膜片钳使用规则
自动膜片钳系统安全操作及保养规程
自动膜片钳系统安全操作及保养规程前言自动膜片钳系统是一种高精度和高效率的加工工具，广泛应用于电子、机械、航空等领域。
本文将介绍自动膜片钳系统的安全操作和保养规程，以确保使用者的安全和系统的可靠性。
安全操作规程1. 在操作前的准备工作在使用自动膜片钳系统前，操作者应该进行以下准备工作：1.熟悉自动膜片钳系统的结构、原理、使用方法、操作规程和注意事项。
2.检查自动膜片钳系统的安全保护装置和紧急停止装置是否正常。
3.检查自动膜片钳系统的电源、水源、气源等供应设施是否正常。
4.清理自动膜片钳系统的工作区域和周边环境，保持干净整洁。
2. 在操作中的注意事项1.使用自动膜片钳系统时，必须穿戴个人防护用品，如手套、安全眼镜、口罩等。
2.操作前应检查自动膜片钳系统的刀具、夹具、钳口等部件是否固定牢固、安全可靠。
3.在操作自动膜片钳系统时，必须按照操作规程逐步进行，不得随意更改操作顺序，以免损坏设备或造成安全事故。
4.不要在自动膜片钳系统正常工作状态下随意拆卸和更换设备部件，必须在设备停止运转后方可进行。
5.在操作过程中，要经常检查自动膜片钳系统的各个部件的运行状态，如异常立即停机排查。
3. 在操作后的注意事项1.在完成自动膜片钳系统加工任务后，及时清理设备内外的各个部位和压缩气源系统管道。
2.将自动膜片钳系统的控制器设置到初始状态。
3.关闭自动膜片钳系统的电源、气源、水源等设备供应装置。
4.将设备周围区域清理干净，注意突出部位。
保养规程1. 定期维护正常使用自动膜片钳系统需要进行定期维护。
具体规定如下：1.安排专人进行设备日常维护，定期进行设备清洁、润滑、检测等工作。
2.对自动膜片钳系统的各个零部件进行定期检查，及时修复、更换。
3.遵守生产厂家所提供的保养手册，根据保养指南进行设备保养。
2. 定期校验为了确保自动膜片钳系统的精度和可靠性，需要定期进行校验和调整。
1.进行设备日常巡检和记录，及时发现和解决可能出现的问题。
膜片钳系统 操作规程
膜片钳系统简明操作规程1.准备（1）相关液体：大部分细胞外液的pH为7.4，电极内液的pH为7.2-7.3；培养细胞的缓冲体系为HEPES，而急性分离细胞或者组织切片的缓冲体系多为碳酸盐体系；至于渗透压，细胞内应高于细胞外（如340mOsmd: 330mOsmd）使细胞微肿胀从而利于封接。
所有液体均应用微孔滤膜过滤，ICS应冻存；如果采用碳酸盐体系，那么实验过程必须灌流。
（2）电极：所用电极控制在2-5MΩ，电阻值越大则tip越细，利于封接而不利于破膜，反之，电阻值越小则tip越粗，利于破膜而不利于封接（注意小细胞有时电极电阻也可大于5MΩ）；电极直径最好为5-10μm，即对于400倍的显微镜下2-4mm；电极末端可用火烧平，防止刮掉氯化银。
2. 封接准备（1）打开Clampex的Membrane Test，设定封接测试脉冲电流方波的幅度和频率。
（2）在玻璃微电极内维持一定的正压，用微操作器使电极进入记录液，在Membrane Test中可见测试脉冲方波，观察电极电阻大小。
（3）关闭Membrane Test，用Auto调节Pipette Offset，使METER 中的I （pA）=0。
如果I不显示为0，则可继续手工精确调节补偿的失调电位数值，直至I为0。
3. 封接（1）打开Membrane Test，使玻璃微电极逐渐接触细胞，去除正压并轻轻给予负压以形成稳定封接。
此时，封接测试脉冲消失，仅出现电极电容瞬变值。
封接电阻在1GΩ以上。
（2）补偿电极电容：用Cp Fast和Cp Slow对电极电容进行补偿。
可选Leak Subtraction去除漏电流。
