菌种保藏大全
菌种保藏的方法
复苏方法：
从液氮罐中取出安瓿管或塑料冻存管，应立即 放置在38℃-40℃水浴中快速复苏并适当摇动。直 到内部结冰全部溶解为止，一般约需50秒-100秒。 开启安瓿管或塑料冻存管，将内容物移至适宜的 培养基上进行培养。
菌 种 冻 存 管
四、菌种保藏的注意事项
菌种在保藏前所处的状态：孢子或芽孢 菌种保藏所用的基质：碳源 操作过程对细胞结构的损害
各大类 产孢子的微生物 细菌，酵母菌
约1～2年 约1～冻干燥保藏法
各大类
>5~15年
繁而高效
液氮保藏法
超低温（－196℃），有保 护剂
各大类
>15年
繁而高效
菌种保藏机构
Ex：
美国的标准菌种保藏所（ATCC） 美国农业部农业研究服务部（ARS） 英国国立标准菌种保藏所（NCTC） 我国：1 普通微生物菌种保藏管理中心（CCGMC） 2 农业微生物菌种保藏管理中心（ACCC） 3 工业微生物菌种保藏管理中心（CICC） 4 医学微生物菌种保藏管理中心（CMCC） 5 抗生素菌种保藏管理中心（CACC） 6 兽医微生物菌种保藏管理中心 （CVCC）
步骤
1安瓿管的处理
菌备用。
直径8-10mm，长度不小于100mm，洗净高压灭
2 保护剂
低分子和高分子化合物，如氨基酸、糖类、蛋白质等。 常用的是脱脂奶和血清。
3 菌悬液制备
最适培养条件、生长后期。产孢子的微生物须适 当延长培养时间以获得成熟的孢子。
4 冷冻干燥
5 安瓿管的保藏
4-5℃保藏
半固体穿刺保藏法
方法：适宜半固体→培养→4℃保藏 原理：缺氧、低温 适用：好气性细菌，酵母等 保藏期：6-12个月 步骤： 用接种针从原菌种斜面上挑取少量菌体，从柱状培养 基中心自上而下刺入，至培养基的1/2处，待微生物生长良 好后覆盖2-3mm无菌液体石蜡.石蜡可防止培养基失水又隔 绝氧气,降低代谢.但不适用于可以石蜡为碳源的微生物.
常用菌株保藏方法
常用菌株保藏方法
常用菌株保藏方法：
1.琼脂斜面低温保藏法：此法是实验室菌种最常用的保藏方法，操
作简便，使用方便，具体方法是，用无菌的接种环挑取菌种一环，划线于适宜的琼脂斜面上（细菌为营养琼脂斜面；真菌为改良马丁琼脂斜面），细菌置35℃培养18~24小时，真菌置25℃培养18~24小时，必要时可延长培养时间，待菌生长充分后，放置2~4℃保存。
霉菌和芽孢菌可保存2~4个月，细菌可保存1~2个月，铜绿假单胞菌不能放在2~4℃保存。
2.甘油冷冻管保存法：用无菌接种环接种菌种在琼脂斜面上，置适
宜的培养条件培养后，用无菌接种环轻轻刮取菌苔，并通过接种环与试管壁之间的摩擦使细菌充分扩散到已装有0.9%氯化钠溶液中，加入等体积的、浓度为20%的无菌甘油，轻轻振摇，分装于无菌小试管中，置-30℃条件下保存。
此法应注意菌悬液的浓度应高一些，而且不能含有培养基等营养物质，以防止长时间保存造成菌数下降；另外甘油的浓度不宜过高，否则影响细菌细胞渗透压，引起细菌死亡；厌氧菌、霉菌不宜用此法保存。
3.半固体高层穿刺培养：用无菌接种针挑取菌落，垂直刺入半固体
培养基中，在适宜条件下培养后，放置2~4℃保存。
也可在半固体表面加入液体石蜡，使液体石蜡高出菌种表面1cm再保存，可延长保存时间至一年，霉菌、芽孢杆菌可保存2年。
论述菌种的保藏方法
论述菌种的保藏方法菌种的保藏是指将某一种菌株保存在适宜的条件下，以确保其长期存活和保持其遗传特性的一种操作。
菌种的保藏对于科学研究和应用具有重要意义，因为菌株的失活或突变可能导致实验结果的不准确性或应用价值的丧失。
本文将介绍几种常见的菌种保藏方法。
