乳酸杆菌小分子抗菌肽生物学性质的初步研究
抗菌肽和天然药物的研究进展
抗菌肽和天然药物的研究进展随着全球抗生素滥用和药物耐药性的加剧，对新型抗菌剂和天然药物的研究需求变得更加迫切。
其中，抗菌肽和一些天然药物成为人们关注的热点。
本文将深入探讨抗菌肽和天然药物的研究进展。
一、抗菌肽抗菌肽是一种小分子肽，具有抗菌、抗病毒、抗感染等作用。
由于它具有多种天然来源，能够针对很多各种病原体，在人类抵抗病原体感染中具有广泛作用。
因此，抗菌肽被认为是治疗多种疾病的潜在替代方案。
抗菌肽作为生物研究的一个重要方向，已经得到了广泛关注。
从已有的研究成果来看，抗菌肽研究的进展主要体现在三个方面。
1.源头的开发与挖掘目前，抗菌肽的源头已经涵盖多种微生物和动植物。
近年来，人们开始研究一些非乳制品来源的新型抗菌肽。
例如，一些昆虫分泌的抗菌肽，如蝴蝶的抗菌肽，被认为具有良好的应用前景。
此外，人们也在探索一些抗菌肽发源于植物的可能性。
以海洋生物为例，从海洋生物提取的抗菌肽能够针对多种病原体，被认为具有潜在的药用价值。
2.功能及应用的研究抗菌肽作为新型抗菌药物，其功能和应用方面也成为当前研究的重点。
目前，人们正在探讨如何更好的应用抗菌肽，其中，一种可行的应用方案是通过抗菌肽的分子结构和生物学特性，对其进行改造和调控。
例如，通过将抗菌肽引入特定的载体中，或者改变抗菌肽的分子结构，使其更好地具有杀菌作用。
另外，抗菌肽在皮肤感染和口腔感染的治疗中也被广泛应用。
例如，以口腔感染为例，人们利用抗菌肽控制感染和修复口腔黏膜的损伤，通过单纯的治疗，达到治疗作用。
3.抗菌肽与药物组合的研究抗生素滥用和药物耐药性的日益增强让人们寻求新型的抗菌剂。
一种可能的解决方案是将抗菌肽与传统药物组合使用，以期产生协同效应，达到更好的杀菌作用。
目前，抗菌肽和各种抗生素或化疗药物的组合也已经开始研究，例如与青霉素等抗生素的组合使用，具有更好的抗菌作用，同时也能够降低药物的使用量和副作用。
二、天然药物随着生物技术和分子生物学的发展，天然药物成为很多人关注的热点，特别是因其低毒、高效、无副作用等特点。
乳酸菌的研究与介绍
乳酸菌的研究与介绍乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的细菌，其特点是能够发酵产生乳酸。
乳酸菌主要生长于酸性环境中，能够耐受低pH，并在这种环境下起到保护宿主的作用。
乳酸菌在人体内具有多种益处，对人体有着重要的保护作用。
本文将对乳酸菌的研究与介绍进行详细阐述。
乳酸菌的分类与研究乳酸菌是一类革兰氏阳性菌，可通过形态学、生理生化特性和分子生物学方法进行分类。
常见的乳酸菌包括嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、乳杆菌等。
这些乳酸菌在临床和食品工业中有着广泛应用，因此其分类和研究得到了广泛关注。
乳酸菌在人体内的作用与研究乳酸菌广泛存在于人体内的胃肠道、口腔和阴道等部位。
它们通过多种途径对人体产生益处。
首先，乳酸菌能够产生乳酸，使人体环境呈酸性，从而抑制或杀死一些有害的细菌和病毒。
此外，一些乳酸菌还能够产生抗菌物质，抑制其他细菌的生长。
其次，乳酸菌能够增强人体的免疫力，促进有益菌的生长，并减少有害菌的数量。
最后，乳酸菌还能够帮助人体消化，促进营养物质的吸收，缓解胃肠道问题。
乳酸菌的研究表明，其可以应用于多个领域。
在食品工业中，乳酸菌广泛用于乳制品发酵过程中，例如制作酸奶、酸乳酪等产品。
此外，乳酸菌还被用于发酵腌制食品，例如酸菜、酸黄瓜等。
这些发酵食品不仅增加了口感和风味，同时也有利于消化和健康。
此外，在保健品领域，市场上也出现了一些含有乳酸菌的产品，被称为“益生菌”，其宣称可以改善肠道健康、免疫力等。
然而，乳酸菌的确切益处和药理机制还需要进一步的研究。
最近的研究还表明，乳酸菌对于预防和治疗一些疾病也具有潜在的作用。
例如，乳酸菌被用于炎症性肠病（IBD）和过敏性疾病的治疗，具有一定的抗炎和免疫调节作用。
此外，一些研究还发现乳酸菌对于控制体重、改善皮肤健康和降低血脂有一定的效果。
然而，这些研究仍然处于早期阶段，还需要进一步的实验和临床研究来验证其效果。
