实验四槐米中芸香苷的提取分离与鉴定
槐米中芸香苷及槲皮素的提取分离与检识
2014.07中医中药242槲皮素作为一种黄酮类的物质，在草本植物和食物中有广泛的分布。
同时槲皮素作为一种比较强的植物性抗氧化剂，能够防止动脉硬化等功能，在治疗冠心病等心脑血管疾病中具有重要的作用。
同时还能够清除自由基，保护心肌、降血压、降血脂以及抗菌消炎等作用，对于肿瘤细胞等均有良好的抑制效果。
在槲皮素的提取中已经出现了多种提取方法，而且其方法也越来越先进，对槲皮素的普及具有重要的作用。
[1]1 芸香苷及槲皮素的提取芸香苷是一种广泛存在于植物体内的黄酮类的化合物，在自然界的花、叶、果实等有广泛的存在，在槐米、罗布麻等植物中的含量比较高。
槲皮素可以用来作为中药制剂，能够有效的降低毛细血管的通透性，抗病毒、清除氧自由基等功能。
具有防止动脉硬化和增强人体毛细血管的重要功能，在临床上常常被用来作为治疗心血管疾病的辅助药物。
同时由于它是一种植物提取物，它对于人体没有毒性，因此在食品工业中还被用来作为抗氧化剂和天然黄色素。
取槐米若干，加入六倍体积的量水，在100摄氏度煮沸环境下教学提取。
加入石灰水缓慢的搅拌调整其pH 到8.0~9.0，然后加入适量的浓度为3%的硼砂溶液，并且煮20~30min 。
然后将得到的混合物过滤，过滤的残渣进行反复的减压过滤3次，然后将得到了滤液合并起来。
在60摄氏度的条件下，用浓硫酸将得到的滤液的pH 调整到5.0。
在室温下放置24小时，然后抽滤，将得到的沉淀物用水洗到中性，在60摄氏度的条件下干燥可以得到芸香苷的粗制品。
利用沸水重新结晶，在70摄氏度的环境下干燥从而得到精制的芸香苷。
精制的芸香苷仍然难以满足使用的需要，需要进一步的提纯，将得到了精制芸香苷按照1:80的比例加入到浓度为2%的硫酸溶液中进行水解，加热到100摄氏度保持二个小时，然后冷却进行过滤。
将得到的滤液利用浓度为95%的乙醇进行重结晶，然后进行分离，用甲醇作为洗脱液进行洗脱，槐米中芸香苷及槲皮素的提取分离与检识甄 真北京卫生职业学院 北京市 101101【摘 要】槐米味苦、微寒，有清肝泻火和凉血止血的作用，槐米中主要含有槲皮素和芸香苷，同时还有槐花米甲乙丙素、鞣制等成分。
槐米中芸香苷类成分的提取分离技术实验流程
槐米中芸香苷类成分的提取分离技术实验流程The extraction and separation of saponins in Sophora japonica seeds (槐米) involves several experimental steps. Here is a detailed description of the process.First, prepare the sample by grinding the Sophora japonica seeds into a fine powder. This can be done using a mortar and pestle or a mechanical grinder. Ensure that the powder is homogeneous and free from any clumps.将槐米研磨成细粉，可以使用研钵和杵或机械研磨器。
确保粉末均匀且没有任何团块。
Next, extract the saponins from the powdered Sophora japonica seeds using a suitable solvent. Commonly used solvents for this purpose include methanol, ethanol, and water. Choose a solvent that has higher affinity for saponins to ensure maximum extraction efficiency. Place the powdered seeds in a container and add the solvent. Stir or shake the mixture to facilitate the extraction process.接下来，使用合适的溶剂从槐米粉末中提取皂苷类化合物。
