常用荧光染料的激发及发射波长解析
流式常用荧光染料概要
如何选择流式细胞仪测定常用的荧光染料
流式细胞仪测定常用的荧光染料有很多种,我们如何来选择流式细胞仪测定的常用荧光染料呢？
首先要考虑，他们分子结构不同,激发光谱和发射光谱也不同,选择荧光染料时，必须依据流式细胞仪所配备的激光光源的发射光波长做为重点考虑。
发射光波长，如：氩离子气体激光管,它的发射光波488nm；
氦氖离子气体激光管发射光波长633nm；
488nm激光光源常用的荧光染料有FITC（异硫氰酸荧光素）；
PE（藻红蛋白）
PI（碘化丙啶）
CY5（化青素）
preCP(叶绿素蛋白)
ECD(藻红蛋白-得克萨斯红)等。
激发光和发射光波长，如下：
流式细胞仪中常用的荧光染料光学特征以及需要的激光器
流式•细胞仪交流论坛：/forum-181-1.ht ml
荧光染料谱。
常用染料的激发与发射
常用染料的激发与发射 Company Document number：WUUT-WUUY-WBBGB-BWYTT-1982GT常用荧光染料的激发和发射波长荧光染料的使用吖啶橙：吖啶橙是最经典的灵敏的荧光染料，它可对细胞中的DNA和RNA同时染色而显示不同颜色的荧光，DNA呈绿色荧光，RNA呈橙红色荧光。
EB:染色DNA和RNA 荧光素双醋酸酯(FDA)：FAD本身无荧光,无极性,可透过完整的原生质膜。
一旦进入原生质体后,由于受到酯酶分解而产生具有荧光的极性物质荧光素。
它不能自由出入原生质膜，因此有活力的细胞能产生荧光,无活力的原生质体不能分解FAD无荧光产生。
5mgFDA溶于1ml丙酮中,避光4℃下贮存,使用时取贮存液加入L甘露醇中.使用时,使最终浓度为%。
荧光染料Ho33342和若丹明123:活细胞双荧光染色观察细胞核和线粒体。
一般的生物染料不能穿透细胞膜，只有当细胞被固定后改变了细胞膜的通透性，染料才能进入细胞内。
但有些活体染料能进入活细胞，并对细胞不产生毒性作用。
荧光染料Ho33342和若丹明123都是活体染料。
Ho33342能与细胞中DNA进行特异的结合，若丹明123能与线粒体进行特异的结合。
采用两种荧光染料的混合染液可对一个活细胞的核和线粒体同时染色。
荧光组化实验中应注意的几个问题：1．每种荧光染料，均有自己的最适PH值，此时荧光最强。
当pH改变时，不仅荧光强度减弱，而且波长将有所改变，因此荧光检测时要在一定的PH值的缓冲液中进行。
2．一放荧光染色在20℃以下时荧光比较稳定，温度升高常出现温度猝灭。
3．在荧光观察中，常因激发光的增强而使样品荧光很快衰竭，造成观察和照相困难。
为此最好用能量小的长波长光进行观察，需照相时再适当增强激发光。
4．一般荧光染液的浓度在万分之一以下，甚至亿万分之一，也能使标本着色。
在一定的限度内，荧光强度可随荧光素的浓度增加而增强，但超过限度，荧光强度反而下降，这是由于荧光分子间的缔合而使自身荧光猝灭所致。
常用染料的激发与发射
常用荧光染料的激发和发射波长备注：发射波长的颜色及频率荧光染料的使用吖啶橙：吖啶橙是最经典的灵敏的荧光染料，它可对细胞中的DNA和RNA同时染色而显示不同颜色的荧光，DNA呈绿色荧光，RNA呈橙红色荧光。
EB:染色DNA和RNA 荧光素双醋酸酯(FDA)：FAD本身无荧光,无极性,可透过完整的原生质膜。
一旦进入原生质体后,由于受到酯酶分解而产生具有荧光的极性物质荧光素。
它不能自由出入原生质膜，因此有活力的细胞能产生荧光,无活力的原生质体不能分解FAD无荧光产生。
5mgFDA溶于1ml丙酮中,避光4℃下贮存,使用时取贮存液加入L甘露醇中.使用时,使最终浓度为%。
荧光染料Ho33342和若丹明123:活细胞双荧光染色观察细胞核和线粒体。
一般的生物染料不能穿透细胞膜，只有当细胞被固定后改变了细胞膜的通透性，染料才能进入细胞内。
但有些活体染料能进入活细胞，并对细胞不产生毒性作用。
