谈谈你对分子生物学未来发展的看法
分子生物学的研究进展及未来展望

分子生物学的研究进展及未来展望分子生物学是研究生物体分子结构、组成和功能的学科,它涉及许多领域,包括生物化学、遗传学、生物物理学、生物工程等,并在基础研究、医学、农业、环境保护等方面发挥着重要的作用。
近年来,随着科技的不断发展和研究手段的不断改进,分子生物学领域也在不断突破和创新,许多重要的研究进展和发现正在改变我们对生命科学的认识。
一、基因编辑技术的突破基因编辑技术是近年来分子生物学领域最为关注和热门的研究之一。
它通过切割和修复DNA序列,能够实现人为地改变生物的基因组,从而创造出具有特定性状的新物种或新品种。
这种技术在医学、农业和环境保护等领域均具有广泛的应用前景。
最近几年,基因编辑技术取得了一系列的重要突破,例如CRISPR-Cas9技术的发展,使得基因编辑技术更加快速、精确和低成本。
此外,基于基因编辑技术的抗癌研究也正在取得巨大的进展,如利用基因编辑技术改变肿瘤细胞基因组,以抑制或消除癌细胞的生长和扩散。
二、人工合成生命体的实现人工合成生命体是一个极具挑战性的研究领域,其中的目标是利用分子生物学技术来开创具有完全不同于自然界的生命形式。
最近几年,人工合成生命体的实现已经成为了分子生物学领域的一大热点和关注点。
2010年,美国两个研究团队利用类似的技术合成了一种“全新”的病原体,其基因组完全来自合成的化学物质。
这个突破意味着我们已经具备了创造、设计和合成生命体的能力,为将来改变人类生命和生物世界带来了巨大的机遇和潜力。
三、蛋白质折叠和疾病研究蛋白质是生命中最为重要的分子之一,它们在细胞内扮演着极为重要的角色,控制着基本代谢过程、细胞信号转导、膜转运等生命活动。
然而,当蛋白质结构发生折叠异常时,就会引起一系列疾病,如肿瘤、神经退行性疾病、糖尿病等。
最近几年,对蛋白质结构和折叠机制的研究得到了显著的进展,特别是应用高分辨率X射线晶体学、核磁共振等技术手段,揭示了许多蛋白质复杂结构的三维结构和动力学过程,从而更好地理解了蛋白质折叠及其与疾病发生发展的关系。
谈谈你对分子生物学未来发展的看法

谈谈你对分子生物学未来发展的看法?21世纪是生命科学世纪,生物经济时代,分子生物学的发展揭示了生命本质的高度有序性和一致性,是人类认识论上的重大飞跃。
生命活动的一致性,决定了二十一世纪的生物学将是真正的系统生物学,是生物学范围内所有学科在分子水平上的统一。
分子生物学是目前自然学科中进展最迅速、最具活力和生气的领域,也是新世纪的带头学科。
分子生物学的研究将带动生物科学全面迅速地发展,生物科学的众多分支学科,将在更高层次上实现理论的大综合。
5、比较原核、真核基因组的特点(上海第二军医大硕士研究生入学考试试题)一、原核生物基因组结构特点1、基因组很小,大多只有一条染色体2、原核生物基因主要是单拷贝基因3、结构简炼4、存在转录单元(trnascriptional operon)、多顺反子(polycistron)5、有重叠基因二、真核生物基因组结构特点1、真核基因组结构庞大2、含有大量重复序列3、非编码序列多4、转录产物为单顺反子5、基因不连续性6、存在大量的顺式作用元件。
7、存在大量的DNA多态性8、端粒结构2、简述RNA转录的基本概念基本过程?转录(transcription):DNA分子中的遗传信息转移到RNA分子中的过程称为转录。
转录产物有mRNA ,tRNA和rRNA。
转录的基本过程:1)无论是原核还是真核细胞,转录的基本过程都包括:模板识别、转录起始、通过启动子及转录的延伸和终止。
