肉苁蓉组织培养
肉苁蓉ppt培训课件
播种技巧
种子细小，播种前需精细整地，将 种子与细沙按1:10比例混合均匀后 撒播，覆土厚度以不见种子为宜。
田间管理与病虫害防治
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
01
02
03
04
中耕除草
幼苗期需勤中耕除草，保持土 壤疏松无杂草。
施肥管理
结合中耕除草进行追肥，以腐 熟有机肥为主，配合适量化肥
。
灌溉排水
炮制工艺
取肉苁蓉片，加入黄酒拌匀，闷润至酒被吸尽，置炒制容器内，用文火加热，炒 至深黄色时，取出晾凉。
质量标准
表面棕褐色或灰棕色，切面黄棕色或棕褐色，有淡棕色点状维管束排列成波状环 纹。质柔润，微有黏性，断面黑色，气微，味甜、微苦。
贮藏与保管注意事项
贮藏条件
置通风干燥处，防蛀。
保管注意事项
定期检查，发现受潮、霉变、虫蛀等问题及时处理。保持库房清洁、干燥、通风，避免与异味物品同 贮。
特点
肉苁蓉具有极高的药用价值，是中国传统的名贵中药材。历史上就被西域各国 作为上贡朝廷的珍品，也是历代补肾壮阳类处方中使用频度最高的补益药物之 一。
肉苁蓉的分布与生长环境
分布
主要分布于内蒙古、宁夏、甘肃 和新疆，素有“沙漠人参”之美 誉。
生长环境
肉苁蓉多寄生在其30-100厘米深 的侧根上。生于海拔225-1150m 的荒漠中，寄生在藜科植物梭梭 、白梭梭等植物的根上。
肉苁蓉的药用价值
药用功效
肉苁蓉具有补肾阳、益精血、润肠通便的功效。常用于治疗 肾阳不足、精血亏虚、阳痿不孕、腰膝酸软、筋骨无力、肠 燥便秘等病症。
现代药理研究
肉苁蓉具有提高性功能、抗衰老、抗疲劳、保护肝脏、调节 免疫等多种药理作用。其提取物在抗疲劳、提高身体机能、 保护心脑血管等方面有显著效果。
N+注入诱导肉苁蓉种子萌发的研究
１０ ０时肉苁蓉种子 的萌发率最高 ， ０ 达到 ２％． ０ 在
表 １ Ｎ 注入对 肉苁蓉种 子萌发的影响
３２ 激 素 条件 下不 同离 子束 对 诱 导 肉苁 蓉 种 子 吸 ． 器 萌发 的影 响
剂量为 ８０和 １ ０ ０ ０时肉苁蓉种子 的萌发率最高 ， ０ 达到 ２． 在离子束剂量为 ｌ２０时 ，肉苁蓉种 ３ ％． ３ ０ 子的萌发率下降． 可见离子束剂量 ８０ １ ０ 对 肉 ０ — ０ ０
第 ２ 卷第 １ ６ 期
２１ ０ ０年 ２月
山西大同大学学报（ 自然科学版）
Ｊｕｎｌ ｆ ｈ ｎｉ ａｏｇＵ ｉ ｒ ｔ Ｎ ｔｒｌ ｃｅｃ） ｏ ｒａ ｏ ａｘ ｔ ｎｖ ｓ ｙ ａ ａ Ｓ ｉ ｅ Ｓ Ｄ ｎ ｅ ｉ（ ｕ ｎ
Ｖ０ －６． ． １２ Ｎｏ １ Ｆ ｂ．０１ ｅ ２ ０
寄主条件下萌发 ，以期从根本上解决 肉苁蓉种子萌发 困难和接种率低 的问题 ， 为扩大 肉苁蓉人工栽 培提供
科学依据 ．
肉苁蓉种子用不同剂量的 轰击处理 ， 剥去种皮 ，
将其用 ０ ％ Ｈ Ｃ ． ｇ １消毒 １２ｍｎ 再用无菌水 冲洗 ５６ １ ￣ ｉ， ￣ 次， 接种在 ＭＳ培养基 和添加不 同激素 的 ＭＳ 养基 培 中， 不添加任何化学诱导物．在接种过程 中为了满足种 子 的群体效应 ， 尽量将种子接在一起但不要挨住 ， 用封
文章 编 号 ： ７ 一 ８４２ １）１ Ｏ ６ — ３ １ ４ Ｏ ７ （０ ００ 一 Ｏ ９ ０ ６
Ｎ 注入诱导 肉苁蓉种子 萌发 的研究 ＋
