一步法RT-PCR试剂盒使用说明书
天根 一步法逆转录PCR试剂盒说明书
通用型一步法RT-PCR试剂盒说明书前言本试剂盒适用于对各种动、植物、病毒RNA进行PCR 检测。
用户可根据被分析基因，配合一对引物，或同时采用Taqman 荧光探针，先将提取的RNA反转录(reverse transcription).成cDNA，再经过聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)技术对特异性片段进行扩增，进行电泳或实时荧光分析。
一步法RT-PCR可使RT及PCR过程在单管中完成，比分开进行RT及PCR更方便。
由于不需要在RT完成后打开反应管，尽可能地避免了样品间的相互污染。
规格20人份适用仪器适用于各种普通PCR仪器和实时荧光PCR仪器。
试剂盒组成试剂准备根据下表配制反应液：振荡混匀后，按每管 40 μl(可根据需要调整)分装，备用。
PCR扩增将均一化后的RNA提取样本10 μl加入各反应管，混匀、离心后，置普通PCR仪器或实时荧光PCR仪器上进行扩增及实时检测。
结果判断扩增产物可直接进行电泳检测；实时荧光检测可根据相应仪器的配套软件进行结果分析。
保存及有效期-20℃保存，有效期为6个月。
注意事项1. 开始检测前请仔细阅读本说明书全文。
2. 整个检测过程中，反应体系的配制、样本处理及加样、PCR扩增（荧光检测）应分区进行以避免污染。
3. 操作人员应戴口罩，经常更换一次性手套，以避免RNA酶的污染；实验中所用器具均应经过除RNA酶处理。
4. 试剂盒组成中的试剂使用前应充分融化并混匀。
5. 进行实时荧光分析时，应使用透光性能较好的一次性薄壁离心管；.荧光探针应避光保存，加入缓冲液中后，应尽快进行扩增。
6. 注意适当处理检测中遗留的样品、扩增产物及可能被污染的试剂。
生产企业：上海蓝创生物科技发展有限公司。
TaKaRa一步法RT-PCR提取法
0.5 μl
PrimeScript RT Enzyme Mix Ⅱ
0.5 μl
PCR Forward Primer（10 μM）
0.5 μl 0.2 μM*1
PCR Reverse Primer（10 μM）
0.5 μl 0.2 μM*1
TaqMan® Probe
1 μl*2
Total RNA
2 μl*3
独自开发的 Buffer 系统相结合，具有高扩增效率，高扩增灵敏度之特点。 3. One Step RT-PCR Buffer III 是一种 2×浓度的 Premix Type 试剂，操作简单，能有效避免污染。
● 使用注意
以下为使用本试剂盒时的注意事项，使用前请一定认真阅读。 1） 当同时需要进行数次 Real Time One Step RT-PCR 反应时，应先配制各种试剂的混合液（Master
1一步法荧光定量反转录PCR试剂盒
注意事项：
●当同时需要进行数次Real Time One Step qRT-PCR反应时，应先配制各种试剂的混合液（M aster M ix；其中 包括RNase-free ddH2O、Buffer、各种酶等），然后再分装到每个反应管中。这样可使所取的试剂体积更准确， 减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验样品之间产生的误差。 ●使用Enzyme M ix和TRUEscript RTase时，分取之前要小心地瞬间离心收集到反应管底部；由于酶保存液中含 有高浓度的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。 ●2×qRT-PCR M ix内含Sybr Green I，保存或配制One Step qRT-PCR反应液时应避免强光照射。 ●为保证反应成功建议使用高质量的RNA模板。 ●不同的片段，所需最佳RNA模板用量不同，过多的RNA会抑制反应，建议根据反应调整模板用量。 ●只能使用特异性引物，不能使用 Oligo(dT) 和 Random Primer 进行反应。
TUREscript One Step qRT-PCR Kit
包 装 量：