2)全酶上的因子辨认DNA模板上的起始位点,使全酶结合在起始位点上形成全酶-DNA复合物,从而开始“起始反应”;3)转录开始后,因子立即从复合物上脱落,由核心酶催化RNA的合成;4)当转录到一定长度时,终止因子识别模板上的终止信号,终止转录,释放转录产物。
简述因子的作用启动子的识别要靠因子来完成。
10.真核生物的原始转录产物必须经过哪些加工才能成为成熟mRNA,以用作蛋白质合成的模板?答:内含子的剪接、编辑、在编码及化学修饰。
分子生物学的重要性和发展方向

分子生物学的重要性和发展方向随着科技的发展,人们对生命的认知也越来越高深。
分子生物学作为生物学领域内的重要学科,将生物学研究从传统的细胞学、遗传学转向了更为微观的分子层面。
分子生物学对于解决许多生命科学中的重要问题起着关键的作用。
一、分子生物学的重要性1. 揭示生物基本单位分子生物学向我们揭示了生物的基本单位——分子。
它探究生命现象的基本原理,揭示生物学发展的规律,让我们更好地认识人类的身体、疾病的发病机理等,为人类的健康提供了支持和保障。
2. 解析遗传信息分子生物学在遗传学方面也有重要的贡献。
以前人们认为只有DNA才是真正负责遗传的物质,但随着分子生物技术的发展,发现了RNA和蛋白质对于遗传信息和生命过程都有重要的作用。
因此,分子生物学在遗传学的研究中具有重要的地位。
3. 支持医学研究分子生物学对于支持医学研究也起着不可替代的作用。
它能够帮助医学工作者解析疾病的发病机理,为确保准确的诊断和治疗提供了科学依据。
同时,人类的基因组计划也是分子生物学与医学研究的重要关注点。
二、分子生物学的发展方向1. 基因组学研究基因组学是研究基因组结构、功能、调控以及一些基因组和物种关系等问题的学科。
这些研究对于人类疾病的预警、治疗等方面起到了关键的作用,因此也将成为未来分子生物学研究的一项重要内容。
2. RNA生物学研究RNA生物学的研究是对RNA的结构、功能、合成和调控等进行研究的一门生物学新分支。
随着对RNA的研究的深入,研究人员已经发现RNA具有重要的生物学功能,例如基因表达、基因调控和遗传变异等方面。
3. 蛋白质学研究与基因和RNA相比,我们对蛋白质的认识还相对较少。
蛋白质学研究是对蛋白质在结构、功能以及与其他生物分子的相互作用等方面的研究。
它将对医学、环境科学、生物工程等领域起到关键的作用。
总之,分子生物学是一个广泛的生物学领域,具有广泛的应用和发展前景。
未来,分子生物学将会在基础研究、医学研究、环境监测、农业生产等领域发挥更加重要的作用,促进科学技术继续向前发展。
分子生物学的现状和未来

分子生物学的现状和未来分子生物学是生命科学的一个分支,通过研究生物分子的结构、功能和相互作用,揭示生命现象的本质。
这个领域已经取得了许多重大的成果,比如揭示DNA双螺旋结构、发现基因调控网络、阐明遗传学、研究蛋白质结构与功能等等。
然而,随着技术的进步和科学问题的不断更新,分子生物学仍然充满了挑战和机遇,在未来的发展中仍有着广阔的空间。
一、现状:技术的蓬勃发展分子生物学的发展史可以追溯到20世纪早期,当时科学家们主要依靠化学和光学技术来探究生物分子。
然而,随着科技的进步,分子生物学的技术也在不断更新和改进。
例如,利用X射线晶体学可以解析分子的三维结构,这对于研究蛋白质结构与功能具有巨大的意义;现代生物芯片技术可以快速高通量地检测分子的表达和交互信息;基因编辑技术的出现可以精确地改变生物的基因组,从而实现对生物学现象进行控制。