一、冷冻保藏法冷冻保藏法是将菌株保存在低温条件下，以减缓菌株的代谢和生长速率，达到延长其存活时间的目的。
常见的冷冻保藏方法有两种：液氮冷冻和低温冷冻。
1. 液氮冷冻：将培养基中的菌株悬浮液加入一定比例的甘油或乙二醇等保护剂，然后分装至冷冻管中，迅速将冷冻管浸入液氮中进行冷冻保存。
液氮的温度极低，可以有效地抑制菌株的代谢活动，保证其长期存活。
2. 低温冷冻：将培养基中的菌株悬浮液加入一定比例的甘油或乙二醇等保护剂，然后分装至冷冻管中，置于-80℃的低温冰箱中保存。
相比于液氮冷冻，低温冷冻的操作更加简便，且可以在普通实验室条件下进行。
二、干燥保藏法干燥保藏法是将菌株保存在无水条件下，通过降低菌株周围环境的水分含量，抑制菌株的代谢活动，并防止细胞内酶的活性。
常见的干燥保藏方法有两种：冷冻干燥和真空干燥。
1. 冷冻干燥：将培养基中的菌株悬浮液加入一定比例的保护剂，然后在真空下进行冷冻干燥。
冷冻干燥的过程中，通过降低温度和压力，使水分直接从固态转变为气态，从而达到保护菌株的目的。
2. 真空干燥：将培养基中的菌株悬浮液均匀涂布在无菌的滤纸或硅胶膜上，然后将其置于真空干燥器中进行真空干燥。
真空干燥的过程中，通过降低压力，将水分从菌株周围环境中蒸发掉，使菌株处于无水状态。
三、液氮冷冻法液氮冷冻法是将菌株保存在液氮中的一种方法。
液氮的温度极低，可以有效地抑制菌株的代谢活动，保证其长期存活。
该方法适用于多种菌株的保藏，包括细菌、真菌和酵母等。
液氮冷冻法的操作步骤如下：1. 将培养基中的菌株悬浮液加入一定比例的甘油或乙二醇等保护剂，以增加菌株的抗冻性。
2. 将菌株悬浮液分装至冷冻管中，每支约0.5-1.0 mL，然后封闭冷冻管。
微生物菌种保藏方法
微生物菌种保藏方法
微生物菌种的保藏是非常重要的，因为这些菌种可能用于各种实验和研究中。
以下是一些常见的微生物菌种保藏方法：
1. 冷冻保存：将菌种在液氮或-80的冰箱中冷冻保存。
这是最常见的保藏方法，能够长期保存菌株并保持其遗传稳定性。
2. 干燥保存：将菌种在无菌室中取出，用无菌纸或吸水纸吸干，然后放入无菌瓶中密封保存。
干燥保存适用于某些孢子或芽孢的微生物，比如放线菌、链霉菌等。
3. 明胶斜培养基保存：将菌种接种在含有明胶的固体培养基上，然后密封保存。
这种方法适用于某些菌株，如革兰氏阳性菌和厌氧菌。
4. 低温保存：将菌种保存在4的冰箱中。
这种保存方式可以在短时间内保持菌株的活性，但不能长期保存。
5. 液氮保存：将菌种在锅内预冷冷冻过的无菌玻璃管中加入10%甘油或蔗糖，然后立即在液氮中保存。
这种方法适用于大多数微生物，并且可以长期保存。
菌种的保藏方法
菌种的保藏方法菌种保藏是微生物学研究中必不可少的一环。
菌种保藏的目的是保存菌种的遗传信息、保持菌种的稳定性和纯度，为后续的研究提供保障。
本文将介绍几种常见的菌种保藏方法。
1. 冻干法冻干法是一种常用的菌种保藏方法。
将菌株培养在适宜的培养基上，生长到适当的密度后，用无菌的冻干管吸取菌液。
将冻干管放入液氮中，冷冻至-80℃，待冻干后，将管子密封，保存在-80℃的冰箱中。
冻干菌株可以保存多年，但是需要注意菌株的密封性和保存温度。
2. 静态液氮法静态液氮法是一种高效、长期保存菌株的方法。
将菌株培养在适宜的培养基上，生长到适当的密度后，用无菌的冻存管吸取菌液。
将菌液加入等量的甘油（最终甘油浓度为20%），混合均匀后分装到冻存管中。
将冻存管放入液氮中，冷冻至-196℃，保存在液氮罐中。
