hoechst33258染色原理
细胞染色方法总结(干货分享)
细胞染色方法总结Hoeｃｈst染色：ｈoｅｃhst可以穿过活细胞膜与细胞核结合(主要为凋亡活细胞)在紫外光下将核染为蓝色. Hoecｈst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果。
ｈｏｅｃhst 有hｏｅchest33３42和hoechst3３2５8两种hｏｅchｓts33258，hoeｃｈst333４２二者区别不大,但是hｏeｃｈst33３42对细胞的毒性作用更小一些,所以一般来说hｏｅcｈsts3３2５8用于细胞固定后再染色，而hoechsｔ3３3４2则可以对活细胞直接进行染色！染色步骤PI （Ｐroｐiｄium Ｉodide碘化丙啶）染色：是一种可对DＮＡ染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测。
碘化丙啶（Ｐｒoｐidium Iｏdide, PI)是一种核酸染料（红色）,它不能透过完整的细胞膜,但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。
用PI单一染色观测培养细胞，只能表示细胞的坏死情况,而不是凋亡（当然晚期凋亡PI亦可着色)。
但是如果您只是想知道细胞的死亡情况，而不是仔细区分坏死或凋亡，那么PI单一染色也可以。
但是如果您一定要认定细胞的凋亡，那么PＩ单一染色显然不够! annexin—v染色细胞凋亡早期，细胞膜标志发生改变.其中，磷脂酰丝氨酸(Annexin-V，PS）外翻,Annexin-Ｖ在Ca+存在的条件下与其高亲和力特异性结合．这样,Ａnnexin-v 染色阳性，表示细胞处于早期凋亡状态.Anneｘｉn－V结合不同的荧光抗体,就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。
Annexin V用FITC标记发绿色荧光；如果用ＰE标记就发红色荧光....文档交流仅供参考...JC-1染色ＪＣ－１是一种阳离子染料,可以在线粒体内聚集，低浓度时主要以单体（monomer)存在,发射光以绿光(～52５nm）为主;而在高浓度时则可以形成多聚体（agｇregａｔioｎ）,发射光以红光(-590nm)为主.线粒体本身存在一定的极性（polarizaｔion),其外膜为负极，内膜为正极。
C1018%20Hoechst33258染色液
17.Zhao Y, Shen S, Guo J, Chen H, Greenblatt DY, Kleeff J, Liao Q, Chen G, Friess H, Leung PS. Mitogen-activated protein kinases and chemoresistance in pancreatic cancer cells. J Surg Res. 2006 Dec;136(2):325-35.
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Hoechst33258 荧光染色法
Hoechst33258 荧光染色法【试剂盒不同，固定染色时间不同。
】
①人肝癌细胞HepG2经常规传代培养至对数期，弃去旧培养液，用0.25%胰蛋白酶溶液消化后制成单细胞悬液，调整细胞密度为1× 106 /ml，接种于6孔培养板中。
置于37°C、5%CO2 恒温细胞培养箱中培养24h后，观察细胞贴壁情况。
②待贴壁细胞密度达到80%后，弃去培养液，用PBS小心冲洗细胞两遍，加入不同浓度的人参皂苷转化物溶液200μl，继续培养24h。
③24h后消化收集细胞，1000r/min离心5min，弃去上清液；用PBS重悬细胞，1000r/min离心洗涤2 次；
④第二次离心洗涤后留少许上清，用微量加样器吸取细胞在洁净载玻片上涂片，室温自然干燥；随即使用甲醇∶冰醋酸(3∶1)固定液固定15 min；
⑤晾干后于暗处用Hoechst 33258 染色工作液(10mg/l)避光染色10 min后用双蒸
水冲洗5min，抗淬灭封片液封片；
⑥置于激光共聚焦显微镜下，激发波长350nm，发射波长460nm，观察细胞凋亡情况并拍照。
①人肝癌细胞HepG2经常规传代培养至对数期，弃去旧培养液，用0.25%胰蛋白酶溶液消化后制成单细胞悬液，调整细胞密度为5×105/ml，接种于6孔培养板中。
置于37℃、5%CO2 恒温细胞培养箱中培养24h后，观察细胞贴壁情况。
②待贴壁细胞密度达到80%后，弃去培养液，用PBS小心冲洗细胞两遍，一孔加入含10%胎牛血清的完全培养液，其余各孔分别加入高、中、低3个浓度的人参皂苷转化物溶液与顺铂溶液200μl，继续培养48h。
③倒置显微镜下观察各组细胞生长情况和形态变化。
Hoechst 染色
本人收集的激光共聚焦常见荧光染料染色方法zuohy(2008-09-19 17:33:43)一、Hoechst 33258染色1、试剂盒组成固定液 50 mlHoechst 33258染色液 50 ml抗荧光淬灭封片液 5 ml说明书 1 份保存条件：4℃保存，Hoechst 33258染色液需4℃避光保存。
