Y染色体微缺失
二 Y染色体微缺失ห้องสมุดไป่ตู้关基因
• AZFa - b缺失患者 50%严重少精子50%无 50%严重少精子50%无
精子 • AZFa - c缺失患者 100%无精子 100%无精子 • AZFb - c缺失患者 4%严重少精子 , 96%无 4%严重少精子 96%无 精子
二 Y染色体微缺失相关基因
• AZFa缺失较为少见 ,占整个 AZF缺失 4 .9%。 AZFa缺失较为少见 AZF缺失 .9%。
• EGFR属于受体酪氨酸激酶 ( recep t or EGFR属于受体酪氨酸激酶
tyrosine kinases, RTKs) ,调控细胞的生长、 ,调控细胞的生长、 分化、 血管生成及凋亡抑制 ,其信号通路与 恶性肿瘤的生长、 侵袭及转移关系密切。 • 靶向药物称作酪氨酸激酶抑制剂 ( tyr osine kinases inhibit ors, TKIs) ,其中吉非替尼 ,其中吉非替尼 (Gefitibib,商品名为 (Gefitibib,商品名为 Iressa 易瑞沙)和埃罗 易瑞沙) 替尼 ( Erlotinib,商品名为 Tarceva 特罗凯) Erlotinib,商品名为 特罗凯) 治疗可以使肿瘤缩小。 • 在 Gefitibib和 Erlotinib的临床试验和治疗 Gefitibib和 Erlotinib的临床试验和治疗 中 ,仅有一部分 NSCLC人群对药物有反应 NSCLC人群对药物有反应
和睾丸组织学表型多种多样。一般说来 ,AZFc缺 ,AZFc缺 失患者尚存精子生成能力。AZFc缺失见于无精子 失患者尚存精子生成能力。AZFc缺失见于无精子 症或严重少精子症患者 ,罕见情况下 ,也可以在自 然状态下遗传给其男性后代 在无精子症患者中,AZFc缺失者通过睾丸精子穿刺 在无精子症患者中,AZFc缺失者通过睾丸精子穿刺 获得精子的机会比其他缺失类型大 ,同时可以从睾 丸穿刺获得精子进行 I CSI受孕 ,但这些患者的男 CSI受孕 性后代都将是 AZFc缺失的携带者，建议在进行试 AZFc缺失的携带者，建议在进行试 管婴儿前 ,行遗传咨询。
• 为临床治疗各种男性不育提供分子或细胞水平的
EGFR突变与非小细胞肺癌酪氨酸激 EGFR突变与非小细胞肺癌酪氨酸激 酶抑制剂靶向治疗
一 背景
• • • •
肺癌是当今世界上最常见的恶性肿瘤 ,男性肺癌占各类恶 性肿瘤发病率的首位 ,女性肺癌发病率仅次于乳腺癌占第 2位。 尽管手术和化疗技术不断提高 ,但肺癌患者的预后仍然很 差 , 5年生存率仍 < 20%。 5年生存率仍 20%。 近年来随着分子生物学技术的提高 ,产生了一些针对分子 靶点的抗肿瘤药物。这些药物针对性强 ,能特异性地杀伤 肿瘤细胞。 其中以表皮生长因子受体 ( epidermal growth factor receptor, EGFR)为靶点的分子靶向治疗 (molecular EGFR)为靶点的分子靶向治疗 targeted therapy)在非小细胞肺癌的治疗中日渐突出。 therapy)在非小细胞肺癌的治疗中日渐突出。
• 发现几乎所有对 TKIs敏感的 NSCLC患者都 TKIs敏感的 NSCLC患者都
存在EGFR基因的体细胞突变。因此 存在EGFR基因的体细胞突变。因此 ,研究 NSCLC患者不同治疗反应性的机制、 NSCLC患者不同治疗反应性的机制、 以及 从中筛选出最适治疗对象进行有针对性的 治疗具有重要临床意义。
二 Y染色体微缺失相关基因
• Y染色体是最短的近端着丝粒染色体 ,是男性特有的染色体。1976年， 1976年，