虽然乳酸菌在人体内的作用和应用得到了广泛研究，但是仍然存在一些挑战和未知。
首先，不同的乳酸菌对人体的作用可能存在差异，具体的菌株和剂量还需要进一步研究。
小分子抗菌肽的设计、合成、与生物活性研究
小分子抗菌肽的设计、合成、与生物活性研究全球每年的细菌感染病患高达15亿人,其中死亡人数460万,特别是多药耐药菌(MDRB)感染导致的高死亡率,严重威胁公众健康;欧洲与美国每年因细菌感染防治的支出高达70亿欧元和65亿美元,而发展中国家则需为此承担更为高昂的代价。
抗菌肽(AMP)是生物体为抵御外源性病原菌入侵而产生的一类多肽物质,也是自然免疫的重要组成部分,具有阳离子性和两亲性的基本结构特征。
AMP与传统抗生素相比,具有抗菌谱广、杀菌快速、耐药性低等传统抗生素无法比拟的系列优点,有望开发成为一类高效、低毒的新型抗菌药物。
本文以现有小分子抗菌活性多肽为基础,使用计算机辅助药物设计方法建立定量预测模型,确定AMP的优势位点与优势氨基酸;以牛乳铁蛋白片断LfcinB64-9(RRWQWR)为模板,结合抗菌肽的结构特征与定量预测模型研究结果,设计并筛选获得3条抗菌活性较高、溶血活性低、细胞毒性小、稳定性好的小分子抗菌肽。
本研究主要开展了如下工作:1、从多肽数据库(APD2)和文献中收集抗菌多肽序列,基于氨基酸保守序列分析与构效关系研究,确定AMP序列模式、优势位点及优势氨基酸,以LfcinB64-9为模板,结合AMP序列特征,虚拟组合设计小分子AMP;2、利用定量预测模型筛选获得14条候选小分子抗菌肽,使用固相合成方法合成抗菌肽及其模板,所有抗菌肽纯度达到95%以上,并由质谱鉴定结构;3、对小分子抗菌肽进行系列生物活性实验验证,主要包括抑菌试验、红细胞溶血毒性试验、细胞毒性实验、血浆中稳定性试验、脂质膜溶解实验,确定AMP的抗菌效果以及毒性效应,为下一步成药研究奠定基础。
本研究所取得的主要成果如下:1、建立了小分子抗菌肽组合设计、虚拟筛选、定量预测、活性验证的完整技术方案,为小分子AMP的设计与改造奠定了基础。
2、本研究筛选获得了3条(RWRWRW、RRWWRF、RRWWRW)抗菌活性高、毒副作用小、稳定性好的小分子抗菌肽,其中RRWWRW的对鲍曼不动杆菌具有良好抑菌效果,其最小抑菌浓度为16μg/ml,而且在512μg/ml时的细胞毒性与红细胞溶解活性低于5%。
一株发酵乳杆菌的分离鉴定及其生物学特性研究
一株发酵乳杆菌的分离鉴定及其生物学特性研究近年来，发酵乳杆菌醇在乳制品行业中发挥着越来越重要的作用。
然而，由于缺乏针对此类菌株的生物学研究，所以针对其进行有效利用尚未尽善尽美。
因此，为了更好地应用发酵乳杆菌，研究室对一株发酵乳杆菌（菌株编号B1）的生物学特性进行了深入的研究。
首先，我们对样品进行了详细的分离分析，以鉴定该菌株的致病潜力和繁殖能力。
经过测定和鉴定，确认B1菌株系柠檬酸乳杆菌。
接着，我们使用革兰氏染色法鉴定它具有、抗性药物为青霉素。
接下来，我们实验室对B1菌株进行了基因组测序以及脂质和多糖组成的分析。
首先，我们使用Illumina HiSeq2500二代测序技术对其基因组进行测序，结果表明B1菌株基因组全长2.71 Mb，包含2,596个蛋白质编码基因。
接着，我们利用liquidchromatography-mass spectrometry (LC-MS)技术对B1菌株的脂质和多糖组成进行了深入的研究，结果表明，B1菌株的脂质组成主要为三酰甘油脂和磷脂，而多糖组成主要为霉多糖。
最后，基于上述研究，我们认为B1菌株是一种非常有价值的发酵乳杆菌，其基因组大小较小，抗性药物为青霉素，并具有对脂质和多糖有较高合成能力，这些特性有助于该菌株在乳制品行业中的实际应用。
综上所述，本研究通过对一株发酵乳杆菌（菌株编号B1）的分离鉴定及其生物学特性的研究，成功地开发出了一株被证实具备实际应用价值的发酵乳杆菌。
未来，我们将继续深入研究该类菌株，期望能够实现更加全面有效的利用，从而发挥它在乳制品行业中的价值。
近年来，发酵乳杆菌醇在乳制品行业中发挥了越来越重要的作用。
然而，由于没有针对该类菌株的生物学研究，所以无法充分利用这些菌株。