白 静 ，张汝 民 ，高 岩
ｆ 山西大同大学农学与生命科学学院， １ ． 山西大同 ０７０ ； ３０ ９ ２ 内蒙古农业大学农学院，内蒙古呼和浩特 ００ １） ． １０ ９
肉苁蓉栽培技术
肉苁蓉栽培技术肉苁蓉栽培技术文档一、肉苁蓉简介肉苁蓉（Cistanche tubulosa）是一种珍稀的中草药材，被广泛用于药用和保健领域。
其根部具有丰富的药用成分，具有提高免疫力、延缓衰老、促进性功能等多种功效。
二、肉苁蓉栽培环境要求1.气候条件肉苁蓉喜欢温暖干燥的气候，适宜种植的地区一般气温在10-30摄氏度之间。
2.土壤条件肉苁蓉对土壤要求较低，但最好是疏松、排水良好的沙质或砂质土壤。
3.光照需求肉苁蓉喜欢充足的阳光照射，一天至少需要6小时以上的日照。
三、肉苁蓉繁殖方法1.种子繁殖肉苁蓉的种子一般在秋季成熟，可通过种子的繁殖方式进行繁殖。
首先将种子进行浸泡处理，然后在育苗盘中播种，注意保持适宜的湿度和温度，一般播种后10-15天可出苗。
2.分株繁殖肉苁蓉也可以通过分株的方式进行繁殖。
选择健康的株体，将株体分成若干个株片，然后将其重新种植到合适的土壤中。
四、肉苁蓉栽培管理1.浇水肉苁蓉对水分要求较少，但在干旱季节仍需适量浇水，保持土壤湿润但不过湿。
2.施肥肉苁蓉喜欢瘦土质的环境，施肥应以有机肥为主，避免使用过量的化学肥料。
3.病虫害防治定期巡视，及时发现并处理病虫害问题。
可使用杀虫剂和农药进行防治。
五、肉苁蓉收获和加工1.收获时间肉苁蓉的收获时间一般在春季和秋季，当其地上部分开始枯黄时可进行收获。
2.加工方法鲜苁蓉可晒干、蒸煮、烘烤等处理方式，使其保存时间更长。
可以制作成炖汤、煎剂、浸泡酒等形式进行食用。
六、附件本文档涉及的附件包括肉苁蓉的图片、肉苁蓉的研究报告等相关资料。
七、法律名词及注释1.《中华人民共和国草药管理法》：中华人民共和国国家药品监督管理局制定和发布的法律，用于管理草药的生产、销售和使用。
2.药用成分：指草药中具有药理活性的化学成分，可用于治疗疾病或提供保健效果。
肉苁蓉种植项目实施方案
肉苁蓉种植项目实施方案一、项目背景肉苁蓉是一种珍贵的中药材，具有抗衰老、提高免疫力和保健养生的功效。
随着人们健康意识的提升和对天然药材需求的增加，肉苁蓉种植项目具有广阔的市场前景。
本实施方案旨在全面介绍肉苁蓉种植项目的实施方法和关键环节，帮助项目团队顺利开展种植工作。
二、项目目标1. 建立肉苁蓉种植基地，实现规模化种植和生产；2. 提高肉苁蓉的产量和品质，满足市场需求；3. 优化种植管理和技术，提高生产效率；4. 完善销售渠道，增加市场份额。
三、项目实施步骤1. 地点选择根据肉苁蓉的生长环境要求，选择适宜的地点进行种植。
地点应具备良好的光照、适度的湿度和通风条件，并保证土壤肥沃和排水良好。
2. 前期准备进行土壤检测和改良，保证土壤的营养和pH值适宜肉苁蓉的生长。
同时，选择健康的苗木进行繁殖，确保种植的初始质量。
3. 种植管理3.1 苗木培育选用优质的肉苁蓉种子，并通过育苗箱等方式进行苗木的培养和繁殖。
确保苗木的生长健壮并适时移栽到主田。
3.2 地面管理合理进行植株间距的安排，以保证肉苁蓉的光照均匀和通风良好。
定期除草、松土等操作，保证土壤的透气性和水分的保持。
3.3 病虫害防治加强病虫害的监测和预防，及时发现和处理病虫害问题。
采取有机农药和生物防治等手段，减少对环境的污染。
