BCA蛋白定量试剂盒
bca蛋白浓度测定试剂盒原理
bca蛋白浓度测定试剂盒原理
BCA蛋白浓度测定试剂盒是一种常用于测定蛋白质浓度的试剂盒，原理主要基于蛋白质与试剂盒中的铜离子在碱性条件下形成紫色融合复合物。
试剂盒中的主要成分包括BCA试剂、BSA标准品和NaOH溶液。
具体操作步骤如下：
1. 准备待测蛋白样品和BSA标准品。
BSA标准品是已知浓度的蛋白质，可用于建立一个标准曲线。
待测蛋白样品和BSA 标准品需稀释至适宜的浓度范围。
2. 取一定量的待测蛋白样品和BSA标准品分别加入试管中。
3. 加入BCA试剂，BCA试剂中含有两个重要的成分：琼脂糖和胺基乙酸。
胺基乙酸能够稳定铜离子，而琼脂糖能够与蛋白质在碱性条件下形成紫色融合复合物。
4. 使用乙醇洗涤液洗涤玻璃坩埚，将洗净后的玻璃坩埚用于测定。
5. 加入NaOH溶液，NaOH溶液用于加强试剂与蛋白质之间的相互作用。
6. 将试管放入水浴中加热，使反应发生。
7. 反应完成后，测量吸光度。
BCA试剂与蛋白质形成的紫色产物在560 nm处具有吸光度。
8. 使用标准曲线计算待测蛋白样品的浓度。
总结：BCA蛋白浓度测定试剂盒的原理是利用蛋白质与试剂盒中的铜离子在碱性条件下形成紫色融合复合物，通过测量吸光度来计算蛋白质的浓度。
BCA蛋白浓度测定-酶标仪法
BCA 法测定蛋白浓度-酶标仪一、药品1.BCA 蛋白浓度测定试剂盒（ P0012， 500 次酶标仪，碧云天），含以下成分：a)BCA 试剂 A （P0012-1， 100ml ，碧云天），室温保存b)BCA 试剂 B （ P0012-2， 3ml ，碧云天），室温保存c)蛋白标准（ 5mg/ml BSA ）（ P0012-3， 1ml ，碧云天）， -20 度保存二、仪器和试剂1.酶标仪（测定波长为 540-595nm之间， 562nm最佳），水浴锅2.96孔单条可拆酶标板（平底）3.15 ml 离心管 1个（准备 BCA 工作液用）4. 1.5 ml 离心管 1个（准备蛋白标准品工作液用）5.单道移液器和枪头， 8道移液器（排枪）和枪头6.PBS三、操作步骤1.水浴锅调至 37℃。
2.蛋白标准品工作液（ 1 mg/ml ）的配制：将蛋白标准品（5mg/ml ）从 -20℃冰箱中取出，完全溶解并混匀。
取60μl 蛋白标准品（ 5mg/ml ），加入 240μl PBS，即稀释 5倍，即配成蛋白标准品工作液（ 1 mg/ml ）。
3.计算 BCA 工作液总量 = 0.2 ml（×样本数 +8）×2×1.1（标准品和样本均需测复孔）。
BCA工作量按 50体积的 BCA 试剂 A 加上 1体积的 BCA 试剂 B配制（即50:1），需充分混匀。
BCA工作液室温 24小时内稳定。
样本数 (n)1~56~78~1011~1213~1415~1617~1920~2122~2324~26A （ ml）6789101112131415B（ ml）0.120.140.160.180.20.220.240.260.280.3总量 (ml) 6.127.148.169.1810.211.2212.2413.2614.2815.34.按下表配制 8 个蛋白标准液（ S0~S7），充分摇匀。
30302 BCA蛋白定量试剂盒说明书
BCA蛋白定量试剂盒货号: 30302规格: 500微孔仅供研究使用FOR RESEARCH USE ONLY北京华肽先锋生物科技有限公司BEIJING SINOPEPT BIOTECH CO.,LTDBCA 蛋白定量试剂盒货 号：30302 产品规格：微板法500T产品简介：BCA 蛋白定量法原理是在碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu +,Cu+与BCA 试剂形成紫色络合物，其吸光值与蛋白浓度成正比。
测定在562nm 处的吸收值，做标准曲线并计算待测蛋白的浓度。
本试剂盒检测灵敏度高，对不同种类蛋白质检测变异系数小，操作简单。
产品组成：1. 稀释标准品：用与样品相同缓冲体系的稀释液按下表稀释标准品（建议稀2. 配置BCA 工作液：根据标准品和样品的数量，将试剂A 和试剂B 以50︰1的体积比混匀。