槐花中芸香苷的提取分离、精制、鉴定二.ppt
香苷的乙醇液作为供试液做芸香苷化学检识反应。
槐花中芸香苷的提取分离、精制、鉴定（二）
• 1、盐酸—镁粉反应：取供试液2ml于试管中，加 入少许镁粉，再向试管中滴加浓盐酸数滴，观察 现象。
• 2、三氯化铝反应：在滤纸片上分别滴两滴供试液 （注意相互不要晕染），其中一滴作为空白对照， 另一滴上面滴一滴三氯化铝溶液。观察二者颜色 变化，并在紫外灯下观察荧光。
• 3、氨熏反应：在滤纸片上分别滴两滴供试液，其 中一滴作为空白对照，将另一滴点有供试液的部 分倒扣在浓氨水的瓶口上。观察二者颜色变化。
槐花中芸香苷的提取分 离、精制、鉴定（二）
Байду номын сангаас
槐花中芸香苷的提取分离、精制、鉴定（二）
• 一、实验目的：使芸香苷在水中重结晶，去除杂质达到精 制的目的。
• 二、实验原理：芸香苷粗品易溶于热水，难溶于冷水。 • 三、操作步骤： • （一）抽滤得到芸香苷粗品。 • （二）芸香苷的精制 • 取芸香苷粗品5/6份，置于500ml烧杯中，加蒸馏水300ml
【正式版】芸香苷的提取分离和鉴定PPT
点芸香样苷：和提槲取皮的素芸的香纸苷色与谱槲皮素的乙醇溶液和对照品的乙醇溶液。
液。 盐取酸芸－ 香镁苷粉水反解应后的芸滤香液苷10与m槲l，皮加素饱溶和液氢分氧别化置钡于溶两液试（管或中碳，酸加钙入粉金末属）镁中粉和少至许中，性盐，酸滤2滴去～白3色滴的，硫观酸察钡并沉记淀录，颜滤色液变水化浴。60℃浓缩至2～3
展ml开，剂加：2～乙3醇m－l乙水醇（溶7解:3），或作甲为醇糖－的水供（试8液:2。）。 芸5 m香l，苷振和摇槲后皮斜素置的试纸管色，谱沿管壁滴加0.
展开剂：正丁醇－醋酸－水（4:1:5）上层溶液。 称 点取样槐：花提米取粗的粉槲2皮0 g素（承压芸碎香）苷，的加乙沸醇水溶30液0 和ml对，照加品热的煮乙沸醇30溶m液in，。纱布趁热过滤，残渣同法再操作一次，合并两次滤液，室温放置析晶，
待全部析出后，减压抽滤，用蒸馏水洗涤芸香苷结晶，抽干，得粗制芸香苷，置空气中干燥后，称重。
取展芸开香 剂苷：及乙槲醇d皮－. 素水三精（品7氯:3约）化1或0 m甲铝g醇，纸－各水用片（5 m8反:l2乙）应醇。溶解在，制两成样张品滤溶液纸，按条下上列方分法进别行滴试验加，比芸较香苷元苷和苷、的槲反应皮情况素。醇溶液 芸香苷后的提，取各－水加提取1%法 三氯化铝乙醇溶液两滴，观察颜色变化，记录现象。
e. 锆－柠檬酸反应 取样品溶液2 ml，加入2%二氯氧锆甲醇溶液3滴～4 摘，观察颜色，然后加入2％柠檬酸甲醇溶液3滴～4滴，观察并记录颜色变 化。
2.色谱鉴定
a. 芸香苷和槲皮素的纸色谱 主称要取是 槐利花用米芸粗香粉苷20的g（物压理碎化）学，性加质沸对水其3进00行m提l，取加分热离煮。沸30 min，纱布趁热过滤，残渣同法再操作一次，合并两次滤液，室温放置析晶，
芸香苷提取精制水解和鉴定
2%硫酸、乙醇、1%氢氧化钠溶液、1%盐酸溶液、10%α-萘酚溶 液、浓硫酸、镁粉、1%醋酸镁甲醇溶液、正丁醇、醋酸 • 仪器：电炉、漏斗、紫外分析仪、锥形瓶、量筒、烧杯、层析 筒、试管
第2页/共1花米20g（研碎），置于1000ml圆底烧瓶中，
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实验内容与方法： • 二、芸香苷的精制 • 取2g加蒸馏水400ml，加热煮沸溶解，趁热抽滤，滤液放置过夜，析晶，抽滤，
得精制芸香甙。烘干。
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实验内容与方法：
• 三、芸香苷的水解 • 取精制芸香甙1g，置250ml圆底烧瓶中，加
2%H2SO4溶液80ml，加热回流30分钟至1小 时，开始加热10分钟为澄清液，逐渐析出黄色小 针状结晶，即为槲皮素。放冷抽滤得结晶，滤液 保留作为糖的检查，沉淀物用蒸馏水洗至中性， 抽干水份，晾干称重，得粗制槲皮素。必要时可 用稀乙醇重结晶。
