内质控，看结果是否在控。 •参加室间质评或返测已知浓度的室间质评样本。
LUZHOU PEOPLE’S HOSPITAL
•记录每次校准结果，与之前的校正结果进行比较。
LUZHOU PEOPLE’S HOSPITAL
生化检验项目校准
泸州市人民医院
LUZHOU PEOPLE’S HOSPITAL
校准：在规定条件下，为确定测量仪器(或 测量系统)所指示的量值，或实物量具(或参考 物质)所代表的值，与对应的由标准所复现的量 值之间关系的一组操作。
LUZHOU PEOPLE’S HOSPITAL
仪器的性能验证：
• • • • • • • • • 零点漂移 波长准确度及重复性 杂散光 吸光度正确度 吸光度重复性 吸光度线性误差 交叉污染率 温度正确度 比色杯间差距
LUZHOU PEOPLE’S HOSPITAL
三、处理： 1. 分别对10umol/L、33umol/L的校准品进行对倍 稀释，得到5umol/L、16.5umol/L浓度的校准； 2. 把参数中校准品个数修改为：5； 3. 浓度设置修改为0、5、10、16.5、33umol/L。 4. 仍采用Spline定标模式重新进行校准，后校准 顺利通过，结果如下：
生物化学检验ppt课件
酶类CK-MB,α-AMY等。
底物/代谢产物类：包括TG，TC，HDL-C，LDL-C，UA， UREA，Cr，Glu，TP，Alb，T-Bil，D-Bil，NH4+,CO2 等。
无机离子类：包括Ca，P，Mg，Cl 等。
认识到了贫困户贫困的根本原因，才 能开始 对症下 药，然 后药到 病除。 近年来 国家对 扶贫工 作高度 重视， 已经展 开了“ 精准扶 贫”项 目
吸收曲线
波长从200nm-400nm 的电磁波，称为紫外光，波长从400nm-760nm 的电磁波，称为可见光。以波长(λ)为横坐标，以吸光度为纵坐标而绘 制出的一条曲线称为吸收曲线，在一段波长范围内，有最大吸收波长 λmax 和最小吸收波长λmin，在最大吸收波长处测定可获得最大的测 定灵敏度。
认识到了贫困户贫困的根本原因，才 能开始 对症下 药，然 后药到 病除。 近年来 国家对 扶贫工 作高度 重视， 已经展 开了“ 精准扶 贫”项 目
二、连续监测法
连续监测法属于动态法检测的一种，适用于酶活性测 定和代谢物检测，多有酶的参与。该法是通过适当的 仪器，连续测定酶促反应过程中某一反应产物或底物 的浓度随时间变化的情况。原理是：在酶反应的最适 条件下，用物理、化学或酶促反应的分析方法，在反 应速度恒定期（零级反应期）来连续观察和记录一定 时间内底物或产物量的变化，以单位时间酶反应初速 度计算出酶活力大小代谢物的浓度。计算方法有：1） 绝对法：酶活力（U/L）=△A×（反应液体积/样品体 积）×（1000/消光系数）；2）相对法：酶活力 （U/L）=〔 △A （测定）/ △A （标准） 〕标准物的 活力或浓度。
两点终点法
两点终点法也称因定时间法，它可以用一种试剂或两 种试剂。这种方法是近年来，可加双试剂的生化分析 仪问世后，才被广泛应用。优点是可以消除样品、试 剂的颜色、浊度，以及一些干扰物对测定的干扰。原 理是：加入样品→试剂1 →读取A1 →试剂2 →读取 A2，其中要读取两次吸光度值，第一次相当于读出样 品空白的值，加入试剂2至第二次读数才是实际呈色 反应，因此A=A1-A2。比浊法也是一种终点法，不过 是一种浊度测定，而不是比色测定。比浊法可分为化 学比浊法与免疫比浊法，免疫比浊法又分为透射比浊 法和散射比浊法。免疫比浊法目前主要用于血清特种 蛋白的测定，如载脂蛋白(apoAI,apoB 等)、补体类(C3、
底物/代谢产物类：包括TG，TC，HDL-C，LDL-C，UA， UREA，Cr，Glu，TP，Alb，T-Bil，D-Bil，NH4+,CO2 等。
无机离子类：包括Ca，P，Mg，Cl 等。
认识到了贫困户贫困的根本原因，才 能开始 对症下 药，然 后药到 病除。 近年来 国家对 扶贫工 作高度 重视， 已经展 开了“ 精准扶 贫”项 目
吸收曲线
波长从200nm-400nm 的电磁波，称为紫外光，波长从400nm-760nm 的电磁波，称为可见光。以波长(λ)为横坐标，以吸光度为纵坐标而绘 制出的一条曲线称为吸收曲线，在一段波长范围内，有最大吸收波长 λmax 和最小吸收波长λmin，在最大吸收波长处测定可获得最大的测 定灵敏度。