静态液氮保存的菌株可以保存数十年，但是需要注意菌株的密封性和保存温度。
3. 冷藏法冷藏法是一种简单、易行的菌株保存方法。
将菌株培养在适宜的培养基上，生长到适当的密度后，用无菌的冻存管吸取菌液。
将冻存管放入4℃的冰箱中保存。
冷藏法保存的菌株可以保存数个月，但是需要注意菌株的密封性和保存温度。
4. 活体保存法活体保存法是一种将菌株保存在活体状态下的方法。
将菌株培养在适宜的培养基上，生长到适当的密度后，用无菌的冻存管吸取菌液。
将菌液加入等量的甘油（最终甘油浓度为20%），混合均匀后分装到冻存管中。
将冻存管放入冰箱中，温度为4℃-8℃。
活体保存法可以保存数个月，但是需要注意菌株的密封性和保存温度。
5. 长期培养法长期培养法是一种将菌株保存在活体状态下的方法。
将菌株培养在适宜的培养基上，生长到适当的密度后，用无菌的冻存管吸取菌液。
将菌液加入等量的甘油（最终甘油浓度为20%），混合均匀后分装到冻存管中。
将冻存管放入冰箱中，温度为4℃-8℃。
每隔一段时间，将菌株转移到新的培养基上进行培养，以保持菌株的纯度和稳定性。
总之，菌种保藏是微生物学研究中必不可少的一环。
菌种保藏
菌种保藏几种常用的保藏方法：1、传代培养法保藏的菌种通过斜面、穿刺或疱肉培养基（用于厌氧细菌）培养好后，置4C˚冰箱中存放，定期进行传代培养、再存放。
可用胶塞代替棉塞或在斜面上覆盖一层无菌液体石蜡来进一步延长保存期。
2、载体法使生长合适的微生物吸附在一定的载体上进行干燥。
常用的载体有土壤、砂土、硅胶、明胶、麸皮、磁珠和滤纸片等。
3、悬液法将细菌、酵母菌细胞悬浮在一定的溶液中保存。
溶液包括蒸馏水、糖溶液、磷酸缓冲液、食盐水等。
4、冷冻法使菌种始终存放在低温环境下的保藏方法。
包括低温法和液氮法。
此法关键是要克服细胞的冷冻损伤。
注意控制降温速率及保护剂的使用。
5、真空干燥法这类方法包括冷冻真空干燥法和L－干燥法。
冷冻真空干燥法是将要保藏的微生物样品先经低温预冻，然后在低温状态下进行减压干燥。
L-干燥法则不需要低温预冻样品，只是使样品维持在10－20C˚范围内进行真空干燥。
操作方法1、斜面保藏法将菌种转接在适宜固体斜面培养基上，待其充分生长后，用牛皮纸将棉塞部分包扎好（棉塞换成胶塞效果更好），置4C˚冰箱中包藏。
保藏时间依微生物的种类而定。
霉菌、放线菌及芽孢菌保存2－4个月移种一次，酵母菌间隔两个月，普通细菌一个月，假单胞菌两周传代一次。
此法优点是操作简单、使用方便，缺点是保藏时间短、易被污染。
2、液体石蜡保藏法将无菌石蜡加在已长好菌的斜面上，其用量以高出斜面顶端1CM为准，使菌种与空气隔绝。
将试管直立，置低温或室温下保存。
此法实用且效果较好。
霉菌、放线菌、芽孢菌可保藏两年以上，酵母菌可保藏1－2年，普通细菌也可保藏1年左右。
3、穿刺保藏法按穿刺接种方式培养菌种，菌种长好后用胶塞封严，置4℃冰箱存放。
4、砂土管保藏法（1）河砂处理取河砂若干加入盐酸10% ，加热煮沸30min除去有机机质。
倒去盐酸溶液，用自来水冲洗至中性，最后一次用蒸镏水冲洗，烘干后用40目筛子过筛，弃去粗颗粒，备用。
（2）土壤处理取非耕作层不含腐殖质的痩黄土或红土，加自来水浸泡洗涤数次，直至中性。
食用菌菌种保藏的6种方法
食用菌菌种保藏的6种方法
菌种保藏的目的是通过降低菌种的代谢活力，使其处于休眠状态，减缓衰亡速度，保持菌种原有优良性状，防止杂菌污染；当恢复生活条件时，菌种能在很短时间内恢复生机，迅速生长繁殖。
母种的保藏有如下方法：
1.斜面冰箱保藏法：把生长丰满健壮的斜面母种，把棉塞在管口剪平，用蜜蜡封口或换用胶塞，存放于摄氏4度冰箱内保存。