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• 2．呈色反应 • 取芸香苷和槲皮素约10mg，各用5ml乙醇溶解，制成
样品溶液，按下列方法进行试验，比较苷元和苷的反应 情况。 • （1）Molish反应 取样品溶液1ml，加10%α-萘酚 溶液1ml，振摇后斜置试管，沿管壁滴加0.5ml浓硫酸， 静置，观察并记录液面交界处颜色变化。 • （2）盐酸镁粉反应 芸香甙与槲皮素溶液分别置于试 管中，加入金属镁粉少许，浓盐酸2~3滴，观察并记录 颜色变化。 • （3）醋酸镁纸片反应 取两张滤纸条，分别滴两滴芸 香苷、槲皮素的乙醇溶液，然后各加1%醋酸镁甲醇溶液 两滴，于紫外灯下观察荧光变化，记录现象。
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• 四、芸香苷的检识反应 • 1．成盐反应 取芸香甙10mg左右，置试管中
槐米中芦丁(芸香苷)的提取分离及检识
结晶
静置液减压抽滤在 60-70温度下烘干 得粗品芸香苷 置于300ml蒸馏水 煮沸至芸香苷全部溶解 趁热抽滤 滤液放冷析晶
天然产物化学
水解 取精制芸香苷1g 置250ml圆底烧瓶中 加2%H2SO4溶液80ml 加热回流30分钟至1小时， 开始加热10分钟为澄清液，逐渐析出黄色小针状结晶， 即为槲皮素。放冷抽滤 沉淀物用蒸馏水洗至中性， 抽干水份，晾干称重，得粗制槲皮素
天然产物化学
提取
碱溶酸沉法
芸香苷分子中含有酚羟基，显弱酸性，能与 碱成盐而溶于碱液中加酸酸化后又可以沉淀 析出，因此可用碱溶酸沉法提取芸香苷。
天然产物化学
实验步骤
重复以上操作， 硼砂水150ml,时 间20min
加0.4%硼砂水200ml 加热微沸30min,用石 灰乳保持pH8-9
结晶
天然产物化学
天然产物化学
聚酰胺薄层色谱检识
点 样：（1）自制1%芸香苷乙醇溶液 （2）自制1%槲皮素乙醇溶液 对照品：1%芸香苷对照品乙醇溶液乙酯（3∶1∶0.5）
显色：（1）先在可见光下观察斑点颜色，然后在紫 外灯下观察斑点颜色 （2）用氨水熏，记录斑点颜色和位置 结果：记录图谱，斑点颜色，计算芸香苷和槲皮素 Rf
天然产物化学
槐米中芦丁（芸香苷）的提取、分离和检识
天然产物化学
芦 丁
芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含 有三分子的结晶水，熔点为174~178℃， 无水物188~190℃。 溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200； 冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。 微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、 氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。
天然产物化学
化学检识
• 取芸香苷和槲皮素约10mg，各用5ml乙醇溶解，制成样 品溶液，按下列方法进行试验，比较苷元和苷的反应情况。 • （1）Molish反应 取样品溶液1ml，加10%α-萘酚溶液 1ml，振摇后斜置试管，沿管壁滴加0.5ml浓硫酸，静置， 观察并记录液面交界处颜色变化。 • （2）盐酸镁粉反应 芸香甙与槲皮素溶液分别置于试管 中，加入金属镁粉少许，浓盐酸2~3滴，观察并记录颜色 变化。
槐米中芸香苷提讲义取分离及检识-课件PPT(精)
槐米中芸香苷
槐米中芸香苷（芦丁）的提取与鉴定【实验目的】1、学会运用碱溶酸沉法，从槐米中提取、精制芦丁，并进行水解。
2、学会用显色反应及纸色谱法检识黄酮类化合物。
【实验原理】采用碱溶酸沉法提取，其原理是芸香苷结构中含有酚羟基，具酸性，能溶于碱水，当加入酸溶液后，则芸香苷沉淀析出。
芸香苷的精制是利用其可溶于热水，难溶于冷水的性质与杂质分离。
【实验材料】设备：电炉、托盘天平、500 ml烧杯、量筒、玻璃棒、移液管、纱布、温度计、滴管、抽滤装置、研钵、250 ml圆底烧瓶、冷凝管、水浴锅、pH 试纸、新华色谱滤纸、紫外灯、展开筒、试管、试管架。