认识到了贫困户贫困的根本原因，才 能开始 对症下 药，然 后药到 病除。 近年来 国家对 扶贫工 作高度 重视， 已经展 开了“ 精准扶 贫”项 目
二、连续监测法
连续监测法属于动态法检测的一种，适用于酶活性测 定和代谢物检测，多有酶的参与。该法是通过适当的 仪器，连续测定酶促反应过程中某一反应产物或底物 的浓度随时间变化的情况。原理是：在酶反应的最适 条件下，用物理、化学或酶促反应的分析方法，在反 应速度恒定期（零级反应期）来连续观察和记录一定 时间内底物或产物量的变化，以单位时间酶反应初速 度计算出酶活力大小代谢物的浓度。计算方法有：1） 绝对法：酶活力（U/L）=△A×（反应液体积/样品体 积）×（1000/消光系数）；2）相对法：酶活力 （U/L）=〔 △A （测定）/ △A （标准） 〕标准物的 活力或浓度。
两点终点法
两点终点法也称因定时间法，它可以用一种试剂或两 种试剂。这种方法是近年来，可加双试剂的生化分析 仪问世后，才被广泛应用。优点是可以消除样品、试 剂的颜色、浊度，以及一些干扰物对测定的干扰。原 理是：加入样品→试剂1 →读取A1 →试剂2 →读取 A2，其中要读取两次吸光度值，第一次相当于读出样 品空白的值，加入试剂2至第二次读数才是实际呈色 反应，因此A=A1-A2。比浊法也是一种终点法，不过 是一种浊度测定，而不是比色测定。比浊法可分为化 学比浊法与免疫比浊法，免疫比浊法又分为透射比浊 法和散射比浊法。免疫比浊法目前主要用于血清特种 蛋白的测定，如载脂蛋白(apoAI,apoB 等)、补体类(C3、
生化检验实验室基本知识PPT医学课件ppt学习课件
防止溶血的办法：？
因为受细储胞存仍条然件活影着，响仍的进项行目代谢活动，消耗
能量，并产生代谢产物，影响血清成分变化
原则：采血后，2h内尽快将血清与细胞分 离，并检测完毕。为什么
受放置时间影响最大的项目有：
3h增:G高LU：、TCPO、2ALB、CHO、K+、Na+、AST、 8h：AGLLPU、、GCGOT2、TP、K+、AST 24降h:低GL：U、GLCUO、2、TBTIPL、KC+L-、、AASLTT、ALB、TBIL、 CHO、Na+、CL-、ALT、ALP、GGT
2.饮食因素： 下降：Alb、铁、钾、总胆
3.药物因素： 4.溶血因素： 5.储存因素：
受饮食影响的项目
项目：GLU、TG、ALP、血酯、丙酮酸、乳 酸、BUN、UA、转氨酶等
原则：空腹6-12h后采血
受药物影响的项目
药物影响检验结果途径： 1.药物本身对检验方法的影响 2.药物代谢产物对检验方法的影响 3.药物对代谢器官功能的影响 原则：检验受某种药物影响的项目之前3天，
类型：基因芯片、蛋白质芯片和芯片实验室 应用：临床疾病诊断、基因测序、药物筛选
（六）生物芯片技术
操作要点 1.芯片制备：玻片、硅片、聚乙烯板等。用小
牛血清蛋白修饰玻片。表面点上已知序列或 结构的基因或蛋白质 2.样品制备：用生物素或酶标记样品中的待测 基因或蛋白 3.生物分子反应：最适温度、pH、缓冲液 4.芯片信号检测：
1.用于细胞器、病毒的分离
1.制备型
超速离心机 2.用于生物大分子的分子量、沉 2.分离型
降系数、纯度等检测
（四）层析技术
定义：利用不同物质理化性质的差异而建立 起来的技术，由固定相和流动相组成
因为受细储胞存仍条然件活影着，响仍的进项行目代谢活动，消耗
能量，并产生代谢产物，影响血清成分变化
原则：采血后，2h内尽快将血清与细胞分 离，并检测完毕。为什么
受放置时间影响最大的项目有：
3h增:G高LU：、TCPO、2ALB、CHO、K+、Na+、AST、 8h：AGLLPU、、GCGOT2、TP、K+、AST 24降h:低GL：U、GLCUO、2、TBTIPL、KC+L-、、AASLTT、ALB、TBIL、 CHO、Na+、CL-、ALT、ALP、GGT
2.饮食因素： 下降：Alb、铁、钾、总胆
3.药物因素： 4.溶血因素： 5.储存因素：
受饮食影响的项目
项目：GLU、TG、ALP、血酯、丙酮酸、乳 酸、BUN、UA、转氨酶等
原则：空腹6-12h后采血
受药物影响的项目
药物影响检验结果途径： 1.药物本身对检验方法的影响 2.药物代谢产物对检验方法的影响 3.药物对代谢器官功能的影响 原则：检验受某种药物影响的项目之前3天，
