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生化技术第二章 离心分离PPT教学课件

生化技术第二章 离心分离PPT教学课件
应用最早、最广泛的检测技术 简便、快速、操作容易
一 糖类的化学检测
糖类包括多糖、双糖、单糖 单糖和某些双糖具有游离羰基——还原糖 多糖和蔗糖等无还原性——非还原糖 糖类化学检测主要是利用游离羰基的还原
性质,与试剂(氧化剂)进行氧化还原反 应而进行测定的。
非还原糖必须转化为还原糖再进行测定
用途:分离细胞、细胞碎片、培养基残渣及粗 结晶等较大颗粒
2高速离心机 1*104g~2.5*104 r/min ,R.C.F 1*104g~105g
用途:分离各种沉淀物、细胞碎片及较大的细 胞器等
高速冷冻离心机
3 超速离心机
2.5*104g~8*104 r/min ,R.C.F 5*105g或更高 结构:离心管帽、冷冻装置和温控系统、真空
第二章 离心分离
借助离心机旋转所产生的离心力,使不 同大小和不同密度的物质分离的技术
细胞的收集、细胞碎片和沉淀的分离等 常用离心分离
超速离心技术已成为分离、纯化、鉴别 和各种生物大分子的重要手段之一
一 离心机的种类与用途
转速分:常速(低速)、高速和超速
1 常速离心机
<8000r/min, R.C.F<1*104g
定磷试剂,45 ℃水浴25min,冷却至室温测OD650 无机磷标准液作标准曲线
(3)核酸含量的计算 一般DNA含磷9.5%,RNA含磷9.2%, RNA量=(总磷量-无机磷量)×10.9 DNA量= (总磷量-无机磷量)×10.5
2 二苯胺法测定DNA含量
DNA中的2-脱氧核糖在酸性环境中与二苯胺 试剂一起加热产生蓝色反应,在595nm处有 最大吸收峰。在40~400μ g范围内,OD595与 DNA浓度成正比。少量乙醛可提高反应灵敏 度。

离心原理PPT课件

离心原理PPT课件
一、步骤
1. 在离心管中加入适量淋巴细胞分离液。
2. 取肝素抗凝静脉血与等量Hank‘s液或RPMI1640 充分混 匀,用滴管沿管壁缓慢叠加于分层液面上,注意保持清 楚的界面,水平离心2000rpm×20分钟。
3. 离心后管内分为三层,上层为血浆和Hank‘s液,下层主 要为红细胞和粒细胞,中层为淋巴细胞分离液,在上、 中层界面处有一以单个核细胞为主的白色云雾层狭窄带 ,单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞。此外,还含有 血小板。
Ø 分离、纯化样品; Ø 对已纯化的样品进行结构和性质的分析。
.
2
一、离心的一般原理
颗 颗粒的密度、形状、大小

运 液体介质的密度、粘度和重力场

的 的强度

向 悬浮颗粒在液体介质的扩散运动


颗粒越小,则沉降越慢,

扩散. 现象越严重。
3
1、离心力和相对离心力
离心力(centrifugal force,F)
.
9
离心机的构造
†转头 †驱动装置 †速度控制系统 †冷却装置 †真空装置 †光学检测系统
preparative
ultracentrifuge
.
10
离 心 转 头
a 水平转头
b 角式转头 c 垂直转头
角度在14-40℃ 之间
.
11
实验中常用的是普通离心机(转速一般 不高于4000rpm),用于分离血清和 沉淀细胞、大的沉淀物等。
等特性的影响。
†预计沉降时间;
†测定物质相对分. 子质量。
6
3、沉降速度(sedimentation velocity, v)
沉降速度是指在离心力作用下,单位 时间内颗粒沉降的距离。

