研究中常用荧光染料和探针
荧光定量PCR中探针法与染料法的区别
荧光定量PCR中探针法与染料法的区别：一、荧光定量PCR中探针法与染料法的描述：1.荧光定量PCR探针法：探针法即除了引物外另外设置一个探针，在探针的两端分别带上发光集团和淬灭集团，这个时候，两个平衡不发光，但是当DNA通过引物合成的时候，探针被折断，释放出发光集团和淬灭集团，两个距离较远，发光集团产生荧光，被机器收集到信号，从而检测基因的量2、荧光定量PCR SYBR Green染料法：染料能够与双链结合，当PCR扩增的时候，染料结合到D NA上，从而发光，单个的染料不发光，这样就能收集到信号，我们可以看出，染料法特异性不强，只要是双链的DNA都回结合发光。
二、荧光定量PCR中探针法与染料法的优缺点1、探针法通过探针可以增加反应收集信号的特异性，只有探针结合的片段上发生扩增才能收集到信号，能够用多重体系反应的方法，能够预测和提前进行反应条件的优化，缺点是要合成探针，成本高2、染料法经济实惠，可以做溶解曲线，分析全部PCR产物的T M值，缺点就是特异性没有探针法好【分享】定量pcr仪选则宝典:各自精彩的选择如何选择合适的定量PCR仪定量P CR仪主要由两部分组成，一个是PCR系统，一个是荧光检测系统。
选择定量PC R仪的关键——由于定量PC R必需借助样本和标准品之间的对比来实现定量的，对于定量PCR系统来说，重要的参数除了传统PCR的温控精确性、升降温速度等等，更重要的还在于样品孔之间的均一性，以避免微小的差别被指数级放大。
至于荧光检测系统，多色多通道检测是当今的主流趋势——仪器的激发通道越多，仪器适用的荧光素种类越多，仪器适用范围就越宽;多通道指可同时检测一个样品中的多种荧光，仪器就可以同时检测单管内多模版或者内标+样品，通道越多，仪器适用范围越宽、性能就更强大。
常见的小分子荧光探针种类
常见的小分子荧光探针种类1.引言1.1 概述小分子荧光探针是一类被广泛应用于生物领域的化学工具，通过其具有的荧光性质，可以用于生物成像、药物传递、疾病诊断等方面。
小分子荧光探针具有分子结构简单、稳定性好、探测灵敏度高等特点，在生物学研究中起着重要的作用。
小分子荧光探针的种类繁多，根据其不同的结构和功能特点，可以分为许多不同的类别。
常见的小分子荧光探针包括有机荧光探针、金属配合物荧光探针、聚合物荧光探针等。
有机荧光探针是指由有机化合物构成的荧光探针，其分子结构多样，可以通过调整结构来实现特定的探测目标。
常见的有机荧光探针包括荧光染料、荧光蛋白等。
荧光染料具有较强的荧光强度和良好的化学稳定性，可以用于细胞成像、生物传感等领域。
荧光蛋白是一类来源于特定生物体的蛋白质，其具有自身天然的荧光性质，可以通过基因工程技术进行改造和调整，广泛应用于生物研究中。
金属配合物荧光探针是指由金属离子与配体形成的荧光探针，其具有较强的荧光性能和较长的寿命。
金属配合物荧光探针具有选择性较高的特点，可以用于特定金属离子的探测和诊断。
常见的金属配合物荧光探针包括铜离子、锌离子、铁离子等的配合物。
聚合物荧光探针是指由高分子聚合物构成的荧光探针，其具有较好的溶解性和稳定性。
聚合物荧光探针可以通过调整聚合物的结构和链长来实现特定的探测需求。
常见的聚合物荧光探针包括聚合物分子探针、聚合物纳米探针等。
总之，常见的小分子荧光探针种类繁多，具有不同的结构和功能特点，可以根据具体的研究需求选择适合的荧光探针进行应用。
这些小分子荧光探针为生物学研究提供了有力的工具，有助于深入理解生命的基本过程和疾病的发生机制。
未来，随着技术的不断发展和突破，相信小分子荧光探针在生物领域的应用会得到更广泛的推广和应用。
1.2文章结构1.2 文章结构本文主要围绕"常见的小分子荧光探针种类"展开讨论。
文章分为引言、正文和结论三个部分。
在引言部分，将进行概述、文章结构和目的的介绍。
生物分析中的探针