二、未来:挑战与机遇虽然分子生物学已经取得了许多重要的成果,但是未来的发展中仍然面临着许多挑战。
1. 生物分子的多样性生命体系中的分子种类和数量都非常庞大,例如由20种氨基酸组成的蛋白质就有数百万种不同的组合方式。
如何高效地解析和分析这些分子的结构和功能,是分子生物学需要克服的关键难题。
2. 数据的处理和分析随着技术的进步,产生的数据量也在不断增加。
如何有效地处理和分析这些数据,并从中挖掘出有价值的信息,是未来发展的重要瓶颈。
3. 各种生命现象之间的综合研究生命现象之间的相互作用非常复杂,例如基因表达调控网络、细胞信号转导通路、蛋白质交互网络等等,在未来的研究中需要从整体性的角度进行研究和探究。
但是,这些挑战也同时带来了机遇,例如:1. 技术的不断更新和改进新的技术手段的出现和不断的改进,为更深层次的研究带来了更多的可能性。
例如,近年来取得突破性进展的单分子操作技术可以探究分子的动态过程;计算机科学与人工智能技术的发展,可以对复杂的数据进行快速分析和处理。
2. 交叉学科的发展在分子生物学的研究过程中,涉及到许多不同的学科,例如化学、物理学、数学、计算机科学等等,这些交叉学科的发展为分子生物学研究提供了更广阔的思路和方法。
分子生物学的研究现状与未来发展

分子生物学的研究现状与未来发展分子生物学,是研究生命体内各种生物大分子之间相互作用、生命现象及其物质基础的学科。
作为生命科学中的重要分支,分子生物学研究的领域涉及生命科学的各个层面,包括了从基因到蛋白质的转录、翻译、修饰和降解等一系列过程,以及细胞周期、细胞信号传递、细胞凋亡等细胞生物学的高级生理和病理过程。
分子生物学的研究手段不断发展,其研究方法已成为生命科学中的重要技术手段。
本文将对分子生物学的研究现状进行探讨,并展望其未来发展。
一、研究现状随着现代生物技术的不断发展,分子生物学的研究方法也不断发展。
分子生物学的研究手段可以分为三个层次:简单分析手段、进阶分析手段和高级生物技术手段。
1.简单分析手段简单分析手段包括基本的实验操作技术,如DNA、RNA抽提、PCR扩增、凝胶电泳、Western-blot等技术。
这些技术被广泛应用于基础和应用研究中,为研究者提供了快速而简便的实验手段。
2.进阶分析手段进阶分析手段是指目前已经比较成熟的技术,其中包括了多种高通量分子生物学测序技术(例如高通量DNA测序、串联质谱技术等)、RNA干扰(RNAi)技术、基因工程、克隆技术、分子影像学技术等。
3.高级生物技术手段高级生物技术手段是指目前火热的新技术,在发展过程中极具发展前景。
例如基因组编辑技术CRISPR/Cas9、CRISPR/Cpf1等,都是近年来兴起的新技术,并在学术和应用领域中得到了广泛应用。
二、未来发展1.多域交叉应用随着分子生物学研究技术的发展,学术界也越来越重视跨领域的交流和合作。
在未来的发展中,多种不同的学科将会逐步融合,在分子生物学研究中起到更大的作用。
以代谢组学为例,它综合考虑了基因组、转录组、蛋白组等多个方面的内容,研究代谢产物及其代表的生理功能,是综合分析生物功能的重要手段。
2.精准医学精准医学是21世纪医学的一大发展趋势,其核心在于针对患者基因组、表观基因组和代谢组学等多种特征,制定出最适合的治疗方案,以达到最优化的治疗效果。
分子生物学的应用与前景

分子生物学的应用与前景分子生物学作为生物学的一个重要分支,通过研究生物体内分子水平的生物学过程,为我们揭示了生命本质的奥秘,并带来了众多的应用和前景。
本文将探讨分子生物学的应用领域以及其未来的发展前景。
一、医学领域的应用在医学领域,分子生物学的应用得到了广泛的认可和应用。
