第18章全自动DNA测序仪和蛋白质自动测序仪习题

合集下载

第18章全自动DNA测序仪和蛋白质自动测序仪习题讲解

第十八章全自动DNA测序仪和蛋白质自动测序仪首页习题习题参考答案习题名词解释选择题简答题一、名词解释1．荧光标记引物法2．荧光标记终止底物法3．多色荧光标记引物法4．多色荧光标记终止底物法5．Edman降解法6．Sanger双脱氧链末端终止法7．平板电泳型DNA测序仪8．毛细管电泳型DNA测序仪9．缩微生物处理器二、选择题【A型题】在五个选项中选出一个最符合题意的答案（最佳答案）。

1. DNA的一级结构是指（）；A．DNA空间构象B．核苷酸序列C．碱基序列D．氨基酸序列E．DNA双螺旋结构2. 下列有关测序反应体系反应原理的叙述中，错误的是（）A．加入的核苷酸单体为2 -脱氧核苷三磷酸B．低温退火时，引物与模板形成双链区C．沿着3'-5'的方向形成新链D．DNA聚合酶结合到DNA双链区上启动DNA的合成E．形成的新生链与模板完全互补配对3. 双脱氧链末端终止法测序反应与普通体外合成DNA反应的主要区别是（）A．DNA聚合酶不同B．dNTP的种类不同C．dNTP的浓度不同D．引物不同E．双脱氧链末端终止法测序反应体系中还需加入ddNTP4. 下列荧光标记方法中，可以将A、C、G、T四个测序反应在同一管中完成而不影响测序结果的是（）A．单色荧光标记引物法B．单色荧光标记终止底物法C．多色荧光标记引物法D．多色荧光标记终止底物法E．多色荧光标记法5. 下列哪一荧光标记法，必需将A、T、C、G四个测序反应分管进行，但可以合并在一个泳道内电泳（）A．单色荧光标记引物法B．单色荧光标记终止底物法C．多色荧光标记引物法D．多色荧光标记终止底物法E．多色荧光标记法6. 毛细管电泳型测序仪电泳时仪器显示无电流，最常见的原因是由于（）A．电极弯曲B．电泳缓冲液蒸发使液面降低C．毛细管未浸入缓冲液中D．毛细管内有气泡E．测序样本未注入毛细管中7. 毛细管电泳型测序仪电泳时产生电弧，主要原因是（）A．电泳缓冲液漏出B．电泳缓冲液配有误C．电极、加热板或自动进样器上有灰尘沉积D．测序样本纯化不完全，含有盐性成份E．加热板温度过高8. 全自动DNA测序仪的主要应用范围，不包括（）A．人类遗传病、传染病和癌症的基因诊断B．法医的亲子鉴定和个体识别C．生物工程药物的筛选D．动植物杂交育种E．新蛋白质的鉴定9. 蛋白质测序仪的基本工作原理，主要是利用（）A．Edman降解法B．双脱氧链末端终止法C．化学降解法D．氧化－还原法E．水解法10. 蛋白质测序仪主要检测（）A．核苷酸序列B．核糖核酸序列C．碱基序列D．氨基酸序列E．脱氧核糖核酸序列11. 下列有关双脱氧链末端终止法测序原理的叙述中，不正确的是（）A．其基本原理是利用DNA的体外合成过程B．反应体系中需加入dNTP和ddNTPC．ddNTP可以形成磷酸二酯键而掺入到DNA链中D．dNTP掺入后可导致新合成链在不同的位置终止E．生成的反应产物是一系列长度不同的多核苷酸片段12. 下列有关多色荧光标记终止底物法的叙述中，不正确的是（）A．需将4种ddNTP分别用4种不同的荧光染料标记B．标记和终止过程在同一时间完成C．A、T、C、G四种反应可以在同一管中完成D．可在一个泳道内完成电泳测序E．荧光染料标记过程和延伸反应终止分别发生在同一DNA片段的两端13. 下列有关荧光标记DNA的检测原理的叙述中，不正确的是（）A．用于测序的产物绝大多数应为单链B．DNA片段上的荧光基团可吸收激光束提供的能量而发射出特征波长的荧光C．两极间的电势差推动DNA片段从正极向负级泳动并达到相互分离D．不同颜色的荧光与不同的碱基信息相对应E．测序结果中，纵轴表示荧光波长种类和强度14. 下列有关Edman降解法基本原理的叙述中，错误的是（）A．PTC－多肽的生成是在弱碱性条件下B．PTC－多肽的生成反应需用过量的试剂使有机反应完全C．