生物分析中的探针生物分析中的探针是指一种特殊的标记物或探测物，用于检测生物分子或细胞中的靶分子，并帮助科学家了解其结构、功能和相互作用等信息。
探针在现代生物技术研究、分子诊断和药物研发等领域中起着重要的作用。
本文将介绍生物分析中常见的几种探针。
1.基于荧光的探针：基于荧光的探针是最常见和常用的探针之一、通过将荧光物质与靶分子或探测物相结合，科学家可以通过监测荧光信号的增强或减弱，来确定靶分子的存在和数量。
最常见的基于荧光的探针有荧光染料、荧光蛋白和量子点等。
例如，在免疫组织化学中，学者们通常使用荧光标记的抗体作为探针，用于检测一些特定的抗原在细胞或组织中的分布情况。
2.基于放射性同位素的探针：基于放射性同位素的探针常用于核医学诊断和药物研发。
放射性同位素有较短的半衰期，可以通过使用放射性同位素标记靶分子或探测物来追踪其在生物体内的分布和代谢。
例如，放射性碘（^125I）或放射性碳（^14C）标记的分子可用于研究药物的代谢途径和排泄速率，以及疾病的诊断和治疗。
3.基于酶反应的探针：基于酶反应的探针是通过结合酶和底物来检测靶分子的存在与否。
酶反应常常通过生化反应产生显色或荧光信号，从而用于监测靶分子的浓度或活性。
这类探针在病原体检测、基因表达分析和蛋白质功能研究等方面具有很大的应用潜力。
4.基于DNA或RNA的探针：基于DNA或RNA的探针通常用于检测和定量测定核酸分子（例如：基因、miRNA等）。
这些探针通常采用荧光标记的寡核苷酸探针，利用互补配对原理来特异性地结合目标核酸分子，从而产生荧光信号。
这类探针在PCR扩增、灵敏核酸杂交和基因组分析中具有广泛的应用。
除了上述常见的探针之外，生物分析中还有其他类型的探针，如金属离子探针、荷电分子探针等。
这些探针通常具有特异性和灵敏性，能够提供对复杂生物系统的详细了解，从而推动生物技术和医学研究的发展。
总之，生物分析中的探针是一种重要的工具，可用于检测和研究生物分子和细胞内的靶分子。
荧光探针的研究及应用
荧光探针的研究及应用随着科技的不断发展，荧光探针逐渐成为生命科学研究领域中不可缺少的重要工具。
荧光探针是一种能够发射出荧光信号的分子，在分子生物学、生物医学和化学生物学等领域中有着广泛的应用。
它们可以被用来研究细胞内的分子相互作用、识别生物分子、分析细胞功能，并可以在体内用作活体成像和药物筛选的工具。
本文将简要介绍荧光探针的基本原理、常见的荧光探针类型和其在生物学研究中的应用。
一、荧光探针的基本原理荧光探针的基本原理是荧光共振能量转移（FRET），其通过将荧光分子与生物分子（生物样品）耦合，使两者之间发生相互作用，从而产生能量转移。
FRET 能量转移是从能量接受者的激发态到另一个分子的荧光染料的发射态的一种非辐射性能量转移。
在FRET中，激发荧光染料的光子会被共振耦合到另一个染料的激发态，从而使其发出荧光光子。
这样，在激发荧光染料的时候，可以用荧光染料的荧光光子来检测另一个染料的存在和位置。
荧光探针对于荧光光子的发射特征和其它的生化参数是很敏感的，所以它们可以被用来探测各种细胞和分子。
二、常见的荧光探针类型1. 荧光染料：荧光染料是最常见的荧光探针类型之一，它们有着广泛的应用，可以被用来标记蛋白质、核酸等生物分子。
常见的荧光染料包括荧光素、草铵膦、偶氮染料等。
2. 荧光蛋白：荧光蛋白是一种具有自发荧光性质的蛋白质，其最早源自于水母Aequorea victoria。
荧光蛋白可以用来跟踪胞内或胞外的重要过程，如蛋白质、核酸合成、信号传递等。
3. 量子点：量子点是一种半导体纳米粒子，具有窄的发射光谱、强的光稳定性和较大的荧光量子产率。
这些特点使得量子点成为新一代高亮度及高灵敏度的荧光探针。
三、荧光探针在生物学研究中的应用荧光探针广泛地应用于细胞内信息传递、化学生物学、生物传感、药物筛选和临床诊断等方面。
以下为举几个常见的案例：1. 细胞内信息传递：荧光探针可被用于研究细胞内信号转导、磷酸化和蛋白质相互作用等过程。