目录编号 154101 154102
包装单位 25次 50次
使用说明书
组成
2×qRT-PCR M ix(Contains Sybr Green) Enzyme M ix (Contains HotM aster DNA Polymerase and RNasin) TRUEscript RTase
反应体系（50 μl）：
注意：2×qRT-PCR Buffer 低温时可能有结晶析出，应手心加热或者涡旋振荡恢复融解后使用。短期使用可放 4℃ 冰箱。
One Step RT-PCR Kit
One Step RT-PCR Kit货号：T2240规格：50T/200T（25μl体系为例）保存：-20℃保存长期保存，使用前应混匀，避免反复冻融。
产品内容：25×One Step RT-PCR RTase mix5×One Step RT-PCR Buffer产品介绍：One Step RT-PCR Kit是一步法（One Step）RT-PCR反应的专用试剂，反应过程在同一管内连续进行，避免开管，能有效防止污染。
本品含有高温反转录酶（RNase H-）和新型热启动酶，采用优化配方的专用Buffer，具有更高的反转录和PCR扩增效率，适合于低浓度RNA模板的高灵敏度扩增。
试剂原理：One Step RT-PCR Kit首先采用反转录酶以RNA为模板合成cDNA，然后再以合成的cDNA为模板，经过PCR扩增反应的热变性、引物退火、链延伸三个步骤循环往复，在短时间内扩增得到大量DNA片段，扩增得到的目的产物3’末端含有一个A碱基，可直接用于T/A克隆。
反应条件：反转录：50℃20分钟；变性：95℃3分钟；变性：95℃10~20秒；退火：56-64℃10~30秒；35~50个循环延伸：72℃10~60秒。
保温：72℃5min第1页，共2页RT PCR反应体系配制：试剂25μl体系50μl体系终浓度25×One Step RT-PCR RTase mix121×5×One Step RT-PCR Buffer5101×Primer1（10μM）0.5-2.5μl1-5μl0.2~1.0μMPrimer2（10μM）0.5-2.5μl1-5μl0.2~1.0μMRNA---ddHO---2Total volume25μl50μl1.通常引物终浓度为0.2μM可以得到较好结果。
反应性能较差时，可以在0.1～1.0μM范围内调整引物浓度；2.不同种类的模板中含有的靶基因的拷贝数不同，必要时可进行梯度稀释，确定最佳的模板添加量。
东盛生物 RT-PCR Kit（逆转录试剂盒） 说明书
0.6 μl RNasin , M-MLV ； 按下列条件进行反转录反应 42℃ 温浴 60 min（随即引物 37℃ 温浴 60 min） ； 5 终止反应 70℃ 温浴 5 min 终止反应，置冰上进行后续实验或-20℃ 保存。 6 用 RNase-free ddH2O 将反应体系稀释到 50 μl ，取 2-5 μl 进行 PCR 扩增反应。
20 次逆转录反应，R1012 可进行 100 次逆转
录反应（20 μl 标准 PCR 反应体系，每次使用 M-MLV 1 μl）。
M-MLV 储存液 20 mM Tris-HCl (pH 7.5) 200 mM NaCl 0.1 mM EDTA 1 mபைடு நூலகம் DTT 0.01% NP-40 50% glycerol 5xfirst-strand buffer 成分 250 mM Tris-HCl (pH 8.3 at 25 ℃) 375 mM KCl 15 mM MgCl2 50 mM DTT 保存条件 各组分均-20℃保存，避免反复冻融。
●
在逆转录反应中经常加入 RNase 抑制剂以增加 cDNA 合成的长度和产量。RNase 抑制剂要在第一链合成反应中，在缓冲
液和还原剂（如 DTT）存在的条件下加入，因为 cDNA 合成前的过程会使抑制剂变性，从而释放结合的可以降解 RNA 的 RNase。蛋白 RNase 抑制剂仅防止 RNase A，B，C 对 RNA 的降解，并不能防止皮肤上的 RNase，因此尽管使用了这些抑 制剂，也要小心不要从手指上引入 RNase。