在无水强碱的作用下，可使靠近PTC基的氨基酸环化，形成ATZ衍生物和一个失去末端氨基酸的剩余多肽D．剩余多肽链可以进行下一次以及后续的降解循环E．ATZ衍生物经水溶酸处理转化为PTH氨基酸15. 毛细管电泳型DNA测序仪电泳时仪器显示无电流，最常见的原因为（）A．缓冲液配制错误B．毛细管内有气泡C．电泳缓冲液蒸发使液面降低，而未能接触到毛细管的两端D．电极弯曲而无法浸入缓冲液中E．加热板温度过高16. 在单纯以测定DNA序列为目的的全自动DNA测序仪中，广泛应用的原理是（）A．Edman降解法B．双脱氧链末端终止法C．化学降解法D．氧化－还原法E．水解法17. 双脱氧链末端终止法测序的基本原理是利用（）A．RT-PCRB．PCRC．Western BlotD．Southern BlotE．水解法18. 测序反应体系中加入的酶为（）A．限制性内切酶B．RNA聚合酶C．DNA聚合酶D．DNA水解酶E．反转录酶19. 在普通的体外合成DNA反应体系中，加入的核苷酸单体为（）A．dAMP，dCMP，dGMP，dTMPB．dADP，dCDP，dGDP，dTDPC．dATP，dCTP，dGTP，dTTPD．ddATP，ddCTP，ddGTP，ddTTPE．ddADP，ddCDP，ddGDP，ddTDP20. 双脱氧链末端终止法测序反应中除PCR反应体系成份外，还加入了（）A．DNA聚合酶B．dNTPC．dNDPD．ddNTPE．ddNDP21. 在DNA自动测序中广泛应用的示踪物是（）A．色素染料B．同位素C．电化学发光物质D．酶E．荧光素22. 下列有关多色荧光标记引物法标记引物的特性的叙述中，正确的是（）A．四种标记引物的序列相同，但5'端标记的荧光染料颜色不同B．四种标记引物的序列相同，但3'端标记的荧光染料颜色不同C．四种标记引物的序列不同，其5'端标记的荧光染料颜色也不同D．四种标记引物的序列不同，其3'端标记的荧光染料颜色也不同E．四种标记引物的序列不同，其2'端标记的荧光染料颜色也不同23. 下列有关多色荧光标记引物法的叙述中，不正确的是（）A．需将荧光染料预先标记在测序反应所用引物的5'端B．四种引物的序列相同，但标记的荧光染料颜色不同C．A、T、C、G四个测序反应必需分管进行D．上样时需分别在不同泳道内电泳E．特定颜色荧光标记的引物则与特定的双脱氧核苷酸底物保持对应关系24. 一般来说，DNA测序图中，其横坐标和纵坐标的意义是（）A．横坐标代表荧光波长种类，纵坐标代表时间B．横坐标代表荧光波长种类和强度，纵坐标代表时间C．横坐标代表时间，纵坐标代表荧光波长种类D．横坐标代表时间，纵坐标代表荧光波长种类和强度E．横坐标代表荧光波长种类，纵坐标代表荧光波长强度25. 下列有关DNA自动测序仪自动进样器区功能的叙述中，不正确的是（）A．毛细管进入样品盘标本孔中进样依靠自动进样器的移动完成B．电极和毛细管一般均固定不动C．两级间极高的电势差可促进DNA分子在毛细管中很快泳动D．电极为电泳的正性电极E．样品盘有48孔和96孔两种，可一次性连续测试48或96个样本26. 下列有关DNA自动测序仪凝胶块区功能的叙述中，不正确的是（）A．电泳时缓冲液阀关闭B．电极为电泳的正性电极C．在分析每一个样品前，泵自动冲掉上一次分析用过的胶，灌入新胶D．注射器驱动杆可给注射器提供正压力，将注射器内的凝胶注入毛细管中E．玻璃注射器可储存凝胶高分子聚合物以及在填充毛细管时提供必要的压力27. 平板电泳型DNA测序仪的测序长度一般为（）A．600bp～900bpB．400bp～600bpC．200bp～400bpD．900bp～1000bpE．300bp～500bp28. 毛细管电泳型DNA测序仪的测序长度一般为（）A．600bp～900bpB．400bp～600bpC．200bp～400bpD．900bp～1000bpE．300bp～500bp【X型题】每题的备选答案中有两个或者两个以上正确答案。