4. 破膜（1）继续给予负压活用Zap功能电击打破细胞膜。
出现膜电容放电。
缓慢撤除电机内负压。
（2）用Auto对膜电容进行补偿，必要时手工进行细微调节。
（3）进行串联电阻补偿：选上Rs Compensation和Disable if oscillation detected，增大Prediction和Compensation对串联电阻进行补偿。
膜片钳技术原理与基本操作
膜片钳技术原理与基本操作1976 年Neher 和Sakmann 建立了膜片钳技术（Patch clamp technique），这是一种以记录通过离子通道的离子电流来反映细胞膜上单一的或多数的离子通道分子活动的技术。
1981 年Hamill, Neher 等人又对膜片钳实验方法和电子线路进行了改进，形成了当今广泛应用的膜片钳实验技术。
该技术可应用于许多细胞系的研究，也是目前唯一可记录一个蛋白分子电活动的方法，膜片钳技术和克隆技术并驾齐驱给生命科学研究带来了巨大的前进动力，这一伟大的贡献，使Neher 和Sakmann 获得1991 年诺贝尔医学与生理学奖。
一、膜片钳技术的基本原理用一个尖端直径在1.5~3.0μm 的玻璃微电极接触细胞膜表面，通过负压吸引使电极尖端与细胞膜之间形成千兆欧姆以上的阻抗封接，此时电极尖端下的细胞膜小区域（膜片，patch）与其周围在电学上分隔，在此基础上固定（钳制，Clamp）电位，对此膜片上的离子通道的离子电流进行监测及记录。
基本的仪器设备有膜片钳放大器、计算机、倒置显微镜、示波器、双步电极拉制器、三轴液压显微操纵器、屏蔽防震实验台、恒温标本灌流槽、玻璃微电极研磨器。
膜片钳放大器是离子单通道测定和全细胞记录的关键设备，具有高灵敏度、高增益、低噪音及高输入阻抗。
膜片钳放大器是通过单根电极对细胞或膜片进行钳制的同时记录离子流经通道所产生的电流。
膜片钳放大器的核心部分是以运算放大器和反馈电阻构成的电流-电压（I-V）转换器，运算放大器作为电压控制器自动控制，使钳制电位稳定在一定的水平上。
二、操作步骤1.膜片钳微电极制作(1) 玻璃毛细管的选择：有二种玻璃类型，一是软质的苏打玻璃，另一是硬质的硼硅酸盐玻璃。
软质玻璃在拉制和抛光成弹头形尖端时锥度陡直，可降低电极的串联电阻，对膜片钳的全细胞记录模式很有利；硬质玻璃的噪声低，在单通道记录时多选用。
玻璃毛细管的直径应符合电极支架的规格，一般外部直径在1.1~1.2mm。
膜片钳之仪器操作与维护篇
膜片钳之仪器操作与维护篇1、电极一旦拉制成功后，其尖端必须作进一步的处理。
目的之一是为了减小电极内部与溶液之间的电容，即在电极末梢前数微米处，涂敷一层疏水材料，如硅酮树脂（Sylgard）。
这种物质能够防止液膜爬上电极。
另一目的是为了对电极尖端作优化处理，如同热抛光的方法使电极尖端光滑、周围均匀，以提高实验过程中的封接成功率。
2、关于电极的问题a. 洁净的电极是封接的关键。
电极需要在使用前拉制完成放在密闭容器中，通常在12小时内用掉比较好；b. 内液（确切的说是电极液）需要过滤；c. 在电极入水之前可以加一个正压，可以吹开电极尖端的液体及灰尘；d. 如果不用灌流的话，最好bath solution也要过滤。
e、电极拉制成功以后，常置于一有盖的容器内，2-3小时内必须使用，电极使用前要进行充灌。
在充灌前，电极内液要用的滤膜或滤纸进行过滤。
利用玻璃管的虹吸作用，溶液可从电极尖端吸入，也可利用5ml注射器在尾端加负压以实现充灌，随后电极从尾端充灌。
电极内液不能漏到夹持器，会使其内表面变湿形成薄膜从而产生热噪声，在充灌时，电极内出现的气泡可以通过轻敲电极而消失。