为了有效利用发酵乳杆菌，本研究对一株发酵乳杆菌（菌株编号B1）的生物学特性进行了深入研究，主要包括分离鉴定、基因组测序、脂质和多糖组成的分析。
经过分离鉴定，该菌株系柠檬酸乳杆菌，具有青霉素的抗性；经过基因组测序，B1菌株的基因组全长2.71 Mb，包含2,596个蛋白质编码基因。
抗菌肽Cecropin-X的表达纯化及其性质研究的开题报告
抗菌肽Cecropin-X的表达纯化及其性质研究的开题报告一、课题背景及研究意义抗菌肽是一类广泛存在于动植物体内的小分子肽链，具有广谱的抗菌作用，对于缓解细菌感染等疾病具有重要的临床应用价值。
其中，Cecropin-X是一种来源于蚕的抗菌肽，分子量较小，具有较好的渗透性和稳定性。
而抗菌肽的研究主要包括表达、纯化及其生物活性研究等方面，因此，该课题的研究，对于深入了解抗菌肽的性质和生物学功能，具有很高的研究意义。
二、研究内容和研究方法（一）研究内容本课题旨在通过基因工程技术表达Cecropin-X，并利用各种生化方法对其进行纯化和鉴定，同时研究其生物学活性和对细菌的抗菌作用。
（二）研究方法1.基因工程技术表达Cecropin-X：在基因序列的设计中，首先考虑到大肠杆菌感受子的选择以及其与载体的兼容性，然后利用PCR扩增出优化的Cecropin-X基因，将其进行重组并转化至大肠杆菌中。
构建后的质粒进行DNA测序和酶切分析，以确保正确性和稳定性。
2.蛋白表达和纯化：利用预期的基因表达系统和蛋白纯化方法，将基因表达后的蛋白进行分离纯化。
采用酸性洗脱剂的亲和层析柱作为首选纯化工具。
经过纯化后，对纯化的蛋白进行可见光谱图和CD光谱图的分析。
3.抗菌活性测试：利用差减显色法和MIC测定法对Cecropin-X蛋白的抗菌活性进行分析。
利用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌作为检测菌株，观察Cecropin-X的抗菌作用。
三、预期成果和研究价值（一）预期成果1.成功地表达和纯化Cecropin-X，得到高纯度的Cecropin-X蛋白；2.对Cecropin-X蛋白的抗菌活性进行评价，并确定其最小抑菌浓度；3.对Cecropin-X蛋白的光谱图和CD光谱进行分析，阐明其分子结构和性质。
（二）研究价值本课题对于研究抗菌肽的生物学特性和应用价值具有重要的意义，同时有助于提升我国在生命科学领域的国际地位和世界影响力，同时拓宽抗菌肽的研究思路，为其在医药领域的应用奠定基础。
乳酸菌细菌素抗菌潜力挖掘研究进展
乳酸菌细菌素抗菌潜力挖掘研究进展易华西,张兰威,杜明,韩雪(哈尔滨工业大学食品科学与工程学院中法乳联合实验室,哈尔滨150001)摘要:乳酸菌产生的主要抗菌防腐物质是有机酸,但在乳酸菌代谢产物中发现了细菌素等其它抗菌物质,其中有的细菌素甚至具有强烈的抗真菌能力。
世界范围内启动的乳酸菌基因组计划创造了巨大的生物信息流。
乳酸菌基因组蕴含的生物信息将对研究乳酸菌细菌素的合成代谢途径,功能基因挖掘以及新型抗菌剂的开发搭建信息平台。
结合乳酸菌细菌素的最新研究进展,讨论利用乳酸菌基因组探索乳酸菌的抗菌潜力及其作为生物防腐剂在食品保藏中的应用前景。
关键词:生物防腐剂;乳酸菌;抗菌物质;细菌素中图分类号:TS20113文献标识码:A文章编号:1006-2513(2010)01-0073-04Recent advance on the potential anti m icrobial activityof bacteri oci ns produced by LABY I Hua-x,i ZHANG Lan-w e,i DU M i n g,HAN X ue(S i n o-France Dairy Jo int Laboratory ofH arbin I nstitute o fTechno logy,H ar b i n150001)Ab stract:T he m a j o r an ti m icrob i a l and biopreservative s ubstance produced by LA B i s organic ac i d;how ev er,som e LA B produce add i tiona l