dna自动测序基本原理概论试题及答案

dna自动测序基本原理概论试题及答案一、选择题1. DNA自动测序技术中，常用的测序方法是（）。

A. Sanger测序B. Maxam-Gilbert测序C. 质谱测序D. 所有选项答案：D2. 在Sanger测序法中，使用的终止核苷酸是（）。

A. dNTPsB. ddNTPsC. rNTPsD. aNTPs答案：B3. DNA测序中，用于标记DNA链的荧光染料通常附加在（）。

A. 引物B. 模板DNAC. 终止核苷酸D. 酶答案：C二、填空题1. DNA自动测序技术能够快速准确地测定DNA序列，其基本原理是通过使用带有不同荧光标记的终止核苷酸来确定DNA链的________。

答案：末端碱基2. 在自动测序过程中，DNA聚合酶在模板DNA上合成新的DNA链，当遇到终止核苷酸时，合成停止，此时的终止核苷酸对应的荧光标记会被________。

答案：检测三、简答题1. 简述Sanger测序法的测序原理。

答案：Sanger测序法的原理是利用DNA聚合酶在模板DNA上合成新的DNA链，同时使用四种不同荧光标记的终止核苷酸（ddNTPs），每种终止核苷酸对应一种碱基。

当DNA聚合酶遇到终止核苷酸时，合成停止，根据荧光标记的不同，可以确定该位置的碱基类型。

2. 在DNA测序中，为什么需要使用终止核苷酸？答案：使用终止核苷酸的目的是为了在DNA合成过程中，在特定的位置终止链的延伸，从而产生一系列长度不同的DNA片段。

这些片段的末端碱基由终止核苷酸决定，通过检测这些终止核苷酸的荧光标记，可以确定DNA序列。

四、论述题1. 论述DNA自动测序技术在生物医学研究中的应用。

答案：DNA自动测序技术在生物医学研究中有着广泛的应用。

首先，它可以用于基因组测序，帮助科学家了解生物体的遗传信息和基因结构。

其次，在疾病诊断和治疗方面，通过测序技术可以识别与疾病相关的基因突变，为个性化医疗提供依据。

此外，测序技术还可以用于遗传病的筛查、病原体的鉴定、以及药物靶点的发现等。

全自动dna测序仪的原理和应用

全自动DNA测序仪的原理和应用1. 前言DNA测序技术是现代生物学、医学研究中的重要工具之一。

随着技术的不断进步，全自动DNA测序仪在DNA测序领域占据重要地位。

本文将介绍全自动DNA测序仪的原理和应用。

2. 原理全自动DNA测序仪基于Sanger测序技术，通过离心分离、扩增和合成等步骤来获取DNA序列信息。

其原理主要包括以下几个步骤：2.1 模板制备全自动DNA测序仪需要将待测的DNA样品进行模板制备。

一般采用PCR（聚合酶链式反应）技术来扩增目标DNA片段，以增加其浓度和复制数目。

2.2 扩增产物净化PCR扩增产生的扩增产物中会包含引物和杂质，需要进行净化处理。

常用的方法是利用凝胶电泳分离扩增产物，并使用各类商业化学试剂盒进行提取和净化操作。

2.3 DNA片段测序将净化后的DNA片段进行测序。

全自动DNA测序仪采用Dye-termination测序方法，使用一系列特殊的引物，通过DNA链延伸过程中的不同颜色发光来标记每个碱基。

之后，仪器会通过激光扫描读取每个碱基的发光信号。

2.4 数据分析与测序结果全自动DNA测序仪会生成一系列的发光数据，这些数据需要进行分析和处理。

通常会使用相关软件进行碱基识别、序列拼接和测序结果的校正等步骤，从而获得准确的DNA序列信息。

3. 应用全自动DNA测序仪广泛应用于各个领域，例如：3.1 生物学研究在生物学研究中，全自动DNA测序仪可以用于基因组测序、转录组测序、蛋白质相互作用的研究等。