3.4 施肥管理根据肉苁蓉的生长需要，进行适宜的施肥和追肥，提供充足的养分供给。
选择有机肥料和微量元素，增加土壤的肥力。
4. 收获和加工根据肉苁蓉的生长周期，合理选择收获的时间。
采用手工或机械收获，并进行初步的加工，去除杂质和保留有益成分。
5. 销售和推广与药店、保健品公司等渠道建立稳定的销售合作关系。
同时，通过互联网宣传和推广，提高肉苁蓉的知名度和市场份额。
四、项目风险及对策1. 自然灾害风险：建立防灾减灾机制，定期检查设备和基地的安全性，并购买相应的保险。
2. 市场风险：及时了解市场需求和价格波动，灵活调整种植规模和产品结构。
梭梭人工造林及肉苁蓉人工栽培技术
2023年第08期现代园艺梭梭人工造林及肉苁蓉人工栽培技术徐玉云（古浪县治沙林场，甘肃武威733100）摘要:肉苁蓉是一种生长于西北沙漠的多年生肉质草本，主要寄生在向日葵和白梭梭的根部，是一种珍贵的中药材，具有很高的药用价值，市场需求较大，是农民增加收入的一种重要方式。
通过多年的生产实践，论述了梭梭的人工造林和人工栽培技术，总结出一套标准化的栽培模式，以进一步提高肉苁蓉的人工栽培技术。
关键词:肉从蓉；梭梭；人工造林；栽培技术苁蓉具有较高的医药价值，补肾功能强，益精血润肠通便，对男性阳痿、女性不孕有很好的疗效，是一种珍贵的中药材。
肉苁蓉是一种特殊的生长环境，主要寄生部位是梭梭林根。
近年来，随着市场对肉苁蓉的需求越来越大，肉苁蓉的价格节节攀升[1]。
为缓解肉苁蓉的供求矛盾，加大肉苁蓉的种植规模，提高其种植规模，提高其经济收入，促进当地经济发展具有十分重要的作用。
1梭梭植树法1.1采集梭梭种子梭梭在栽培后3～4年内即可开花结果，但因其土壤湿度和生长环境不同，导致花期有较大的差别。
如果有足够的水分，梭梭的发育良好，但开花和结种的时间较长，通常在5～6年以后才能开花结果；在干旱条件下，梭梭的繁殖可以提早进行，3～4年就能开花结果。
梭梭于4月下旬－5月上旬开花，9月下旬成熟，应适时采摘。
通常在10月上旬，当梭梭种子由绿变黄或灰棕色时，即可采摘。
采收时，要在无风的天气，用布料铺在采种树下，用棍子敲击种子并收集，清理其中的树枝和杂草，并及时烘干。
新收的种子不易从种翅中分离出来，且混有大量的脱落枝，须在粉碎、击打之后，用3mm或更小孔的筛子，筛除脱落树枝和种翅，然后风选，以保证种子洁净度90%，含水量小于5%[2]。
梭梭种子的胚芽是在种子中生成的，如果受潮，温度合适，2～3h即可发芽，因此要存放于干燥、透气的场所，防止雨水和潮湿。
1.2繁殖1.2.1育苗场地的选取。
梭梭对于土壤要求不高，但应选择黏性较大的土壤，土壤盐分含量大于1%，低洼处通风条件差，容易导致病虫感染，导致根系腐烂，无法进行育苗。
肉苁蓉栽培技术
肉苁蓉栽培、初加工技术甘肃省民勤县中药材研究所杨立泽摘要：介绍了肉苁的人工种植技术，包括土壤与寄主植物选择、繁殖、接种、田间管理、病虫害防治、采收等内容，以期为肉苁蓉的人工种植提供参考。
关键词：肉苁蓉；人工种植；田间管理；加工肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉（Cistanche deserticoloY.C.Ma）的干燥全草。
别名苁蓉、大芸、察干高要（蒙语）。
肉苁蓉属约有20余个种，在我国有4个种1个变种，内蒙古还有盐生肉苁蓉和沙苁蓉各一个种，新疆另有管花肉苁蓉一个种。
