生物碱显色剂
中药化学《生物碱》重点总结及习题
生物碱的碱性强弱与pKa的关系：pKa＜2为极弱碱，pKa2~7为弱碱，pKa7~11为中强碱，pKa11以上为强碱
3．影响碱性强弱的因素
（1）氮原子的杂化方式：SP3>SP2>SP1
四氢异喹啉（SP3pKa9.5） 异喹啉（SP2pKa5.4） 氰类（SP 中性 ）
③碱性极弱的生物碱（酰胺类生物碱）和酸生成的盐不稳定，其酸水溶液用氯仿萃取时，生物碱可转溶于氯仿而被分离。
表10-2 生物碱溶解性规律
水 酸水 碱水、甲（乙）醇、 苯 乙醚 CHCl3、 CCl4石油醚
亲脂性生物碱-+-++ （++）-
亲水性生物碱++++--
生物碱盐 ++-+--
※两性生物碱、酰胺类生物碱、内酯型生物碱：既可溶于酸水，也可溶于碱水中，其余同脂溶性生物碱。
二、旋光性
大多有旋光（不对称碳原子或不对称中心），且多呈左旋性。通常左旋体的活性大于右旋体。
三、溶解性
1．游离态 指大多数的仲胺、叔胺类生物碱，多为亲脂性的，极性较小。
2．盐 为离子型，极性大。
生物碱盐溶解性规律：
①无机酸盐的水溶度大于有机酸盐的水溶度。
②无机酸盐中，含氧酸盐的水溶度大于卤代酸盐。
③卤代酸盐中，盐酸盐的水溶度最大，氢碘酸盐的水溶度最小。
附注：用方法二分离时，应采用多缓冲纸色谱（分配原理）进行先导分离。
* 碱性弱的生物碱易游离（脂溶性，易于CHCl3）。
** 碱性强的生物碱易成盐（离子型，易于水）。
（2）利用生物碱的极性（溶解性）差异分离
分子结构的不同 极性的差异 对特殊溶剂的溶解性能不同而分离
生物碱的显色反应
生物碱的显色反应生物碱的显色反应啊，就像是一场神秘的魔法秀，每次看到那些颜色变化，都让人忍不住惊叹。
我记得在学校的化学实验室里，第一次做生物碱显色反应实验的时候，那场景可真是有趣极了。
老师拿出了几种含有生物碱的植物提取物，有从颠茄里提取的，还有从曼陀罗里弄出来的，这些东西看起来普普通通，就像一些不起眼的小粉末。
当老师把一种生物碱溶液滴到一块白色的瓷板上，然后又加入了一种叫 Dragendorff 试剂的东西。
刚开始的时候，瓷板上的溶液还是无色透明的，就像一杯平淡无奇的白开水。
可没过一会儿，神奇的事情发生了！溶液开始慢慢地变色，从透明逐渐变成了橙红色，就像夕阳的颜色一点点在瓷板上晕染开来。
我当时眼睛都瞪得大大的，死死地盯着瓷板，生怕错过任何一个瞬间。
旁边的同学也都发出了“哇”的惊叹声，就像看到了一场精彩的魔术表演。
接着，老师又换了一种生物碱，这次用的是小檗碱。
当它和另一种试剂混合后，溶液先是变成了黄色，然后又迅速地变成了绿色，那绿色鲜艳得就像春天刚冒出来的嫩草。
我好奇地凑上前去，想看看这颜色到底是怎么变出来的。
我闻了闻，有一股淡淡的气味，说不上来是什么味道，有点像植物的清香，但又夹杂着一些化学试剂的特殊味道。
我自己也动手尝试了一下。
我小心翼翼地吸取了一点生物碱溶液，滴到瓷板上，然后按照老师教的步骤加入试剂。
我的手都有点微微发抖，心里既紧张又兴奋。
当看到溶液开始变色的时候，我高兴得差点跳起来。
我做的这个反应最后呈现出了一种漂亮的紫色，就像薰衣草的颜色。
我看着自己的“杰作”，心里满是成就感，就像一个小魔法师成功地施展了一个魔法咒语。
在这个过程中，我还发现不同的生物碱和不同的试剂搭配，会产生各种各样的颜色变化。
这就像不同的服装搭配会给人带来不同的风格一样。
有的组合会产生明亮的颜色，有的则是比较深沉的色调。
这些显色反应可不仅仅是为了好看，它们对于鉴别生物碱的种类有着非常重要的作用。
就像一把把钥匙，能打开不同生物碱的“身份之门”。
常用的显色剂
