多肽与蛋白质的提取与分离
多肽的分离纯化方法
多肽的分离纯化方法一、引言多肽是由氨基酸组成的生物大分子，其具有广泛的生物学功能和应用场景。
多肽的研究需要对其进行分离纯化，以获取高纯度的多肽样品。
本文将介绍多肽的分离纯化方法。
二、多肽的提取1. 细胞裂解法：将细胞裂解后，通过离心等方法去除细胞碎片和脂质等杂质，得到含有目标多肽的上清液。
2. 酸性水解法：将含有目标多肽的蛋白质样品加入酸性溶液中，在适当温度下进行水解反应，得到含有目标多肽的水解液。
三、分离方法1. 层析法：利用不同化学性质或大小形状等差异对混合物进行分离。
包括凝胶层析、离子交换层析、亲和层析等。
2. 电泳法：利用电场作用下不同电荷或大小形状等差异对混合物进行分离。
包括SDS-PAGE、IEF等。
3. 薄层色谱法：将混合物均匀地涂在薄层色谱板上，通过不同的溶剂系统进行分离。
4. 超滤法：利用超滤膜对混合物进行筛选，根据分子量和形状等差异进行分离。
四、纯化方法1. 透析法：将混合物放入透析袋中，在适当条件下通过半透膜进行渗透扩散，去除杂质，得到目标多肽。
2. 再结晶法：通过溶液浓缩、结晶等步骤得到高纯度的多肽样品。
3. 活性剂法：利用表面活性剂或有机溶剂等对混合物进行解聚和去除杂质。
五、检测方法1. 比色法：利用多肽与某些化学试剂发生反应产生显色物质来检测多肽样品。
2. 质谱法：通过质谱仪对多肽样品进行检测，得到其分子量和组成信息。
3. 免疫学方法：利用特异性抗体对多肽样品进行检测。
六、结论多肽的分离纯化方法有很多种，选择合适的方法需要考虑到目标多肽的特性以及实验室条件等因素。
在分离纯化过程中，需要注意对样品的保护和操作的规范性，以获取高质量的多肽样品。
微生物蛋白的提取和分离纯化
菌体表达的胞外酶
上清（滤液）
菌体表达的胞外酶分解培养基形成的小肽 及一些氨基酸成分
预处理
未分解利用的部分培养基
沉淀（滤饼）
菌体
胞内匀浆：胞内表达的酶，小肽
膜系结构：周质蛋白，膜蛋白
细胞破碎和蛋白质溶解
• 机械法 匀浆、研磨、压榨、超声等 • 非机械法 渗透、酶溶、冻融、化学等 • 新方法 激光破碎、冷冻喷射、相向流撞击等
0.7 0.6 0.5
洗脱0Biblioteka 8Protein (mg/ml) Protein (mg/ml)
0.6 NaCl Na Cl 0.5 0.4
NaCl
0.8
Protein 1
按操作方式 • A.恒定洗脱 (isocratic elution) • B.分步洗脱 (stage elution) • C.梯度洗脱 (gradient elution
• 特点：
– 介质的颗粒尺寸分布较窄，柱效高（9000塔板 数/米）； – 在机械强度、理化特性、化学稳定性及热稳定 性等方面均优于传统凝胶介质
• 由于其机械强度高，适合在高流速下进行快速分离； • 可以用0.5 mol/L NaOH作为清洗剂 • 在pH 7时能承受121℃、30 min反复高温灭菌而不会 对层析效果产生明显影响 • 其分离效果不受去污剂、促溶盐类、变性剂等影响 • 能在多种有机溶剂存在下使用
• 根据所需的目的蛋白制定蛋白提取和纯化 的策略和步骤 • 一般的预处理：过滤（工业生产）和离心 （实验室研究）
过滤操作是借助于过滤介质，在一定的压力差ΔP作用下， 离心分离是利用转鼓高速转动所产生的离心力， 将悬浮液中的固体粒子截留，而与液体分离的技术。 来实现悬浮液、乳浊液分离或浓缩的目的。
蛋白质和多肽提取分离
蛋白质与多肽提取分离1 分离方法采取何种分离纯化方法要由所提取的组织材料、所要提取物质的性质决定。