-、肉苁蓉的药用价值肉苁蓉是-种寄生濒危中药材，属国家二级保护植物，是著名的补益药物。
肉苁蓉含有丰富的生物碱、氨基酸、微量元素、维生素等成分。
中医学以全草入药，味甘、咸，性温。
有补肾壮阳、益精血、润肠通便、强筋骨的功能，具有多种保健功能。
治阳萎、腰膝冷痛、不孕、肠燥便秘等症。
具有提高性功能、防治老年痴呆、治疗便秘等功效，素有“沙漠人参”之美誉，它与人参、鹿茸-起并列称为中国三大补药。
1988年人工栽培试验获得成功，科技推广工作随即展开。
民勤县采取先定植梭梭，三年后再培植肉苁蓉的方式进行，主要以东湖镇、西渠镇、夹河乡、昌宁乡、大滩乡、勤锋试验站和石羊河林场为主，其中种植面积最大的为甘肃天盛生物科技有限公司在夹河黄案滩种植6000亩。
肉苁蓉是我国出口创汇的重要商品之-，销往日本、韩国、俄罗斯等地。
近年来，肉苁蓉的市场销量与价格仍呈大幅上升趋势。
二、分布肉苁蓉专主寄生于梭梭、白梭梭和红柳的根部，其分布由梭梭与白梭梭所限定。
主产于内蒙古、新疆、甘肃、宁夏、青海等省区。
三、形态特征肉苁蓉为多年生寄生草本植物，茎肉质，圆柱形或下部较扁。
高40-l60厘米，下部较粗，向上渐细。
叶鳞片状，淡黄白色，下部叶紧密宽短而厚，向上渐稀疏狭长而薄，叶片三角形、披针形或狭披针形，无柄。
5-6月开花结果。
穗状花序，粗大，顶生，圆柱形，长15-50厘米蒴果卵形，成熟时2瓣裂，褐色，果内含几百粒种子。
肉苁蓉种植规范
肉苁蓉种植规程1.1 植苗造林以苗木作为栽植材料的造林方法。
1.2 梭梭天然林复壮更新直播造林将林木种子直接播种在造林地进行造林的方法。
1.3 梭梭天然林复壮更新对天然梭梭林实施封禁，保护植物自然繁殖生长，并辅以人工经营改造措施，以提高林木质量的一项技术措施。
2 梭梭人工培育2.1 采种选择健壮梭梭植株于十一月前后采收，经晾晒，去翅，除屑后，装入透气袋中，放在阴凉通风处储藏。
育苗种子质量等级要求净度达65％以上，发芽率达90％以上，含水量低于8％（GB15/281～1998）。
梭梭种子要求头年采集，翌年育苗，不能隔年。
2.2 育苗2.2.1 大田育苗1)育苗地：有灌溉条件，地下水位较低的轻碱沙壤土或沙土地。
2)整地：以0.3亩左右作成畦田，整平，施腐熟并经消毒处理的农家肥300～500 kg，播前浇透水。
3)种子处理：用0.1％～0.3％的高锰酸钾或硫酸铜溶液浸种20～30分钟后捞出晒干。
4)育苗时间：4月底至5月初。
5)育苗：在育苗地内开水平沟，沟深2～3cm，宽10～15cm，沟间距30cm，将种子均匀撒入沟内，覆沙土1cm厚，亩播种量5～7 kg。
6)管理：全年适时浇水6～10次，5月下旬～6月上旬间苗一次，苗距保持在5～10cm，亩产苗量控制在6～8万株。
2.2.2 容器育苗7)容器：一般选用厚度为0.02～0.06mm，直径为5cm，高为12cm的圆桶有底的无毒塑料薄膜容器。
容器中、下部需打6～12个直径为0.4～0.6cm的小孔，小孔间距为2～3cm。
8)填土：沙壤土与腐熟并经消毒处理的农家肥按4：1混合装入容器。
装填前含水量10％～15％。
基质必须装实，基质装至离容器上缘O．5～lcm处。
9)种子处理：用0.1％～0.3％的高锰酸钾或硫酸铜溶液浸种20～30分钟后捞出晒干。
10)育苗时间：5～7月。
11)育苗：在平整的圃地上，划分苗床与步道，苗床一般宽1～1．2m，床长依地形而定，步道宽40cm。