实验室最常用的显色剂及其配制方法：1、香草醛-硫酸(vanillin-sulphuric acid)用于精油、高级醇、酚等试液：香草醛1g溶于100ml硫酸或香草醛0.5g溶于100ml硫酸-乙醇(1：1)溶液。
喷或浸后处理：于120摄氏度加热至颜色最深。
2、三氯化铁(ferric chloride) 用于酚类、羟酰胺酸。
试液：1%~5%三氯化铁的0.5mol/L盐酸溶液。
注：酚类呈兰色或绿色，羟酰胺酸呈红色。
3、碘化铋钾试剂(dragendorff reagent) 用于生物碱和某些含氮化合物。
试液：a：次硝酸铋0.85g溶于10ml冰乙酸与40 ml水中。
b：碘化钾8g溶于20ml水中。
方法：试液a和b等量混合，置棕色瓶保存试液。
用前将试液1ml 加2ml冰乙酸和10ml水混合。
注：显色斑点呈橙红色。
4、邻苯二甲酸苯胺用于还原糖。
试液：苯胺0.93g和邻苯二甲酸1.66g溶于100ml以水饱和的正丁醇中。
喷或浸后处理：于105摄氏度加热10min，醛己糖及甲基戊糖呈棕色，醛戊糖呈樱桃红色5、硫酸(sulphuri acid) 通用显色剂。
试液：a、5%浓硫酸乙醇或乙酐溶液b、浓硫酸与甲醇或乙醇等体积混合c、15%浓硫酸正丁醇溶液方法：用以上任一试液喷洒或浸湿晾干，于110摄氏度加热至呈色，或达最强荧光。
6、三氯化铝(aluminium chloride) 用于黄酮类化合物。
试液：1%三氯化铝乙醇溶液，紫外光长波下斑点显黄色荧光。
7、碘(iodine) 通用显色剂。
试液：a：0.5%碘的氯仿溶液。
喷后处理：待薄层上过量碘挥散，喷1%淀粉溶液，斑点转为兰色，如有过量碘留在薄层上，则背景也呈兰色。
b：碘蒸气：将少许碘晶体放入一密闭的容器内，使之充满饱和碘蒸气，将薄层放入容器片刻或数分钟即显色。
有时在容器内放一小杯水增加湿度，可提高显色的灵敏度，可提高显色的灵敏度。
在化合物斑点处显黄-棕色。
当前位置：化学中国论坛8、磷钼酸(molybdophosphoric acid)用于还原性化合物、类脂、甾体化合物等。
常用显色剂配制方法
常用显色剂配制方法Company Document number：WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998碘：不饱和或者芳香族化合物配制方法在100ml广口瓶中，放入张滤纸，少许碘粒或者在瓶中，加入10g碘粒，30g硅胶紫外灯含共轭基团的化合物，芳香化合物硫酸铈：生物碱配制方法10%硫酸铈(IV)+15%硫酸的水溶液氯化铁苯酚类化合物配制方法1% FeCl3 + 50% 乙醇水溶液.桑色素(羟基黄酮)广谱, 有荧光活性配制方法% 桑色素+甲醇茚三酮氨基酸配制方法茚三酮 + 100mL of 正丁醇+ 醋酸二硝基苯肼(DNP)醛和酮配制方法12g二硝基苯肼+ 60mL 浓硫酸 + 80mL 水 + 200mL 乙醇香草醛(香兰素)广谱配制方法15g 香草醛 + 250mL 乙醇 + 浓硫酸高锰酸钾含还原性基团化合物，比如羟基，氨基，醛配制方法KMnO4 + 10g K2CO3 + 10% NaOH + 200mL 水. 使用期3月溴甲酚绿羧酸，pKa<=配制方法在100ml乙醇中，加入溴甲酚绿，缓慢滴加的NaOH水溶液，刚好出现蓝色即至。
钼酸铈广谱配制方法235 mL 水 + 12 g 钼酸氨 + g 钼酸铈氨 + 15 mL 浓硫酸茴香醛(对甲氧基苯甲醛)1广谱配制方法135 乙醇 + 5 mL 浓硫酸 + mL of 冰醋酸 + mL 茴香醛，剧烈搅拌，使混合均匀.茴香醛(对甲氧基苯甲醛)2萜烯，桉树脑(cineoles), withanolides, 出油柑碱(acronycine)配制方法茴香醛:HClO4:丙酮:水 (1:10:20:80)磷钼酸(PMA)广谱配制方法10 g of 磷钼酸+100 mL 乙醇常用显色剂配制一、通用显色剂1．碘，检查一般有机物。