本试剂盒自订购之日起六个月内有效。
2、注意事项：需荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。
需PBS或0.9%NaCl溶液。
需盖玻片与载玻片。
荧光物质均易发生淬灭，染色后的样品宜避光保存。
在使用抗淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭，但仍宜尽量避光。
3、使用说明：1）贴壁细胞A. 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养级PBS或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。
将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为50%-80%满。
B. 刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0.5ml固定液，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
C. 去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。
洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。
D. 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。
也宜用摇床，或手动晃动数次。
E. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。
F. 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免气泡。
使细胞接触封片液，切勿弄反。
G. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。
激发波长在350nm左右，发射波长在460nm左右，详细图谱请参考下图。
2）悬浮细胞A. 离心收集细胞样品于1.5ml离心管内，加入0.5ml固定液，缓缓悬起细胞，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
B. 离心去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。
洗涤期间手动晃动。
C. 最后一次离心后吸去大部分液体保留约50ml液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞分布均匀。
常见细胞核荧光染料
细胞核荧光染料（PI DAPI Hoechst33342）Hoechest 33258 是膜透性的,因此在活细胞时候能轻松进入;DAPI是半透性的,有选择性的进入.因此Hoechest 33258 一般用来染活细胞,可以长驱直入;DAPI一般是染固定细胞.2、两者都可以用紫外看，参见以下的激发发射波长Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。
DAPI的最大激发波长为340nm，最大发射波长为488nm；DAPI和双链DNA结合后，最大激发波长为364nm，最大发射波长为454nm。
Hoechst 33342/PI双染色法1．悬浮生长的细胞在培养状态下加入Heochst 33342，终浓度为1μg/ml；帖壁生长的细胞用含有0.02％EDTA的0.25％胰蛋白酶消化成单细胞悬液，离心，弃上清，用1ml全培养液重悬细胞，加入Heochst 33342，终浓度为1μg/ml，37℃孵育7～10min。
2．4℃500～1000r/min离心弃去染液。
3．加入1.0ml PI染液，4℃避光染色15min。
??碘化丙啶染色???? 1．原理? 碘化丙啶(propidium iodide，PI)不能穿人完整的活细胞膜中，即正常细胞和凋亡细胞在不固定的情况下对PI拒染，而坏死细胞由于失去膜的完整性，PI可进入细胞内与DNA结合，根据此特点，使用PI染色可鉴别死细胞。
如果对活细胞染色必须在染色前进行固定，以增加细胞膜对染料的通透性。
???? 2．溶液配制? 使用0．01mol／LPBS(pH 7．4)配制终浓度为0．5mg／ml的PI工作液。
???? 3．染色程序??? (1)单层细胞培养标本经预冷70％乙醇固定1小时，4℃；??? (2)0．01mol／LPBS(pH 7．4)冲洗；??? (3)沥干后加入PI工作液，室温孵育15分钟；??? (4)冲洗后封片。
Hoechst33258染色液
Hoechst 33258染色液简介：Hoechst 33258也称bisBenzimide H 33258或HOE 33258，分子式为C 25H 24N 6O · 3HCl 。
Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低，常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。
Hoechst 33258也用于普通的细胞核染色、DNA 染色。
Leagene Hoechst 33258染色液可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。
组成：操作步骤(仅供参考)：(一)固定的组织细胞染色1、对于细胞或组织样品，固定后冲洗去除固定剂。
如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33258染色，如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33258染色。
2、室温放置，轻轻吸除Hoechst 33258染色液。
4、用无菌的PBS 或生理盐水清洗2～3次。
5、直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。
(二)活细胞染色1、取96、24、6孔板培养细胞至合适状态，按96孔板加入100μl 、24孔板加入500μl 、6孔板加入1ml 的比例，加入适当的Hoechst 33258染色液，染液必须充分覆盖细胞。
2、在适宜于细胞培养的条件下培养。
3、轻轻吸除Hoechst 33258染色液。
4、用无菌的PBS 或生理盐水清洗2～3次。
5、进行荧光检测。
注意事项：1、 Hoechst 33258染色液的浓度适用于大多数常规染色的需要。
2、 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽快检测。
活细胞或组织染色后宜立即观察。
3、 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
编号 名称 DA0010 Storage Hoechst 33258 Staining Solution 10ml -20℃ 避光 使用说明书1份4、避免反复冻融，否则容易失效。
hoechst33258染色原理
hoechst33258染色原理Hoechst 33258染色原理Hoechst 33258是一种广泛应用于细胞染色的荧光染料，其染色原理基于其特殊的荧光性质。
本文将介绍Hoechst 33258染色的原理以及其在生物学研究中的应用。
Hoechst 33258是一种DNA染料，可以通过与DNA的特异性结合来染色细胞核。
其结构中含有多个芳香环，并且具有两个亲水性基团。
这些特征使得Hoechst 33258能够与DNA的碱基发生作用，并形成稳定的染色复合物。
Hoechst 33258的染色原理可以分为两个步骤：细胞透过性和DNA结合。
Hoechst 33258可以通过细胞膜透过性进入细胞内。
细胞膜是由脂质双层组成的，具有一定的透过性，特别是对于小分子量的化合物。
Hoechst 33258具有较小的分子量和亲水性基团，因此可以通过细胞膜进入细胞。
Hoechst 33258与DNA的碱基发生作用，形成稳定的染色复合物。
DNA是由脱氧核苷酸组成的双链分子，在细胞核中起着储存和传递遗传信息的作用。
Hoechst 33258中的芳香环能够与DNA的碱基发生π-π堆积作用，特别是与腺嘌呤（A）和胸腺嘧啶（T）发生较强的结合。
这种结合使得Hoechst 33258能够选择性地染色细胞核，而不影响其他细胞结构。
Hoechst 33258的染色特点使其成为生物学研究中广泛应用的染料之一。
通过Hoechst 33258染色，可以直观地观察细胞核的形态和数量变化，进而研究细胞增殖、凋亡和分化等生物学过程。
此外，Hoechst 33258还可以用于检测DNA的含量和DNA损伤，以及细胞周期的研究。
在实验中，Hoechst 33258的使用方法相对简单。
首先，将Hoechst 33258溶解在适当的溶液中，再将其加入含有待染细胞的培养基中。
随后，将细胞与Hoechst 33258溶液共孵育一段时间，使其充分染色。
最后，使用荧光显微镜观察细胞，并通过荧光信号的强度和分布来分析细胞核的状态。
hoechest 染色
Hoechst是一种膜通透性的荧光染料，故正常细胞和中早期调亡细胞均可被Hoechst着色，但是正常细胞核Hoechst染色的形态呈圆形，淡蓝色，内有较深的蓝色颗粒；而调亡细胞的细胞核由于浓集而呈亮蓝色，或核呈分叶，碎片状，边集。
常用Hoechst33258和Hoechst33342，前者渗透性不如后者好，多用于活细胞染色，而后者活细胞和死细胞均可。
Hoechst33342 能透过胞膜完整的细胞,嵌入细胞核DNA ,使之发出明亮的蓝色荧光。
凋亡的细胞核染色增强,荧光更为明亮,呈圆状或固缩状、团块状结构。
非凋亡细胞核呈现荧光深浅不一的结构样特征。
二者形态迥然相异,很易判别。