类型：基因芯片、蛋白质芯片和芯片实验室 应用：临床疾病诊断、基因测序、药物筛选
（六）生物芯片技术
操作要点 1.芯片制备：玻片、硅片、聚乙烯板等。用小
牛血清蛋白修饰玻片。表面点上已知序列或 结构的基因或蛋白质 2.样品制备：用生物素或酶标记样品中的待测 基因或蛋白 3.生物分子反应：最适温度、pH、缓冲液 4.芯片信号检测：
1.用于细胞器、病毒的分离
1.制备型
超速离心机 2.用于生物大分子的分子量、沉 2.分离型
降系数、纯度等检测
（四）层析技术
定义：利用不同物质理化性质的差异而建立 起来的技术，由固定相和流动相组成
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学习交流PPT
19
5.不同的仪器，在做非线性校准时所要求的校准品 个数是不同的。
例如： ① 日立、奥林巴斯等仪器，要求至少带三个浓度的
校准品即可进行非线性拟合； ② 贝克曼、东芝等仪器，则要求至少带四个浓度的
校准品才进行非线性拟合。 五、总结：
我们在进行新项目实验前，除了选择正确的校 准模式外，还要根据该仪器的性能特点，选择符 合要求的校准品个数，以保证实验的顺利进行。
最好为人血清基质，减少基质效应 仪器、试剂、校准品的配套性 如有可能校准品应溯源到参考方法或参考物质 要有明确的不确定度
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冰冻产品的处理步骤：从-70℃或-20℃冰箱中取出 样本，置室温（18-25）℃下平衡，使之完全融化， 温和混匀。
冻干产品的复溶步骤： 从冰箱中取出样本，置室 温（18-25）℃下平衡，并放置在水平桌面上，轻 拍小瓶，以确保所有物质已沉淀在该小瓶底部，小 心拔开胶塞，采用已校准的移液管沿瓶壁缓慢精确 加入规定体积的去离子水，压胶塞到原位后置室温 下使之完全溶解，温和混匀。
Secondary wavelength：700nm； Main read time：31-33； Blank read time：26-28； Sample volume：10ul； R1 reagent volume：185ul； R2 reagent volume：50ul； Calibration method：Spline； 校准品个数设置：3；
顺利通过，结果如下：
Cal Factor 吸光度
0 umol/L 5 umol/L 10 umol/L
-87.2
-213.5
16.5 umol/L -279.6
33 umol/L -365.3
-0.0032 -0.0195 -0.0366 -0.0558 -0.0744
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5、之后校准显示通过，质控在控，证明校准成功
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三、处理： 1. 分别对10umol/L、33umol/L的校准品进行对倍
稀释，得到5umol/L、16.5umol/L浓度的校准； 2. 把参数中校准品个数修改为：5； 3. 浓度设置修改为0、5、10、16.5、33umol/L。 4. 仍采用Spline定标模式重新进行校准，后校准
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线性校准（Linear）：其反应为线性（直线）， 一般只需一个校准品进行校准。
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非线性法：又称非直线性校准法 非线性法包括 logit-log法、指数函数法、样条函数法等方 法 Logit-log3p对数函数法中的一种，适用于浓 度升高而吸光度表现为收束的工作曲线。P表示 参数之意，由3个参数（S1Abs、k、a）参与计 算。S1Abs表示试剂空白，K表示校准所得斜率， a表示近似常数。
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logit-log4p对数函数法中的一种，适用于浓度升 高而吸光度表现为收束的工作曲线。