3. 试管检测（线性范围：20-2000μg/ml ）1） 将0.1ml 样品与稀释好的标准品分别添加于试管中；2） 向各试管中加入2ml BCA 工作液，37℃水浴中孵育30min 或者RT 孵育2h （样品：BCA 工作液=1︰20）； 3） 37℃冷却至室温；4） 用分光光度计测定562nm 处的吸光值（若无562nm 滤光片可以选择接近波长的滤光片进行测定，比如560nm 或者570nm ）； 5） 绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度；6） 如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品至BCA 线性范围内进行再次测定。
4. 微孔板检测 (线性范围：20-2000μg/ml)1） 将25μl 样品与稀释好的标准品分别添加于96孔板的微孔中； 2） 各孔中加入200μl BCA 工作液，充分混匀（样品：BCA 工作液=1︰8） 3） 盖上96孔板盖，37℃孵育30分钟或者室温孵育2h ； 4） 37℃孵育的样品需要冷却至室温；5） 用酶标仪测定562nm 处的吸光值（若无562nm 滤光片可以选择接近波长的滤光片进行测定，比如560nm 或者570nm ）； 6） 绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度；7） 如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品至BCA 线性范围内进行再次测定。
BCA蛋白定量
BCA蛋白定量试剂盒配制及内部操作SOP一、BCA试剂盒配制流程1、标准品配制：配制2mg/ml的BSA标准品，以50ml为例，各成分加入量如下表：原料浓度加入量（mg）厂家货号牛血清白蛋白（BSA）0.2%100北京（二楼生产部提供）YSCW2500氯化钠（NaCl）0.9%450国药集团化学试剂有限公司10019308叠氮化钠0.05%25成都金山化学试剂有限公司/注意：为了确保检测的准确性，应用微量天平精准称量100mg，然后定容至50ml，1ml/管分装，4℃保存。
2、工作液配制由于A液和B液加入比例为50:1，因此配制工作液时A液各成分加入量按照1000ml配制量加入，B液成分按照25ml配制量加入。
原料浓度加入量（g）厂家货号A液（1000ml）二喹啉甲酸（BCA）1％10aladdin B107658无水碳酸钠2％20天津博迪化工股份有限公司/碳酸氢钠0.95%9.5国药集团化学试剂有限公司10018960酒石酸钠0.16% 1.6国药集团化学试剂有限公司30169818氢氧化钠0.4％4国药集团化学试剂有限公司10019762B液（25ml）硫酸铜4％1国药集团化学试剂有限公司81005261备注：A液各成分混合之后，调节PH至11.25。
二、BCA法蛋白定量操作SOP1、标准品稀释按照下表制备一组蛋白质标准品。
将一安瓿的牛血清白蛋白标准品（BSA）稀释到几个干净的小瓶中，最好使用与待测样品相同的缓冲液。
每一个1mL安瓿的2mg/mL牛血清白蛋白标准品足够用于制备下表中所列出的任意一组稀释范围的标准品；每个稀释浓度的标准品的体积足够用于3次重复检测。
用于标准方案的稀释方法（检测范围=20-2,000ug/mL）如下：标准液编号稀释液体积（ul）标准品体积（ul）标准液终浓度（ug/ml）A03002000B125375ul的A1500C325325ul的A1000D175175ul的B750E325325ul的C500F325325ul的E250G325325ul的F125H400100ul的G25I40000用于试管增强方案的稀释方法如下（检测范围=5–250ug/mL）：标准液编号稀释液体积（ul）标准品体积（ul）标准液终浓度（ug/ml）A700100250B400400ul的A125C450300ul的B50D400400ul的C25E400100ul的D5F400002.样品稀释：根据需要，将样品用用PBS或者与待测样品缓冲液相同的溶液稀释至线性范围内（所用稀释液与标准品稀释液应保持一致）。
康为世纪- BCA蛋白定量试剂盒
BCA Protein Assay KitBCA蛋白定量试剂盒Version 21092010‐2.2I 产品规格Catalog no. CW0014Number of preps. 500试剂A 100 ml试剂B 3 mlBSA标准品 (2mg/ml) 2 mlII 保存条件试剂A、B室温放置，BSA标准品4℃储存。
III 产品简介BCA蛋白定量法是目前广泛使用的蛋白定量方法之一。
本产品是基于BCA（Bicinchoninic Acid）法研制而成，实现了对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定。