首先,基因诊断技术的发展使得我们能够通过检测DNA或RNA水平上的突变来准确诊断许多遗传性疾病,如遗传代谢病、遗传性肿瘤等。
其次,分子生物学技术也被广泛应用于药物研发领域,通过对特定靶点基因的研究,有效地辅助新药的发现和开发,为药物治疗提供了更加精准和个体化的方法。
此外,分子生物学的进展也推动了生物医学图像学的发展,例如分子标记的探针和显色剂的发展,能够为疾病的早期诊断提供更加精确的方法。
二、农业领域的应用在农业领域,分子生物学的应用也发挥了巨大的作用。
我们可以通过分析农作物的基因组来改良农作物的品质和产量,例如通过转基因技术引入抗虫基因,提高农作物的抗虫能力。
此外,利用分子生物学技术我们还可以检测食品中的基因修饰成分,确保食品的安全性和合规性。
分子生物学技术还可以应用于动物养殖领域,通过选择性繁殖和基因编辑技术改良家畜的品种,提高畜牧业的经济效益。
三、环境领域的应用分子生物学的应用也可以在环境保护和生态学研究中得到体现。
例如,通过环境DNA技术,我们可以分析水体中的微生物组成,评估水质和生态系统的健康状况。
此外,分子生物学的方法还可以用于鉴定和监测入侵物种,帮助我们进行生态系统的修复和保护。
四、未来的发展前景随着分子生物学技术的不断发展,其应用前景也变得愈发广阔。
首先,基因组学和转录组学的进展为我们研究基因功能和调控机制提供了更深入的理解,进一步加深了我们对生命的认识。
其次,细胞工程学和基因编辑技术的不断革新,为我们精确调控基因功能提供了更有效的手段。
此外,人工智能和大数据分析的应用也将推动分子生物学的发展,通过整合和分析大量的生物数据,加速生物学研究的进程。
生化与分子生物学的研究现状与未来发展趋势

生化与分子生物学的研究现状与未来发展趋势生化与分子生物学是生命科学中的重要学科之一,也是现代医学和生命科技的基础。
随着科学技术的不断发展,这两个领域的研究也在不断深入,为人类健康和科技进步做出了重要贡献。
本文将对生化与分子生物学的研究现状和未来发展趋势进行探讨。
一、生化学研究现状生化学是一个研究生命体系内分子组成、代谢、分解、融合等过程的学科。
从化学的角度来看,生化学是研究生命分子的特性,探索生命过程的机理以及生物体生命现象的化学基础。
到目前为止,生化学已经成为了生命科学中不可或缺的一部分。
生化学的研究领域非常广泛,包括基础研究和应用研究两个方面。
在基础研究方面,生化学家们一直在探索分子生物学的细节,尤其在生命过程中的能源代谢、蛋白质折叠和炎症反应等方面有所突破。
近几十年来,生化学的研究成果已经涉及生命过程的方方面面,包括分子机制、信号传递、生物合成和分解等。
生化学的应用研究也在不断发展。
在医药领域,生化学的研究成果使得人类在抗癌、心血管疾病、传染病和糖尿病等疾病治疗方面有了更多的选择。
而在生命科技领域,生化学的研究已经使得我们能够将基因编辑技术、胚胎干细胞治疗等技术应用于实际生产和生活中。
在技术手段方面,生物大分子的结构解析技术(如蛋白质晶体学、核磁共振、电子显微镜等技术)的发展对于生化学的研究起到了至关重要的作用。
随着实验技术的不断提高,生化学的研究将在更深层次上逐渐揭示生命过程中的奥秘。
二、分子生物学研究现状分子生物学是研究生物分子结构、功能和相互作用等问题的一门学科。
其中,DNA、RNA和蛋白质是分子生物学研究的三大核心。
随着分子生物学技术的不断发展,越来越多的关于基因、蛋白质和代谢途径的研究开始进入细胞分子水平,向整个生物层次的研究拓展。