药品：槐米粗粉、浓盐酸、蒸馏水、0.4%硼砂、石灰乳、2%硫酸、95%乙醇、氢氧化钡、葡萄糖标准品水溶液、鼠李糖标准品水溶液、正丁醇、醋酸、芦丁标准品、槲皮素标准品、氨水、三氯化铝、浓硫酸、α–萘酚、氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、镁粉、苯胺-邻苯二甲酸、醋酸镁【实验步骤】实验1、芸香苷的提取：称取槐米粗粉20g，置500 ml烧杯中，加入0.4%硼砂沸水溶液200 ml，在搅拌下加石灰乳，调至pH8～9，加热微沸20分钟（注意保持pH8～9），并随时补充蒸发掉的水分，趁热用四层纱布滤过。
滤渣同样操作再提取一次，合并两次滤液。
滤液在60℃～70℃用浓盐酸调至pH5左右，静置过夜使沉淀完全，抽滤，沉淀用蒸馏水洗2～3次至中性，抽干，置空气中晾干，得芸香苷粗品。
实验2、芸香苷的精制：称一定重量的粗品，按约1∶200的比例悬浮于蒸馏水中，煮沸10分钟使其全部溶解，趁热抽滤，冷却滤液，静置析晶。
抽滤，置空气中晾干或60℃～70℃干燥，得精制芸香苷，称重，计算得率。
实验3、芸香苷的水解和鉴定：取芸香苷1g，研细后置于250 ml圆底烧瓶中，加入2%硫酸溶液100 ml，直火微沸回流约40分钟，至析出鲜黄色沉淀不再增加为止，放冷抽滤，滤液保留作糖检查，沉淀用少量水洗去酸，抽干水分，晾干称重，得粗制槲皮素，然后用乙醇（95%乙醇约15 ml）重结晶即得精制槲皮素。
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实验四槐米中芸香苷的提取分离与鉴定
芦丁(Rutin)亦称芸香甙(Rutisude)，广泛存在于植物界中。
现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、荞麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。
尤以槐花米和荞麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。
槐花米为豆科植物槐(Sophora japonica L。
)的花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达12%~16%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。
芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性。
临床上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。
槐花米中主要化学成分的结构及性质：
1.芦丁(Rutin)
淡黄色细小针状结晶，℃~178℃(含三分子结晶)，188℃(无水物)。
溶解度：
水：1:100(冷)，1:200(热)
甲醇：1:100(冷)，1:9(热)
乙醇：1:650(冷)，1:60(热)
吡啶：1:(冷)，易溶(热)
不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。
可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。
2. 槲皮素(Quercetin)
即芸香甙甙元，为黄色结晶，mp.313℃~314℃(含2分子结晶水)，316℃(无水物)。
溶解度：
乙醇：1:290(无水乙醇)，1:23(热)
可溶于甲醇、乙酸乙酯、丙酮、吡啶、冰醋酸。
不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚等。
3. 皂甙
粗品为白色粉末，mp.210℃~220℃(分解)。
易溶于水、吡啶，能溶于200倍的甲醇中。
酸水解后得白桦脂醇、槐二醇二种皂甙元及葡萄糖，葡萄糖醛酸及葡萄糖醛酸内酯。
(1) 白桦脂醇(Betulin)
无色针晶，℃~252℃。
能溶于醋酸、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿、