对蛋白质、多肽提取分离常用的方法包括：盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法等。
这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化，同时上述这些方法也是蛋白、多肽类物质分析中常用的手段，如层析、叫泳等。
1.1 高效液相色谱（HPLC）HPLC的出现为肽类物质的分离提供了有利的方法手段，因为蛋白质、多肽的HPLC应用与其它化合物相比，在适宜的色谱条件下不仅可以在短时间内完成分离目的，更重要的是HPLC 能在制备规模上生产具有生物活性的多肽。
因此在寻找多肽类物质分离制备的最佳条件上，不少学者做了大量的工作。
如何保持多肽活性、如何选择固定相材料、洗脱液种类、如何分析测定都是目前研究的内容。
1．1．1 反相高效液相色谱（RP-HPLC）结果与保留值之间的关系：利用RP-HPLC分离多肽首先得确定不同结构的多肽在柱上的保留情况。
为了获得一系列的保留系数，Wilce等利用多线性回归方法对2106种肽的保留性质与结构进行分析，得出了不同氨基酸组成对保留系数影响的关系，其中极性氨基酸残基在2～20氨基酸组成的肽中，可减少在柱上的保留时间；在10～60氨基酸组成的肽中，非极性氨基酸较多也可减少在柱上的保留时间，而含5～25个氨基酸的小肽中，非极性氨基酸增加可延长在柱上的保留时间。
同时有不少文献报道了肽链长度、氨基酸组成、温度等条件对保留情况的影响，并利用计算机处理分析得到每种多肽的分离提取的最佳条件。
肽图分析（Peptide Mapping）：肽图分析是根据蛋白质、多肽的分子量大小以及氨基酸组成特点，使用专一性较强的蛋白水解酶[一般未肽链内切酶（endopeptidase）]作用于特殊的肽链位点将多肽裂解成小片断，通过一定的分离检测手段形成特征性指纹图谱，肽图分析对多肽结构研究合特性鉴别具有重要意义。
大豆肽的制备工艺
大豆肽的制备工艺大豆肽是一种由大豆蛋白质水解而成的活性多肽物质，具有多种生物活性和保健功能，如抗菌、抗氧化、抗炎、降血压、降血脂等。
大豆肽的制备是通过对大豆蛋白质进行水解处理得到的。
目前，大豆肽的制备工艺主要有酶法、盐酸法和酸碱法等。
首先，酶法是大豆肽制备的主要方法之一、该方法利用酶类（如蛋白酶、胰蛋白酶、酵素等）对大豆蛋白质进行水解，从而得到大豆肽。
具体工艺流程如下：1.大豆蛋白质的提取：将大豆破碎、脱脂后，用适量的缓冲盐水悬浮并调节pH值。
2.酶解：将提取的大豆蛋白质溶液添加适量的酶，调节酶解条件（如温度、反应时间、酶的浓度等），进行酶解反应。
3.过滤分离：用滤纸或膜过滤器将反应液进行过滤，分离大豆肽和未被水解的蛋白质。
4.浓缩：将过滤得到的大豆肽溶液进行浓缩，可以采用真空浓缩法或喷雾干燥法等。
5.深度净化：用活性炭、树脂等吸附材料进行吸附分离，去除杂质，得到纯净的大豆肽。
6.干燥：将纯净的大豆肽进行干燥，得到成品。
其次，盐酸法也是常用的大豆肽制备方法之一、该方法利用盐酸对大豆蛋白质进行酸解，得到大豆肽。
具体工艺流程如下：1.大豆蛋白质的提取：将大豆进行破碎、脱脂，用适量的浓盐酸悬浮。
2.酸解：将提取的大豆蛋白质溶液加热，徐徐加入浓盐酸，调节酸解条件（如温度、反应时间、酸的浓度等）。
3.过滤分离：用滤纸或膜过滤器将反应液进行过滤，分离大豆肽和未被水解的蛋白质。
4.中和：将过滤得到的大豆肽溶液进行中和，用碱调节pH值，使其接近中性。
5.提纯浓缩：通过酒精沉淀、离心、冷沉淀等方式，得到纯净的大豆肽。
6.干燥：将纯净的大豆肽进行干燥，得到成品。
最后，酸碱法也是一种常用的大豆肽制备方法。