碘蒸气对很多化合物显黄棕色。
在一个密闭的玻璃缸内予先放入碘片，使缸内空气被碘蒸气饱和，将薄层或纸层放入缸内数分钟即可显色。
生物碱
第九章生物碱一、填空1.小檗碱呈黄色，而四氢小檗碱则无色，其原因在于（结构中有较长的共轭体系）。
2.弱碱性生物碱在植物体内主要是以（游离）状态存在。
3.在生物碱的色谱检识中常用的显色剂是（碘化铋钾），它与生物碱斑点作用常先（橘红）色。
4.总生物碱的提取方法大致有（溶剂法）、（离子交换树脂）和（沉淀法）三类。
5.麻黄碱和伪麻黄碱的分离可利用它们的（草酸）盐在水中的溶解度不同，（草酸麻黄碱）在水中溶解度比较小，能先行结晶检出，（草酸伪麻黄碱）则留在母液中。
6.生物碱沉淀反应可应用于：（预试中是否存在生物碱）、（在分离过程中可作为追踪生物碱的指标）、（分离提纯生物碱）等。
7.用硅胶柱层析进行生物碱的薄层色谱时，为克服硅胶的酸性，得到集中的斑点，有两种方法：（用高碱或缓冲液代替水来制硅胶板）、（用碱性溶剂作为展开剂）。
8.用pH 梯度萃取法分离生物碱，是将总生物碱溶于有机溶剂中，用不同pH 缓冲液进行萃取，缓冲液pH 值（高）到（低），所得到的生物碱的碱度则由（强）到（弱）。
二、判断题1.所有生物碱都有不同程度的碱性。
√2.含氮原子的杂环化合物都是生物碱。
×3.一般生物碱的旋光性都是左旋的。
×4.在所有生物碱中，季铵碱的碱性最强。
×5.生物碱与碘化铋钾多生成红棕色沉淀。
√6.生物碱盐都易溶于水中。
×三、选择题（单选）1.下列关于生物碱的论述，正确的是（A）A.含有氮原子B. 显碱性C.自然界的所有含氮成分D.在植物体内以盐的状态存在2.生物碱不具有的特点是（D）A.分子中含氮原子B.氮原子多在环内C. 具有碱性D. 分子中多有苯环3.小檗碱的结构类型是（B）A. 喹啉类B.异喹啉类C. 哌啶类D.吲哚类4. 下列生物碱碱性最强的是（D）A. 伯胺生物碱B. 仲胺生物碱C. 叔胺生物碱D. 季胺生物碱5. 下列生物碱碱性最弱的是（D）A. 伯胺生物碱B. 仲胺生物碱C. 叔胺生物碱D. 酰胺生物碱6.决定生物碱碱性最主要的因素是（A）A.氮原子的杂化方式B. 诱导效应C. 共轭效应D. 分子内氢键三、多选题题1. 使生物碱碱性减弱的因素是（AE）A.吸电子诱导效应B.供电子诱导效应C.供电子共轭效应D.立体效应2. 使生物碱碱性减弱的吸电子基团是（BCD）A. 烷基B.羰基C.醚基D.苯基第四章醌类化合物一、填空1.醌类化合物主要有苯醌、（萘醌）、（菲醌）、（蒽醌）四种类型。
常用试剂配制及显色方法详解
常用试剂配制及显色方法详解(一)通用显色剂1.重铬酸钾--硫酸一般有机物均能显色，不同化合物显示不同颜色。
喷洒剂:5克重铬酸钾溶于100ml，40%硫酸中。
喷洒后加热至150oC斑点出现。
2.碘:检查一般有机物(1)碘蒸汽:在一个密闭玻璃皿先放入碘片，使缸内空气被碘蒸气饱和将薄层或纸层放入缸内数分钟即显色，有时在缸内放一盛水的小杯，增加缸内的湿度，可提高显色的灵敏度。
(2)0.5%碘的氯仿溶液，取出挥发散过量的碘再喷1%淀粉的水溶液，斑点转成蓝色。
3.碘--碘化钾溶液:很我有机物虽黄色(配法见后)。
4.5%--磷钼酸乙醇溶液:喷后120oC烤，还原性物质显兰色，再用氨气熏，则背景变为无色。
5.20%磷酸乙醇溶液:喷后120oC，还原性物质显兰色。
6碱性高锰酸钾试剂:还原性物质在淡红背景上显黄色。
溶液I:1%高锰酸钾溶液。
:5%碳酸钠溶液。
溶液II溶液I和溶液II等量混合使用。
7.中性0.05%高锰酸钾溶液:易还原性物质在淡红背景上显黄色。