苯、乙醚等溶剂，难溶于石油醚及水。
(2) 槐二醇(Sophoradiol)
无色针晶，℃~220℃或224℃。
能溶于石油醚、苯、丙酮、甲醇中，难溶于水。
4. 槐属甙(Sophoricoside)
mp.298℃。
易溶于热乙醇、热醋酸、吡啶、稀碱液；难溶于水；冷乙醇、冷醋酸；难溶于乙酸乙酯、丙酮中。
5. 槐属黄酮甙(Sophoraflavonoloside)
mp.207℃~208℃。
可溶于热水及乙醇，难溶于冷水、乙酸乙酯、丙酮，不溶于乙醚等低极性有机溶剂。
6. 槐属双甙(Sophorabioside)
针状结晶，mp.156℃~160℃(含结晶水)，无水物mp.248℃。
易溶于吡啶，能溶于热乙醇、丙酮，稍溶于热水，不溶于弱极性有机溶剂。
一、实验目的
1. 掌握酸碱法提取黄酮甙的一般原理及方法。
2. 掌握黄酮甙（包括甙元）的鉴定方法。
3. 学会纸色谱的操作技术。
二、实验原理
1. 芦丁可溶于热水，难溶于冷水，其分子结构中具有较多的酚羟基，显弱酸性，在碱液中易溶解，而在酸性条件下，易析出沉淀，故本实验采用碱溶解酸沉淀的方法自槐花米中提取芦丁。
再利用其在冷热水中溶解度的差别采用沸水为结晶溶剂进行精制。
2. 利用芦丁可被稀酸水解，生成甙元和糖，通过颜色反应，薄层层析及纸层析进行检识和确认芦丁和槲皮素。
三、实验内容
（一）芦丁的提取
1. 于1000m1烧杯中加500m1蒸馏水加热煮沸后，称取40g槐花米粗粉，投人沸水中，直火加热煮沸5分钟，在搅拌下小心加入石灰乳至pH 8～9，加热保持微沸20-30分钟，趁热用棉花过滤，滤渣再用调pH 8～9的石灰水200m1煮10分钟，趁热过滤，合并两次滤液，稍冷(60-70℃)用浓盐酸调至pH2～3左右，放置过夜
2. 减压过滤，沉淀用水洗二次，然后用少量乙醇洗二次，抽干，称重______g，即得芦丁粗品。
（二）芦丁的精制
1. 将芦丁粗品置烧杯中，按(1：200)加蒸馏水，加热煮沸数分钟，使其充分溶解，趁热抽滤，滤液放置过夜；
2. 减压过滤，用少量蒸馏水洗涤沉淀2-3次，抽干，即得芦丁精品，称重______g，计算提取率______
（三）芦丁的水解
1. 取精制芦丁2 g，尽量研细，置于500ml圆底烧瓶中，加2%硫酸250ml，于直火加热微沸回流小时，放冷
2. 减压过滤，所得沉淀即为槲皮素，称重______g；滤液保留作糖部分的鉴定。
3. 取水解母液约20m l，小心地用BaOH细粉中和至近中性，自然过滤，滤液蒸干，加2～3ml乙醇溶解，作为糖的供试液。
（四）检识
1. 理化鉴别
（1）. 莫氏(Molish)反应
取芦丁和槲皮素各数毫克，分别置于两支小试管中，加2ml乙醇溶解，再加10% α-萘酚乙醇液1ml，振摇使之溶解，然后沿试管壁加浓硫酸约2ml，静置，观察，两液层界面变化，呈紫红色环者示分子中含糖结构。
(2). 盐酸----镁粉反应
取芦丁和槲皮素各数毫克，分别置于两支小试管中，加2ml乙醇热溶，加镁粉少许，滴加浓盐酸，溶液由黄色逐渐变红者示有黄酮类化合物存在。
(3). 醋酸镁纸片反应
取两张滤纸，分别滴两滴芦丁和槲皮素的乙醇溶液，然后各加1%醋酸镁甲醇溶液两滴，黄酮类应呈黄色荧光。
紫外灯下观察荧光的变化，并记录现象。
(4). 三氯化铝纸片反应
取两张滤纸，分别滴两滴芦丁和槲皮素的乙醇溶液，然后各加1%三氯化铝甲醇溶液两滴，黄酮类化合物应呈鲜黄色。
紫外灯下观察荧光的变化，并记录现象。
2. 色谱鉴定
（1）芦丁和槲皮素的纸色谱
支持剂：新华层析滤纸
点样：1. 自制精制芦丁乙醇液
2. 自制精制槲皮素乙醇液
对照品：3. 芦丁标准品乙醇液
4. 槲皮素标准品乙醇液
展开剂：正丁醇－醋酸－水(4:1:5) (上层)或15%醋酸水溶液
显色：(1) 可见光下显黄色斑点，紫外光下观察荧光斑点。
(2) 用氨熏后再观察。
(3) 喷1%三氯化铝试液后再观察。
（2）糖的纸色谱鉴定
支持剂：新华层析滤纸
点样：自制糖的供试品溶液及葡萄糖、鼠李糖对照品
展开剂：正丁醇－醋酸－水(4:1:5) (上层)
显色剂：苯胺—邻苯二甲酸试剂（喷后105℃烘10min显色）
画出图谱，计算Rf值。