Tiepolo和Zuifaidi首先提出Y Tiepolo和Zuifaidi首先提出Y染色体上有多个基因参与生精过程。多年 研究，发现男性特有的Y 研究，发现男性特有的Y染色体上面存在一个关键的与生育相关的因 子的区域，称为AZF区。目前认为在AZF区上存在四个精子发生亚区 子的区域，称为AZF区。目前认为在AZF区上存在四个精子发生亚区 （AZFa、AZFb、AZFc、AZFd），各亚区包含的位点在男性生殖细胞 AZFa、AZFb、AZFc、AZFd），各亚区包含的位点在男性生殖细胞 发育的不同时期起着不同的作用，位点的缺失可致患者表现为少、弱 精症或无精症从而引发不育。 • 一般认为，Y染色体的近端缺失（涉及AZFa和AZFb），表现以唯 一般认为，Y染色体的近端缺失（涉及AZFa和AZFb），表现以唯 支持细胞综合症为主的严重生精障碍，Y 支持细胞综合症为主的严重生精障碍，Y染色体的远端缺失（涉及 AZFd和AZFc），可残留岛状的生精正常区域。对无精症患者中，对 AZFd和AZFc），可残留岛状的生精正常区域。对无精症患者中，对 检查睾丸过小或睾丸活检仍无精子患者，一般不再行AZF基因检测。 检查睾丸过小或睾丸活检仍无精子患者，一般不再行AZF基因检测。 总之，开展染色体和AZF检测，可全面评价男性不育遗传缺陷，从而 总之，开展染色体和AZF检测，可全面评价男性不育遗传缺陷，从而 更好的解释发病原因，提供遗传咨询和指导临床诊疗。
四 Ｙ 染色体微缺失的检测方法
• 选择位于 Y染色体短臂 ( Y p ) 的睾丸决定基因( S RY ) 和 的睾丸决定基因(
锌指蛋白基因( 锌指蛋白基因( Z F X ／ Z F Y ) 为对照。Z F X ／ Z F Y 为对照。Z 既存在于 x染色体短臂， 也存在于 Y p ， 其与 S R Y一 Y一 起构成2 起构成2个 目前推荐使用 的参照基因。每个 A Z F区域至 F区域至 少设置2 少设置2个 S T S位点 才能正确有效. S位点 才能正确有效. 其推荐的 S T S为 A Z F a ： s Y 8 4， s Y 8 6：A Z F b： S为 4， 6： b： s Y 1 2 7， s Y 1 3 4； A Z F c ： s Y 2 5 4， s Y 2 5 5 。 7， 4； 4， 多重 P C R 实验 中的引物应包括 ： s Y 1 4 ( S R Y ) ， z FY， ， s Y 8 4， s Y 8 6 ， s Y 1 2 7 ， s Y 1 3 4 ， s FY， 4， Y254，sY255。
二 Y染色体微缺失相关基因
• AZFa缺失的病人 , 主要表现为唯支持细胞 AZFa缺失的病人
综合征伴睾丸体积缩小 ,无精子生成 • AZFb缺失的病人主要表现为生精过程阻滞 AZFb缺失的病人主要表现为生精过程阻滞 在精母细胞阶段 ,无精子生成 • AZFc区缺失病人表现多样化 ,会出现无精子 AZFc区缺失病人表现多样化 症和少精子症的不同临床表现
四 Ｙ 染色体微缺失的检测方法
目前关于 Ｙ 染色体微缺失的检测方法最常用 的是多重聚合酶链反应 (ＰＣＲ) 技术 而检测的位 ＰＣＲ) 点有很多 但有研究表明 ＳＹ８４ ＳＹ１５２ Ｓ Ｙ１２７ ＳＹ１４７\ＳＹ２５４-ＤＡＺ 和 ＲＢ ＳＹ１４７\ＳＹ２５４ＭＹ１ 这 ６ 个基因标志物能覆盖大部分已发现 的微缺失 其他的位点序列灵敏度比较低, 当然不 其他的位点序列灵敏度比较低, 同种族间可能会有轻微的差异
• 1996年将 AZF区划分为 3个区:AZFa、AZFb、 AZFc。1999 年研究发现在 1996年将 AZF区划分为 个区:AZFa、AZFb、 AZFc。
AZFb 和 AZFc 间存在AZFd。研究发现 ,在 Y染色体 AZFa、 AZFb、 AZFc3个 间存在AZFd。研究发现 AZFa、 AZFb、 AZFc3个 区至少发现 15个与精子发生相关的基因，AZFd区尚未发现相关基因。 15个与精子发生相关的基因，AZFd区尚未发现相关基因。