荧光染料及其生物医学应用
荧光染料及其生物医学应用荧光染料是一类能够吸收特定波长的光并发射出较长波长的光的化合物。
由于荧光染料具有较强的荧光发射，因此在生物医学领域中有着广泛的应用。
荧光染料在生物成像中起到了重要的作用。
通过将荧光染料标记在特定的生物分子上，可以实现对这些分子的可视化观察。
例如，研究人员可以将荧光染料标记在特定的蛋白质上，通过荧光显微镜观察这些蛋白质在细胞内的分布和活动情况。
这种荧光标记技术不仅可以帮助研究人员了解生物分子的功能和相互作用，还可以在疾病诊断中起到重要的作用。
荧光染料在生物探针中的应用也非常突出。
生物探针是一种特异性地与生物目标分子结合并发出荧光信号的分子。
荧光染料被广泛应用于生物探针的制备中，用于检测和定量生物样品中的特定分子。
例如，在临床诊断中，研究人员可以利用荧光染料制备出特定的生物探针，用于检测血液中的肿瘤标志物，从而实现早期肿瘤的筛查和诊断。
荧光染料还在药物输送系统中发挥了重要作用。
荧光染料可以被用作药物载体的标记剂，通过与药物分子的结合，实现对药物输送过程的可视化监测。
这种荧光染料标记的药物系统可以帮助研究人员了解药物在体内的分布情况，从而指导药物的合理使用和剂量控制。
荧光染料还在生物传感器中得到了广泛应用。
生物传感器是一种能够通过特定的生物识别元素与目标分子相互作用，并转化为可测量信号的装置。
荧光染料可以作为生物传感器中的信号转换元件，通过与目标分子的结合发生荧光变化，实现对目标分子的检测和定量。
这种荧光染料标记的生物传感器在环境监测、食品安全等领域具有重要的应用价值。
荧光染料在生物医学中具有广泛的应用前景。
通过将荧光染料与生物分子结合，可以实现对生物分子的可视化观察、生物探针的制备、药物输送系统的监测和生物传感器的构建等应用。
相信随着技术的不断发展和创新，荧光染料在生物医学领域中的应用会越来越广泛，为生命科学研究和临床诊断带来更多的突破和进展。
细胞成像技术中的荧光探针
细胞成像技术中的荧光探针细胞成像技术是一种非常重要的生物医学研究方法，可以直接观察活细胞和组织内部的生物过程，探测生物分子之间的相互作用和环境因素对生物过程的影响，对于疾病诊断和治疗的研究具有重要的应用价值。
荧光探针是细胞成像技术中的一种关键工具，可以标记目标生物分子，通过检测探针发射出的荧光信号来实现对生物过程的观察和研究。
荧光探针的种类非常多，可以根据其特性和应用领域分类。
常见的荧光探针有荧光染料、荧光蛋白、量子点等。
其中，荧光染料是一类小分子有机化合物，可以通过共价或非共价结合到生物分子上，对目标分子进行可视化标记。
荧光蛋白则是一类天然蛋白质，可以自发地发射荧光信号，使得它们成为一种可以在细胞和组织中表达的标记物。
量子点是一种半导体微纳米结构，具有较高的亮度和稳定性，可以作为高分辨率成像的荧光探针。
荧光探针在细胞成像技术中的应用非常广泛。
例如，在细胞膜的成像中，荧光假单胞菌素（FM）是一种常用的荧光探针。
FM会结合到细胞膜的磷脂双层上，因此可以用来标记细胞膜的形态和位置，并且能够被内质网吞噬后进入细胞内部，也可用来探测细胞内部的运输和分泌。
对于荧光信号强度要求较高的研究，如时间分辨和高速成像等，荧光蛋白和量子点则更具优势。
除了标记分子的位置和形态外，荧光探针还可以用来探测生物分子的活性和进程。
例如，最近研究表明，荧光探针可以用来探测癌细胞内部的凋亡过程，即细胞自我消亡的过程。
由于凋亡在癌症治疗中具有重要的作用，这种荧光探针在癌症治疗研究中具有潜在的应用价值。
此外，荧光探针还可被用于研究细胞的代谢过程、对环境因素的响应以及药物治疗的途径等诸多应用领域。
总之，荧光探针是细胞成像技术中不可缺少的工具，具有标记位置、形态和活性、进程等多种应用价值。
随着技术的进步和应用领域的拓展，荧光探针在细胞成像技术中的应用也将得到进一步拓展和深化。
荧光探针在生物医学领域中的应用及优势分析