通过测序获得的DNA序列信息可以帮助研究者了解生物体的遗传信息、功能和相互关系。

3.2 医学领域在医学领域，全自动DNA测序仪可以用于诊断遗传性疾病、癌症等疾病的基因突变。

通过测序可以快速准确地分析患者的基因组信息，从而为临床医生提供准确的诊断和治疗方案。

3.3 农业和食品安全全自动DNA测序仪在农业和食品安全领域也有广泛的应用。

它可以用于鉴定转基因作物、检测食品中的基因改造成分、追溯食品来源，保证食品安全和品质。

临床分子生物学检验智慧树知到期末考试章节课后题库2024年湖南师范大学

临床分子生物学检验智慧树知到期末考试答案章节题库2024年湖南师范大学1.人类基因计划的大部分测序工作是利用YAC实现的。

（）答案:错2.线粒体病主要累及大脑和肌肉组织。

（）答案:对3.HER2可作为早期诊断乳腺癌的参考依据。

（）答案:对4.荧光原位杂交可同时检测多种靶序列。

（）答案:对5.TPMT与嘧啶类药物的疗效和毒副作用密切相关。

（）答案:错6.Northerm 杂交检测靶序列是RNA。

（）答案:对7.高通量表面增强激光解吸电离飞行时间质谱可获得“癌症指纹”信息。

（）答案:对8.葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症呈X染色体连锁不完全隐性遗传。

（）答案:错9.PCR是已知突变检测的“金标准”。

（）答案:错10.结核杆菌分子生物学检测包括特异性基因检测和耐药基因检测。

（）答案:对11.电喷雾质谱技术是一种软电离技术。

（）答案:对12.核糖体蛋白是基于MALDI-TOF-MS进行细菌鉴定的主要标志物。

（）答案:对13.实时荧光定量PCR引物的最适长度为15～30nt。

（）答案:错14.肺癌的诊断主要依靠分子生物学检验。

（）答案:错15.逆转录病毒的基因组是单倍体。

（）答案:错16.染色体的形态最典型和清晰的阶段是有丝分裂间期。

（）答案:错17.PCR 技术的本质是核酸重组技术。

（）答案:错18.双脱氧链终止法测序需要加入双脱氧核苷酸。

（）答案:对19.Tm 主要与 A-T 含量有关。

（）答案:错20.产前诊断的金标准是对羊水或脐带血细胞进行染色体核型分析。

（）答案:对21.16SrRNA基因作为细菌分类鉴定的靶基因的优点有（）答案:多信息###长度适中###多拷贝22.关于沙眼衣原体的分子生物学检验，正确的是（）答案:RAPD技术不适用于血清学分型###PCR扩增靶基因序列主要有外膜蛋白基因、隐蔽性质粒DNA和16S rRNA基因序列###PCR-RFLP可用于CT分型###LCR技术适合于高危人群普查时大批量标本的检测23.SELDI-TOF-MS中蛋白质芯片系统的组成主要包括（）答案:芯片###芯片阅读器###分析软件24.CYP450基因分型检测的分子生物学方法有（）答案:实时荧光定量PCR###等位基因特异性PCR###基因芯片###PCR-RFLP25.临床分子生物学实验室检测方法的选择原则包括（）答案:根据本地区患者的承受能力选择###根据实验室的技术特点选择###根据检测目的选择###根据实验室的实验条件选择26.PML-RARa融合基因常用的检测方法有（）答案:RT-PCR###荧光原位杂交###荧光定量PCR27.原癌基因激活的机制包括（）答案:易位激活###癌基因甲基化程度降低###原癌基因扩增###点突变28.法医物证学的主要内容有（）答案:种族和种属认定###性别鉴定###个体识别###亲子鉴定29.关于DHPLC技术的描述正确的是（）答案:灵敏度和特异性高###自动化程度高###是分析异质性突变的首选方法###可实现高通量检测30.理想的质控品应满足以下要求（）答案:稳定、价廉、同一批次可大量获得###无已知的生物传染危害性###基质与待测样本一致###阳性质控品所含待测物浓度接近试验的决定性水平###靶值或预期结果已知31.乙型肝炎病毒的核酸类型是（）答案:双股DNA32.TPMT是下列哪类药物在体内代谢的关键酶（）答案:嘌呤类33.采集用于PCR检测的血清样本时，不宜选择使用的抗凝剂是（）答案:肝素34.奥美拉唑在体内代谢主要受哪种药物代谢酶的影响？（）答案:CYP2C1935.PCR的退火温度通常比引物的Tm值（）答案:低约5℃36.HLAI类抗原的特异性取决于（）答案:α重链37.可以用来分辨16SrRNA基因不能鉴别的非常接近的菌种和种内菌株的是（）答案:16S-23S rRNA基因38.单细胞基因扩增一般采用下列哪项技术增加检测的敏感性和特异性（）答案:巢式PCR39.Southern 印迹杂交中常用的核酸变性剂是（）答案:氢氧化钠40.DNA指纹的分子遗传学基础是（）答案:DNA的多态性41.新一代测序技术最显著的特点是（）答案:高通量42.微卫星异常的检测方法有（）答案:DNA测序43.PCR的引物Tm值的计算公式为（）答案:Tm= 2(A+T)+4(G+C)44.PCR循环中的延伸时间取决于（）答案:扩增产物的长度45.线粒体基因组22个tRNA可转录几种tRNA （）答案:20种46.保证结果准确可靠的先决条件是（）答案:分析前质量控制47.肿瘤的分子诊断策略有（）答案:检测肿瘤相关基因48.在PGD中诊断单基因疾病的主要手段是（）答案:单细胞PCR技术49.焦磷酸测序法突出的优势是（）答案:较长的读长50.寡核苷酸探针的最大优势是（）答案:可以区分仅仅一个碱基差别的靶序列51.非整倍体筛选的诊断方法主要借助于下列哪项技术（）答案:FISH52.乙型肝炎病毒可分为多少个基因型？（）答案:853.TaqMan 探针技术要求扩增片段应为（）答案:50～150bp54.目前对肺癌遗传易感性主要集中在如下哪几个领域（）答案:DNA修复能力55.临床分子生物学检验的核心技术是（）答案:核酸扩增技术56.临床分子生物学检验标准化的前提是（）答案:标准品57.临床基因扩增检验实验室设计的原则主要包括（）答案:分区设置###控制空气流向58.质量管理体系文件具有法规性、唯一性和时效性三大特性。