高温菌在16摄氏度为宜。
有效期3—6个月。
2.石蜡油保藏法：斜面母种注入经二次灭菌后，在摄氏40度温箱2天蒸发水分而冷却了的石蜡油至斜面顶尖1—1.5厘米处，再用蜜蜡封管口或换用胶塞，直立于摄氏4度冰箱或室温存放。
保存期可1—2年。
3.孢子保藏法：用2×0.5×0.8厘米经灭菌的滤纸条吸附上孢子，可参考孢子分离法，然后把带孢子的纸条放入无菌试管内，置干燥器内2—3天吸干水分，再改用胶塞。
在冰箱或室温内可保存多年。
4.菌丝球保藏法：常用经灭菌的生理盐水、无菌水、蒸馏水、营养液等装入试管约5毫升作媒介，把经过液体培养至对数生长期的菌丝球4—5个，移入媒介内，用胶塞封口，冰箱摄氏4度或室温可保存1—2年。
5.液氮保藏法：常用经灭菌10%甘油蒸馏水或10%二甲基亚砜蒸馏水为保护剂，注入斜面母种管，刮下菌丝体成悬浮液或孢子液，吸取菌液0.5—0.8毫升注入已灭菌安瓿管，
熔封管口，置液氮冷冻器内，每分钟降摄氏1度，1小时内使其温度降至摄氏负35度，其后迅速降至气相摄氏负150度，液相摄氏负196度保存。
保存期可超过10年。
6.自然基质保藏法：此法多用于原种保藏。
在一些欠设备的地区，也可作母种保藏法。
实验室最常用的五种菌种保藏方法
在现代生物学研究和生物技术应用中，菌种保藏是至关重要的环节。
恰当的菌种保藏方法能够确保菌种的活性、遗传稳定性和可用性，为科学研究的持续开展以及相关产业的发展提供坚实的基础。
本文将重点介绍实验室中最常用的五种菌种保藏方法，深入探讨它们各自的特点、适用范围以及操作要点。
一、低温冷冻保藏法低温冷冻保藏法是目前最为广泛应用且效果较为可靠的菌种保藏方法之一。
其基本原理是将菌种置于超低温环境（通常为液氮温度，即-196℃）下，使菌种细胞处于极度冷冻的状态，从而抑制其代谢活动，达到长期保存的目的。
该方法具有诸多显著优点。
低温能够极大地减缓细胞的生理活动，几乎使其处于完全停滞状态，从而有效地延长菌种的存活时间。
低温冷冻保藏对菌种的遗传稳定性影响较小，经过长期保存后，菌种的特性通常能够较好地保持。
操作相对简单，只需将菌种制备成适宜的冷冻保存液，然后置于液氮罐中即可。
在具体操作时，首先要选择合适的冷冻保存液。
常用的冷冻保存液一般含有一定比例的保护剂，如甘油、二甲基亚砜等，它们能够降低细胞内冰晶的形成对细胞的损伤。
制备好冷冻保存液后，将菌种接种到冷冻保存液中，制成菌悬液。
将菌悬液分装到合适的冷冻管中，迅速放入液氮罐中进行保存。
在液氮罐中，要定期检查液氮的液位，确保菌种始终处于适宜的低温环境中。
低温冷冻保藏法适用于大多数微生物菌种的长期保存，尤其对于那些对温度敏感、容易变异的菌种，如细菌中的一些致病菌、真菌中的丝状真菌等，具有良好的保藏效果。
然而，该方法也存在一些不足之处，例如液氮的成本较高，液氮罐的储存空间有限，以及在取出菌种进行复苏时可能存在一定的风险等。
二、干燥保藏法干燥保藏法是利用菌种在干燥环境下代谢活动受到抑制的原理来实现保藏的方法。
常见的干燥保藏法包括沙土管保藏法、滤纸保藏法等。
沙土管保藏法是将菌种接种到无菌的沙土中，然后将沙土管置于干燥器中进行干燥保存。
该方法具有操作简便、成本低廉的特点。
在干燥过程中，菌种细胞内的水分逐渐散失，代谢活动减缓，从而达到保藏的目的。
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菌种保藏一、菌种的含义：菌种：菌种是指食用菌、工业菌、农用菌菌丝及其生长基质组成的繁殖材料。