•
五 染色体微缺失相关基因研究的 意义
1 用于原发性无精或少弱精症的遗传咨询。 通过遗传病因诊断， 找到男性不育的遗传 病因， 则可避免不必要的药物及手术治疗。 2 进行辅助生育之前对其进行遗传病因诊断， 可尽量避免将不良基因传递给下一代 3 辅助生育精子质量筛选 4 为未来的基因治疗提供理论依据。
整个 AZFa区域缺失通常表现为 SCOS,为绝 AZFa区域缺失通常表现为 SCOS,为绝 对的无精子症。若患者为 AZFa缺失 ,不建 AZFa缺失 议做睾丸穿刺寻找精子进行卵细胞胞质内 单精子注射，目前只能寻求供精人工授精 技术来获得妊娠。
二 Y染色体微缺失相关基因
• AZFb缺失也不多见 ,占整个 AZF缺失 AZFb缺失也不多见 AZF缺失
Y染色体微缺失检测
迪安医学检验中心
一、背景
•1 •2 •3 •4
全球不育夫妇占已婚夫妇10%全球不育夫妇占已婚夫妇10%-15% 其中男性原因占40%其中男性原因占40%-50% 遗传因素占男性不育的30% 遗传因素占男性不育的30% 10%~15%的特发性无精症存在 10%~15%的特发性无精症存在 Y 染色 体的微缺失
•
三 AZF微缺失与其他不育因素 AZF微缺失与其他不育因素
• • • • • •
AZF微缺失与隐睾症 AZF微缺失与隐睾症 AZF微缺失与精索静脉曲张 AZF微缺失与精索静脉曲张 AZF微缺失与双侧输精管缺如 AZF微缺失与双侧输精管缺如 AZF微缺失与睾丸支持细胞 AZF微缺失与睾丸支持细胞 AZF微缺失与生殖激素异常 AZF微缺失与生殖激素异常 AZF微缺失与其他不育因素 AZF微缺失与其他不育因素
二 Y染色体微缺失相关基因
• AZFa缺失患者 33%为严重少精子,67%表现 AZFa缺失患者 33%为严重少精子,67%表现
为无精子 • AZFb缺失患者 9%轻度少精子, 23%严重少 AZFb缺失患者 9%轻度少精子, 23%严重少 精子 , 68%无精子 68%无精子 • AZFc缺失患者 46%严重少精子 , 54%无精 AZFc缺失患者 46%严重少精子 54%无精 子
四 Ｙ 染色体微缺失的检测方法
• 核型分析总体上来说操作繁琐、效率不高, 核型分析总体上来说操作繁琐、效率不高,
尤其是难以检测出微小的染色体异常或变 异。荧光原位杂交(Fluorescence 异。荧光原位杂交(Fluorescence isitu hybridization, FISH)虽然有更高的分辨率, FISH)虽然有更高的分辨率, 但其检测的范围为 20 kb~5 Mb,对于微小 Mb,对于微小 的染色体缺失也难以检测, 的染色体缺失也难以检测, 且繁琐的实验操 作与高昂的成本也限制了 FISH 技术在临床 中的广泛应用。
Y染色体微缺失
好的解释发病原因，提供遗传咨询和指导临床诊疗。
• 1996年将 AZF区划分为 3个区:AZFa、AZFb、 AZFc。1999 年研究发现在 AZFb 和 AZFc 间存在AZFd。研究发现 ,在 Y染色体 AZFa、 AZFb、 AZFc3个区至少发现 15 个与精子发生相关的基因，AZFd区尚未发现相关基因。
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四 Ｙ 染色体微缺失的检测方法
• 选择位于 Y染色体短臂 ( Y p ) 的睾丸决定基因( S RY ) 和锌 指蛋白基因( Z F X ／ Z F Y ) 为对照。Z F X ／ Z F Y既存在于 x染色体短臂， 也存在于 Y p ， 其与 S R Y一起构成2个 目 前推荐使用 的参照基因。每个 A Z F区域至少设置2个 S T S 位点 才能正确有效.