肉苁蓉研究进展
天然产物研究与开发2005 Vol 117 No 12N ATURAL PR ODUCT RESEAR CH AND DEVELOP MEN T收稿日期:2004-03-14 接受日期:2005-04-05 *通讯作者Tel:86-10-82622280;E -mail:czliu@ho me.i 肉苁蓉研究进展成喜雨1,2,郭 斌1,倪 文2,刘春朝1*(11中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室,北京100080;21北京科技大学,北京100083)摘 要:本文就肉苁蓉资源分布、化学成分、分离提纯、药理作用和资源开发利用作一综述,并展望其发展前景。
关键词:肉苁蓉;化学成分;药理作用;资源开发利用中图分类号:Q946191Study Advances of Herba CistancheC HENG X-i yu 1,2,G UO Bin 1,NI Wen 2,LI U Chun -zhao 1*(1.Sta te Key Laboratory o f Biochemica l Engineering,Institute o f Process En gineering,Chinese Aca dem y o f Sciences,Beijing 100080,China;2.Unive rsity o f Science and T echnology Bei j ing,Beijing 100083,China )Abstract:The current research progress on Herba Cistanche,an endangered medicinal species in China,was reviewed in this paper including its chemical composition,isolation and purification of phytochemicals,medicinal activi ty and comprehensive ut-i lization.Key words:Herba Cistanche;chemical composition;medicinal activity;resource utilization and develop ment肉苁蓉(Herba Cistanche)为列当科(Oroban -chaceae)植物肉苁蓉(Cistanche deserticola Y.C.Ma)的带鳞片的干燥肉质茎,又名苁蓉、大芸、金笋、地精[1]。
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肉苁蓉组织培养研究进展及应用前景摘要:肉苁蓉由于采挖过度而濒临灭绝,组织培养是合理利用肉苁蓉,防止其资源枯竭的有效方法。
组织培养研究较多的是荒漠肉苁蓉和盐生肉苁蓉,分别对这两种肉苁蓉愈伤组织的诱导、培养基的优化和药用成分的诱导条件等方面的研究进行综述,介绍了应用组织培养生产肉苁蓉药用成分的经济价值和生态效益,以及利用组织培养进行肉苁蓉快速繁殖的实践意义,浅析了肉苁蓉大规模细胞培养的产业化前景。