分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级，也可以理解为保存着的、具有活性的菌株。
微生物工业对菌种的要求1.原料廉价，生长迅速、目标产物高。
2.易于控制培养条件，酶活性高，发酵周期较短。
3.抗杂菌和噬菌体的能力强。
4.菌种遗传性能稳定，不易变化和退化，不产生任何有害的生物活性物质和毒素，保证安全生产。
5.对放大设备的适应强。
二、菌种保藏的重要意义：菌种是从事微生物学以及生命科学研究的基本材料，特别是利用微生物进行有关生产，如抗生素、氨基酸、酿造等工业，都离不开菌种。
所以菌种保藏是进行微生物学研究和微生物育种工作的重要组成部分。
其任务首先是使菌种不死亡，同时还要尽可能设法把菌种的优良特性保持下来，而不致向坏的方面转化。
菌种是一种极其重要和珍贵的生物资源，1980年我国成立了中国微生物菌种保藏委员会。
菌种保藏的原理与方法微生物菌种保藏的概念：收集实验室和生产用微生物（菌种、菌株、病毒毒株等，也包括动、植物的细胞株和微生物质粒），运用适当方法和措施使其长期存活并保持原种的生物学性状稳定不变，使之不死、不衰、不乱，以达到便于研究、交换和使用等目的的措施。
微生物个体微小、代谢活跃、生长繁殖快，很容易发生变异，或被其他微生物污染，甚至死亡。
因此根据实际情况选择合适的保藏方法十分重要。
一、菌种保藏的原理：菌种保藏主要是根据菌种的生理、生化特性，人工创条件使其生长代谢处于最低或几乎停止的状态，以减少其变异和保持生物性状。
保藏时，一般利用菌种的休眠体（孢子、芽孢等），创造最有利于休眠状态的环境条件，如低温、干燥、隔绝空气或氧气、缺乏营养物质等，以降低菌种的代谢活动，减少菌种变异，使菌种处于“休眠”状态，抑制其繁殖能力，达到长期保存的目的。
一个好的菌种保藏方法，应能保持原菌种的优良特性和较高的存活率，同时也应考虑到方法本身的经济、简便。
国内外主要菌种保藏机构介绍国外（1）ATCC 美国标准菌种收藏所，美国，马里兰州，罗克维尔市.（2）CSH 冷泉港研究室，美国.（3）IFO 日本大阪发酵研究所，日本大阪.（4）NRRL 美国北部地区研究实验会（5）CBS 荷兰霉菌中心保藏所（6）ＮCTC 英国国家典型菌种保藏所现有菌种保藏的大体方法有1.传代培养法2.悬液法3.载体法4.真空干燥法5.冷冻法菌种保藏的注意事项（1）菌种保藏所处的状态大部分以均保藏其休眠体，保藏前选择合适的培养时间。
培养时间过长，生产性能会下降，反之保存时容易死亡。
一般以稍低于生长最适温度培养至孢子成熟保藏的菌种进行保藏，效果较好。
（2）保藏所用的基质一般使其营养成份贫乏较好，降低其代谢活动。
冷冻时应加入保护剂。
（3）操作过程尽量减少对细胞结构的损害，如选择合适的冻结速度，加入保护剂等。
细胞结构的损伤不仅使菌种保藏的死亡率增加，而且容易导致菌种变异，造成菌种性能衰退。
二、实验室和生产实践中常用的菌种保藏技术方法：1. 斜面低温保藏法（冰箱保藏法）2．矿物油中浸没保藏法3．穿刺法4. 滤纸法5. 固体曲保藏法6．砂土管保藏法7. 普通冷冻保藏8．超低温冷冻保藏法9. 冷冻干燥法10. 液氮冷冻保藏法11. 寄主保藏保藏方法通常基于温度、水分、通气、营养成分和渗透压等方面考虑1.斜面低温保藏（冰箱保藏法）原理是利用低温（4℃）降低菌种的新陈代谢，使菌种的特性在短时期内保持不变。
方法是：将菌种转接在适宜的固体培养基斜面上，待其充分生长好后，用封口膜或油纸将棉塞部分包扎好，置于4℃冰箱中保存。