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二 Y染色体微缺失相关基因
• AZFa缺失的病人 , 主要表现为唯支持细胞综 合征伴睾丸体积缩小 ,无精子生成
• AZFb缺失的病人主要表现为生精过程阻滞 在精母细胞阶段 ,无精子生成
• AZFc区缺失病人表现多样化 ,会出现无精子 症和少精子症的不同临床表现
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二 Y染色体微缺失相关基因
• AZFa缺失患者 33%为严重少精子,67%表现为 无精子
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四 Ｙ 染色体微缺失的检测方法
• 由于不 同实验室采用 P C R方法不 同,导致 实验结果各异。为提高诊断质量， 欧洲男 科协 会( E A A ) 和欧洲分子遗传实验质控网 ( E MQ N) 在 1 9 9 9 、 2 0 0 4年先后颁布了 第 1版和第 2版 Y染色体 微缺失分子诊断指 南， 规范了检测微缺失时的Y 染色体序列 标签点( s e q u e n c e t a r g e t e d s i t e s ， S T S ) 与 所采用的内外对照方法。
Y染色体微缺失检测指导
Y染色体微缺失检测指导内部编号：（YUUT-TBBY-MMUT-URRUY-UOOY-DBUYI-0128）Y染色体微缺失是严重少精子或无精子症的重要原因，是导致男性不育的第二大遗传因素，其发生率仅次于Klinefelter综合征(克氏综合征)。
从1999年开始，欧洲男科学协会和欧洲分子遗传实验质控网(EAA/EMQN)为提高诊断质量，出版了Y 染色体微缺失分子诊断指南，并提供了客观的实验质量评价方法。
最新版的实验室指南是2013年9月EAA/EMQN根据12年的临床积累和专家共识，在1999版和2004版的基础上修订而成。
新指南重点阐明：在少精子症或无精子症男性中发现的Y染色体微缺失区域，主要是无精子因子(azoospermia factor，AZF)区域仅包含AZFa、AZFb、AZFbc、AZFc和AZFabc区，独立的AZFd区并不存在；AZFc区中gr/gr缺失是影响精子生成的一个危险因素，但临床意义尚存争议，不作为常规检查指标；检测位点增加并不能提高检测灵敏度，反而可能使结果复杂化；基于两管多重PCR的检测方法仍适用于整个AZF缺失检测。
EAA/EMQN 12年国际质量评估计划(EQA计划)的实施表明，参与实验室通过规范实验操作，改善报告质量，可有效降低诊断错误率。
Y染色体微缺失在中国不育男性中的发生频率为%，处于较高水平，我们建议将AZF检测作为男性严重少精子或无精子症的常规检测项目，呼吁国内AZF检测实验室加入EQA计划，完善中国Y染色体微缺失检测实验操作规范。
Y染色体微缺失分子检测在中国已开展多年，国内专家对AZF缺失模式、检测序列标签位点(sequence–tagged site, STS)的数量、检测方法和内部质量控制等临床问题未达成共识。
各实验室的诊断操作方法有很大不同，导致不准确或错误诊断时有发生，迫切需要建立Y染色体微缺失诊断标准和质量控制标准。
EAA/EMQN更新的2013版指南对以上问题都给出了明确的专家共识，对我国建立自己的检测指南有重要的指导意义。
Y染色体AZF区域微缺失与男性生殖健康
Y染色体AZF区域微缺失与男性生殖健康Y染色体微缺失是指无精子因子（Azoospermia factor，AZF）区域的缺失，该区域不同程度的缺失可引起生精功能障碍，造成无精子或少精子症。
目前，Y染色体AZF微缺失，是已知的导致男性不育的最重要的遗传因素之一。
在精子的发生过程中，细胞快速的分裂，导致精子比卵子有更大的概率发生异常。
如果精子发生过程中存在引起遗传突变的因素，则Y 染色体一直处在这个环境中。
Y染色体是男性所独有的染色体，由于Y 染色体是单倍体，无法像常染色体一样进行修复，即便是一个小小的基因缺失，也有可能导致明显的效应。
无精子因子区域被划分为AZF a，AZF b及AZF c区三个区域。
三个区域的任一段异常都会导致严重的后果。
一般来说，a区缺失的患者，常表现为唯支持细胞综合征，常规检查男性精液时基本显示为无精子症；b区缺失的患者，常表现为生精阻滞，精液分析结果大多也为无精子症；c区缺失则具有多样化，可出现无精子症、严重少弱精子症，甚至会出现精子数量正常的表现。
AZF区域的分子遗传特点AZFa 仅编码单拷贝基因，并且由单拷贝、广泛表达的基因构成，其中X 同源序列可以逃避失活。
四个基因已被定位到AZFa 区，有USP9Y、DBY、UTY和 TB4Y。
AZFb基因座位于Yq11的中心区（间隔5-6MB），跨越3.2Mb，其中1.5Mb与AZFc重叠。