8.硝酸银--氢氧化铵(Tollen's--zoffaronl)试剂，喷后105oC烤5~10分钟，还原性物质显黑色。
溶液I:0.1N硝酸银溶液。
溶液II:氢氧化铵溶液。
临用前溶液I和溶液II以1:5混合。
注意:放久则形成爆炸性的叠氦化银。
9硝酸银--高锰酸钾试剂:还原性物质在兰绿色背景上立即显黄色。
溶液I:0.1N硝酸银溶液:2N氢氧化铵溶液:2N氢氧化钠(1:1:2)。
临用前配制。
溶液II:高锰酸钾0.5g，碳酸钠1g，加水成100ml溶液,临用前溶液I和溶液II等量混合。
10.四唑试剂:还原性物质，在室温或微加热时显紫色。
溶液I:0.5%四唑兰甲醇溶液。
溶液II:6N氢氧化钠溶液。
临用前溶液I和溶液II等量混合。
11.铁氰化钾:三氯化铁试剂:还原性物质显兰色，再喷射2N/L盐酸溶液，则兰色加深。
溶液I:1%铁氰化钾溶液。
溶液II:2%三氯化铁溶液。
生物碱类药物含量测定方法
生物碱类药物含量测定方法
生物碱是一类具有生物活性的碱性化合物，在自然界中广泛存在，尤其在植物和微生物中含量丰富。
生物碱的含量测定方法有多种，常用的方法包括比色法、紫外-可见分光光度法、荧光法、薄层色谱法、高效液相色谱法等。
1.比色法：该方法是通过生物碱与特定的显色剂发生化学反应，
生成有色离子或分子，根据颜色的深浅程度进行含量测定的方
法。
例如，苦参碱可以通过与溴甲酚绿显色剂发生反应来进行
含量测定。
2.紫外-可见分光光度法：该方法是通过测量生物碱溶液在紫外和
可见光区的吸收光谱，进而计算其含量的方法。
例如，盐酸吗
啡碱可以在254nm波长处进行含量测定。
3.荧光法：该方法是利用生物碱分子在特定波长激发下发出的荧
光强度来计算其含量的方法。
例如，荧光素钠在紫外光激发下
可以发出绿色荧光，可以用于含量测定。
4.薄层色谱法：该方法是利用生物碱在不同极性溶剂中的分配系
数差异，将样品溶液展开在薄层板上，然后用显色剂显色，根
据斑点面积或荧光强度来计算生物碱的含量。
5.高效液相色谱法：该方法是利用高效液相色谱仪对生物碱进行
分离和检测，然后根据峰面积或峰高来计算生物碱的含量。
该
方法具有分离效果好、灵敏度高、重现性好等优点，是生物碱
含量测定的常用方法之一。
生物碱显色剂
（6）硫酸高铈铵1％本品的85％磷酸溶液。用于吲哚类，长春花生物碱显各5ml浓硫酸与35ml水混合，放冷后加对二甲氨基苯甲醛125mg，再加入5％三氯化铁溶液0.05ml。本试液可保存一周。用于麦角生物碱。
（11）三氯化铁-碘三氯化铁5g、碘2g溶于50ml丙酮与50ml 20％酒石酸的混合液中。用于黄嘌呤生物碱类，不同生物碱显不同颜色。
（12）硫酸铈-硫酸（改良Sonnenschein试剂）硫酸铈0.1g混悬于4ml水中，加1g三氯乙酸，加热煮沸，放冷，逐滴加入浓硫酸直至浑浊消失。用于生物碱、含碘有机化合物的显色，喷后110℃烤几分钟，不同生物碱显不同颜色。
（23）三氯化锑试剂25g三氯化锑溶于75g氯仿中成饱和溶液。用于秋水仙生物碱类。
（2）碘-碘化钾（Wagner）碘1g与碘化钾10g溶于50ml水（微温），加2ml乙酸,加水至100ml。用于生物碱，显棕褐色。
（3）碘铂酸5ml 15％氯化铂溶液加45ml 10％碘化钾溶液，用水稀释至100ml。用于生物碱，不同生物碱显不同颜色。
（4）碘铂酸钾10％六氯铂酸溶液3ml与97ml水混合，加100ml 6％碘化钾溶液，混匀。新鲜配制。用于生物碱与其他有机含氮化合物，不同生物碱显不同颜色。
（13）硫氰酸钴（Ⅱ）试液硫氰酸铵3g、氯化钴1g溶于20ml水中。用于生物碱，伯、仲、叔胺类。
（14）碘化汞钾（Meyer）试剂1.36g氯化汞和5g碘化钾各溶于20ml水中，混合后加水稀释至100ml即可。