3、降低噪声的关键是地线和屏蔽，第一地线接地要好；第二要注意将一些容易产生噪声的设备屏蔽好，比如显微镜灯光的电源、电动微超的马达、监视和记录的电脑以及一些可能产生噪声的电源线，总之你可以用排除法一一试验，肯定会降低噪声的，一般降低到几个pA/fA级即可。
另外，你的负压也可以用一个“U”形管通过3通管加上。
我认为屏蔽很重要哦，以前我在实验中，常遇到电极入水后方波有50HZ干扰，有时还跳动，很是心烦，想了很多办法就是去不掉，包括接地线，镀银丝、参比电极，清洗Holder等等，甚至怀疑仪器有问题，感到有些绝望了！后来发现灌流时干扰明显，把灌流装置控制电源搬到法拉第笼子外，一切就ok了！而且发现只要有电源线进入屏蔽笼，即使没有通电，也有交流干扰，所以所有进入屏蔽笼的电源线都应该用屏蔽线（而不是一般电线）。
膜片钳技术SOP
膜片钳技术SOP关键词：膜片钳目的：研究膜片上几个甚至一个离子通道的电流，对单个离子通道在各种电位状态及每种电位状态下对产生电流的离子作出定性、定量的分析，来反映细胞膜上离子通道活动，为研究离子通道结构与功能关系提供关于生物电特性的新资料。
基本原理：膜片钳制技术（patch clamp technique)是对一块单独的细胞膜片（或整个细胞）的电位进行钳制的一项电生理技术。
通过对膜电位的钳制可以观察通过离子通道的电流，膜片钳放大器正是通过维持电压的恒定而测出这种电流。
运用膜片钳技术记到的最小电流可达到pA级(10-12 A)。
膜片钳的本质属于电压钳范畴，其基本工作原理是：采用经典的负反馈放大技术作电压固定，但改用细胞外微吸管作电极，将微电极管尖端与细胞膜表面接触，经负压抽吸，形成具极高阻抗的紧密封接，其电阻值高达10-100千欧（即GΩ=109Ω）。
只有在这种封接存在时，通过膜电极引导记录的电流才是通过该膜的离子通道电流。
膜片钳技术原理示意图Rs是膜片阻抗相串联的局部串联电阻（输入阻抗），Rseal是封接阻抗。
Rs通常为1～5MΩ，如果Rseal高达10GΩ（1010Ω）以上时，IP/I=Rseal/(Rs+ Rseal)-1。
此Ip可为在I－V转换器（点线）内的高阻抗负反馈电阻(Rf)的电压降而被检测出。
药品和试剂：根据不同的实验设计选择不同的药品和试剂。
主要仪器设备与材料：①屏蔽防震实验台(TMC 63-544)②数字式超级恒渐浴槽（HSS-1 CHENDU INSTRUMENT China）③微管电极拉制器（PP-83 NARISHIGE Japan）④微管电极抛光仪（ME-83 NAEISHIFE Japan）⑤电子刺激器（SEN-2030, NIHON KOHDEN, Japan）⑥膜片钳放大器（AXOPATCH 200B Axon Instruments U.S.A）⑦倒置相差显微镜（AXIOVERT 135 ZEISS Germany）⑧计算机（PⅢ 800）⑨A/D、D/A转换器（DIGIDATA-1200 Axon Instruments U.S.A）⑩pClamp软件（10.0）Axon Instruments U.S.A )实验对象：兔、大鼠、猪、和人的组织细胞（直径小于30μm的细胞），都可用于膜片钳实验。
常州细胞生物学脑定位膜片钳原理及步骤
常州细胞生物学脑定位膜片钳原理及步骤
常州细胞生物学脑定位膜片钳是一种用于记录神经元电活动的实验技术。
其原理为利用微型电极穿透细胞膜，直接记录细胞内外电位的变化，并通过程序控制电极的移动，定位到特定的神经元细胞上进行电生理实验分析。
具体步骤如下：
1. 制备膜片钳：制作玻璃微电极，并用火炬加热封闭一端，使其呈现一个微小的孔。
将另一端连接到电极放大器上。
2. 切取小鼠或大鼠脑组织：将小鼠或大鼠的脑组织切成薄片，并将其置于离心管中。
加入缓冲液处理，使脑片柔软并不断吸除液，去除脑组织中的血液和细胞间液。