荧光探针在生物医学领域中的应用及优势分析引言：生物医学领域的研究和应用需借助各种工具和技术来实现目标。
荧光探针作为一种常用的工具，在生物医学研究和临床应用中发挥着重要的作用。
本文将介绍荧光探针在生物医学领域中的应用，并分析其优势。
一、荧光探针在生物分子检测中的应用1. 荧光染料的标记荧光探针可以与生物分子结合，通过标记荧光染料实现生物分子的可视化检测。
例如，荧光标记的抗体可以用于检测特定蛋白质在细胞或组织中的表达情况。
通过观察荧光信号的强度、位置和分布，可以了解生物分子在生物体内的功能和变化。
2. 荧光探针的靶向性荧光探针可以通过特定的结构或配体具有靶向性，可以选择性地与生物体内的特定分子相互作用。
靶向性荧光探针可以用于检测疾病标志物、药物递送和肿瘤成像等领域。
例如，癌症标志物HER2在乳腺癌中的过表达，可以利用荧光标记的抗体探针进行早期诊断和治疗监测。
3. 荧光探针在基因组学研究中的应用荧光探针可以通过与DNA或RNA序列特异性结合，实现基因组学研究的目的。
荧光原位杂交( FISH)技术利用荧光探针可以检测染色体异常和基因突变。
此外，荧光探针还可用于探测基因表达、基因转录和蛋白质交互作用等方面的研究。
二、荧光探针在细胞成像中的应用1. 细胞器标记与成像荧光探针可以标记细胞器，如线粒体、内质网和高尔基体，通过荧光成像显示细胞器的形状、位置和功能。
这对于研究细胞的生理和病理过程非常有价值。
荧光探针的高选择性和灵敏性使得细胞器可以在活细胞中实时观察，从而深入了解细胞的内部结构和功能。
2. 荧光探针在细胞信号传导中的应用细胞信号传导是细胞内外相互作用的重要过程。
荧光探针可以用于研究钙离子、ROS（活性氧化物种）和其他重要小分子信号分子在细胞内的浓度和动态变化。
通过荧光成像和定量分析，可以揭示细胞内信号通路的调控机制。
三、荧光探针的优势分析1. 高灵敏度和高选择性荧光探针具有高灵敏度和高选择性，可以通过荧光信号变化准确检测生物分子的存在和浓度变化。
荧光定量PCR中探针法与染料法的区别
荧光定量PCR中探针法与染料法的区别：一、荧光定量PCR中探针法与染料法的描述：1.荧光定量PCR探针法：探针法即除了引物外另外设置一个探针，在探针的两端分别带上发光集团和淬灭集团，这个时候，两个平衡不发光，但是当DNA 通过引物合成的时候，探针被折断，释放出发光集团和淬灭集团，两个距离较远，发光集团产生荧光，被机器收集到信号，从而检测基因的量2、荧光定量PCR SYBR Green 染料法：染料能够与双链结合，当PCR扩增的时候，染料结合到DNA上，从而发光，单个的染料不发光，这样就能收集到信号，我们可以看出，染料法特异性不强，只要是双链的DNA都回结合发光。
二、荧光定量PCR中探针法与染料法的优缺点1、探针法通过探针可以增加反应收集信号的特异性，只有探针结合的片段上发生扩增才能收集到信号，能够用多重体系反应的方法，能够预测和提前进行反应条件的优化，缺点是要合成探针，成本高2、染料法经济实惠，可以做溶解曲线，分析全部PCR产物的TM值，缺点就是特异性没有探针法好【分享】定量pcr仪选则宝典:各自精彩的选择如何选择合适的定量PCR仪定量PCR仪主要由两部分组成，一个是PCR系统，一个是荧光检测系统。
选择定量PCR仪的关键——由于定量PCR必需借助样本和标准品之间的对比来实现定量的，对于定量PCR系统来说，重要的参数除了传统PCR的温控精确性、升降温速度等等，更重要的还在于样品孔之间的均一性，以避免微小的差别被指数级放大。
至于荧光检测系统，多色多通道检测是当今的主流趋势——仪器的激发通道越多，仪器适用的荧光素种类越多，仪器适用范围就越宽;多通道指可同时检测一个样品中的多种荧光，仪器就可以同时检测单管内多模版或者内标+样品，通道越多，仪器适用范围越宽、性能就更强大。
荧光检测系统主要包括激发光源和检测器。