该方法利用酸碱反应调节大豆蛋白质的溶解度和电荷，从而获得大豆肽。
具体工艺流程如下：1.大豆蛋白质的提取：将大豆破碎、脱脂后，用适量的缓冲盐水悬浮并调节pH值。
2.酸碱处理：将提取的大豆蛋白质溶液加入酸或碱，调节pH值，使大豆蛋白质进行溶解或沉淀。
多肽类分析分离方法
多肽类化合物广泛存在于自然界中，其中对具有一定生物活性的多肽的研究，一直是药物开发的一个主要方向。
生物体内已知的活性多肽主要是从内分泌腺组织器官、分泌细胞和体液中产生或获得的，生命活动中的细胞分化、神经激素递质调节、肿瘤病变、免疫调节等均与活性多肽密切相关。
随着现代科技的飞速发展，从天然产物中获得肽类物质的手段也不断得到提高。
一些新方法、新思路的应用。
不断有新的肽类物质被发现应用于防病治病之中。
本文介绍了近几年肽类物质分离、分析的主要方法研究进展。
1 分离方法采取何种分离纯化方法要由所提取的组织材料、所要提取物质的性质决定。
对蛋白质、多肽提取分离常用的方法包括：盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法等。
这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化，同时上述这些方法也是蛋白、多肽类物质分析中常用的手段，如层析、电泳等。
1.1 高效液相色谱（HPLC）HPLC的出现为肽类物质的分离提供了有利的方法手段，因为蛋白质、多肽的HPLC 应用与其它化合物相比，在适宜的色谱条件下不仅可以在短时间内完成分离目的，更重要的是HPLC能在制备规模上生产具有生物活性的多肽。
因此在寻找多肽类物质分离制备的最佳条件上，不少学者做了大量的工作。
如何保持多肽活性、如何选择固定相材料、洗脱液种类、如何分析测定都是目前研究的内容。
1．1．1 反相高效液相色谱（RP-HPLC）结果与保留值之间的关系：利用RP-HPLC分离多肽首先得确定不同结构的多肽在柱上的保留情况。
为了获得一系列的保留系数，Wilce等利用多线性回归方法对2106种肽的保留性质与结构进行分析，得出了不同氨基酸组成对保留系数影响的关系，其中极性氨基酸残基在2～20氨基酸组成的肽中，可减少在柱上的保留时间；在10～60氨基酸组成的肽中，非极性氨基酸较多也可减少在柱上的保留时间，而含5～25个氨基酸的小肽中，非极性氨基酸增加可延长在柱上的保留时间。
多肽提取方法范文
多肽提取方法范文
一、物理方法
1.机械破碎法：通过直接或间接机械破碎细胞的方法来提取多肽。
例如，高速均质机、高压均质机等可以破坏细胞膜来释放细胞内的多肽。
此外，也可以通过超声波处理或通过球磨仪来破坏细胞。
2.离心法：通过离心将细胞内容物与细胞壁分离，并将多肽富集在上
清液中。
离心速度和时间的选择应根据待提取的样品而定。
3.滤液法：通过使用滤膜来富集多肽。
细菌滤液、胰蛋白酶水解产物
等可以通过滤液法进行富集。
4.萃取法：使用有机溶剂或水溶液来提取多肽。
常用的有机溶剂有甲醇、醋酸乙酯、氯仿等。
二、化学方法
1.酸碱水解法：在酸或碱的条件下，将待提取样品进行水解，使多肽
从复合物或结合物中释放出来。
酸碱水解法适用于提取蛋白质或肽类物质。
2.酶解法：通过使用特定的酶来酶解待提取样品，使多肽释放出来。
例如，使用胰蛋白酶可以将蛋白质水解为多肽。
3.溶剂萃取法：使用有机溶剂或水溶液来提取多肽，然后通过蒸干或
浓缩溶剂来得到多肽。
例如，甲醇、乙腈等有机溶剂可以用于多肽的提取。
4.膜技术：通过使用膜分离技术（如逆渗透、超滤、渗析等），将多
肽与其他物质分离。