关键词:肉苁蓉;组织培养;荒漠肉苁蓉;盐生肉苁蓉;苯乙醇苷类化合物肉苁蓉为列当科多年生寄生草本植物,全球分布大约有22种[1],我国共有4种和1变种[2],分别为荒漠肉苁蓉Cis-tanche deserticolaY. C. Ma、盐生肉苁蓉C.salsa(C. A.Mey.) Benth. et Hook. f.、管花肉苁蓉 C.tubulosa(Schenk) R. Wight、沙苁蓉C.sinensisG. Beck和白花盐苁蓉C.salsa(C. A. Mey.) Benth. et Hook. f.var.albiflo-raP. F. Tu et Z. L. Lou。
肉苁蓉是中药复方中用量最大的中药材之一,特别是荒漠肉苁蓉、盐生肉苁蓉和管花肉苁蓉被大量应用,并且大量出口日本、韩国及东南亚地区。
近年来由于狂采滥挖,肉苁蓉野生资源遭到严重破坏。
目前,虽然肉苁蓉人工种植已取得重要进展,但受各种条件的限制,仍不能足市场需求。
应用组织培养的方法,可以在不受寄主和季节气候等条件影响的情况下大量生产肉苁蓉细胞,是解决市场需求和保护野生资源的有效途径,具有很高的经济价值和生态效益。
近年来研究人员在肉苁蓉愈伤组织的诱导、愈伤组织最佳培养条件的探索和提高愈伤组织中药用成分等方面进行了不少工作,本文对相关的研究进行概述,并指出肉苁蓉大规模产业化的应用前景。
1肉苁蓉组织培养的研究进展肉苁蓉组织培养的主要目的是产业化生产肉苁蓉细胞及其药用成分,或者通过愈伤组织诱导植株再生为高产栽培提供种质资源。
通过大规模细胞培养生产愈伤组织,从中提取药用成分,需要摸索诱导愈伤组织的培养条件、适宜愈伤组织快速生长的培养条件和提高药用成分量的培养条件,以分。
作为另一个主要用途,体外培养种苗主要是通过组织培养的方法使种子在体外条件下萌发,再通过激素诱导愈伤组织发芽,产生人工种苗。
这种方法可以提高种子的发芽率,大大提高人工栽培生活能力。
苯乙醇苷类化合物(phenylethanoid glycosides, PhGs),是肉苁蓉的次生代谢产物,也是其主要药效成分。
肉苁蓉中PhGs的种类很多,有松果菊苷、麦角甾苷、海胆苷、顺式麦角甾苷、异麦角甾苷、乙酰基麦角甾苷、肉苁蓉苷等[3]。
目前组织培养肉苁蓉的研究大多数都集中在提高PhGs产量方面。
近年来兴起的生物转化系统生产药用成分的研究在肉苁蓉PhGs的生产中也有应用。
生物转化是利用生物体系,将加入到反应系统中的外源有机底物某一特定部位或功能基团进行特异性的结构修饰,以获得有价值的不同化学产物的工艺[4]。
这方面的研究对于产业化生产肉苁蓉药用成分具有重要的意义。
不同种肉苁蓉的愈伤组织中PhGs的种类和质量分数不同。
在我国作为药用植物使用的主要有荒漠肉苁蓉、盐生肉苁蓉和管花肉苁蓉。
研究证明3种肉苁蓉均有补肾壮阳的作用[5]。
其中荒漠肉苁蓉是《中国药典》规定的正品肉苁蓉,自古以来就作为药用植物大量使用。
盐生肉苁蓉所含的PhGs与荒漠肉苁蓉类似,而管花肉苁蓉中所含PhGs的种类比前两种要少,但某些成分的量却比荒漠肉苁蓉要高[5],总体药用功效与荒漠肉苁蓉类似。
目前组织培养中使用的外植体基本都来自荒漠肉苁蓉和盐生肉苁蓉。
以下分别对这两种肉苁蓉组织培养的研究现状进行概述。
1.1荒漠肉苁蓉组织培养的研究进展:目前已从荒漠肉苁蓉的茎、幼芽、鳞片、花瓣、子房、雄蕊和种子等多种组织和器官中诱导得到愈伤组织。
对其诱导条件和继代培养条件进行研究发现,温度、培养基、激素配比、pH值、光照和诱导子等对愈伤组织的培养和PhGs 的合成都有影响。