anti m icrobia l compounds.Among these,the bac terioc i ns have de m onstrated great potenti a l as food preservati ves.A tre m endous fl ow o f i nforma ti on has been created through various genome sequenc i ng pro jects wor l dw i de.T he i n f o r m ati on obta i ned fro m genom ics w ill prov ide anew platf o r m for i dentifi ca tion of pat hw ays for the bac-ter i oc i ns producti on,g eno m e m i n i ng and deve l op m ent of ne w anti m icrob i a l agents.Explorati on o f anti m icrob i a l po ten-tial i n LAB by geno m ics was also d i scussed i n t h is rev i ew.K ey w ords:LAB genom e;LA B;an ti m icrob i a l compounds;bacter i oc i ns食品防腐剂是食品添加剂的重要成员之一。
乳酸菌的分离鉴定及其抗菌肽与发酵性能研究
乳酸菌的分离鉴定及其抗菌肽与发酵性能研究一、本文概述本文旨在对乳酸菌的分离鉴定进行深入研究，并探讨其抗菌肽与发酵性能。
乳酸菌是一类重要的微生物，广泛存在于自然界中，包括人类肠道、乳制品、植物表面等。
它们具有多种生理功能，如促进消化、增强免疫力、改善肠道微生物平衡等，因此在食品、医药和农业等领域具有广泛的应用前景。
本研究首先通过适当的分离方法从各种样品中分离出乳酸菌，并运用分子生物学技术对其进行鉴定，明确其种类和遗传背景。
随后，对分离得到的乳酸菌进行抗菌肽的提取和纯化，通过生物活性测定等方法，研究其抗菌肽的抗菌效果和作用机制。
还将对乳酸菌的发酵性能进行评估，包括其在不同条件下的生长情况、发酵产物的种类和产量等，以期为乳酸菌在食品和生物制品生产中的应用提供理论依据和技术支持。
本研究的意义在于，一方面，通过深入了解乳酸菌的生物学特性，为乳酸菌的开发和利用提供科学依据；另一方面，通过研究乳酸菌的抗菌肽和发酵性能，为开发新型抗菌药物和生物制品提供候选菌株和活性物质。
本研究也有助于推动微生物学、生物化学和发酵工程等相关领域的发展，为相关领域的研究人员提供有价值的参考和借鉴。
二、乳酸菌的分离与鉴定乳酸菌的分离是本研究的基础工作，我们采用了严格的无菌操作技术，从多种自然发酵食品中，如酸奶、泡菜、乳酪等，采集乳酸菌样本。
通过选择性培养基，如MRS培养基，在厌氧条件下进行乳酸菌的初步分离。
随后，对分离得到的菌落进行形态学观察，如菌落颜色、形状、边缘整齐度等特征，初步筛选出具有乳酸发酵特性的菌株。
为了对分离得到的乳酸菌进行精确鉴定，我们采用了分子生物学方法。
提取各菌株的基因组DNA，利用PCR技术扩增其16S rRNA基因序列。
通过对扩增得到的序列进行测序和比对分析，我们确定了各菌株的种属信息。
我们还利用生理生化试验，如糖发酵试验、明胶液化试验等，对分离得到的乳酸菌进行了进一步的鉴定和特性分析。
经过上述步骤，我们成功从自然发酵食品中分离并鉴定了多株乳酸菌。
抗菌肽的研究进展
抗菌肽的研究进展抗菌肽是一种生物活性肽类分子，具有广泛的抗菌谱和多种生物活性。
其研究涉及基础生物学、生物技术和医疗健康等多个领域，近年来得到了广泛关注。
一、抗菌肽的概述抗菌肽最初被发现于20世纪50年代，是一类长度在10~100个氨基酸之间、分子量在1~10千道尔顿的小分子化合物。
它们主要存在于植物、动物、微生物等生物体内，为一种特殊的免疫分子，具有广谱的抗菌、抗病毒和抗真菌等生物活性。
因此，抗菌肽已成为新型抗感染药物的研究热点之一。