总结起来，多肽的提取方法包括物理方法和化学方法。
物理方法主要
包括机械破碎、离心、滤液和萃取等；化学方法主要包括酸碱水解、酶解、溶剂萃取以及膜技术等。
在实际操作中，根据待提取的多肽类型和样品特
点选择适合的提取方法，以获得高纯度和高产率的多肽。
微生物发酵生产蛋白质与多肽的研究进展
微生物发酵生产蛋白质与多肽的研究进展摘要:微生物发酵、基因工程等相关技术的发展，激发了科研机构和个人对蛋白质和多肽的研究。
微生物发酵工艺在生产取得惊人的效益。
本文对近年来微生物发酵生产蛋白质和多肽，原料资源的开发与应用、生产技术和微生态制剂等产品研究成果及发展进行总结与分析。
关键词：微生物、发酵、多肽、蛋白质前景：随着技术的发展和社会需求的增长,近代生物工业已由糖分解生产简单化合物转入复合化合物的生物合成阶段.近代人生物工业发展规模的日益扩大,面临自然资源的匮乏问题,迫切需要开辟原料新资源,利用纤维、石油甚至空气等资源代粮发酵生产各种产品取得了成功。
这一研究进展改变了发酵工艺对原料依赖。
而且，微生物发酵技术生产的啤酒、酱油、酒精、青霉素、蛋白酶、干扰素、白介素、单细胞蛋白等产品已经深入到国民经济各个部门。
随着对纤维素水解研究的深入，人们发现取之不尽的纤维素资源代替粮食发酵生产各种产品和能源物质取得了成功。
研究表明，有些细菌可以固定大气中的氮、碳、空气来生产来生产蛋白质。
这些研究对于开辟人类未来粮食新资源有重要意义。
可以说，，微生物发酵技术有着广阔的发展前景，是具有生命力的既古老而又年轻的工艺。
1 微生物发酵生产多肽及蛋白质的获取微生物发酵生产多肽及蛋白质是利用微生物的生化代谢反应将植物体或动物组织中的大分子蛋白转化成小分子蛋白活性肽或小分子蛋白质，并通过微生物的代谢和发酵条件生产各种氨基酸排序和分子质量大小不同的生物活性肽及蛋白质。
2 微生物发酵生产多肽及蛋白质的应用多肽现已广泛应用于医药、化妆品、食品等行业。
2.1 微生物发酵生产蛋白质的应用通过发酵可获得大量的微生物菌体──单细胞蛋白。
单细胞蛋白食品具有高蛋白、低脂肪等优点。
功能肽除了具有一般蛋白质的营养作用外，对人体还具有非常重要的不可替代的调节作用，这种作用几乎涉及到人体的所有生理活动。
研究发现，一些调节人体生理机能肽的缺乏，会导致人体机能的转变。
蛋白质、多肽提取分离
蛋白质、多肽提取分离1、分离方法采取何种分离纯化方法要由所提取的组织材料、所要提取物质的性质决定。
对蛋白质、多肽提取分离常用的方法包括：盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法等。
这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化，同时上述这些方法也是蛋白、多肽类物质分析中常用的手段，如层析、叫泳等。
1.1 高效液相色谱（HPLC）HPLC的出现为肽类物质的分离提供了有利的方法手段，因为蛋白质、多肽的HPLC应用与其它化合物相比，在适宜的色谱条件下不仅可以在短时间内完成分离目的，更重要的是HPLC能在制备规模上生产具有生物活性的多肽。
因此在寻找多肽类物质分离制备的最佳条件上，不少学者做了大量的工作。
如何保持多肽活性、如何选择固定相材料、洗脱液种类、如何分析测定都是目前研究的内容。
1．1．1 反相高效液相色谱（RP-HPLC）结果与保留值之间的关系：利用RP-HPLC分离多肽首先得确定不同结构的多肽在柱上的保留情况。