离心技术

离心技术

五、离心机使用注意事项 使用前应将负荷平衡, 1. 使用前应将负荷平衡 , 重量误差越小 越好 严禁空转, 2. 严禁空转,启动时转速由低至高逐步 调节,严格高速启动。 调节,严格高速启动。 选择合适的转头,控制转速。 3. 选择合适的转头,控制转速。 保护转头,防止碰撞、擦伤、 4. 保护转头,防止碰撞、擦伤、防止异 污垢进入、用毕立即清洁。 物、污垢进入、用毕立即清洁。 低温离心样品时, 5. 低温离心样品时 , 先将空转头预冷一 定时间。温度± 定时间。温度±0℃。 发现异常如噪声,应立即停机检查。 6. 发现异常如噪声,应立即停机检查。 离心机结构及使用方法——实习 六、离心机结构及使用方法 实习 离心机的应用——自学 七、离心机的应用 自学
2、离心机的分类 :按离心机应用范围分为四类: 、 离心机的分类:按离心机应用范围分为四类: 普通离心机、专用离心机、制备离心机和分析用离心机, 普通离心机、专用离心机、制备离心机和分析用离心机, 按离心速度即离心机转速分为: 按离心速度即离心机转速分为: 普通离心机:转速小于5000转/min,在室温下运 ① 普通离心机:转速小于 转 , 主要用于红细胞,微生物细胞,粗大沉淀物, 行,主要用于红细胞,微生物细胞,粗大沉淀物,细胞 细胞膜等的沉淀分离。 核、细胞膜等的沉淀分离。 高速离心机:转速为5000~20000转/min,通常 ② 高速离心机:转速为 ~ 转 , 备有致冷和温控装置。适用于各种生物细胞、病毒、 备有致冷和温控装置。适用于各种生物细胞、病毒、血 清蛋白等有机物、无机物溶液, 清蛋白等有机物、无机物溶液,悬浮液及胶体溶液等样 品的分离,浓缩、提取制备工作。 品的分离,浓缩、提取制备工作。它是细胞和分子生物 水平研究的基本工具。 水平研究的基本工具。 ③ 超 速 离 心 机 : 转 速 为 20000 ~ 90000 转 /min 。 Ultrcentrifuge因它能产生超强的离心力场而达到独特的 因它能产生超强的离心力场而达到独特的 分离纯化目的。它是分离、纯化、分析、 分离纯化目的。它是分离、纯化、分析、鉴定生物大分 子的重要技术手段 。 如 DNA/RNA 杂交分子的分离 , HDL的分离。 的分离。 的分离

09离心式压缩机的典型结构与基本方程(一)

09离心式压缩机的典型结构与基本方程(一)
sin122222222aaruthzctgucuuch???????222ucrr??为流量系数sin12222aaruzctg????????理论能量头系数或周速系数222uhuth??例1某离心式压缩机的第三级叶轮其叶片进出口速度为cc例1某离心式压缩机的第三级叶轮其叶片进出口速度为cc1160ms11c90cc22130ms130ms2218叶轮转速为n12000rmin进出口直径分别为dd18叶轮转速为n12000rmin进出口直径分别为dd11180mmd22330mm求叶轮给予每公斤有效流量的理论能头
U2

Z
sin 2 A
sin 2 A C 2U Z 1 C 2U U 2 C 2 r ctg 2 A

滑移系数
Cr 2 ctg 2 A sin 2 A ) U2 Z
无预旋时
H th C2U U 2 U 2 (1
2
H th C2U U 2 U 2 (1
vin
RTin 0.91 m 3 / KG P in
P in vin RT in
求叶轮进口气流密度
in
1 1.1kg / m 3 vin
0 K v 0 in 0.91 1.1 1.0
(4)贝努力方程
由热力学第一定律 : dQ dU PdV
dH d (U PV ) dU PdV VdP
校核各级叶轮选取的合理性和计算压缩机的转速
2 r
Cr 2 U2
出口流量系数
b2 D2
叶轮相对宽度
b2 0.065 D2
通常:0.025
2
Z 2 b2 2 Z 2 D2 b2 sin 2 A sin 2 A D2 b2