临床医学检验：临床检验仪器真题

临床医学检验：临床检验仪器真题1、问答题常用的离心方法分几类？正确答案：常用的离心方法大致可分为平衡离心法、等密度离心法、经典式沉降平衡离心法等三类。

2、问答题简述蛋白质测序仪的主要应用。

正确答案：蛋白质测序仪（江南博哥）获得的蛋白质序列信息主要应用在以下三个方面。

（1）新蛋白质的鉴定：在凝胶电泳中出现的未知条带可以利用蛋白质测序仪来测定其序列，为探索蛋白质的功能提供线索。

（2）分子克隆探针的设计：是蛋白质序列信息的基本用途之一。

用蛋白质序列信息设计PCR引物和寡核甘酸探针。

可以利用这些探针进行cDNA文库或基因组文库的筛选。

（3）抗原的人工多肽合成：由合成多肽免疫产生的抗体常用来证实和纯化新发现的蛋白质。

此外，合成的多肽类似物能够揭示蛋白质重要结构特征和提示蛋白质的功能特性。

3、问答题第三代自动血培养仪有哪些性能特点？正确答案：（1）培养基营养丰富；（2）以连续、恒温、振荡方式培养，细菌易于生长；（3）培养瓶多采用不易碎材料制成，提高了使用的安全性；（4）采用封闭式非侵入性的瓶外监测方式，避免标本交叉感染，且无放射性污染；（5）自动连续监测，缩短了检测时间，阳性标本检测可快速、准确；（6）结果报告及时，85%以上的阳性标本能在48小时内被检出；（7）培养瓶多采用双条形码技术，只需用电脑上的条码阅读器扫描报告单上的条码，就可直接查询到病人的结果及生长曲线；（8）培养瓶可随时放入培养系统，并进行追踪检测；（9）数据处理功能较强，数据管理系统随时监测感应器的读数，依据数据的变化来判定标本的阳性或阴性，并可进行流行病学的统计分析；（10）设有内部质控系统，可保证仪器的正常运转；（11）可进行血液及所有无菌体液的细菌培养检测。

4、单选库尔特原理中血细胞的电阻与电解质溶液电阻的关系是OoA.相等B.大于C.小于D.大于或等于E.小于或等于正确答案：B5、问答题电泳技术根据分离原理如何分类？正确答案：根据分离原理可分为移界电泳、区带电泳、等速电泳、等电聚焦、免疫电泳等。

《国内外医疗器械原理图解与操作标准及维修技术实用全书》

《国内外医疗器械原理图解与操作标准及维修技术实用全书》本书作者:中国医科大学医学工程教授图书册数:1380 出版社:中国知识出版社定现价:1380 元价:690 元《国内外医疗器械原理图解与操作标准及维修技术实用全书》本店是实体店，坚决抵制各类盗版、劣质图书及附件，严格控制图书进货渠道，遵守国家新闻出版、发行的相关规定，直接从经过国家出版发行行政部门审核批准的出版社进货，与国图、中华书局、三联书店、商务印书馆、人民文学、上海古籍、上海世纪出版集团、中国社科、社科文献、电子工业、机械工业、化学工业、科学、法律、上海外教、北大、清华、人大、复旦、武大、南大、广西师大、北京出版集团、浙江少儿、江苏少儿、 21 世纪、作家、春风文艺、长江文艺、接力、漓江等全国知名的 300 余家出版社建立了良好的合作关系，所采购的图书均经所在地图书市场审读办公室审读合格后，方上市发行， 100%正版、优质，订购速度快，数据提供及时，加工全方位，能全面1 / 13符合客户的需求。