分子生物学研究的主要成果集中在三个方面:基因逻辑学、蛋白质学和基因组学。
在基因逻辑学方面,分子生物学研究揭示了DNA转录、RNA翻译和基因调控的分子机制。
分子生物学的研究现状与发展趋势

分子生物学的研究现状与发展趋势分子生物学是现代生物学发展的一个重要分支,其主要研究分子水平上的生物学问题,包括基因的表达、遗传信息的传递、蛋白质结构和功能等。
随着分子生物学技术的逐步完善和广泛应用,它已经成为研究生命科学各个领域的基础和重要手段。
本文将从分子生物学的研究现状、发展趋势以及应用前景三个方面来探讨分子生物学的未来。
一、分子生物学的研究现状分子生物学的发展始于20世纪50年代,当时人们开始利用化学方法研究DNA和蛋白质的结构及其相互作用关系。
1970年代以后,随着DNA序列技术和重组DNA技术的发展,分子生物学进入了一个高速发展的新时期。
目前,分子生物学研究的内容以基因和蛋白质为主,这是由于基因和蛋白质是生命现象的两个核心要素。
在分子生物学的研究领域中,进行的工作主要包括:(1)基因的克隆、定位和表达基因是控制生命活动的分子基础。
分子生物学主要研究如何从生物体中克隆要研究的基因,并对其进行定位和表达。
通过这些工作,人们可以更深入地了解基因的结构和功能,从而为研究生命现象提供更精确的基础。
(2)蛋白质的结构和功能研究蛋白质是生命现象中最为关键的分子,其复杂的结构和多样的功能为科学家们提出了许多挑战。
通过分析蛋白质的三维结构和功能机制,人们可以更好地理解生命现象,并探索新的治疗方法和药物研发思路。
(3)基因调控和信号传递机制研究基因的表达受到复杂的调控机制的影响。
当前分子生物学研究的另一个重点是探究这些调控机制的作用。
同时,信号传递机制是细胞内外沟通和协调的重要手段,了解它的机制对于深入理解生物体的调节和自我平衡具有重要意义。
二、分子生物学的发展趋势随着分子生物学技术的不断进步和新的技术手段的出现,分子生物学将呈现以下几个发展趋势。
(1)技术方法将更为成熟和多样化分子生物学的发展是与技术方法的发展密不可分的。
目前,分子生物学技术包括PCR、DNA测序、基因芯片、蛋白质质谱和蛋白质组学等。
未来,随着这些技术的不断完善和更新,将衍生出更多新的技术方法和手段,为分子生物学的研究提供更多样化的工具。
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谈谈你对分子生物学未来发展的看法?
21世纪是生命科学世纪,生物经济时代,分子生物学的发展揭示了生命本质的高度有序性和一致性,是人类认识论上的重大飞跃。
生命活动的一致性,决定了二十一世纪的生物学将是真正的系统生物学,是生物学范围内所有学科在分子水平上的统一。
分子生物学是目前自然学科中进展最迅速、最具活力和生气的领域,也是新世纪的带头学科。
分子生物学的研究将带动生物科学全面迅速地发展,生物科学的众多分支学科,将在更高层次上实现理论的大综合。
5、比较原核、真核基因组的特点(上海第二军医大硕士研究生入学考试试题)
一、原核生物基因组结构特点
1、基因组很小,大多只有一条染色体
2、原核生物基因主要是单拷贝基因
3、结构简炼
4、存在转录单元(trnascriptional operon)、多顺反子(polycistron)
5、有重叠基因
二、真核生物基因组结构特点
1、真核基因组结构庞大
2、含有大量重复序列
3、非编码序列多
4、转录产物为单顺反子
5、基因不连续性
6、存在大量的顺式作用元件。
7、存在大量的DNA多态性
8、端粒结构
2、简述RNA转录的基本概念基本过程?