（15）硅钨酸（Bertrand）试剂5g硅钨酸溶于100ml水中，加盐酸少量调至pH＝2左右。
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（7）对二甲氨基苯甲醛-硫酸65ml浓硫酸与35ml水混合，放冷后加对二甲氨基苯甲醛125mg，再加入5％三氯化铁溶液0.05ml。本试液可保存一周。用于麦角生物碱。
（8）肉桂醛-盐酸肉桂醛5ml、乙醇95ml和5ml 36％盐酸混合，新鲜配制。用于吲哚类衍生物。
（9）呫吨氢醇0.1g本品溶于90ml乙醇中，加10ml 36％的盐酸，用前新鲜配制。用于色氨酸及其他吲哚类生物碱。
（10）氯化铁-过氯酸0.5mol/L三氯化铁溶液1ml与35％过氯酸溶液50ml混合。用于吲哚类生物碱。
（11）三氯化铁-碘三氯化铁5g、碘2g溶于50ml丙酮与50ml 20％酒石酸的混合液中。用于黄嘌呤生物碱类，不同生物碱显不同颜色。
（3）碘铂酸5ml 15％氯化铂溶液加45ml 10％碘化钾溶液，用水稀释至100ml。用于生物碱，不同生物碱显不同颜色。
（4）碘铂酸钾10％六氯铂酸溶液3ml与97ml水混合，加100ml 6％碘化钾溶液，混匀。新鲜配制。用于生物碱与其他有机含氮化合物，不同生物碱显不同颜色。
（5）Ehrlich①10％对二甲氨基苯甲醛盐酸溶液与丙酮按1:4混合；②对二甲氨基苯甲醛1g，溶于100ml 96％乙醇中。用于吲哚类,有时喷后要加热。
（23）三氯化锑试剂25g三氯化锑溶于75g氯仿中成饱和溶液。用于秋水仙生物碱类。
（12）硫酸铈-硫酸（改良Sonnenschein试剂）硫酸铈0.1g混悬于4ml水中，加1g三氯乙酸，加热煮沸，放冷，逐滴加入浓硫酸直至浑浊消失。用于生物碱、含碘有机化合物的显色，喷后110℃烤几分钟，不同生物碱显不同颜色。
（13）硫氰酸钴（Ⅱ）试液硫氰酸铵3g、氯化钴1g溶于20ml水中。用于生物碱，伯、仲叔胺类。
（14）碘化汞钾（Meyer）试剂1.36g氯化汞和5g碘化钾各溶于20ml水中，混合后加水稀释至100ml即可。
（15）硅钨酸（Bertrand）试剂5g硅钨酸溶于100ml水中，加盐酸少量调至pH＝2左右。
（16）苦味酸试剂1g苦味酸溶于100ml水中。
（17）鞣酸试剂鞣酸1g加乙醇1ml溶解后再加水至10ml。
（18）4-甲基伞形酮0.02g本品溶于35ml乙醇，加水至100ml。用于含氮杂环化合物。
（19）硫酸铜-联苯胺①0.3g硫酸铜溶于100ml水-乙醇（5：4）的混合液中；②0.1％联苯胺的50％乙醇溶液。用时先喷试液①，于60℃干燥后再喷试液②。用于吡啶单羧酸的显色。
（20）氯化铜0.5％氯化铜溶液。用于肟类。
常用生物碱显色剂
（1）改良碘化铋钾（Dragendorff）试剂①碱式硝酸铋0.85g溶于10ml冰醋酸与40ml水中；②碘化钾0.8g溶于20ml水中。试液①与试液②等量混合置棕色瓶内保存作贮备液。用前将1ml贮备液、2ml冰醋酸与10ml水混合。用于生物碱与某些含氮化合物，显橙红色。
（2）碘-碘化钾（Wagner）碘1g与碘化钾10g溶于50ml水（微温），加2ml乙酸,加水至100ml。用于生物碱，显棕褐色。
（21）硝普钠-铁氰化物10％氢氧化钠溶液、10％硝普钠溶液、10％铁氰化钾溶液和水按（1：1：1：3）混合，冰箱内保存（可保存数周），使用前取适量与等体积丙酮混合。用于氯基氰、胍、肌酸、肌酸酐、脲和硫脲及其衍生物的显色。
（22）硝普钠-过氧化氢5％硝普钠溶液2ml、10％氢氧化钠1ml与5ml 3％过氧化氢溶液混合后，加15ml水。冰箱可保存数日。用于胍、尿素、硫脲及其衍生物、肌酸和肌酸酐的检测。