AZFb区域具有复杂的基因组结构并且包含三个单拷贝区域，Y染色体特异性重复DNA家族（DYZ），19卫星重复阵列和14个称为扩增子的多拷贝序列单位。
这些扩增子被组织成6个序列家族，家族内同源性水平> 99％。
AZFb中丰富的扩增子的存在造成复杂的重排。
精母细胞成熟所必需的关键AZFb区间从回文中心P5延伸到RBMY1簇内P3的近端边缘，间隔超过4 Mb，含有13个编码基因。
AZFb与AZFc易发生NAHR（非等位基因同源重组），导致两种常见缺失，分别为6.23和7.7 Mb。
Y染色体微缺失检测
Y染色体微缺失检测试剂盒背景介绍根据国际卫生组织调查数据，约15%育龄夫妇存在生育障碍，其中男性因素引起的生育障碍约占一半。
在已知的导致男性不育的遗传学因素中，发病率最高的两种是Y染色体的微缺失和克氏综合症。
Y染色体具有大量重复基因序列及回文结构，这些结构在维持Y染色体进化稳定性的同时也使回文结构内部基因易于丢失，进而导致不育。
缺失率最高的三个影响精子发生的区域被命名为AZFa，AZFb和AZFc，它们之中任何一个出现缺失都有可能导致育性下降或不育。
Y染色体微缺失在无精症或少精症患者中发病率在10-15%，已成为男性不育患者的常规检查项目。
图1，Y染色体AZF区结构示意图（AZFa区两端有两段原病毒序列、AZFb/c区内部有5个序列高度一致的大的回文结构，这些序列和结构导致相应染色体片段易发生同源重组，造成缺失或复制。
）欧洲男科学协会和欧洲分子遗传实验质控协作网（EAA/EMQN）2004年发表“Y染色体微缺失分子诊断指导意见”建议通过对各AZF区的共6个STS位点和两个对照位点检测Y染色体微缺失。
产品简介本剂盒通过“多重定量荧光PCR技术”（Multiplex Quantitative Fluorescent PCR），以一个高度复合的扩增体系中扩增至少15个Y染色体微缺失检测相关的位点，并根据各位点有无扩增产物及扩增产物剂量判断缺失类型。
对于Y染色体微缺失，由于各AZF区片段相对较小，常规核型分析等方法难以发现其缺失。
本项目采用的检测方法是：在各AZF区上分别选择具有序列特异性的多个位点，通过多重定量荧光PCR方法检测各位点。
根据有无扩增产物判定样本染色体是否包含所检测的序列特异性位点，进而推断样本染色体是否在位点所在AZF区域发生缺失；通过部分位点扩增产物相对剂量确定相关位点拷贝数比例，根据拷贝数比例推断相关位点对应区域是否发生缺失或复制，并对于AZFb和/或AZFc区部分缺失或复制，实现了首次检测。
男性不育与Y染色体微缺失相关
家庭医学2017.05(上)染色体是基因的载体。
人类的细胞中有23对染色体，包括22对常染色体和1对性染色体，性染色体包括X 和Y 染色体，决定人类的性别，男性的性染色体为XY ，而女性为XX 。
研究表明，男性Y 染色体上存在很多与精子产生和功能密切相关的基因，当其某个区域的片段发生微小缺失（即Y 染色体微缺失），就可引起生精功能障碍。
而这些片段称为无精子因子（英文简称AZF ）。
具体又分为AZFa 、AZFb 、AZFc 三种，分别代表着不同基因片段的缺失，患者在临床上就会出现不同程度的生精障碍。
其中约80%表现为AZFc 缺失。
黎某及父亲兄弟与小张的情况，都属于AZFc 类型的染色体缺失。
Y 染色体微缺失的检测，采用的是多重聚合酶链反应（PCR ）体外扩增和电泳检测技术，它可快速、准确检测男性Y 染色体AZF 上6个位点。
这6个位点是sY84，sY86，sY127，sY134，sY254与sY255。
如果检出sY84与sY86，表示有AZFa 存在；如果检出sY127与sY134，表示有AZFb 存在；如果检出sY254与sY255，表示有AZFc 存在。
反之为缺失。
正式试验时还要设同步阳性与空白参照物（SRY ），阳性参照物必需出现6个位点条带，空白参照物不显影，方证明实验结果有效。
如果检测发现AZFa 或AZFb 缺失，就现阶段的医疗技术而言，患者无须再进行进一步的检测和治疗，只能选择领养或是供精人工授精。
像案例中小张这样的AZFc 缺失，自己的生育尚有希望。
在排除其他影响精液质量因素后，这类患者可考虑接受辅助生殖技术。
另有研究发现，AZFc 区域缺失的少精子症患者，其精子数目有进行性下降的趋势，最后发展为无精子症。
因此，对AZFc 区域缺失的少精子症患者，应及早进行治疗或将其精液进行冷冻保存。
部分AZFc 缺失的无精子患者，可通过药物治疗或睾丸活检找到精子。
需要说明的是，由于此类患者生育男孩可能会遗传AZFc 缺失的问题，在进行辅助生殖前，完成染色体核型分析和Y 染色体微缺失的检测非常必要。
Y染色体微缺失导致男性不育
无精子因子检查不仅可以明确病因，避免进
行睾丸活检等创伤性检查，或者一些无效的，更 主要的是可以避免将有缺陷的基因遗传给下一
代。目前，国内上海、广州、长沙等地部分医疗
机构已开展这项。
那么，Y 染色体检查适应哪些临床需要呢?