其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽链结构能与Cu2+络合生成络合物，同时将Cu2+还原成Cu+。
BCA试剂可敏感特异地与Cu+结合，形成稳定的有颜色的复合物。
在562nm处有高的光吸收值，颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，可根据吸收值的大小来测定蛋白质的含量。
本试剂盒含有牛血清白蛋白（BSA）溶液作为蛋白质标准品溶液，测定范围为20～2000 ug/ml。
IV注意事项1．如待测样品中含较多的干扰物质(具体见附表1)，可采用Bradford蛋白浓度测定试剂盒或其他蛋白定量试剂盒测定。
2．采用37℃孵育30 分钟或室温放置2小时进行反应，结果无差异。
3．BSA标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致。
为简便起见，也可用1XPBS或0.9%生理盐水进行稀释。
4．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
V 操作步骤1.稀释BSA标准品：用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。
管号稀释液用量（ul）BSA标准品用量（ul）BSA标准品最终浓度（ug/ml）A 0 1002000B 200 200 1000C 200200（从B管中取）500D 200200（从C管中取）250E 200200（从D管中取）125F 400100（从E管中取）25G 200 0 0(空白)2.配置BCA工作液：根据BSA标准品和待测样品的数量，将试剂A和试剂B以50：1的体积比混匀。
BCA蛋白定量试剂盒(Thermo)使用指南
BCA蛋白定量试剂盒(Thermo)使用指南BCA蛋白定量试剂盒(Thermo)使用指南概要：BCA蛋白定量试剂盒是一种广泛应用于生物化学和分子生物学实验室中的试剂盒。
本文将提供BCA蛋白定量试剂盒的使用指南，以帮助研究人员准确、方便地进行蛋白质定量实验。
引言：蛋白质定量是生物化学和分子生物学研究中的关键步骤之一。
BCA 蛋白定量试剂盒是一种经典的蛋白质定量方法，利用铜离子在碱性条件下与蛋白质中的蛋白质氨基酸反应生成紫色络合物，这个络合物的吸光度与蛋白质的浓度呈线性关系，从而可以通过光谱测定吸收值来计算蛋白质的浓度。
材料与试剂：1. BCA蛋白定量试剂盒(Thermo)2. 蛋白质标准品3. 去离子水4. 96孔板5. 震荡器/离心机6. 吸光度计步骤：1. 首先使用去离子水清洗96孔板，并将其放置在震荡器或离心机中以除去潜在的污染物。
2. 根据需要，准备一系列不同浓度的蛋白质标准品，并分别添加到96孔板中的不同孔位中。
注意，至少应包括一个空白孔位作为背景对照。
推荐使用浓度范围为0-2000 μg/mL的标准品。
3. 使用BCA蛋白定量试剂盒中的试剂，按照提供的说明书中的配方将试剂稀释到适当的浓度。
4. 将BCA蛋白定量试剂加入到96孔板的所有孔位中，每孔100 μL。
确保试剂均匀覆盖样品。
5. 轻轻摇晃或轻轻震动96孔板，以确保试剂与样品充分混合。
6. 将96孔板放置在室温下孵育30分钟，使试剂与蛋白质反应。
7. 使用吸光度计在562 nm波长下测量各孔位的吸光度。
确保仪器进行基线校准，并将空白孔位的吸光度值设为零点。
8. 使用标准曲线法，根据吸光度测量值计算样品中的蛋白质浓度。
注意事项：1. 请遵循BCA蛋白定量试剂盒的说明书中的操作指南，确保准确性和可靠性的结果。
2. 避免使用异柠檬酸盐缓冲液，因为它会干扰试剂的反应。
3. 在使用吸光度计前，请确保对仪器进行基线校准。
4. 为了提高准确性，建议每个样品至少重复三次测量，然后取平均值。
BCA法蛋白含量测定试剂盒使用说明
BCA法蛋白含量测定试剂盒使用说明BCA法（bicinchoninic acid assay）是一种用于测定蛋白质含量的常用方法。
BCA法蛋白含量测定试剂盒使用说明如下：试剂盒组成：1.BCA试剂A：含有重铜离子和碱性溶液。
2.BCA试剂B：含有双咪唑试剂和碱性溶液。
3.蛋白标准溶液：一系列已知浓度的牛血清蛋白标准溶液。
4.BCA试剂C：含有特殊缓冲溶液。
注意事项：1.所有试剂和样品在使用前均需室温下静置至少30分钟。