----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------广州东盛生物科技有限公司 电话：020-87791356 传真：020-87791381 网址：
天根 一步法逆转录PCR试剂盒说明书
通用型一步法RT-PCR试剂盒说明书前言本试剂盒适用于对各种动、植物、病毒RNA进行PCR 检测。
用户可根据被分析基因，配合一对引物，或同时采用Taqman 荧光探针，先将提取的RNA反转录(reverse transcription).成cDNA，再经过聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)技术对特异性片段进行扩增，进行电泳或实时荧光分析。
一步法RT-PCR可使RT及PCR过程在单管中完成，比分开进行RT及PCR更方便。
由于不需要在RT完成后打开反应管，尽可能地避免了样品间的相互污染。
规格20人份适用仪器适用于各种普通PCR仪器和实时荧光PCR仪器。
试剂盒组成试剂准备根据下表配制反应液：振荡混匀后，按每管 40 μl(可根据需要调整)分装，备用。
PCR扩增将均一化后的RNA提取样本10 μl加入各反应管，混匀、离心后，置普通PCR仪器或实时荧光PCR仪器上进行扩增及实时检测。
结果判断扩增产物可直接进行电泳检测；实时荧光检测可根据相应仪器的配套软件进行结果分析。
保存及有效期-20℃保存，有效期为6个月。
注意事项1. 开始检测前请仔细阅读本说明书全文。
2. 整个检测过程中，反应体系的配制、样本处理及加样、PCR扩增（荧光检测）应分区进行以避免污染。
3. 操作人员应戴口罩，经常更换一次性手套，以避免RNA酶的污染；实验中所用器具均应经过除RNA酶处理。
4. 试剂盒组成中的试剂使用前应充分融化并混匀。
5. 进行实时荧光分析时，应使用透光性能较好的一次性薄壁离心管；.荧光探针应避光保存，加入缓冲液中后，应尽快进行扩增。
6. 注意适当处理检测中遗留的样品、扩增产物及可能被污染的试剂。
生产企业：上海蓝创生物科技发展有限公司。
一步法 RT-PCR 说明书
一步法RT-PCR使用说明书本试剂盒适用于各种动、植物、病毒RNA的PCR 检测，反转录PCR反应体系为50µl，用户在使用此试剂盒之前请详细阅读此说明书。
规格：10次试剂盒组成：名称浓度体积dNTPs10 mM50µl5×反应缓冲液100µlAMV反转录酶5u/µl20µlTaq DNA聚合酶5u/µl20µlDEPC-ddH2O 1.5mlRNasin 40u/µl 20µl实验操作:1．取103-106拷贝的特异目的模板或1pg-5µg的总RNA于一支0.2或0.5ml离心管中，65-70℃保温5-10分钟，离心数秒，放置冰浴中。
2．按照指定的体积将DEPC-ddH2O，5x 反应缓冲液，dNTPs，特异上下游引物及25mM MgSO4加入到置于冰上的0.5ml薄壁反应管中，配制成反应混合物。
反复吹吸使混合物中各组分混合均匀。
然后向反应体系中加入AMV反转录酶和Taq DNA聚合酶和RNasin。
将反应管轻柔震荡10秒以使该混合物混匀。
如需要做多个样品的RT-PCR反应，则应在冰上先配制一总的混合物，该混合物由反应体系中各组分按其指定体积的适当倍数组成，然后取该总混合物48µl加入到每一反应管中。
向各反应管中加入模板以启动反应。
每次加样均应使用单独的加样器枪头，小心勿使样品之间相互污染。
体积终浓度DEPC-ddH2O（加至终体积为50µl）Xµl5× 反应缓冲液10µl 1×dNTP混合物（每dNTP 10mM）1µl 0.2mM下游引物* 50pmol 1µM上游引物* 50pmol 1µM25mM MgCL2 2µl1mM AMV反转录酶（5U/µl）1µl 0.1U/µlTaq DNA聚合酶（5U/µl）1µl 0.1U/µlRNasinRNA样品或对照** Yµl终体积50µl* 计算引物为50pmol时所对应的质量（纳克）的通用公式为：50pmol=16.3ng×b；b为引物碱基数目。