斜面法保藏菌种的时间依微生物的种类不同而异。
霉菌、放线菌以及形成芽孢的细菌保存3~5个月移种一次，普通细菌最好每月移种一次，假单胞菌则两周传代一次，酵母菌间隔2个月。
注意事项1.保存期间要注意冰箱的温度，不可波动太大，不能在0℃以下保存，否则培养基会结冰脱水，造成菌种性能衰退或死亡。
2.此方法是一种短期、过渡的保藏方法此方法，一般不适宜作工业生产菌种的长期保藏，一般保存时间为3~6个月。
优缺点优点:最为简单和经济，操作简单、使用方便、不需要特殊设备，能随时检查所保藏的菌株是否死亡、变异、与污染杂菌等。
可用于实验室中若干菌种的保藏。
缺点:保藏时间短、需定期传代，且易被污染，菌种的主要特性容易改变。
易发生培养基干枯、菌体自溶、基因突变2. 矿物油中浸没保藏（石蜡油封藏法）1.先将液体石蜡分装于试管或三角瓶中，塞上棉塞并用牛皮纸包扎，121℃灭菌30min，然后放在40温箱中使水汽蒸发后备用。
2.将需要保藏的菌种在最适易的斜面培养基中培养，直到菌体健壮或孢子成熟。
3.用无菌吸管取适量的无菌液体石蜡，加在已长好的菌苔的斜面上，其用量以高出斜面顶端1cm为准，使菌种与空气隔绝。
4.将试管直立，置于低温或室温下保存（有的微生物在室温下比在冰箱中保存的时间要长）。
此法实用效果较好。
产孢子的霉菌、放线菌、芽孢菌可保藏2年以上，有些酵母菌可保藏1~2年，一般无芽孢细菌也可保藏1年左右，甚至用一般方法很难保藏的脑膜炎球菌，在37℃温箱内，亦可保存3个月之久。
注意事项1.以液体石蜡作为保藏方法时，应对需保藏的菌株预先作试验。
因为某些菌株在液体石蜡下生长还十分明显，有些菌株如某些假丝酵母还会同化液体石蜡，也有的对液体石蜡保藏敏感。
所有这些菌株都不能用液体石蜡保藏。
为了预防不测，一般保藏株2～3年也应做一次存活试验。
2.从液体石蜡下面取培养物移种后接种环在火焰上灼烧时，培养物容易与残留的液体石蜡一起飞溅，应特别注意，尤其是保藏致病菌更需小心。
优缺点：优点：制作简单，不需特殊装备，且不需经常移种。
缺点：保存时必须直立放置，所占位置较大；同时也不便携带。
3. 穿刺法该方法比较简便，是短期保藏菌种的一种有效方法。
1.接种培养（培养试管选用带螺旋帽的短试管或离心管）。
2.将培养好的穿刺管盖紧，外面用封口膜封严，置于于4℃存放。
3.取用时将接种环（环的直径尽量小些）伸入菌种生长处挑取少许细胞，接入适当培养基中。
将穿刺管封严后可保存以后再用。
4.滤纸法1、滤纸的制备将滤纸剪成0.5cm×1.2cm的小纸条装入0.6cm×8cm的安瓿管中，每管装入1~2片，用棉花塞上后经121℃灭菌30min。
2、保护剂的制备配制20％脱脂奶，装在三角瓶或试管中112℃灭菌25min。
待冷却后随机取出几份分别置28℃、37℃培养过夜，然后各取0.2mL涂布在肉汤平板上或斜面上进行无菌检查，确认无菌后方可使用，其余的保护剂置4℃存放待用。
3、菌种培养将需保藏的菌种在适宜的斜面培养基上培养，直到其生长丰满。
4、菌悬液的制备取无菌脱脂奶2~3mL加入待保存的菌种斜面试管内，用接种环轻轻地将菌苔刮下，经振荡器震荡均匀，即为菌悬液。
5、分装样品：用无菌滴管或吸管吸取菌悬液滴在安瓿瓶中的滤纸上，每片滤纸滴0.5mL，塞上棉花。
6、干燥：将安瓿管中放入五氧化二磷或无水氯化钙作吸水剂的干燥瓶中，用真空泵抽其至干。
7、熔封与保存：用火焰将安瓿管封口，置于4℃或室温存放。