激发光源有卤钨灯光源、氩离子激光器、发光二极管LED光源，前者可配多色滤光镜实现不同激发波长，而单色发光二极管LED价格低、能耗少、寿命长，不过因为是单色，需要不同的LED才能更好地实现不同激发波长。
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荧光细胞化学样品制备和检测技术
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荧光显微镜的优点和用途
优点：
检出能力高（放大作用） 对细胞的刺激小（可以活体染色） 能进行多重染色 用途： 物体构造的观察——荧光素 荧光的有无、色调比较进行物质判别——抗体荧光等 发荧光量的测定对物质定性、定量分析
荧光细胞化学样品制备和检测技术
1.1
混合固定液
（5） Zenker固定液：经此液固定的标本，细胞核和细胞质染色颇为清晰，但成本较高且需 特殊处理汞。该固定液要避免接触阳光，以免引起化学变化而失效。
升汞
5.0g
重铬酸钾
2.5g
硫酸钠
1.0g
蒸馏水（加至）
100ml
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甲醛-明胶，铬矾明胶， Vectabond试剂 （3）体液沉淀涂片法 （4）穿刺吸取涂片法 （5）印片法
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组织脱水
试剂 中性缓冲甲醛
乙醇 乙醇 乙醇 无水乙醇Ｉ 无水乙醇ＩＩ 二甲苯－无水乙醇 二甲苯Ｉ 二甲苯ＩＩ 石蜡 石蜡 石蜡
选择最佳固定液标准是： （1）最好地保持细胞和组织的形态结构； （2）最大限度地保存抗原的免疫活性。一些含重金属的固定液在免疫组化和细胞化学技术中
是禁用的； （3）不要用可能带有自发荧光的固定剂，如带有苦味酸的固定剂，还有甲醛升汞固定液，会
使上皮细胞产生非特异性荧光； （4）固定剂的选择、固定时间、温度和PH值都会影响实验结果。
光供作观察。作出定性、定位（根据荧光图象的形态学特征和颜色）和定量（根据荧光的亮度）。 其中：1）为自发荧光，2）为继发荧光。
荧光细胞化学样品制备和检测技术
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1.1
落射荧光与透射光观察的区别
荧光细胞化学样品制备和检测技术
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1.1
落射荧光与透射光观察的区别
荧光细胞化学样品制备和检测技术
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浓度／温度 ４％
８０％ ９０％ ９５％
体积比为１：１
６０℃ ６０ ℃ ６０ ℃
时间设定 ３．００ｈ １．００ｈ １．００ｈ
过夜 ２．００ｈ ２．００ｈ ３０ｍｉｎ ３０ｍｉｎ １．００ｈ １．００ｈ １．００ｈ １．００ｈ
甲醛（40%） 无水磷酸氢二钠 磷酸二氢钠 蒸馏水
100ml 6.5g 4.0g 900ml
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单纯固定剂
（2）乙醇固定液：使用时以80%-95%的浓度为宜，具有硬化、固定、脱水等作用，对组织渗 透力较弱，因此很少单独使用，但其保存组织中的核酸强于中性甲醛，故常用于有核酸操 作的实验或检查，如果用于证明尿酸结晶和保存糖原，可用于100%乙醇固定组织。
1.1
取材
组织取材：按病理诊断和研究的目的和要求，从标本上切取适当大小和数目的组织块，供后续 制片和显微镜下观察用于诊断以及相关研究。
细胞标本的取材 （1）贴壁生长的培养细胞 （2）悬浮的培养细胞：
沉淀涂片，细胞离心涂片器（cytospin）， 载玻片上涂粘附剂—多聚赖氨酸（0.01~0.5%），