抗菌肽可以激活宿主免疫系统，促进嗜中性粒细胞吞噬病原体，调控炎症反应等，同时还可以直接破坏细菌膜、DNA和RNA分子等，具有强大的杀菌能力。
二、抗菌肽的种类目前已经发现和鉴定的抗菌肽有数百种，其中最为常见的是以下几类：1、防御素：是由哺乳动物的单核细胞、肺泡、胃液和吐泄物等分泌的一种抗菌肽，主要作用于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
2、宏观藻类鱼类抗菌肽：是由宏观藻类和鱼类细胞制造出的一些无效肽类，主要杀菌作用是针对革兰氏阳性菌。
3、微生物抗菌肽：是由某些微生物体分泌的与内共生菌、外来菌和真菌等有广泛抗菌作用的肽类。
4、合成抗菌肽：与其他抗菌肽不同，合成抗菌肽是经过化学合成得到的一系列分子，因此其抗菌谱、抗菌速度、抗菌强度等性质可以根据需要调整和改进。
三、抗菌肽的应用前景抗菌肽作为新型抗感染药物具有很好的应用前景。
据报道，美国一些单位已经使用抗菌肽制成肺炎克雷伯菌感染的口服制剂，并且该制剂已进入三期临床试验，有望在未来取代现有的抗生素。
此外，抗菌肽还可以用于保健食品、动物饲料、化妆品等领域。
比如抗菌肽可以用于保健食品中，改善人体免疫系统的健康水平，饲料则可以用于提高家禽、畜禽的生产效益和健康水平。
四、抗菌肽研究的挑战和机遇尽管抗菌肽的应用前景广阔，但是其研究也面临一些挑战和机遇。
1、抗菌肽的生产技术尚不成熟，生产成本较高；2、抗菌肽的应用场景和使用规模有待进一步扩展和加大；3、抗菌肽的作用机理和毒副作用还需要深入研究和认识，以及合适的应用剂量等。
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[基金项目] 黑龙江省发改委重大课题资助项目([2002]1199) [作者简介] 齐桂云(1965-),女,在读博士,副主任技师,主要从事微生物检验工作。
3通讯联系人【论著】乳酸杆菌小分子抗菌肽生物学性质的初步研究齐桂云1,周东坡2,雷 红2,李秀凉2,平文祥23,李 蓉3(11哈尔滨医科大学附属二院微生物室,哈尔滨 150086;21黑龙江大学生命科学院,哈尔滨 150080;31中国疾病预防控制中心营养与食品安全所,北京 100021)[摘要] 目的:探讨从酸菜汁中筛选分离到的乳酸杆菌所产抑菌物质的生物学性质。
方法:菌株HD117发酵液经提取、纯化获得具有抑菌活性的干粉,采用尿素-S DS-P AGE不连续凝胶电泳法确定该物质的分子量,并对其热敏感性、酶敏感性、抑菌活性的适宜pH值及部分抑菌谱进行测定。
结果:该物质具有蛋白质性质,分子量为14000左右的小肽,热稳定性好,可被胰蛋白酶水解,pH2时抑菌效果最佳。
结论:此小分子肽是一种具有研发价值的微生物天然防腐剂。
[关键词] 乳酸杆菌;抗菌肽;生物学性质[中图分类号] R378199+2 [文献标识码] A [文章编号] 1004-8685(2006)02-0129-02Study on b i olog i ca l fea tures of s ma ll m olecul ar an ti bacter i a l pepti de produced by l actoba2 c illusQ i Gui2yun1,Zhou D ong2po2,L ei Hong2,L i X iu2liang2,Ping W en2xiang23,L i Rong3(11The Second Affiliated Hos p ital of Harbin Medical University,Harbin150086,China;21College of L ife Science,Heil ongjiang University,Harbin150080,China;31The I nstitute f or Nutriti on and Food Safety Chinese Center f or D isease Contr ol and Preven2 ti on,Beijing100021,China)[Abstract] O bjecti ve:To investigate the bi ol ogical