3. 将片段放在实验器皿中：将制备好的膜片钳放入实验器皿中，将离心管中的脑片放在显微镜下，观察和定位神经元的位置。
4. 穿透细胞膜：通过微调玻璃微电极的位置，将其穿透神经元细胞膜，并记录细胞内外的电位变化。
5. 进行电生理实验：利用程序控制电极的移动，将膜片钳定位到具体的神经元细胞上进行离子通道电流和电势信号的测量。
6. 分析细胞电生理数据：通过数据分析软件对实验结果进行分析，了解神经元细胞的电生理特性和响应情况。
7. 记录实验结果：将数据记录下来，并用图表等方式展示实验结果，以便后续研究或发表论文。
膜片钳放大器安全操作及保养规程
膜片钳放大器安全操作及保养规程膜片钳放大器是一种常用的电气控制设备，广泛应用于工业自动化控制和科学研究等领域。
为了确保膜片钳放大器的安全运行和延长使用寿命，有必要了解其安全操作规程和保养方法。
本文将详细介绍膜片钳放大器的安全操作及保养规程。
膜片钳放大器的安全操作规程1. 接地保护使用膜片钳放大器时，首先要确保设备接地良好，以保证安全工作。
在安装过程中，必须将设备的金属外壳与地线相连，以防止电气机箱或机器身体累积的电荷。
2. 不可操作电器在开机和停机时，必须遵循正确的操作程序。
此外，禁止对开机的膜片钳放大器进行手动接通或断开操作，避免发生事故。
3. 过载保护膜片钳放大器需要严格按照额定电流和电压使用，以免设备受到过载损害。
如果电流或电压超过额定值，设备将自动切断电路，保护设备和操作人员的安全。
4. 温度保护为了保护膜片钳放大器的运行安全，必须确保设备的温度不超过设备允许的最大值。
如果温度过高，设备将自动停机，直到温度降至安全水平。
5. 禁止潮湿和腐蚀膜片钳放大器面板上的控制电路元件非常敏感，禁止将设备放置在潮湿或腐蚀性环境中。
此外，操作人员必须避免使用湿手触摸设备面板，以免电流流入人体。
6. 禁止自行改装严禁未经授权的人员进行自行改装或修理。
所有的维修和维护操作必须由经过专业培训的技术人员执行。
7. 关机前检查在停机前，操作人员应先将膜片钳放大器的控制电路元件断电后才能进行关机。
另外，还要进行全面的关机前检查，以确定设备是否存在问题。
膜片钳放大器的保养方法1. 定期清洁为了保持膜片钳放大器的正常运行，必须定期清洁设备。
操作人员可以使用干布或吹风机清理设备的内部和表面，保持设备的整洁和干燥。
2. 注意环境温度膜片钳放大器的环境温度对设备的寿命和性能有很大影响。
操作人员需要注意设备的环境温度和湿度，避免大范围温度变化或过高湿度造成设备故障。
3. 注意运输和存储在运输和存储设备时，要注意保护设备的外壳，并避免碰撞或震动。
膜片钳使用规则
膜片钳使用规则一、工作原理：1.膜片钳是一种可以直接观察单一的离子通道蛋白质分子对相应离子通透难易程度等特性的一种实验技术。
其基本原理是用一个尖端光洁，直径约为0.5~3um 的玻璃微电极同神经或肌细胞的膜接触而不刺入，然后在微电极另一端开口处施加适当的负压，将与电极尖端接触的那一小片膜轻度吸入电极尖端的纤细开口，这样在这一小片膜周边与微电极开口处的玻璃边沿之间，会形成紧密的封接，其电阻可达数个或数十个千兆欧，这实际上把吸附在微电极尖端开口处的那一片膜同其余部分的膜在化学上完全隔离出来，由微电极记录到的电流变化只同该膜片中通道分子的功能状态有关。
如果在这一小片膜中只包含了一个或少数几个通道蛋白分子，那么通过微电极测量出的电流，就是某种带电离子经由开放的单一通道蛋白质分子进行跨膜移动的结果。
二、操作步骤：1.打开总电源。
2.依次打开电脑、显微镜、监视器、微操、放大器。
3.打开PULSE软件，在E盘建立自己的文件夹。
4.灌注玻璃电极并排空气体。
5.装上玻璃电极，浸入液面并调至视野范围。
6.点击set-up，将增益调为0.5，点Auto，记录电极电阻。