离心技术

离心技术

一、基本原理
沉降-扩散平衡: 沉降-扩散平衡: 利用沉降-扩散协同作用可将不同质量的物质分开; 利用沉降-扩散协同作用可将不同质量的物质分开;
自然条件下的沉降是由重力场作用,重力场强度有限, 自然条件下的沉降是由重力场作用 , 重力场强度有限 , 当 质量小到一定程度时,沉降速度<<扩散速度, <<扩散速度 质量小到一定程度时,沉降速度<<扩散速度,微粒就不能沉 降分离。 降分离。 离心:借助高速旋转产生比重力场更大的离心力场, 离心:借助高速旋转产生比重力场更大的离心力场,加大沉 淀作用,使更小的微粒也能沉淀。 淀作用,使更小的微粒也能沉淀。 离心力场的优点: 离心力场的优点 *远大于重力场 远大于重力场 *可调节大小 可调节大小
水平转头
垂直转头
o转头停止和运动时, 转头停止和运动时, 离心管都是呈垂直放 置的, 置的,适合用于密度 梯度离心。 梯度离心。 o特点;离心结束时, 特点;离心结束时, 液面和样品区带要作 九十度转向, 九十度转向,因而降 速要慢。 速要慢。介由于样品 颗粒沉降距离最短, 颗粒沉降距离最短, 离心所需时间也短。 离心所需时间也短。
第二节 制备离心技术
(一)差速离心法
1Hale Waihona Puke 差速离心法:逐渐增加离心速度, 或低速与高速交替进行离心,使沉降系数 差速离心法:逐渐增加离心速度, 或低速与高速交替进行离心, 不同的颗粒在不同速度或不同离心时间下分离的方法。 不同的颗粒在不同速度或不同离心时间下分离的方法。 2、特点:离心介质的浓度均一;离心速度改变 特点:离心介质的浓度均一; 3、用途:用于分离大小相差10S的样品颗粒的初步分离 用途:用于分离大小相差10S 4、优点:操作容易,通过倾倒就可将上清液和 优点:操作容易, 沉淀分离,而且可用大容量的角转子。 沉淀分离,而且可用大容量的角转子。 • 缺点:需经多次离心,沉淀不纯,分离效果差, 缺点:需经多次离心,沉淀不纯,分离效果差, 沉淀大量堆集在离心管底部, 沉淀大量堆集在离心管底部,颗粒受挤压 易失活。 易失活。 5、应用中的主要问题:离心时间和离心速度的选择 、应用中的主要问题:

离心技术

离心技术

所以 rpm = 1000 RCF 11.2r
利用此公式可以进行相对离心力和转数的计算,例如:已 知 一 个 离 心 机 转 头 的 半 径 r=254mm (25.4cm), 速 度 rpm=4200, 求RCF?
根据公式 RCF = 11.2r(rpm 1000)2
RCF = 11.2 25.4 (4200 1000)2 = 5018g
二级真空系统。这种泵的真空度可达133.322 10-3pa
3.3.4光学系统:
a 转头识别:通过离心腔内的光学扫描系统,对安装的转 头进行扫并把扫描的信号与本机设定的转头比较以此识别 。 b测速:通过转头底黑白相间的花边进行测定, c沉降带检测:通过光学系统将运行中的离心状态显示出 来。
3.3.5控制系统: 控制系统是离心机的指挥中心。 a速控:包括设速、测速、控速等 设速:是在离心前设定离心时所需速度。 测速:在离心机启动后通过光电检测器测定运行的真实 速度 控速:包括提速、恒速、限速、减速等。 b温控:包括制冷启动、恒温、加温除霜
4转头的基本参数与性能
4.1转头K因子:
转头K因子是转头的常数,它表示转头大小和转速之间的关系。出 厂时就被标定了,以表示每个转头的分离性能。用公式表示为: (rmax/rmin ) S=2.533 1011ln──── (rpm)2.T S:表示颗粒的沉降系数(单位:Sec) rmax:为转头最大半径(单位:cm) rmin:为转头最小半径(单位:cm) rpm:为转头的允许速度(单位:转/分)
超速离心
1概述 2离心的基本理论 3离心机的分类与构造 4转头的基本参数与性能 5离心技术 6安全操作与离心机的保养
1概述
1.1离心技术过程的发展

离心技术

离心技术

36
甩平式转头 36,000
5×5
55
垂直管转头 100,000 8×5
<2
近垂直管转头 78,000
8×5
4
效果 较好
好 较好

离心管
塑料离心管:聚乙烯(PE)管,纤维素(CAB) 管,聚碳酸酯(PC)管,聚丙二醇酯(PP)管 等。
不锈钢离心管
离心方法介绍及举例
沉淀离心 差速分级离心 密度梯度离心 淘洗离心 连续流离心






600 rpm



垂直转头(vertical tube rotor)
垂直转头:是指离心管与旋转轴成平行方向。当 转头旋转时,离心管中的液体层改变方向,与旋 转轴成垂直方向。当离心结束后,液层又随转速 的降低慢慢恢复原位。
承受的最大离心速度在100, 000 r/min左右,最大 离心力在700, 000g 。
近垂直管转头 超速 连续离心转头 低、高、超速
1989年,(日)Hitachi Koki;(美) Beckman公司
1965年,(英)MSE公司
角转头(angle rotor)
角转头:离心管放置的位置与转头的旋转轴之间 成一个固定角度,通常在14-40℃之间。 承受的最大离心速度在100,000 r/min,最大离心 力可达800,000 × g。 适用于差速离心,也可用于等密度离心。 特点:容量大,转头内容纳的离心管多。
1955年,Anderson发明了区带转头,并用区带离 心法首次证明了DNA双螺旋结构半保留复制的假说;
1955年以后,开始了超速、高速、低速大容量离 心机以及分析用超速离心机的商品化生产;