荧光染料Ho33342和若丹明123都是活体染料。
Ho33342能与细胞中DNA进行特异的结合，若丹明123能与线粒体进行特异的结合。
采用两种荧光染料的混合染液可对一个活细胞的核和线粒体同时染色。
荧光组化实验中应注意的几个问题：1．每种荧光染料，均有自己的最适PH值，此时荧光最强。
当pH改变时，不仅荧光强度减弱，而且波长将有所改变，因此荧光检测时要在一定的PH值的缓冲液中进行。
2．一放荧光染色在20℃以下时荧光比较稳定，温度升高常出现温度猝灭。
3．在荧光观察中，常因激发光的增强而使样品荧光很快衰竭，造成观察和照相困难。
为此最好用能量小的长波长光进行观察，需照相时再适当增强激发光。
4．一般荧光染液的浓度在万分之一以下，甚至亿万分之一，也能使标本着色。
在一定的限度内，荧光强度可随荧光素的浓度增加而增强，但超过限度，荧光强度反而下降，这是由于荧光分子间的缔合而使自身荧光猝灭所致。
荧光染料激发波长和发射波长
荧光染料激发波长和发射波长荧光染料激发波长和发射波长荧光染料是一种广泛应用于科学研究和工业领域的物质。
通过受到特定波长光的激发，荧光染料可以发射出具有特定颜色的荧光，并被广泛用于生物医学成像、材料科学、独特效果的光学标记等领域。
在使用荧光染料之前，了解荧光染料的激发波长和发射波长非常重要。
本文将介绍荧光染料激发波长和发射波长的相关知识，并探讨其在生物医学领域的应用。
1. 什么是荧光染料的激发波长和发射波长？荧光染料的激发波长指的是激发荧光染料所需要的波长范围。
每种荧光染料都有其对应的激发波长范围，只有在这个波长范围内的光线照射到荧光染料上才能激发其发光性质。
而荧光染料的发射波长则是指荧光染料在受到激发后所发射出的荧光的波长范围。
荧光染料的激发波长和发射波长往往存在一定的关联性，但并不总是一致的。
2. 为什么了解荧光染料的激发波长和发射波长很重要？了解荧光染料的激发波长和发射波长对于正确选择和使用荧光染料至关重要。
如果不了解荧光染料的激发波长，我们可能会选择错误的激发光源，导致荧光染料无法被激发，从而无法得到准确的实验结果。
同样地，如果不了解荧光染料的发射波长，我们也无法选择合适的检测方法来观察荧光染料发射的荧光。
深入了解荧光染料的激发波长和发射波长可以帮助我们更好地设计和进行实验。
3. 荧光染料激发波长和发射波长的应用荧光染料的激发波长和发射波长在生物医学领域有着广泛的应用。
在生物荧光成像中，选择适合的激发波长可以准确地观察细胞或组织中的特定分子，从而实现对疾病发展或生物过程的研究。
荧光染料的发射波长还可以与其他分子或材料的发射波长相互配合，实现多种荧光信号的同时检测，从而提高实验的灵敏度和准确性。
4. 个人观点和总结荧光染料的激发波长和发射波长是我们在科学研究和实验中必须要考虑的重要因素。
通过了解激发波长和发射波长，我们可以选择合适的实验条件，确保荧光染料可以被有效地激发和检测，并获得准确的实验结果。
cy3.5激发波长和发射波长
CY3.5标记的激发波长和发射波长是细胞荧光染料领域中的重要参数。
在细胞和分子生物学研究中，荧光染料被广泛应用于细胞成像、蛋白质检测、细胞追踪等领域。
CY3.5作为一种常用的荧光染料，其激发波长和发射波长的选择对于实验结果的准确性和可靠性具有重要意义。
1. CY3.5激发波长CY3.5的激发波长一般在550-570nm范围内。
在进行细胞成像或蛋白质检测实验时，我们需要选择适合的激发波长来激发CY3.5荧光染料。
激发波长的选择应考虑到激发效率和对样品的影响。
在实际操作中，我们可以通过激光共聚焦显微镜等设备来选择合适的激发波长，以确保CY3.5荧光的最大激发效果。
还需要注意避免激发波长对细胞和样品产生的热伤害，保证实验结果的准确性。
2. CY3.5发射波长CY3.5的发射波长一般在570-590nm范围内。