为了获得一系列的保留系数，Wilce等利用多线性回归方法对2106种肽的保留性质与结构进行分析，得出了不同氨基酸组成对保留系数影响的关系，其中极性氨基酸残基在2～20氨基酸组成的肽中，可减少在柱上的保留时间；在10～60氨基酸组成的肽中，非极性氨基酸较多也可减少在柱上的保留时间，而含5～25个氨基酸的小肽中，非极性氨基酸增加可延长在柱上的保留时间。
同时有不少文献报道了肽链长度、氨基酸组成、温度等条件对保留情况的影响，并利用计算机处理分析得到每种多肽的分离提取的最佳条件。
肽图分析（Peptide Mapping）：肽图分析是根据蛋白质、多肽的分子量大小以及氨基酸组成特点，使用专一性较强的蛋白水解酶[一般未肽链内切酶（endopeptidase）]作用于特殊的肽链位点将多肽裂解成小片断，通过一定的分离检测手段形成特征性指纹图谱，肽图分析对多肽结构研究合特性鉴别具有重要意义。
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关键词：多肽蛋白质提取分离摘要：多肽是由多个氨基酸缩合形成的，蛋白质是由几十到几千个氨基酸分子借助肽键和二硫键相互连接的多肽链，随肽数目，氨基酸组成及排列顺序不同，蛋白质分子呈现三维空间结构，并且有生物活性。
采取何种分离方法要由所提取的组织材料、所要提取物质的性质决定。
对蛋白质、多肽提取分离常用的方法包括：盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法等。
这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化。
﹑多肽的提取与分离多肽类化合物广泛存在于自然界中，其中对具有一定生物学活性的多肽的研究，一直是药物开发的一个主要方向。
生物体内已知的活性多肽主要是从内分泌腺组织器官、分泌细胞和体液中产生或获得的，生命活动中的细胞分化、神经激素递质调节、肿瘤病变、免疫调节等均与活性多肽密切相关。
随着现代科技的飞速发展，从天然产物中获得肽类物质的手段也不断得到提高。
相1. 高效液色谱（HPLC）HPLC的出现为肽类物质的分离提供了有利的方法手段，因为蛋白质、多肽的HPLC应用与其他化合物相比，在适宜的色谱条件下不仅可以在短时间内完成分离目的，更重要的是HPLC能在制备规模上生产具有生物活性的多肽。
因此在寻找多肽类物质分离制备的最佳条件上，不少学者做了大量的工作。
如赵骏等以酪蛋白为原料，采用微生物蛋白酶A水解，其酶解产物为血管紧张素转化酶（ACE）。
2.反相高效液相色谱（RP-HPLC）.用反相色谱法分离多肽和蛋白质的原理是基于蛋白质的疏水性，在不同介质条件下，使不同的蛋白质得以分离，具有快速高效和高回收的特点，在分离和制备多肽及蛋白质上有独特的优越性。
吴亚丽等利用反相高效液相色谱法分析降血压肽AHP的最佳工艺条件。
3. 疏水作用色谱(Hydrophobic interaction chromatography,HIC)HIC是利用多肽中含有疏水基团，可与固定相之间产生疏水作用而达到分离分析的目的，其比RP-HPLC具有较少使多肽变性的特点。
利用HIC分离生产激素（GH）产品的结构与活性比RP-HPLC分离的要稳定，活性较稳定。
Geng等利用HIC 柱的低变性特点，将大肠杆菌表达出的经盐酸胍乙啶变性得到人重组干扰素-γ，通过HIC柱纯化、折叠出高生物活性的产品。
不同人尿表皮生长因子（EGF）也利用HIC纯化到了，均具有良好的生物活性。
HIC可将未经离子交换柱的样品纯化。
而RP-HPLC则不能达到这一要求。
4.分子排阻色谱(Size-Exclusion chromatography,SEC)SEC是利用多肽分子大小、形状差异来分离纯化多肽物质，特别对一些较大的聚集态的分子更为方便。