7.封接细胞，若上G，提起或吸破细胞。
8.依次点击on-cell，whole-cell补偿。
9.选定In-out或whole-cell模式进行实验。
10.用毕请关闭仪器，并切断总电源。
三、注意事项：1.每天做实验前请用清水拖地，以防尘埃、静电伤害机器。
2.拉制仪使用前需预热15-30min。
3.银丝电极及地线发白时，请先用砂纸轻微打磨，再浸入新鲜的次氯酸钠溶液镀氯化银，如果银丝电极30min未变黑，则考虑更换次氯酸钠。
4.先开放大器，后开软件；先关软件，后关放大器。
5.非必须用到汞灯时请不要打开汞灯电源，打开后至少需1个小时才可关闭。
6.在放大器打开时绝对不能用手、金属物品或其它导电的物品接触电极丝（包括地线），在取放细胞片时请关闭放大器。
7.向玻璃微电极灌注内液时切勿灌太多（1cm左右为适），以防液体进入银丝底部增加噪声。
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膜片钳使用规则
一、工作原理：
1.膜片钳是一种可以直接观察单一的离子通道蛋白质分子对相应离子通透难易程度等特性的一种实验技术。
其基本原理是用一个尖端光洁，直径约为0.5~3um 的玻璃微电极同神经或肌细胞的膜接触而不刺入，然后在微电极另一端开口处施加适当的负压，将与电极尖端接触的那一小片膜轻度吸入电极尖端的纤细开口，这样在这一小片膜周边与微电极开口处的玻璃边沿之间，会形成紧密的封接，其电阻可达数个或数十个千兆欧，这实际上把吸附在微电极尖端开口处的那一片膜同其余部分的膜在化学上完全隔离出来，由微电极记录到的电流变化只同该膜片中通道分子的功能状态有关。
如果在这一小片膜中只包含了一个或少数几个通道蛋白分子，那么通过微电极测量出的电流，就是某种带电离子经由开放的单一通道蛋白质分子进行跨膜移动的结果。
二、操作步骤：
1.打开总电源。
2.依次打开电脑、显微镜、监视器、微操、放大器。
3.打开PULSE软件，在E盘建立自己的文件夹。
4.灌注玻璃电极并排空气体。
5.装上玻璃电极，浸入液面并调至视野范围。
6.点击set-up，将增益调为0.5，点Auto，记录电极电阻。
7.封接细胞，若上G，提起或吸破细胞。
8.依次点击on-cell，whole-cell补偿。
9.选定In-out或whole-cell模式进行实验。
10.用毕请关闭仪器，并切断总电源。
三、注意事项：
1.每天做实验前请用清水拖地，以防尘埃、静电伤害机器。
2.拉制仪使用前需预热15-30min。
3.银丝电极及地线发白时，请先用砂纸轻微打磨，再浸入新鲜的次
氯酸钠溶液镀氯化银，如果银丝电极30min未变黑，则考虑更换
次氯酸钠。
4.先开放大器，后开软件；先关软件，后关放大器。
5.非必须用到汞灯时请不要打开汞灯电源，打开后至少需1个小时
才可关闭。
6.在放大器打开时绝对不能用手、金属物品或其它导电的物品接触
电极丝（包括地线），在取放细胞片时请关闭放大器。
7.向玻璃微电极灌注内液时切勿灌太多（1cm左右为适），以防液
体进入银丝底部增加噪声。
8.安装玻璃微电极时，电极应与银丝平行，防止刮蹭银丝电极。
9.玻璃微电极需先用甲醇浸泡，再用酒精灯微烧两端，使其平滑。
10.换液时应时刻观察浴槽，防止液面过低或液体溢出污染镜头，最
适液面为微高于出液口。
11.浴槽及灌流系统用毕请及时清洗，防止长菌影响实验。
12.打雷天气必须禁止膜片钳实验。
13.干燥季节请先用手触摸金属框架释放身体的静电。
14.每位实验者请在E盘建立自己的文件夹储存数据。
15.实验者可以根据需求设定自己的电极拉制和patch模式参数，但
请大家不要随意修改软件、显微镜以及拉制仪的默认设置。