转录(transcription):DNA分子中的遗传信息转移到RNA分子中的过程称为转录。
转录产物有mRNA ,tRNA和rRNA。
转录的基本过程:
1)无论是原核还是真核细胞,转录的基本过程都包括:模板识别、转录起始、通过启动子及转录的延伸和终止。
2)全酶上的因子辨认DNA模板上的起始位点,使全酶结合在起始位点上形成全酶-DNA复合物,从而开始“起始反应”;
3)转录开始后,因子立即从复合物上脱落,由核心酶催化RNA的合成;
4)当转录到一定长度时,终止因子识别模板上的终止信号,终止转录,释放转录产物。
简述因子的作用
启动子的识别要靠因子来完成。
10.真核生物的原始转录产物必须经过哪些加工才能成为成熟mRNA,以用作蛋白质合成的模板?
答:内含子的剪接、编辑、在编码及化学修饰。
简述原核和真核生物mRNA的区别?
原核生物mRNA的特征:
A、半衰期短
B、多以多顺反子的形式存在
C、单顺反子mRNA:只编码一个蛋白质的mRNA。
D、多顺反子mRNA:编码多个蛋白质的mRNA
E、5’端无“帽子”结构,3’端没有或只有较短的poly(A )结构
F、SD序列:mRNA中用于结合原核生物核糖体的序列。
真核生物mRNA的特征:
a、5’端存在“帽子”结构
b、多数mRNA 3’端具有poly(A )尾巴(组蛋白除外)
C、以单顺反子的形式存在
什么是Pribnow box?它的保守序列是什么?
pribnow box是原核生物中位于转录起始位点上游-10区的TATA区,保守序列是TATAAT,其功能是RNA聚合酶中的σ因子与其特异结合使转录得以起始。
12.什么是RNA编辑?其生物学意义是什么?
答:是某些RNA,特别是mRNA前体的一种加工方式,如插入、删除或取代一些核苷酸残基,导致DNA所编码的遗传信息的改变,因为经过编辑的mRNA序列发生了不同于模板DNA的变化。
意义:校正作用、调控翻译、扩充遗传信息。
第四章
一、简述密码的简并性和同义密码子(武汉大学2003年试题)
由一种以上密码子编码同一个氨基酸的现象称为简并(degeneracy),对应于同一氨基酸的密码子称为同义密码子(synonymous codon)。
二、选择题:
1.多数氨基酸都有两个以上密码子,下列哪组氨基酸只有一个密码子?D A.苏氨酸、甘氨酸
B.脯氨酸、精氨酸
C.丝氨酸、亮氨酸
D.色氨酸、甲硫氨酸
E.天冬氨酸和天冬酰胺
2.tRNA分子上结合氨基酸的序列是B
A.CAA-3′
B.CCA-3′
C.AAC-3′
D.ACA-3′
E.AAC-3′
3.遗传密码E
A.20种氨基酸共有64个密码子
B.碱基缺失、插入可致框移突变
C.AUG是起始密码
D.UUU是终止密码
E.一个氨基酸可有多达6个密码子
4、tRNA能够成为氨基酸的转运体、是因为其分子上有A A.-CCA-OH 3′末端
B.3个核苷酸为一组的结构
C.稀有碱基
D.反密码环
E.假腺嘌吟环
5、蛋白质生物合成中的终止密码是( ADE )。
(A)UAA (B)UAU (C)UAC (D)UAG(E)UGA
6、Shine-Dalgarno顺序(SD-顺序)是指:( A )
A.在mRNA分子的起始码上游8-13个核苷酸处的顺序
B.在DNA分子上转录起始点前8-13个核苷酸处的顺序
C.16srRNA 3’端富含嘧啶的互补顺序
D.启动基因的顺序特征
7、反密码子中哪个碱基对参与了密码子的简并性(摇摆)。
(A )(A)第一个(B)第二个(C)第三个(D) 第一个与第二个8、真核与原核细胞蛋白质合成的相同点是(C )
(A)翻译与转录偶联进行
(B)模板都是多顺反子
(C)都需要GTP
(D)甲酰蛋氨酸是第一个氨基酸
以大肠杆菌为例,简述蛋白质生物合成过程。
答: 氨基酸的活化
翻译的起始
肽链的延伸
肽链的终止
新生多肽链的折叠与加工
遗传密码有什么特性?