如人重组生长激素（hGH)的分离，不同结构、构型的GH在SEC柱上的分离行为完全不同，从而可分离不同构型或在氨基酸序列上有微小差异的变异体。
利用SEC研究修饰化的PEG的分离方法，此PEG具有半衰期长、作用强的特点。
一些分子量较大的肽或蛋白均可利用此法分离分析。
5.离子交换色谱(Iron-Exchange chromatography,IEXC)IEXC可在中性条件下，利用多肽的带电性不同分离纯化具有生物活性的多肽。
其可分为阳离子柱与阴离子柱两大类，还有一些新型树脂，如大孔型树脂、均孔型树脂、离子交换纤维素、葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶树脂等。
在多肽类物质的分离分析研究中，对多肽的性质、洗脱剂、洗脱条件的研究较多，不同的多肽分离条件有所不同，特别是洗脱剂的离子强度、盐浓度等对纯化影响较大。
Wu等报道利用离子交换柱层析法，探讨分离牛碳酸酐酶异构体和牛血清白蛋白、鸡血清白蛋白酶的提取条件，获得了有价值的数据供今后此类物质分离研究。
6.膜蛋白色谱(Chromatography of Membrane Protein,CMP)CMP+分离强疏水性蛋白、多肽混合物的层析系统，一般有去垢剂（如SDS）溶解膜蛋白后形成SDS-融膜蛋白，并由羟基磷灰石为固定相的柱子分离纯化。
羟基磷灰石柱具有阴离子磷酸基团（P-端），又具有阳离子钙（C-端），与固定相结合主要决定于膜蛋白的大小、SDS结合量有关。
利用原子散射法研究cAMP的分离机制发现，样品与SDS结合后在离子交换柱上存在SDS分子、带电荷氨基酸与固定相中带电离子间的交换，从而达到分级分离的目的。
7.高效置换色谱(High-Performance Displacement Chromatography,HPDC)HPDC是利用小分子的高效置换剂来交换色谱柱上的样品，从而达到分离目的。
它具有分离组分含量较少成分的特性。
利用HPDC鉴定分离了低于总量1％组分的活性人重组生长激素(rHG)。
﹑蛋白质的提取与分离蛋白质种类很多，性质差异很大，既或是同类蛋白质，因选用材料不同，使用方法差别也很大，且又处于不同的体系中，因此不可能有一个固定的程序适用各类蛋白质的分离。
但多数分离工作中的关键部分基本手段还是共同的，大部分蛋白质均可溶于水、稀盐、稀酸或稀碱溶液中，少数与脂类结合的蛋白质溶于乙醇、丙酮及丁醇等有机溶剂中。
因此可采用不同溶剂提取、分离蛋白质。
蛋白质的提取与分离一般分为4个阶段：①材料的选择和预处理，②细胞的破碎（有时需进行细胞器的分离），③提取，④分离。
一、原料的选择原料的选择主要依据实验目的定。
从工业生产角度考虑，注意选含量高、来源丰富及成本低的原料。
尽量要新鲜原料。
但有时这几方面不同时具备。
含量丰富但来源困难，或含量来源均不理想。
但分离纯化操作繁琐，反而不如含量略低些易于获得纯品者。
一般要注意种属的关系，如鲣的心肌细胞色素C较马的易结晶，马的血红蛋白较牛的易结晶。
不但使用种属一定的原料，而且要取自同一个体的原料。
可能时尽量用全年均可采到的原料。
对动物生理状态间的差异（如饥饿时脂肪和糖类相对减少），采收期及产地等因素也要注意。
二、前处理1、细胞的破碎材料选定通常要进行处理。
要剔除结缔组织及脂肪组织。
如不能立即进行实验，则应冷冻保存。
除了提取及胞细外成分，对细胞内及多细胞生物组织中的蛋白质的分离提取均须先将细胞破碎，使其充分释放到溶液中。
⑴机械方法主要通过机械切力的作用使组织细胞破坏。