倪博士指出，无精子因子的微缺失是无精子和严 重少精子男子常见的基因改变之一，目前已知无
常规检查时显微镜下根本看不到精子，是典型的
无精症患者。接着，医务人员又作了 Y 染色体微 缺失的分子检查，证实男方的 Y 染色体上的单拷
贝基因 DAZ 和多拷贝基因 RBM 家族片段微缺失，
导致生精障碍。
“床上功夫好，不一定生育功能就好，这是
两回事。生育所表现的是繁育下一代的能力，如 男方无精或少精就有很大可能不育。如男方不
不明原因的无精子症或少精子症患者中，约有
15%的人表现为 Y 染色体长臂上的微小缺失，这
些缺失又被称为无精子因子。
由于男方的原因，夫妻间不能正常通过受 孕，就只好借助“辅佐生育技术”来完成繁育下
一代的任务。倪斌博士介绍说，辅佐生育技术，
确切的名称为症患者带来生
子要大。二是无精子因子微缺失既可以表现为特
发性不育，也可以表现为隐睾。隐睾和睾丸下降 不全是最常见的男性分化异常，由于腹部温度较 高，常伴有精子生成障碍和睾丸癌的高发性，而 AZF 微缺失能造成生殖细胞发育过程中某一阶段 的中止，并以某种特征性的睾丸病变形式表现出
来。如性反转综合症：46，XX 男性的主要临床表
这一次他戴着那个银白色的耳机。对于他的违纪，老师从不过问，似乎班上没
育，不妨查查 Y 染色体。”湖南省现代优生技术
重点实验室主任、研究员倪斌博士说。
Y染色体微缺失与男性不育简介-机理和技术-2015年第2版
肉眼判读，条带大小相近，图片模糊 操作复杂，人工实验较繁琐 电泳检测，接触EB等致癌物 电泳时间长，需8小时
适用医疗机构及科室
男科（不育）
医院生殖遗传室
Y染色体微缺失检测
生殖医学中心
计划生育研究所
样本要求
推荐样品类型顺序：新鲜外周血＞冷冻外周血 采血管选用非肝素抗凝管，推荐使用枸橼酸钠抗凝管和EDTA抗凝管
检验结果演示
同一荧光通路检测同一AZF区域位点 彩色S曲线结果，简单直观
组别 Group A 荧光 染料 FAM VIC ROX Cy5 检测 位点 SRY sY84 sY127 sY255 ZFX/ZF Y sY86 sY134 备注 对照 AZFa AZFb AZFc 对照 AZFa AZFb
检测位点 检测方法 内参基因 对照组设置
区域 STS
AZFa sY84 sY86
AZFb sY127 sY134
AZFc sY254 sY255
多重荧光PCR法，两管反应 ZFX/ZFY基因：检验样本是否正确提取，质量可靠 SRY基因：检验是否为男性样本
设置阳性对照(正常男性样本)、阴性对照(女性 样本)与空白对照(水)
基因检测，指导生育
检测对患者来说只要抽少量血液 即可，非常方便。
不同的位点缺失或是否存在缺失的治疗方法是不 一样的，检测结果指导医生是否采用ICSI辅助生 育； 同时为是否选择性移植女性胚胎提供依据，因为 男性后代将遗传父亲的不育缺陷。
Y染色体微缺失分子诊断
染色体显带方法-G显带
染色体显带 ：经不同的方法 处理染色体，经染色后使染 色体在纵轴上显示明、暗或 着色深、浅相间的横纹即显 带（Banding）。
这种带对每一条染色体来说 都是独特的，可以区分和确 认每一条染色体。
Y染色体微缺失检测结果的分析
（ ６ ９ ／ ３ ７ １ ２ ） ， Ａ ｚ Ｆ ｂ ５ ． ２ ８ ％（ １ ９ ６ ／ ３ ７ １ ２ ） ， Ａ ｚ Ｆ ｃ ９ ． ５ ６ ％（ ３ ５ ５ ／ ３ ７ １ ２ ） ， Ａ ｚ Ｆ ｄ ９ ． ８ ６ ％ （ ３ ６ ６ ／ ３ ７ １ ２ ） ．Ａ ｔ ｏ ｔ ａ ｌ ｏ ｆ １ ９ ｄ ｉ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ
（ Ｆ ａ ｍ ｉ ｌ ｙ Ｐ ｌ ａ ｎ ｎ ｉ ｎ ｇ Ｓ ｐ ｅ ｃ ｉ ｌ ａ Ｈ ｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ｏ ｆ Ｇ ｕ ａ ｎ ｇ ｄ ｏ ｎ ｇ 。 Ｇ ｕ ａ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ ５ １ ０ ６ ０ ０， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｏ ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ： Ｔ ｏ ｄ ｉ ｓ ｃ ｕ ｓ ｓ Ｙ ｃ ｈ ｒ ｏ ｍ ｏ ｓ ｏ ｍ ｅ ｍ ｉ ｃ ｒ ｏ ｄ ｅ ｈｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ｙ ｐ ｅ ｓ ａ ｎ ｄ ｉ ｔ ｓ ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ ｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｉ ｆ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ．Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ： Ｙ ｃ ｈ ｒ ｏ ｍｏ －
ｄ ｅ ｌ ｅ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ｙ ｐ ｅ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｆ ｏ ｕ ｎ ｄ。 ｔ ｈ ｅ ｔ ｈ ｒ ｅ ｅ ｍｏ ｓ ｔ ｃ ｏ ｍｍｏ ｎ ｔ ｈ ｒ ｅ ｅ ｄ ｅ ｌ ｅ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ｙ ｐ ｅ ｓ ａ ｃ ｃ ｏ ｕ ｎ ｔ ｅ ｄ ｆ ｏ ｒ ８ ４ ． ２ ０ ％ ｏ ｆ ａ ｌ ｌ ｄ ｅ ｆ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ｄ ｅ ｌ ｅ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ｙ ｐ ｅ ｓ 。
摘要 ： 目的 探讨 Ｙ染色体 微缺失类型及其临床意义。方法 回顾分析我 院门诊 不育症男性 Ｙ染色体微缺 失 （ Ａ Ｚ Ｆ ） １ ５个基 因位 点的检 测结 果。结果 ３ ７ １ ２例 Ａ Ｚ Ｆ基 因检 测 结果 显示 ， Ａ Ｚ Ｆ总的缺 失 率 为 １ ０ ． ９ １ ％， Ａ Ｚ Ｆ ａ 、 Ａ Ｚ Ｆ ｂ 、 Ａ Ｚ Ｆ ｃ 、 Ａ Ｚ Ｆ ｄ的缺 失率分别为 １ ． ８ ６ ％（ ６ ９ ／ ３ ７ １ ２ ） 、 ５ ． ２ ８ ％（ １ ９ ６ ／ ３ ７ １ ２ ） 、 ９ ． ５ ６ ％（ ３ ５ ５ ／ ３ ７ １ ２ ） 、 Ａ Ｚ Ｆ ｄ ９ ． ８ ６ ％（ ３ ６ ６ ／ ３ ７ １ ２ ） 。共发现 １ ９种不 同的缺失类型 ， 最 常见三种缺 失类型所 占全 部缺 失类 型的 ８ ４ ． ２ ０ ％， 它们 分别 为： Ｓ Ｙ １ ５ ２＋ Ａ Ｚ Ｆ ｃ缺失 ， ４ ４ ． ４ ４ ％（ １ ８ ０ ／ ４ ０ ５ ） ； Ａ Ｚ Ｆ ｂ＋Ａ Ｚ Ｆ ｃ ＋Ａ Ｚ Ｆ ｄ缺失， ２ ７ ． ４ １ ％（ １ ｌ １ ／ ４ ０ ５ ） ； １ ５个基 因位点全缺 失， １ ２ ． ３ ５ ％（ ５ ０ ／ ４ ０ ５ ） 。结论 Ａ Ｚ Ｆ各 区缺 失 率从高 到低依 次为 ： Ａ ｚ Ｆ ｃ ＞Ａ Ｚ Ｆ ｂ＞Ａ ｚ Ｆ ａ 。Ａ Ｚ Ｆ缺 失 患者 中， Ｓ Ｙ １ ５ ２＋Ａ ｚ Ｆ ｃ 缺 失 的有 ５ ％表现为少精子症， 其余为无精 子症 ； Ａ Ｚ Ｆ ａ 、 Ａ ｚ Ｆ ｂ 有缺 失 的患者 均表现 为无精 子症。Ａ Ｚ Ｆ ｄ的存在 意义及 Ｓ Ｙ １ ５ ２ 的 归属问题有待进 一步探讨 。 关键词 ： Ｙ染色体 ； 微 缺失； 临床 意义
Y染色体微缺失检测指导
丫染色体微缺失是严重少精子或无精子症的重要原因，是导致男性不育的第二大遗传因素，其发生率仅次于Klinefelter综合征（克氏综合征）。