Hoechst 染色方法：1. 贴壁细胞A. 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养级PBS或0.9%NaCl等洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。
将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为50%-80%满。
B. 刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入固定液，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
C. 去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，吸尽液体。
洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。
D. 加入终浓度为10μg/ml的Hoechst染色液，染色5分钟。
也宜用摇床，或手动晃动数次。
E. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍。
F. 将贴有细胞的盖玻片盖于载玻片上，尽量避免气泡。
切勿弄反。
G. 荧光显微镜或激光共聚焦显微镜检测。
2. 悬浮细胞A. 离心收集细胞样品于1.5ml离心管内，加入固定液，缓缓悬起细胞，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
B. 离心去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。
C. 最后一次离心后吸去大部分液体保留约50μl液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞分布均匀。
D. 稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。
E. 均匀滴加Hoechst染色液，染色5分钟。
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hoechst33258染色原理
Hoechst 33258染色原理及其应用
一、引言
Hoechst 33258是一种广泛应用于细胞生物学和分子生物学研究中的DNA染色剂。
它能够与DNA结合形成荧光复合物，通过荧光显微镜观察，可以对细胞核进行定位和分析。
本文将介绍Hoechst 33258染色原理及其应用。
二、Hoechst 33258染色原理
Hoechst 33258是一种荧光染料，其化学结构中含有两个吡啶环和一个三嗪环。
该染料可以通过静电作用与DNA结合，形成稳定的染色复合物。
Hoechst 33258与DNA的结合是通过静电相互作用和氢键形成的。
静电相互作用是指Hoechst 33258的阳离子部分与DNA 的阴离子部分之间的吸引力。
氢键是指Hoechst 33258与DNA之间氢键的形成，通过吡啶环与DNA中的腺嘌呤碱基之间的氢键相互作用。
三、Hoechst 33258染色的步骤
Hoechst 33258染色一般包括以下几个步骤：
1. 细胞固定：将待染色的细胞进行固定，常用的方法有甲醛固定、乙醛固定等。
2. 细胞透化：使用适当的透化剂，如Triton X-100等，使细胞膜通透。
3. Hoechst 33258染色：将Hoechst 33258溶液加入到细胞中，使其与DNA结合。
4. 荧光显微镜观察：使用荧光显微镜观察染色结果，Hoechst 33258与DNA结合后产生蓝色荧光。
四、Hoechst 33258染色的应用
1. 染色体分析：Hoechst 33258可以用于染色体的分析，通过观察染色体形态和数量的变化，可以研究染色体的结构和功能。
2. 细胞核定位：Hoechst 33258与DNA结合后产生荧光信号，可以用于细胞核的定位。
通过观察荧光信号的位置和强度变化，可以判断细胞核的形态和位置。
3. 细胞凋亡检测：细胞凋亡是一种重要的细胞死亡方式，Hoechst 33258可以用于检测细胞凋亡。
在凋亡细胞中，DNA会发生断裂和聚集，形成特殊的染色形态，通过观察Hoechst染色后的细胞核形态变化，可以判断细胞是否发生凋亡。
4. 细胞周期分析：Hoechst 33258可以用于细胞周期分析，根据不同细胞周期阶段DNA的含量差异，通过观察Hoechst染色后的细胞核形态和荧光强度变化，可以分析细胞所处的周期阶段。
5. DNA含量测定：Hoechst 33258可以用于测定DNA的含量，通过比较不同样本中Hoechst染色的细胞核荧光强度，可以计算出DNA 的含量，用于研究细胞的倍性和DNA的变化。
五、总结
Hoechst 33258是一种常用的DNA染色剂，通过与DNA的结合形成荧光复合物，可以用于细胞核的定位和分析。
它在染色体分析、细胞核定位、细胞凋亡检测、细胞周期分析和DNA含量测定等方面具有广泛的应用。
通过研究Hoechst 33258染色原理和应用，可以更好地理解细胞核的结构和功能，为细胞生物学和分子生物学研究提供重要的技术支持。