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蔡司光学仪器
荧光细胞化学样品制备和检测技术
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什么是显微镜荧光检测？
一般荧光显微镜荧光观察，是借标本: 1）本身的荧光反应物质吸收荧光光源发出的激发光能而呈现的荧光现象，或 2）利用组织及细胞内某成分可与荧光染料（荧光色素）结合并受到荧光激发后所出现特定颜色的荧
95%乙醇
900ml
（2）B5（醋酸钠-升汞-甲醛）固定液：多用于固定淋巴组织。染色前应进行脱汞沉淀处理。
无水醋酸钠
1.25g
升汞
6.0g
蒸馏水
90ml
使用前加入甲醛 10ml
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混合固定液
（3）Bouin固定液：特别适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀，收缩很 少，不会使组织变硬变脆。需现配现用。
荧光细胞化学样品制备和检测/4Date
1.1
什么是荧光 ?
• 物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变为高能状态，再回到低能状态时释放出的光，是非温度 辐射光——冷光。即：物质吸收短波光，发射出的长波光。
• 显微镜荧光利用光源激发——光化荧光
荧光的性质
吸收光，必需有激发光源 荧光波长＞激发波长（损失热能） 荧光强度极小于激发光的强度 有不同程度的衰减 荧光强度取决于激发光强度、被检物浓度、荧光效率
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标本制作的顺序
组织固定、取材、组织脱水、包埋、切片、染色、封片 培养的悬浮细胞、粘附细胞
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组织固定
活体组织一旦停止血液循环和物质代谢就会因物质代谢障碍产生一系列的生物化学和组织学改 变，并导致形态学上可见的细胞器变化和细胞组织的形态改变直至腐败自溶。
（3）4%多聚甲醛固定液：主要用于培养细胞的固定。
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混合固定液
（1）乙醇-甲醛（乙醇-福尔马林，AF）固定液：适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定 液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入95%乙醇脱水。
甲醛（40%） 100ml
饱和苦味酸水溶液（约1.22%）
75ml
甲醛
25ml
冰醋酸
5ml
（4）Carnoy固定液：穿透能力强，可很好的固定细胞质和细胞核，特别适用于固定外膜致密 的组织，也适用于糖原及尼氏小体的固定。
无水乙醇 60ml
氯仿
30ml
冰醋酸
10ml
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荧光细胞化学样品制备和检测技术
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单纯固定液
（1）4%中性甲醛固定液：最常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。中性 甲醛是以PH7.2-7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优 于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处，保存时间不超过一个 月。