features of antibacterial substance p r oduced by lact obacillus is olated fr om Chinese sauerkraut juice1M ethods:The strain HD117p r oducing antibacterial substance was identified and its p r oduct was puri2 fied1The molecular weightwas deter m ined by the U rea-S DS-Polyacryla m icle Gel Electr ophoresis technique1The features of heat -resistant,enzy me sensitivity,pH app licable scope and antibacterial s pectru m were detected1Results:The substance was a s mall pep tide with molecular weight about14000,and it was stable t o heat and sensitive with tryp sin1I nhibiti on activity was the str on2 gest at pH21Conclusi on:The substance was a valuable m icr obi ol ogical pep tide p reservative f or reseaching1[Key words] Lact obacillus;Antibacterial pep tide;B i ol ogical feature 乳酸菌在自然界种类繁多,分布范围极广,是一类兼性厌氧菌,被广泛应用于医药、食品及发酵工业[1],除了产生右旋D-乳酸、左旋L-乳酸和混旋DL-乳酸外。
还可以产生一些有抑菌或杀菌作用的物质,乳酸链菌肽(nisin)就是乳链球菌代谢产生的小分子抗菌肽,目前被世界上50多个国家和地区应用为食品的天然防腐剂[2]。
我们在进行L-乳酸菌应用研究过程中从酸菜发酵汁中分离筛选到了一株能产生抑菌活性物质的乳酸杆菌属菌株HD117,采用尿素-S DS-P AGE不连续凝胶电泳分析[3],证明该物质是小肽类,具有蛋白质性质,并对其热敏感性、酶敏感性、抑菌活性的适宜pH值及部分抑菌谱等方面进行了深入的研究。
1 材料与方法111 菌株来源从齐齐哈尔丰源食品有限公司L-乳酸菌酸菜发酵液经乳酸杆菌选择培养基分离、鉴定、保存。
指示菌株均由黑龙江省应用微生物研究所提供,包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、黄色微球菌、酵母菌、白色链霉菌、植物乳杆菌。
112 主要试剂及培养基蛋白酶K(p r oteinase K),德国进口;胃蛋白酶(pepesin)、木瓜蛋白酶(papainase)、胰蛋白酶(tryp sinase)购自上海华美生物工程公司;乳酸(分析纯)购自北京化学试剂二厂;乳酸菌素(N isin)标准品。
培养基包括MRS的固体、液体培养基; M17的固体、液体培养基;LB的固体、液体培养基。
113 抑菌物质的提取及生物学性质分析11311 HD117菌株发酵液经离心、萃取、盐析、透析、层析获得具有抑菌活性的干粉,同时进行电泳确定分子量,以乳酸和N isin标准品为对照。
11312 热稳定性试验 将浓缩发酵液分别在60℃、80℃、100℃、121℃条件下处理20、40、60m in后,以枯草芽孢杆菌为指示菌作抑菌试验。
采用无重复观测值的二因素方差进行统计分析。
11313 蛋白酶对其抑菌的影响 将浓缩发酵液的pH调至各酶的最适pH,按115mg/m l的比例分别加入胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和K蛋白酶,在各自适宜的温度下处理1h 后,沸水浴处理3m in使酶失活,冷却后调pH=5,以枯草芽孢杆菌为指示菌做抑菌试验。