利用高温处理可以提高种子的愈伤组织诱导率并诱导其分化出芽[6]。
1.1.1愈伤组织的诱导:影响愈伤组织诱导率的主要因素有外植体的种类和培养基、激素配比、温度、光照、pH值等培养条件。
不同外植体诱导愈伤组织时,诱导率和诱导条件都不相同。
通过荒漠肉苁蓉茎、幼芽、鳞片、花瓣、子房、雄蕊和种子等多种组织和器官的比较发现,子房、茎无论在脱分化的时间,还是在愈伤组织的诱导率及生长状况上都比鳞片、幼芽好[7],而用种子进行愈伤组织的诱导较难,诱导率非常低[8]这可能是由于肉苁蓉的寄生性造成的,自然条件下肉苁蓉种子具有一个近球形胚,只有在宿主梭梭根穿入之后才能够萌发[9],因此从种子中诱导出愈伤组织需要克服其对寄主的依赖性。
欧阳杰等研究了用荒漠肉苁蓉种子诱导愈伤组织的条件,发现在接种前剥去种皮并进行热处理可以明显提高诱导率,最佳的处理方法是50℃处理1 h,此时愈伤组织的诱导率可达25%[10]。
培养条件对愈伤组织的诱导率和生长状况也非常重要。
通常高盐离子浓度的MS培养基和B5培养基诱导愈伤组织的效果比较好。
在诱导过程中,激素的种类和浓度很关键,需要设置多个梯度进行对比选择最佳条件,实验中采用正交设计是较科学的一种方法。
pH值过低不利于愈伤组织的生长,过高会使培养基凝结成块,不利于营养成分的吸收,需要设置多个梯度选择最佳pH值。
温度和光照等对诱导效果的影响不是很大[10],目前的研究大都采用25℃暗培养的条件[7,8]。
荒漠肉苁蓉幼芽、种子和鳞片的研究发现,B5+CH500 mg/L为基本培养基,添加IAA 0.58 mg/L+KT 2mg/L,pH值为6.0诱导效果最好[8];若采用MS+2,4-D 2 mg/L+NAA 1 mg/L,配方简单,同时对各种愈伤组织也都能达到较好的诱导效果[7]。
采用正交设计研究其种子的诱导发现,最佳诱导条件为去除种皮,添加2,4-D 2 mg/L、KT 0.5mg/L和GA31 mg/L,pH值为 6.0[10];此实验对各影响因子的分析非常科学,但设置激素水平未设置0水平,即默认了3种激素必须同时存在。
若多设置1～2个激素水平(包括0水平)将会获得更佳的培养条件。
1.1.2 适宜愈伤组织快速生长的培养条件:对温度、基本培养基、植物激素的浓度、蔗糖浓度、水解酪蛋白的浓度以及光照进行多梯度比较发现,25℃,固体B5培养基,pH值5.5～6.5,添加6-BA 0.5 mg/L、赤霉素10 mg/L、蔗糖20 g/L、水解酪蛋白800 mg/L,每天光照16 h,光照强度为24Lmol/(m2·s),最有利于PhGs的合成,其量比外植体中高了42%～127%[11]。
方差分析表明光照对PhGs合成和积累的影响非常显著,这可能是由于愈伤组织的生长和PhGs的合成与光形态发生作用有关。
通过研究光照强度和光谱特定性对于愈伤组织生长和PhGs产生和积累的影响,发现435 nm蓝光强度为24Lmol/(m2·s)时,愈伤组织干重和PhGs达到最高值,分别比白光照射下提高了19%和41%[12]。
同时分别测定了PhGs合成途径中的限速酶——苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性在蓝光和白光照射下随时间的变化,发现蓝光照射下PAL的活性明显高于白光照射下的水平,推测光照对PhGs合成的影响可能是由于光受体被蓝光激活后提高了植物体内PAL的活性,促进了PhGs合成和积累的增加[12]。