一步法RT-PCR说明书
一步法RT-PCR说明书
TaKaRa PrimeScript TM One Step RT-PCR Kit Ver.2
试剂盒使用说明书
该试剂盒采用一步（One step）RT-PCR法。
RNA→cDNA →PCR反应操作在同一反应体系中连续进行，反应中途不需添加任何试剂。
实验操作
1.配制RT-PCR反应液，以n个反应管为例。
首先，配制如下混合体系，混匀后分加到n个PCR反应管中。
RNase Free dH2O 20μI X (n+1)
2x1 Step Buffer 25μI X (n+1)
PrimeScript 1 Step Enzyme Mix 2μI X (n+1)
其次，向PCR反应管中加入欲检测病原的扩增引物（即上下游引物）和样品抽提RNA。
上游引物1μI
下游引物1μI
样品RNA 1μI
总体系：50 μI
2．进行RT-PCR反应
50℃30 min
94℃ 2 min
94℃30 sec
50～65℃（以相应的引物而定） 30 sec 30 循环72℃ 1 min
72℃ 10 min
试剂盒自带有确保试剂有效性的阳性对照RNA以及相应的扩增引物（Positive Control RNA, Control F-1 Primer, Control R-1 Primer）,扩增产物为462bp。
扩增后如果试剂盒阳性对照电泳结果为阳性说明试剂盒所有试剂有效，RT-PCR反应液体系没问题。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
一步法RT-PCR 检测试剂盒 (一步法RT-PCR 扩增试剂盒)
(目录号HS0612-2)
产品包装
保存条件
-20℃
产品简介
本试剂盒是专为一步法RT-PCR 实验研制，逆转录和PCR 在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，在避免污染的同时提高了检测灵敏度和实验效率。
本试剂盒包括全新高效逆转录酶、快速热启动DNA 聚合酶，同时包含适用于逆转录和PCR 扩增的反应缓冲液和实验中所必需的反应组分。
经过重组表达的SuperRT 逆转录酶RNase H 活性缺失，减少了逆转录反应中RNA 的降解，更容易获得全长的cDNA 。
该逆转酶逆转录效率高，可对少量 RNA 模板进行良好的逆转录反应。
SuperRT 逆转录酶与RNA 亲合性高，能通读GC 含量高，二级结构复杂的RNA 模板，获得高产量的cDNA 。
PCR 反应使用的DNA 聚合酶具有扩增效率高、延伸速度快的优良性能。
独特的缓冲体系使逆转录酶和聚合酶同时发挥最大功效。
使用该试剂盒能够方便快捷的在同一个反应管内完成逆转录和PCR 扩增反应。
使用本试剂盒扩增得到的目的产物3′端附有一个″A ″碱基，可直接用于T/A 克隆。
北京厚生博泰科技有限公司
Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.
产品特点
1. 效率高，可以高效转录GC含量高，二级结构复杂的RNA模板。
2. 耐热性及稳定性强。
3. 操作简单迅速,最大限度的避免污染。
4. 独特的缓冲体系使逆转录酶和聚合酶同时发挥最大功效。
使用方法
1）一般PCR实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，退火时间一般为20 ~ 30秒，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2）延伸时间根据所扩增的片段大小设定，本产品中所包含的DNA Polymerase的扩增效率为1 kb/30s。
3）可根据扩增产物的下游应用设定循环数。
循环次数太少，扩增量不足；循环次数多，错配机率会增加，非特异性背景严重。
所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数。
5. 反应结束后取5 ul反应产物，加入适量上样缓冲液后进行电泳检测结果。