8、需要使用菌种，复活培养时，可将安瓿管口在火焰上烧热，滴一滴冷水在烧热的部位，使玻璃破裂，再用镊子敲掉口端的玻璃，待安瓿管开启后，取出滤纸，放入液体培养基内，置温箱中培养。
细菌、酵母菌、丝状真菌均可用此法保藏，前两者可保藏2年左右，有些丝状真菌甚至可保藏14—17年之久。
此法较液氮、冷冻干燥法简便，不需要特殊设备。
5. 固体曲保藏法这是根据我国传统制曲原理加以改进的一种方法，适用于产孢子的真菌。
该法采用麸皮、大米、小米或麦粒等天然农产品为产孢子培养基，使菌种产生大量的休眠体（孢子）后加以保存。
该法的要点是控制适当的水分。
6.砂土管保藏法本方法是用人工方法模拟自然环境使菌种得以栖息。
适用于产孢子的放线菌、霉菌以及产芽孢的细菌。
砂土是砂和土的混合物，砂和土的比例一般为3：2或1：1。
（1）取河沙加入10％稀盐酸，加热煮沸30分钟，以去除其中的有机质。
倒去酸水，用自来水冲洗至中性，最后一次用蒸馏水冲洗。
烘干，用40目筛子过筛，以去掉粗颗粒，备用。
（2）另取非耕作层的不含腐植质的瘦黄土或红土，加自来水浸泡洗涤数次，直至中性。
烘干，碾碎，通过100目筛子过筛，以去除粗颗粒。
（3）按一份黄土、三份沙的比例（或根据需要而用其他比例，甚至可全部用沙或全部用土）掺合均匀，装入10mm×100mm的小试管或安瓿管中，每管装1g左右，塞上棉塞，进行灭菌(通常采用间歇灭菌2~3次），烘干。
（4）抽样进行无菌检查，每10支沙土管抽一支，将沙土倒入肉汤培养基中，37℃培养48小时，若仍有杂菌，则需全部重新灭菌，再作无菌试验，直至证明无菌，方可备用。
（5）选择培养成熟的（一般指孢子层生长丰满的，营养细胞用此法效果不好）优良菌种，加入2~3mL无菌水，用接种环轻轻地将菌苔洗下，制成孢子悬液。
（6）于每支沙土管中加入约0．5ml（一般以刚刚使沙土润湿为宜）孢子悬液，以接种针拌匀。
（7）放入真空干燥器内，用真空泵抽干水分。
每10支抽取一支，用接种环取出少数沙粒，接种于斜面培养基上，进行培养，观察生长情况和有无杂菌生长，如出现杂菌或菌落数很少或根本不长，则说明制作的沙土管有问题，尚须进一步抽样检查。
若经检查没有问题，用火焰熔封管口（也可用橡皮塞或棉塞塞住试管口），放冰箱（4℃）或室内干燥处保存。
每半年检查一次活力和杂菌情况。
（8）需要使用菌种，复活培养时，取沙土少许移入液体培养基内，置温箱中培养。
此法多用于能产生孢子的微生物如霉菌、放线菌，因此在抗生素工业生产中应用最广，效果亦好，可保存2年左右，但对于营养细胞效果不佳。
7.普通冷冻保藏由于该法的保藏温度为－20℃，为了避免微生物受损伤致死，需要甘油作为保护剂。
甘油的最终浓度为25%。
具体操作如下：①配制浓度为50％的甘油溶液，121℃灭菌后备用；②制备菌悬液，一般菌悬液的浓度为108～1010个／mL；③将菌悬液和甘油溶液以等体积混合均匀后，置－20℃保藏。
或者，将菌种培养在小的试管或培养瓶斜面上，待生长适度后，将试管或瓶口用橡胶塞严格封好，同上置于冰箱中保存。
普通冷冻保藏可以维持若干微生物的活力1~2年。
应注意的是经过一次解冻的菌株培养物不宜再用来保藏。
保藏过程中应注意控制保藏温度，培养瓶或试管应严格密封。
这一方法虽简便易行，但不适宜多数微生物的长期保藏。
8. 超低温冷冻保藏要求长期保藏的微生物菌种，一般都要求在-60～-80℃以下进行保藏。
在超低温冷藏柜中保藏菌种的一般方法是：1．离心收获对数生长中期至后期的微生物细胞2．用新鲜培养基重新悬浮所收获的细胞；3．加入等体积的20％甘油或10％二甲亚砜；4．混匀后分装入冷冻指管或安瓿中，于-70℃超低温冰箱中保藏。