公司经营的图书科目品种齐全，涉及学科面广，涵盖文学、文化、教育、体育、科技、历史、工具图书、艺术、哲学、语言、政治、经济、学术专著、工具书及其它社科综合类图书等。

经营风格全方位，适合各文化层次读者学习和阅读需要。

内容介绍：商品简介商品编码：pdf94281 出版社：中国知识出版社册   数：作者:中国医科大学医学工程教授2 / 13出版时间:2013 年 3 月印刷时间 2013 年 3 月 isbn：版次：第二版装帧：精装纸张：胶版纸印次：第二次页数：正文语种：中文开本：16 开目录最新国内外医疗器械原理图解与操作标准及维修技术实用全书最新国内外医疗器械原理图解与操作标准及维修技术实用全书第一篇医疗电子仪器原理图解与操作标准及维修技术第一章概论第二章医用传感器第三章心电仪器第四章医用监护仪器第五章脑电图机第六章医用 CT 机3 / 13第七章医用超声诊断仪器第八章核医学仪器第九章医用电子仪器操作安全第二篇医疗电动仪器原理图解与操作标准及维修技术第一章口腔科设备第二章离心机第三章呼吸机第四章麻醉机第五章血液透析机第六章血液分析仪器第七章体外循环机第三篇临床医疗仪器原理图解与操作标准及维修技术第一章医用遥测设备第二章医用激光器第三章医用 X 线电视第四章核磁共振成像设备第五章听力检查仪器第六章耳聋与康复设备第七章红外线探测器第八章血流量测量仪器第四篇临床检验常规仪器原理图解与操作标准及维修技术第一章自动生化分析仪4 / 13第二章徽生物快速检测仪第三章生物安全柜第四章免疫分析仪第五章电化学临床分析仪器第六章尿液分析仪器第五篇理疗、治疗仪器原理与操作标准及维修技术第一章光线治疗机第二章电疗机第三章磁疗机第四章康复治疗仪器第五章人工心肺机第六章体外碎石机第七章放射治疗机第六篇医用色谱仪、电泳仪、显徽镜原理与操作标准及维修技术第一章色谱仪器第二章电泳仪第三章毛细管电泳仪第四章光学显徽镜第五章电子显徽镜第七篇生化检验仪器原理与操作标准及维修技术第一章 GD—821 型光电比色计第二章 DU 型临床生化分析仪5 / 13第三章紫外—可见光光度计第四章质谱仪第五章酸度计第六章 PC—603 型血细胞计数器第七章磁共振波谱分析仪第八章计数器第九章荧光分析仪器第十章原子光谱分析仪第八篇医用 X 线检查设备原理与操作标准及维修技术第一章医用 X 线检查设备的结构、基本原理第二章 X 线发生器主要参量的检测与调校第三章 X 线检查设备的维护和质量控制第四章 X 线检查设备的故障及检修方法第五章 X 线发生器低压系统第六章 X 线发生器高压系统第七章工频 X 线发生器故障检修综合举例第八章中高频 X 线发生器故障检修第九章附属设备的故障检修第十章 X 线影像增强、电视系统故障检修第十一章牙科 X 线机的故障检修第十二章口腔曲面体层 X 线机第九篇细胞、分子生物学仪器原理与操作标准及维修技术6 / 13第一章培养箱第二章 PCR 基因扩增仪第三章全自动 DNA 测序仪和蛋白质自动测序仪第四章流式细胞仪巨邦文化发展有限公司服务宗旨让客户“买得放心、买得开心”是本公司的一贯服务宗旨，而且，我们也会始终将这一宗旨贯彻到底，并赋与其更丰富的涵义。

DNA测序模板的制备和测序引物设计中的相关问题

DNA测序模板的制备和测序引物设计中的相关问题王虎王晓健甄一松邹玉宝郑维越张芊核酸序列测定是基因研究的重要手段,本世纪60年代和70年代,科学家们一直致力于研究测定核酸序列的方法。