11314 不同pH下的抑菌效果 为了观察该物质的pH使用范围,将离心、浓缩10倍的HD117菌株发酵液的pH分别用乳酸或氢氧化钠调至2、3、4、5、6、7、8后,枯草芽孢杆菌为指示菌用双层检测平板检测抑菌效果。
11315 不同指示菌的抑菌效果观察 将菌株HD117发酵液离心、浓缩10倍后,测定pH值,选用大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、黄色微球菌、酵母菌、白色链霉菌、植物乳杆菌为指示菌做抑制试验。
2 结果211 分子量的测定采用尿素-S DS-P AGE不连续凝胶电泳测得该抑菌物质的分子量为14000左右[3]。
212 热稳定性检测结果从表1中可以看出浓缩发酵液在60℃、80℃、100℃、121℃各温度下分别处理20、40、60m in后,抑菌圈直径无规律性变化,说明小肽抑菌活性没有随温度和时间而变化。
证明该物质对热有很强的耐受性。
表1 温度对抑菌效果的影响温度抑菌环直径(mm)No hearing20m in40m in60m in Ti Xi 60℃3615635180351063611414412636107 80℃37102371303719437132149158371395 100℃36156381303814437126151132371640 121℃37142381823717237136151132371830 T1j147156150122149186148108595172X1j3618937155537146537102371233213 蛋白酶敏感性检测结果该菌株pH5时的发酵液有较大抑菌圈,被胰蛋白酶作用后抑菌圈消失,此抑菌物质能被胰蛋白酶分解,说明它具有蛋白质性质。
此抑菌物质对胰蛋白酶敏感,同时对胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、K蛋白酶不敏感。
214 不同pH下对枯草杆菌抑菌结果表2显示该物质在pH值2、3、4、5的条件下均有抑菌效果, pH值为2时抑菌效果最强。
pH值大于515抑菌活性消失。
表2 小肽在不同pH条件下抑菌效果pH值抑菌环直径(mm)浓缩发酵液(A)乳酸(B)N isin A-B210461723170311782310031040180231453014217135410201121114011190817251016164--9164515----610----710----810---- 11牛津杯孔径为017c m;21“-”:表示无抑菌环215 小肽对不同指示菌的抑菌结果表3显示对枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、植物乳杆菌、巨大芽孢杆菌、李斯特菌、沙门菌、志贺菌、普通变形菌、蜡样芽孢杆菌有较强的抑制作用,而对酵母样真菌无抑制作用。
表3 小肽对各种指示菌的抑菌效果指示细菌抑菌环直径(mm)小肽浓缩前发酵液小肽浓缩后发酵液N isin pH相同的乳酸大肠杆菌131682117401000100金黄色葡萄球菌18128301629132010枯草芽孢杆菌151542516491288118黄色微球菌111082819281848151酵母菌0100010001000100白色链霉菌-35136--植物乳杆菌-17104-- “-”:无抑菌环;“…”:未作试验,无数据3 讨论细菌、放线菌、酵母菌等均可代谢产生具有抑菌活性的物质。
乳酸菌作为益生菌在食品、医药行业已被广泛应用[2],乳酸菌代谢产生的小分子抗菌肽是微生物天然防腐剂中研究的热点,目前已知至少有七个属的乳酸菌可产生小肽类物质[2,4],此类物质是细菌代谢过程中通过核糖体合成机制产生的,其抑菌范围广,不局限于同源细菌[5]。
迄今研究的比较清楚的乳酸菌素(nisin)就是由乳酸球菌代谢产生的,其特殊的作用机制是通过作用于细菌的细胞膜,在膜上形成离子通道,引起胞内物质的外漏,从而杀死细菌[6,7]。
关于乳杆菌产生小分子抗菌肽的研究国内外未见报道,我们从酸菜发酵汁中筛选鉴定的乳杆菌产生的抑菌物质经检测其分子量为14000左右,其氨基酸序列及分子结构正在研究中。