离心技术

离心技术

不同的细胞器、大分子和病毒的密度及相应的沉降系数
常见物质的沉降系数
可溶蛋白 1-60s 真核生物核糖体 80s 微粒体 100-1000s 线粒体 10000-100000s 核酸 4-100s 病毒 60-1000s 烟草花叶病毒 200s
概述
技术要点:
制备超离心的关键是如何根据颗粒和介 质的性质以及转子的某些参数来确定转速 和离心时间。
Equilibrium density-gradient centrifugation 平衡密度梯度离心
原理 当不同颗粒存在浮力密度差时,在离
心力场下,在密度梯度介质中,颗粒或 向下沉降,或向上浮起,一直移动到与 它们各自的密度恰好相等的位置上形成 区带,从而使不同浮力密度的物质得到 分离。
介质的密度梯度范围必需包括所有待分离粒 子的密度。样品可以铺在密度梯度液柱上面 或均匀分布在密度梯度介质中。离心过程中 粒子移至与它本身密度相同的地方形成区带。
对称平衡:当离心转速达 1 - 5 万(rpm / min)
时,如对称管相差 1 g ,转头半径 5 cm ,则离心
力公式
F=m × RCF
查表得: 1 万( rpm / min ) RCF=6000 代入公式 F=1 × 6000=6 ( kg )
5 万( rpm / min ) RCF=150000 代入公式 F=1 × 150000=150 (kg )
因为它可以真实地反映颗粒在离心管内不同位置的离 心力及其动态变化。
由于离心管中从管口到管底与旋转 中心的距离是不同的,所以在同样转速 时,管口和管底所受到的离心力也有差 别。
例如:在某个角度转头中,离心管 口到旋转中心的距离为4.8cm,而离心 管底到旋转中心的距离是8.0cm,当转 速为12000 r/min时,离心管口和离心 管底所受到的相对离心力RCF分别是: RCF(管口)=
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可用于难分离的物料,如大肠杆菌。
碟片式离心机
D、活门(活塞)排渣喷嘴 碟片离心机
操作:断续式 应用:
A、澄清作业; B、细胞收集。 主要技术参数: A、离心速度比相同直径的活塞机大23-30%; B、离心力强度可达15000g。
可用于酶制剂、疫苗、胰岛素等生产中的澄清;酶生 产中细菌的收集;DNA的收集与澄清。
意义:衡量离心设备的离心程度的重要技术参数,用 于离心机的分类
Dole Cotzias转换列线图t
离心分离原理
离心沉降系数(S) 单位离心力作用下粒子的沉降速率
(单位s ,1S=10-13s) —常用20℃纯水中的沉降系数SW,20为标准表示
离心时间
—已知转速时
K因子(澄清因子)
估计粒子从离心杯上最近转轴处到最远处所需的时间 —与转子大小和速率有关,是转子的效率因子 转子说明书
第九章
概述
固液分离:第一选择为过滤,第二选择为离心分离。 应用: A、难过滤的发酵液(d小、大、过滤v慢)、甚至不能过
滤的悬浮液,及忌用助滤剂、或助滤剂无效的悬浮液; B、其他难分离的固液分离; C、互不相溶的液—液分离,如液液萃取; D、不同密度固体或乳浊液的密度梯度分离,如超离心分离 缺点: A、分离得到的不是滤饼一样的半干物,而是浆状物; B、处理量小; C、设备复杂,价格贵,分离成本高。
概述
离心技术:利用转鼓高速转动所产生的离心力来实 现悬浮液、乳浊液的分离或浓缩的分离技术。
主要用于固液、液液分离过程
离心分离原理:相对密度差;沉降系数、质量及浮力等因子的不同
离心沉降 利用固液两相的 无孔转鼓 悬浮液
相对密度差
或管子
离心过滤 利用离心力并通 有孔转鼓 悬浮液 过过滤介质
离心分离 利用不同溶质颗 无孔转鼓 不同相对 和超离心 粒在溶液各部分 或管子 密度液体
常用于抗生素、疫苗、维生素、生物 碱甾类化合物及梭状芽孢杆菌等
碟片式离心机
B、喷嘴排渣碟片离心机
操作:连续式 应用:
多用于悬浮液的浓缩。 主要技术参数: A、固体浓度<25% ; B、颗粒d为0.1-100um; C、转鼓直径达900mm; D、喷嘴2-24个,直径0.5-3.2mm; E、浓缩比达5-20。