常用器械有：①高速组织捣碎机（转速可达10000rpm，具高速转动的锋利的刀片），宜用于动物内脏组织的破碎；②玻璃匀浆器（用两个磨砂面相互摩擦，将细胞磨碎），适用于少量材料。
⑵物理方法主要通过各种物理因素的作用，使组织细胞破碎的方法。
Ⅰ反复冻融法于冷藏库或干冰反复于零下15～20℃使之冻固，然后缓慢地融解，如此反复操作，使大部分细胞及细胞内颗粒破坏。
由于渗透压的变化。
使结合水冻结产生组织的变性，冰片将细胞膜破碎，使蛋白质可溶化，成为粘稠的浓溶液，但脂蛋白冻结变性。
Ⅱ冷热变替法将材料投入沸水中，于90℃左右维持数分钟，立即置于冰浴中使之迅速冷却，绝大部分细胞被破坏。
Ⅲ超声波法暴露于9～10千周声波或10～500千周超声波所产生的机械振动，只要有设备该法方便且效果也好，但一次处理量较小。
应用超声波处理时应注意避免溶液中气泡的存在。
处理一些超声波敏感的蛋白质酶时宜慎重。
Ⅳ加压破碎法加一定气压或水压也可使细胞破遗留房产的继承碎。
⑶化学及生物化学方法Ⅰ有机溶媒法粉碎后的新鲜材料在0℃以下加入5～10倍量的丙酮，迅速搅拌均匀，可破碎细胞膜，破坏蛋白质与脂质的结合，蛋白质一般不变性。
Ⅱ自溶法将待破碎的鲜材料在一定pH和适当的温度下。
利用自身的蛋白酶将细胞破坏，使细胞内含物释放出来。
比较稳定，变性较难，蛋白质不被分解而可溶化。
因自溶时间较长，不易控制，所以制备活性蛋白质时较少用。
Ⅲ酶法与前述的自体融法同理，用胰蛋白酶等蛋白酶除去变性蛋白质。
但值得提出的是溶菌酶处理时，它能水解构成枯草菌等菌体膜的多糖类。
2、细胞器的分离制备某一种生物大分子需要采用细胞中某一部分的材料，或者为了纯化某一特定细胞器上的生物大分子，防止其他细胞组分的干扰，细胞破碎后常将细胞内各组分先行分离，对于制备一些难度较大需求纯度较高的生物大分子是有利的。
细胞器的分离一般采用差速离心法。
细胞经过破碎后，在适当介质中进行差速离心。
利用细胞各组分质量大小不同，沉降于离心管内不同区域，分离后即得所需组分。
细胞器的分离制备、介质的选择十分重要。
最早使用的介质是生理盐水。
因它容易使亚细胞颗粒发生聚集作用结成块状，沉淀分离效果不理想，现一般改用蔗糖、Ficoll（一种蔗糖多聚物）或葡萄糖-聚乙二醇等高分子溶液。
﹑提取1.水溶液提取大部分蛋白质均溶于水、稀盐、稀碱或稀酸溶液中。
因此蛋白质的提取一般以水为主。
稀盐溶液和缓冲溶液对蛋白质稳定性好、溶度大，也是提取蛋白质的最常用溶剂。
以盐溶液及缓冲液提取蛋白质进常注意下面几个因素。
盐浓度等渗盐溶液尤以0.02～0.05mol/L磷酸盐缓冲液和碳酸盐缓冲液常用。
0.15mol/L氯化钠溶液应用也较多。
有时为了螯合某些金属离子和解离酶分子与其他杂质的静电结合，也常使用枸橼酸钠缓冲液和焦磷酸钠缓冲液。
有些蛋白质在低盐浓度下浓度低，如脱氧核糖核蛋白质需用1mol/L以上氯化钠液提取。
总之，只要能溶解在水溶液中而与细胞颗粒结合不太紧密的蛋白质和酶，细胞破碎后选择适当的盐浓度及PH，一般是不难提取的。
只有某些与细胞颗粒上的脂类物质结合较紧的，需采用有机溶剂或加入表面活性剂处理等方法提取。
PH值蛋白质提取液的PH值首先应保证在蛋白质稳定的范围内，即选择在偏离等电点两侧。
如碱性蛋白质则选在偏酸一侧，酸性蛋白质选择偏碱一侧，以增大蛋白质的溶解度，提高提取效果。
某些蛋白质或酶与其分物质结合常以离子键形式存在，选择PH3～6范围对于分离提取是有利的。
温度多数酶的提取温度在5℃以下。
少数对温度耐受性较高的蛋白质和酶，可适当提高温度，使杂蛋白变性分离且也有利于提取。
如胃蛋白酶等及许多多肽激素类，选择37～50℃条件下提取，效果比低温提取更好。