选择适当的发射波长可以有效提取荧光信号，从而获得清晰的细胞成像或蛋白质定位结果。
在实验设计中，我们需要根据实际情况选择合适的检测设备和滤光片，以确保有效捕获CY3.5的发射信号。
3. CY3.5激发波长和发射波长的选择意义CY3.5荧光染料作为一种重要的细胞标记物，其激发波长和发射波长的选择直接影响了实验结果的精准度和可靠性。
合理选择激发波长和发射波长可以最大程度地提高CY3.5荧光信号的强度和稳定性，为细胞成像和蛋白质检测提供可靠的数据支持。
个人观点和理解在进行生物荧光实验时，合理选择CY3.5的激发波长和发射波长是非常重要的。
这不仅关系到实验结果的准确性，也关系到对细胞和样品的保护。
对于CY3.5激发波长和发射波长的选择，我们需要深入了解其光学特性和实验条件，以确保实验结果的可靠性。
总结回顾通过本文的介绍，我们了解到CY3.5荧光染料的激发波长和发射波长选择对于生物荧光实验具有重要意义。
合理选择激发波长和发射波长可以有效提高荧光信号的稳定性和强度，从而获得清晰可靠的实验结果。
在进行类似实验时，我们应该注意选择合适的光学设备和滤光片，以确保CY3.5荧光信号的最佳表现。
常用染料的激发与发射
常用染料的激发与发射公司内部编号：（GOOD-TMMT-MMUT-UUPTY-UUYY-DTTI-常用荧光染料的激发和发射波长荧光染料的使用吖啶橙：吖啶橙是最经典的灵敏的荧光染料，它可对细胞中的DNA和RNA同时染色而显示不同颜色的荧光，DNA呈绿色荧光，RNA呈橙红色荧光。
EB:染色DNA和RNA荧光素双醋酸酯(FDA)：FAD本身无荧光,无极性,可透过完整的原生质膜。
一旦进入原生质体后,由于受到酯酶分解而产生具有荧光的极性物质荧光素。
它不能自由出入原生质膜，因此有活力的细胞能产生荧光,无活力的原生质体不能分解FAD无荧光产生。
5mgFDA溶于1ml丙酮中,避光4℃下贮存,使用时取贮存液加入L 甘露醇中.使用时,使最终浓度为%。
荧光染料Ho33342和若丹明123:活细胞双荧光染色观察细胞核和线粒体。
一般的生物染料不能穿透细胞膜，只有当细胞被固定后改变了细胞膜的通透性，染料才能进入细胞内。
但有些活体染料能进入活细胞，并对细胞不产生毒性作用。
荧光染料Ho33342和若丹明123都是活体染料。
Ho33342能与细胞中DNA进行特异的结合，若丹明123能与线粒体进行特异的结合。
采用两种荧光染料的混合染液可对一个活细胞的核和线粒体同时染色。
荧光组化实验中应注意的几个问题：1．每种荧光染料，均有自己的最适PH值，此时荧光最强。
当pH改变时，不仅荧光强度减弱，而且波长将有所改变，因此荧光检测时要在一定的PH值的缓冲液中进行。
2．一放荧光染色在20℃以下时荧光比较稳定，温度升高常出现温度猝灭。
3．在荧光观察中，常因激发光的增强而使样品荧光很快衰竭，造成观察和照相困难。
为此最好用能量小的长波长光进行观察，需照相时再适当增强激发光。
4．一般荧光染液的浓度在万分之一以下，甚至亿万分之一，也能使标本着色。
在一定的限度内，荧光强度可随荧光素的浓度增加而增强，但超过限度，荧光强度反而下降，这是由于荧光分子间的缔合而使自身荧光猝灭所致。
常见细胞核荧光染料
细胞核常用荧光染料有：吖啶橙（Acridine Orange，AO）、溴化乙锭（Ethidium Bromide，EB）和碘化丙啶（Propidium Iodide，PI），DAPI、Hoechst染料、EthD III、7-AAD、RedDot1、2 等等。
透膜的染料如下：AO：具有膜通透性，能透过细胞膜，将核DNA和RNA分别染成绿色和红色，因此使细胞核呈绿色或黄绿色荧光。
EB：一种高度灵敏的荧光染色剂，在标准302nm处激发出橙红色信号。