1.1.3添加诱导子提高愈伤组织中的药用成分:由于促进肉苁蓉愈伤组织生长与促进次生代谢产物大量合成、积累的培养条件并不相同,因此肉苁蓉大规模细胞培养可以采用两步培养法,第1步先在生长培养基上使细胞快速增殖,再将处于对数生长期的细胞到诱导培养基上增行第2步培养,以便获得最多的药用成分。
探索第2步培养中最适宜药用成分合成并大量积累的条件是研究中最为关键的问题。
利用生物转化的方法生产药用成分是一条有效的途径,这种方法是将伤组织作为生物转化系统,通过前体饲喂和添加诱导子,使廉价的前体转化为价值很高的药用成分。
诱导子是一类能引起植物细胞代谢强度改变或代谢途径改变的物质,包括生物诱导子和非生物诱导子两类。
生物诱导子又分内源性和外源性两类,内源诱导子来源于植物本身,如降解细胞壁的酶类、细胞壁碎片和寡聚糖等;外源诱导子多来源于微生物,包括经处理的菌丝、微生物机体浸提物及产物等。
非生物诱导子常用辐射、金属离子等。
近年来研究发现稀土元素化合物是一类诱导活性很高的诱导子[15]。
在药用植物愈伤组织培养的第2步,加入诱导子往往能够刺激细胞的次生代谢、提高药用成分的量,对于降低工业化生产的成本有重要的影响。
目前已有研究表明加入真菌诱导子茄病镰孢Fusarium solani或非生物诱导子稀土元素都可以提高肉苁蓉愈伤组织的生物量和其中PhGs的量。
李森等用从梭梭根系及肉苁蓉植物株内分离出的真菌镰刀菌属茄病菌菌丝作为诱导子,研究其对荒漠肉苁蓉愈伤组织中氨基酸量的影响。
结果证明,7种人体必需氨基酸(除苏氨酸略低外)均高于野生植株,其中苯丙氨酸的量是野生植株10倍以上[13]。
鲁翠涛等采用同样的真菌诱导子茄病菌研究其对荒漠肉苁蓉PhGs量的影响。
用不同剂量(碳水化合物当量)的诱导子诱导液体培养的愈伤组织,经过27 d 后测得剂量为20 mg/L时PhGs的总产量最高,比不加诱导子时提高了近100%[14]。
这可能与植物遇到微生物侵袭时的防御机制有关。
当植物遭到有害物质威胁的情况下,倾向于合成抗病的次生代谢产物。
欧阳杰等用稀土元素作为诱导子研究其对荒漠肉苁蓉愈伤组织生长和PhGs合成的影响,发现稀土元素钕(Nd)、镧(La)、铈(Ce)都可在适当的浓度范围对愈伤组织生长和PhGs合成有促进作用,一种稀土元素的混合物(MER,La2O3∶CeO2∶Pr6O11∶Sm2O3=225∶175∶3∶1,mol/mol)表现出最强烈的促进作用。
经过30 d的培养,加入0.02mol/L MER的愈伤组织中PhGs的量和总产量都提高最多,分别是20.8%和1.6 g/L,比对照(没有加入稀土元素)提高104%和167%[5]。
原因可能跟稀土元素的化学结构类似于Ca有关。
低浓度的稀土元素与Ca2+、Fe3+竞争细胞膜上的受体,从而影响了营养物质的吸收、利用和转化。
同时根据实验研究组织培养不同时间的苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性变化,推测可能Ce4+影响了PAL的活性,从而影响PhGs的合成[15]。
1.2盐生肉苁蓉组织培养的研究:对于盐生肉苁蓉的研究较荒漠肉苁蓉要少,主要研究集中在确定适合愈伤组织生长和药用成分合成的培养基、生长素、激素配比、温度和光照等培养条件。