2.打开试剂盒后，避免将试剂直接暴露于空气中，以免影响试剂稳定性。
3.在所有步骤中，使用干净且蛋白污染的工具可能会导致错误的结果。
步骤1：制备标准曲线1.准备一系列不同浓度的蛋白标准溶液，如0、20、40、60、80和100μg/mL。
2.取0.1mL蛋白标准溶液加入1.9mL去离子水，即配制出100μg/mL的稀释溶液。
3.以同样的方法依次配制出20、40、60和80μg/mL的稀释溶液。
4.将每个稀释溶液的0.2mL与2mLBCA试剂A混合，放置30分钟。
5.加入0.5mLBCA试剂B，再次混合均匀。
6.将混合液放置37°C加热反应30分钟后冷却至室温。
7. 使用紫外-可见光谱仪测定吸光度，以280 nm为波长，绘制标准曲线。
步骤2：测定待测样品1.取待测样品，如细胞裂解液，加入BCA试剂C进行稀释，使得样品中的蛋白质浓度在标准曲线范围内。
2.取样品0.1mL加入1.9mL去离子水，配制出与标准曲线相同浓度的稀释液。
3.加入1mLBCA试剂A混合均匀，放置30分钟。
4.加入0.2mLBCA试剂B，再次混合均匀。
5.将混合液放置37°C加热反应30分钟后冷却至室温。
6. 使用280 nm波长的紫外-可见光谱仪测定吸光度。
步骤3：计算蛋白质含量1.将待测样品的吸光度值与标准曲线进行比较，根据吸光度值确定样品中蛋白质的含量。
2.通过线性拟合标准曲线计算待测样品中蛋白质的浓度。
BCA蛋白定量试剂盒使用说明书
BCA蛋白定量试剂盒使用说明书一、产品简介BCA 蛋白定量试剂盒是一种常用的蛋白质浓度测定方法，具有操作简便、灵敏度高、准确性好等优点。
本试剂盒适用于细胞裂解液、组织匀浆、血清、血浆等多种样品中总蛋白浓度的定量测定。
二、试剂盒组成1、 BCA 工作液：A 液与 B 液按 50:1 的比例混合而成，现配现用。
2、蛋白标准品（2mg/ml）：牛血清白蛋白（BSA）溶液。
3、 96 孔板三、所需设备1、酶标仪（波长 562nm）2、移液器（量程分别为20μl、200μl、1000μl）3、涡旋振荡器4、离心机四、操作步骤1、标准曲线的绘制（1）将蛋白标准品（2mg/ml）用 PBS 或生理盐水稀释成一系列浓度梯度，如0μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、600μg/ml、800μg/ml、1000μg/ml、1500μg/ml、2000μg/ml。
（2）在 96 孔板中，每个浓度梯度设置 2 个复孔。
分别向孔中加入25μl 不同浓度的标准品溶液。
（3）向每个孔中加入200μl BCA 工作液，轻轻振荡混匀，37℃孵育 30 分钟。
（4）使用酶标仪在 562nm 波长下测定吸光度值（OD 值）。
（5）以蛋白浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，绘制标准曲线。
2、样品测定（1）将待测样品用 PBS 或生理盐水适当稀释（若样品浓度过高，可能会超出标准曲线范围）。
（2）在 96 孔板中，设置样品孔和空白孔（仅加25μl 稀释液和200μl BCA 工作液）。
向样品孔中加入25μl 稀释后的样品。
（3）向每个孔中加入200μl BCA 工作液，轻轻振荡混匀，37℃孵育 30 分钟。
（4）使用酶标仪在 562nm 波长下测定样品孔和空白孔的吸光度值（OD 值）。
（5）样品的蛋白浓度可根据标准曲线计算得出。
五、注意事项1、 BCA 工作液应现配现用，避免长时间放置导致失效。
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BCA 蛋白定量试剂盒
简介：
目前世界上最常用的蛋白浓度检测方法是：BCA 蛋白定量试剂盒(BCA Protein Assay Kit)和Bradford 蛋白定量试剂盒(Bradford Protein Assay Kit)。
BCA 法与传统方法相比，更简单、更稳定、更灵敏度。
BCA 法测定蛋白浓度兼容性亦很好，不受大部分样本中其他成分的影响，对于5%以内的SDS 、Triton X-100、Tween 20、 Tween 80具有很好的兼容性。
BCA 法测定蛋白浓度易受螯合剂、高浓度的还原剂影响。
在BCA 法测定蛋白浓度前，应尽量使EDTA 浓度≤m10M; DTT 浓度≤1mM ，2-ME ≤0.01%。
Leagene BCA Protein Assay Kit 在50～1000μg/ml 浓度范围内有较好的线性关系， 其最小检出量为25μg/ml 。