答;简并性
普遍性与特殊性
连续性
摆动性
有几种终止密码子?他们的序列和别名是什么?
3种UAG、UGA、UAA
简述摆动学说?
答:转运氨基酸的tRNA上的反密码子需要通过碱基互补与mRNA上的遗传密码子反向配对结合,在密码子与反密码子的配对中,前两对严格遵守碱基配对原则,第三对碱基有一定的自由度,可以“摆动”,这种现象称为密码子的摆动性。
第五章
简述实时定量PCR的原理和过程
答:原理:是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
实时定量PCR反应在带透明盖的塑料小管中进行,激发光可以直接透过管盖,使其中的荧光探针被激发。
荧光探针事先混合在PCR反应液中,只有与DNA结合后,才能被激发出荧光。
简述基因组DNA 文库的构建流程。
答:基因组DNA 文库的构建程序包含 5 个部分:
①载体的制备;
②高纯度大分子量基因组DNA 的提取;
③高分子量HMW DNA 的部分酶切与脉冲电泳分级分离(PFGE size selection);
④载体与外源片段的连接与转化;
⑤重组克隆的挑取和保存。
蛋白质组学的研究对象和目的是什么?主要有哪些技术和方法?
答:蛋白质组学的研究对象是在大规模水平上研究蛋白质的特征,研究对象包括蛋白质的表达水平,翻译后的修饰,蛋白与蛋白相互作用等,目的是由此获得蛋白质水平上的关于疾病发生,细胞代谢等过程的整体而全面的认识。
双向电泳western印迹法蛋白质的质谱分析技术
真核细胞mRNA的哪一结构特征可用来分离纯化mRNA?请设计实验分离纯化真核细胞mRNA。
答:mRNA分子最显著的结构特征:5ˊ-m7G帽子,3ˊ-poly尾巴;实验中常用寡聚(dT)-纤维素柱色谱法纯化mRNA。
1、利用mRNA 含有3ˊ-poly尾巴,当RNA流经寡聚(dT)-纤维素柱时,mRNA被特异性的结合在柱上;
2、然后用低盐溶液或蒸馏水洗脱mRNA;
Promega公司的polyAT Tract mRNA分离系统:将生物素标记的寡聚dT与细胞总RNA 温育,再加入微磁球相连的抗生物素蛋白以结合polyA mRNA,通过磁场吸附作用将polyA mRNA从总RNA中分离。
第六章
简述酵母单杂交系统的主要原理。
答:研究DNA-蛋白质之间相互作用的新技术,可识别稳定结合于DNA上的蛋白质,在酵母细胞内研究真核生物中DNA-蛋白质之间的相互作用,并通过筛选DNA文库直接获得靶序列相互作用蛋白的编码基因。
酵母双杂交系统(Y east two-hybrid system)
将待研究的两种蛋白质的基因分别克隆到酵母表达质粒的转录激活因子(如GAL4等)的DNA结合结构域基因和GAL4激活结构域基因,构建成融合表达载体,从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统。
基因敲除:(gene knock-out)又称基因打靶:
通过外源DNA与染色体DNA之间的同源重组,进行精确的定点修饰和基因改造,具有专一性强、染色体DNA可与目的片段共同稳定遗传等特点。
基因敲除分为:
完全基因敲除
条件型基因敲除(又称不完全基因敲除)。