从1999年开始，欧洲男科学协会和欧洲分子遗传实验质控网（EAA/EMQN为提高诊断质量，出版了丫染色体微缺失分子诊断指南，并提供了客观的实验质量评价方法。
最新版的实验室指南是2013年9月EAA/EMQN根据12年的临床积累和专家共识，在1999版和2004版的基础上修订而成。
新指南重点阐明：在少精子症或无精子症男性中发现的丫染色体微缺失区域，主要是无精子因子（azoospermia factor，AZF）区域仅包含AZFa AZFb AZFbc AZFc和AZFabc区，独立的AZFd区并不存在；AZFc 区中gr/gr 缺失是影响精子生成的一个危险因素，但临床意义尚存争议，不作为常规检查指标；检测位点增加并不能提高检测灵敏度，反而可能使结果复杂化；基于两管多重PCR的检测方法仍适用于整个AZF缺失检测。
EAA/EMQN 12年国际质量评估计划（EQA计划）的实施表明，参与实验室通过规范实验操作，改善报告质量，可有效降低诊断错误率。
丫染色体微缺失在中国不育男性中的发生频率为11.5%，处于较高水平，我们建议将AZF检测作为男性严重少精子或无精子症的常规检测项目，呼吁国内AZF检测实验室加入EQA计划，完善中国丫染色体微缺失检测实验操作规范。
丫染色体微缺失分子检测在中国已开展多年，国内专家对AZF缺失模式、检测序列标签位点（sequenee- tagged site, STS的数量、检测方法和内部质量控制等临床问题未达成共识。
各实验室的诊断操作方法有很大不同，导致不准确或错误诊断时有发生，迫切需要建立丫染色体微缺失诊断标准和质量控制标准。
EAA/EMQN 更新的2013版指南对以上问题都给出了明确的专家共识，对我国建立自己的检测指南有重要的指导意义。
一、丫染色体微缺失发生频率丫染色体微缺失在健康人群中发生率约为1/4 000，但在不育男性中显着升高，微缺失发生频率为2%〜10%（甚至更高）。
Y染色体微缺失
• AZFb缺失也不多见 ,占整个 AZF缺失
15 .8%。缺失的典型睾丸组织学特征是精子 成熟障碍,主要停滞在初级精母细胞阶段。但 也有 SCOS的报告，睾丸穿刺不能获得精子 , 因此 ,临床上也不建议做睾丸穿刺。
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二 Y染色体微缺失相关基因
• AZFc缺失是临床上最常见的 AZF缺失类型 ,临床和
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五 染色体微缺失相关基因研究的 意义
• 为临床治疗各种男性不育提供分子或细胞水平的
依据， Ｙ 染色体微缺失虽然不会影响身体健康和 心理健康 ，但会导致后代出现同样的不育问题 对 于不育夫妇 ，特别是无精子症和严重少精症的不 育夫妇，虽然其可以通过 ＩＣＳＩ 达到妊娠的目 的 ，并且有正常的胚胎发育和足月妊娠， 但在接 受 ＩＣＳＩ 治疗之前有必要进行 Ｙ 染色体微缺 失的检测以及移植前遗传诊断， 尽量选择女婴， 切断遗传途径。
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EGFR基因突变与 TKIs治疗敏感性
• 文献报道：肺癌细胞中 EGFR酪氨酸激酶编
码区基因突变是靶向药物奏效的一个必要前 提条件,研究结果显示,对 EGFR突变型 NSCLC, Gefitinib的有效率高达80%以上 ,而 对野生型肿瘤则基本无效。这一研究随后被 相继其它研究所证实。
• 在 Gefitibib和 Erlotinib的临床试验和治疗中 ,
仅有一部分 NSCLC人群对药物有反应
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• 发现几乎所有对 TKIs敏感的 NSCLC患者都
存在EGFR基因的体细胞突变。因此 ,研究 NSCLC患者不同治疗反应性的机制、 以及从 中筛选出最适治疗对象进行有针对性的治疗 具有重要临床意义。