最初使用的方法只能测定RN A,主要是tRNA,一则因为它的链较短,通常只有74295个核苷酸,二则有可能分离单个tRNA分子。

而D NA的情况却大相径庭,人的染色体有大有小,每条染色体约含5千5百万到2亿5千万个碱基对,远远大于RNA 分子,如何将其切割并分离成500bp以下的片段成了D NA序列测定问题的关键。

基因克隆(gene cloning)和多聚酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术使从染色体中分离特定D N A片段的难题迎刃而解,快速高效的测序技术因此产生。

1977年,基于链终止和化学降解的D N A测序法研究成功,略经改善后很快就被推广到世界各国的分子生物学实验室,成为80年代和90年代序列测定革命的基础。

但此种测序法的缺点也是显而易见的,一方面操作步骤繁琐,可测样本量小,另一方面同位素的使用也明显限制了该方法的应用。

八十年代末期,美国加州一位科学家发明了世界上第一台D N A全自动测序仪,随着此后技术的不断成熟与完善,D NA的测序已经实现了高通量、产业化。

由美、英、日、德、法、中六国参与的人类基因组计划(Human Genome Project,HGP),是人类文明史上最伟大的科学创举之一,其核心内容是人类基因组序列图的绘制)))测定人类基因组的全部D NA序列,该计划启动于1990年,原定15年完成,由于技术的成熟与基因组测序的规模化运作,人类基因组工作框架图构建已于2001年6月全部完成。

一、测序的原理D NA测序方法主要有双脱氧链终止法(Sanger法)和化学降解法(M axa m2Gilbert法)。

目前,传统的手工测序方法及仪器自动测序方法均使用双脱氧链终止法。

测序常见问题解答

1．为什么需要新鲜的菌液？首先，新鲜的菌液易于培养，可以获得更多的DNA，同时最大限度地保证菌种的纯度.2．如何提供菌液？如果您提供新鲜菌液，用封口膜封口以免泄漏；也可以将培养好的4—5ml菌液沉淀下来，倒去上清以方便邮寄。

同时邮寄时最好用盒子以免邮寄过程中压破.3．如何制作穿刺菌？用灭菌过1.5ml或2ml离心管加入LB琼脂(7g/L)斜面凝固，用接种针挑取分散良好的单菌落穿过琼脂直达管底，不完全盖紧管盖适当温度培养过夜，然后盖紧盖子加封口膜，室温或4度保存。

4．PCR产物直接测序有什么要求？1)．扩增产物必须特异性扩增，条带单一.如果扩增产物中存在非特异性扩增产物，一般难以得到好的测序结果；.2）必须进行胶回收纯化；3）DNA纯度在16—2.0之间.浓度50ng/ul以上.5．为什么PCR产物直接测序必须进行Agarose胶纯化？如果不进行胶纯化而直接用试剂盒回收，经常会导致测序出现双峰甚至乱峰。

这主要是非特异性扩增产物或者原来的PCR引物去除不干净所导致。

大多所谓的PCR"纯化试剂盒"实际上只是回收产物而不能起到纯化的作用的。

对于非特异性扩增产物肯定无法去除，而且通常他们不能够完全去除所有的PCR引物，这会造成残留的引物在测序反应过程中参与反应而导致乱峰。

6．如何进行PCR产物纯化？PCR产物首先必须用Agarose胶电泳，将特异扩增的条带切割下，然后纯化。

使用凝胶回收试剂盒回收.产物用ddH2O溶解。

7．PCR产物直接测序的好处？A) PCR产物直接测序可以反映模板的真实情况.B) 省去克隆的实验费用和时间.C) PCR产物测序正确的片段进行下一步克隆实验使结果更有保障.D) 混合模板进行PCR的产物直接测序可以发现其中的点突变.8．对用于测序的质粒DNA的要求有哪些？对测序模板DNA的一般要求：1).DNA纯度要求高，1.6—2.0之间，不能有混合模板，也不能含有RNA，染色体DNA，蛋白质等；2).溶于ddH2O中，溶液不能含杂质，如盐类，或EDTA等螯合剂，将干扰测序反应正常进行。