——生化分离常用高速冷冻离心机
(一)离心机分类
(二)离心机转子及附件
离心分离设备
二、离心沉降设备
沉降式离心机 ——实验室用
瓶式离心机 ——工业用
无孔转鼓离心机 -管式 -多室式 -碟片式 -卧螺式 (decanter)
离心沉降设备类型
离心分离设备
1.瓶式离心机
实验室常用 低、中速离心机,转速一般
在3000~6000rpm
转子常为外摆式或角式 操作:一般在室温下,也有
配备冷却装置的冷冻离心机
离心分离设备
2.管式离心机
操作:间歇式或连续式,还可以冷却 应用:A、液-液分离(连续式);
B、低固体含量(<1%)的固-液分离。 主要技术指标: A、离心管直径40-150mm,长径比4-8; B、离心力强度15000-65000g; C、处理能力100-400 L/h; D、适应的颗粒直径0.01-100m,固液密度
差>0.01g/cm3,固体含量<1%。
常用于微生物菌体和蛋白质的分离等。
管式离心机 Tubular bowl
离心分离设备
3.多室离心机
操作:间歇式,粒度筛分,澄清的分 离液经溢流口或由向心泵排出
应用: A、液-液分离; B、固相浓度小于5%的固—液分离。
主要技术参数: A、3-7个分离室(若干同心圆分隔成); B、分离因子2000-8000g; C、处理能力2.5-10 m3/h; D、颗粒d >0.1m,固体浓度<5%。
常用于抗菌素液-液萃取分离,果汁和酒类饮料的澄清等。
离心分离设备
4.碟片式离心机
A、10-100个锥顶角为60-100的锥形碟片; B、碟片间距很短0.5-2.5mm。
碟片式离心机
A、人工排渣碟片离心机
操作:间歇式 应用:
A、液-液分离; B、固相浓度小于2%的固—液分离; C、澄清作业。 主要技术参数: A、固体浓度1-2% ; B、离心力很高。
分布的差异
第一节 离心分离原理
离心力:
一、离心沉降原理
离心沉降速度:
球形颗粒沉降的受力情况
离心沉降速率:在强大离心力的作用下,单位时
间内物质运动的距离。
离心分离原理
相对离心力(RCF) 在离心力场的作用下,颗粒所受的离心力相
当于地球重力的倍数,单位是重力加速度g。
离心分离因子Fr,离心分离因数Fr,离心力强度 ——离心力/重力;离心加速度/重力加速度
离心分离设备
三、离心过滤设备
离心过滤机 设有一个开孔转鼓,
可以分离固体密度大 于或小于液体密度的 悬浮液。可分连续式 和间歇式 a——分批立式轴 b——分批卧式轴 c——连续锥形滤网 d——连续推送式
离心过滤设备类型
离心分离设备
常用于抗生素、酶、氨基酸、酵母、淀粉、微生物 或单细胞蛋白质等
碟片式离心机
C、活门(活塞)排渣碟片离心机
操作:断续式 应用:
A、可用于难分离的物料; B、悬浮液分离。 主要技术参数: A、固体浓度<5% ; B、颗粒d为0.1-500um; C、固液密度差>0.01g/cm3 ; D、处理能力达40m3/h; E、离心力强度5000-9000g。
离心分离原理
二、离心过滤原理
离心过滤是将 料液送入有孔 的转鼓并利用 离心力场进行 过滤的过程, 以离心力为推 动力完成过滤 作业,兼有离 心和过滤的双 重作用。
第二节 离心分离设备
一、离心分离设备概述
离心机分类: ——离心力 (或转速) ——使用温度 ——容量与用途 ——放置方式 ——排渣方式
离心分离设备
5、螺旋卸料沉降离心机Leabharlann 操作:连续式 ——立式、卧式
应用: A、固液分离; B、高浓度的大颗粒。 主要技术参数: A、分离因子<6000g;转鼓直径--900mm; B、适应的颗粒直径2um-5mm,固体含量1-50%; C、固液密度差>0.05g/cm3; D、处理量可达60t/h; E、操作温度高,可>300C;操作压力一般为常压。 常用于胰岛素及胰酶分离、淀粉精制、污水处理
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