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样条函数法（spline）：是将每一标准液测定的 吸光度连接起来（点对点），形成一个完整曲线， 即为曲线拟合。该曲线拟合优于折线法校准。
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•logit-logXp与样条函数法
四、分析： 1. 全自动生化分析仪的校准模式设置中均有线性或非
线性的选择。当我们对其进行设置时，会根据试剂 盒的反应原理选择合适的校准模式。 2. 通常情况下，常规的生化项目我们会选择线性模式 校准，而免疫比浊项目我们会选择非线性模式校准。 3. 若选择线性校准，往往我们只需带一个校准品进行 两点校准即可。 4. 若选择非线性校准时，我们会带多个浓度校准品进 行多点校准。
检测项目校准
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校准目的是准确度的传递
一级标准品
决定性方法
参考方法
溯
二级标准品
校
源
厂家方法
准
校准品
常规分析
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项目校准主要涉及内容
• 校准方法的选择 • 校准品的选择及准备 • 校准频率的选择 • 校准后的验证 • 问题讨论
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校准方法的选择
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生化检验项目校准
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校准：在规定条件下，为确定测量仪器(或 测量系统)所指示的量值，或实物量具(或参考 物质)所代表的值，与对应的由标准所复现的量 值之间关系的一组操作。
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仪器的性能验证：
• 零点漂移 • 波长准确度及重复性 • 杂散光 • 吸光度正确度 • 吸光度重复性 • 吸光度线性误差 • 交叉污染率 • 温度正确度 • 比色杯间差距
•抛物线型(左下图)，则多考虑用logic方法拟合。 •曲线类型不确定时，或校准曲线类型如图12-37所示 的S型非线性校准类型，则多考虑Splain方法拟合。
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校准品的选择及准备
校准品：含有已知量的欲测物，用以校准该测定 方法的数值，它与该方法、试剂、仪器是相关联 的。校准品的作用是为了减少或消除仪器、试剂 等造成的系统性误差。
应按厂家提供说明书操作。
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校准品浓度水平及个数选择 • 校准至少包含你需要报告结果的内容/范围。 • 校准范围也定义为分析方法的工作范围。 • 个数要与仪器要求相匹配
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案例分析
一、现象： 某品牌HCY试剂（仪器：雅培 C8000），校准无法通过，
出现“校准失败”的报警。 试剂参数为：Primary wavelength：340nm；
浓度分别设置为：0、10、33umol/L。
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二、了解情况： 查看校准结果，发现其每个浓度的吸光度实
际在该仪器上已做出测定，分别为：0：-0.0027 10：-0.0344 33：-0.0738，但参与最终结果 计算的Cal Factor（校准因数）却显示为0，说 明该仪器并未通过所测定的吸光度进行曲线拟合， 故出现“校准失败”报警。
K因子法（+ -）： 理论k值：根据理论摩尔消光系数来计算。通常试 剂生产厂家给出的k值都属于。 实测K值：是根据仪器实测的摩尔消光系数来设置K 值 校准k值：是根据仪器当前的实际状态，试剂的稳 定性等通过校准品校准后得到的K值。
K因数法适用的分析方法有Байду номын сангаас点终点法，两点 终点法，两点速率法，多点速率法。