组成：
自备材料：
1、 酶标仪或分光光度计
2、 96孔板或离心管
3、 恒温箱
操作步骤(仅供参考)：
1、 取蛋白标准配制液加入到蛋白标准(BSA)(20mg)中，充分溶解后配制成蛋白标准溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白标准溶液应-20℃保存。
2、 取适量蛋白标准，稀释至终浓度为500μg/ml 或所需浓度。
如取25μl 20mg/ml 蛋白标准，加入975μl 稀释液，充分混匀，即配制500μg/ml 蛋白标准。
特别提示：待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中。
例如待测蛋白溶解于蔗糖中，亦取20mg/ml 蛋白标准溶解于蔗糖中。
一般也可以用0.9%NaCl 或PBS 作为溶解BSA 稀释液。
稀释后的500μg/ml 蛋白标准也应-20℃长期保存。
3、 根据样品数量，试剂(A):试剂(B 配制BCA 工作液，即取BCA 试剂A 和BCA 试剂B ， 充分混匀，即获得BCA 工作液。
例如取BCA 试剂A 和BCA 试剂B ，配制成BCA 工作液。
编号 名称 PT0001 250T PT0001 500T Storage 试剂(A): BCA 试剂A 50ml 100ml RT 避光 试剂(B): BCA 试剂B 1.5ml 3ml RT 避光 试剂(C): 蛋白标准(BSA) 20mg 20mg RT 试剂(D): 蛋白标准配制液 5ml 10ml RT 使用说明书 1份
BCA工作液室温24小时内稳定。
4、将标准品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl加到96孔板的标准品孔，加稀释液补足。
5、加适当体积待测蛋白样本到96孔板的样品孔中。
如果标准品稀释液与溶解待测蛋白样
本的溶液不同，应在待测蛋白样本孔中加入稀释液；如果标准品稀释液与溶解待测蛋白样本的溶液相同，无需在待测蛋白样本孔中加入l稀释液。
6、各孔加入200μl 配制好的BCA工作液, 放置。
7、测定562nm波长处的吸光度(OD值)，如无562nm，540～595nm之间的波长也可。
8、各孔OD值减去用未加标准品的孔的OD值，作出标准曲线，根据标准曲线计算出样
品的蛋白浓度。
注意事项：
1、蛋白标准(BSA)粉末溶解于蛋白标准配制液后，即获得蛋白标准原液，该原液中含有防
腐剂，不影响后续检测，该蛋白标准原液-20℃长期保存。
2、待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中，否者待
测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致，有可能导致测定不准确。
3、待测蛋白和蛋白标准加入BCA工作液后，如果发现检测效果不佳，可以室温放置2h
或60℃放置30min，颜色会随着时间的延长不断加深。
显色反应也会随温度升高
而加快。
如果浓度较低，可以适当延长孵育时间或在较高温度下孵育。
4、测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化，可能的原因
是样品中含有严重干扰BCA法测定蛋白浓度的物质。
5、建议每次测定时都做标准曲线。
因为BCA法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，
并且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则如需精确测定宜每次都做标准曲线。
6、如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但应考虑根据比色皿的最小检
测体积。
应按比例适当加大BCA工作液的用量使总体积不小于最小检测体积，样
品和标准品的用量亦相应按比例放大。
使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
7、为了加快BCA法测定蛋白浓度的速度可以适当加热，但是切勿过热，否则易失效。
8、BCA法检测中样本中不应含有EGTA，否则影响检测结果。
9、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
蛋白标准配制成溶液后应-20℃冻存。