DAPI：蓝色一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，其与DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光，而与单链DNA结合无荧光的增强。
DAPI对双链DNA的染色灵敏度要高于EB和PI，荧光强度比Hoechst低，但光稳定性高于Hoechst。
Hoechst染料：蓝色一类在显微观察中标记DNA的荧光染料，最常见的两种是Hoechst33342和Hoechst33258。
这两种染料都在紫外350nm处被激发，在461nm处最大发射光附近发射青/蓝色荧光。
与DAPI相比，Hoechst33342加有乙基，具有更强的亲脂性，因此能更好的透过完整的细胞膜，并且细胞毒性更小。
RedDot 1染料：红色，超强的细胞核选择性，其光谱相似于Draq?5 和Draq?7。
RedDot?染料可被几种常见的激光激发并可在远红外区激发荧光。
RedDot? 的红色近红外荧光有效的与其他常用荧光探针区分开来。
不透膜的染料，如下：PI：不同通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。
PI作为红色荧光复染剂首选，PI经常与Calcein-AM或者FDA等荧光探针合用，区分死/活细胞。
EthD III、7-AAD、RedDot 2：不能透过细胞膜，但能将坏死细胞区分开来；更适合凋亡坏死实验的检测；细胞核荧光染料（PI DAPI Hoechst33342）细胞核荧光染料PI碘化丙啶（简称PI）是一种常用的细胞核荧光染色剂。
常用染料特征
常用抗体标记荧光染料的特性及其应用1、FITC：激发波长488nm，最大发射波长525nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；2）在流式细胞仪的FL1通道检测；3）可用于荧光显微镜技术4）荧光强度易受PH值影响，PH值降低时其荧光强度减弱。
2、Alexa Fluor 488：激发波长488nm，最大发射波长519nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；2）在流式细胞仪的FL1通道检测；3）具有超乎寻常的光稳定性，非常适用于荧光显微镜技术；4）在较宽的PH值范围内保持稳定（PH4～10）。
3、Cy3：激发波长488nm，最大发射波长570nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；2）在流式细胞仪的FL2通道检测；3）适用于荧光显微镜技术；4）为小分子染料，非常适合需小分子染料的流式细胞术，荧光强度低于PE。
4、Cy5：激发波长633/635nm，最大发射波长670nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备633nm氩离子激光器的流式细胞仪；2）在流式细胞仪的FL4通道检测；3）适用于荧光显微镜技术；4）同样为小分子染料，非常适合需小分子染料的流式细胞术，荧光强度低于APC。
5）与单核和粒细胞非特异性结合多，易出现假阳性结果。
5、PE：激发波长488nm，最大发射波长575nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；2）在流式细胞仪的FL2通道检测；3）其荧光泯灭性强，不适用于传统的荧光显微镜技术，但适用于激光共聚焦显微镜技术。
6、PE-TR：激发波长488nm，最大发射波长615nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL3通道检测；2）可适用于小功率激光器的流式细胞仪，也可使用于大功率激光器的大流式细胞仪。
7、PE-Alexa Fluor 610：激发波长488nm，最大发射波长628nm。