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

1. 目前DNA测序仪的工作原理，主要是利用（）A．Edman降解法B．双脱氧链末端终止法C．化学降解法D．氧化－还原法E．水解法2. 下列有关多色荧光标记引物法的叙述中，正确的是（）A．需将荧光染料预先标记在测序反应所用引物的3 端B．四种引物的序列相同，但标记的荧光染料颜色不同C．A、T、C、G四个测序反应必需分管进行D．上样时需分别在不同泳道内电泳E．特定颜色荧光标记的引物则与特定的双脱氧核苷酸底物保持对应关系3. 下列哪些荧光标记法必需将A、T、C、G四个测序反应分管进行（）A．单色荧光标记引物法B．单色荧光标记终止底物法C．多色荧光标记引物法D．多色荧光标记终止底物法E．多色荧光标记法4. 下列有关单色荧光标记法原理的叙述中，正确的是（）A．需将A、G、C、T四管反应分管进行B．上样时需在不同泳道电泳C．可用于标记ddNTP，也可用于标记引物D．有可能因泳道间迁移率不同而影响测序精度E．仅适用于标记ddNTP，而不能标记引物5. 平板电泳型DNA测序仪电泳时仪器显示无电流，可能原因有（）A．电极导线未接好或损坏B．电泳缓冲液配制不正确C．正极或负极铂金丝断裂D．正极或负极的胶面未浸入缓冲液中E．倒胶时有气泡形成6. 采用荧光标记终止底物法的测序反应体系中，包含（）A．DNA模板B．引物C．dNTPD．ddNTPE．水解酶7. 毛细管电泳型DNA测序仪电泳时仪器显示无电流，可能原因有（）A．电泳缓冲液蒸发使液面降低，而未能接触到毛细管的两端B．毛细管内有气泡C．毛细管未浸入缓冲液中D．电极弯曲而无法浸入缓冲液中E．加热板温度过高8. 导致毛细管电泳型DNA测序仪电极弯曲的原因有（）A．测序时未进行电极定标操作就直接执行电泳命令B．自动进样器上有灰尘沉积C．运行前未将样品盘归位D．进行电极定标操作时X/Y轴归位尚未结束就运行Z轴归位E．凝胶干燥而阻塞毛细管9. 平板电泳型DNA测序仪电泳时仪器显示无电流，可能原因有（）A．电泳缓冲液配制不正确B．电极导线未接好或损坏C．正极或负极铂金丝断裂D．正极或负极的胶面未浸入缓冲液中E．电泳缓冲液蒸发使液面降低，而未能接触到毛细管的两端10. Sanger双脱氧链末端终止法和Maxam-Gilbert化学降解法的共同点包括（）A．反应体系中均有ddNTPB．都是根据在某一固定的点开始核苷酸链的延伸，随机在某一个特定的碱基处终止C．均产生A、T、C、G四组不同长度的一系列核苷酸链D．均在变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳进行片段的分离和检测E．均可检测DNA的一级结构11. 在Sanger双脱氧链末端终止法测序反应体系中，ddNTP与dNTP相比的异同点有（）A．ddNTP在脱氧核糖的5'位置上缺少一个羟基B．ddNTP在脱氧核糖的3'位置上缺少一个羟基C．DNA链在掺入dNTP的位置终止链的延伸D．均可与正在延伸的DNA链的末端脱氧核糖3'-OH发生反应E．ddNTP不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键12. 下列有关Sanger双脱氧链末端终止法测序反应体系反应原理的叙述中，正确的是（）A．加入的核苷酸单体包括dNTP和ddNTPB．低温退火时，引物与模板形成双链区C．沿着3'-5'的方向形成新链D．DNA聚合酶结合到DNA双链区上启动DNA的合成E．形成的新生链与模板完全互补配对13. 下列有关DNA自动测序仪自动进样器区功能的叙述中，正确的是（）A．毛细管进入样品盘标本孔中进样依靠自动进样器的移动完成B．电极和毛细管一般均固定不动C．DNA分子在毛细管中泳动的动力来自于两级间极高的压力差D．电极为电泳的正性电极E．样品盘有48孔和96孔两种，可一次性连续测试48或96个样本14. 下列有关DNA自动测序仪凝胶块区功能的叙述中，正确的是（）A．电泳时缓冲液阀打开B．电极为电泳的负性电极C．在分析每一个样品前，泵自动冲掉上一次分析用过的胶，灌入新胶D．注射器驱动杆可给注射器提供正压力，将注射器内的凝胶注入毛细管中E．玻璃注射器可储存凝胶高分子聚合物以及在填充毛细管时提供必要的压力15. 下列有关缩微生物处理器结构和功能特点的叙述中，正确的是（）A．基本结构为2层玻璃薄片和2层聚二甲基硅氧烷薄片B．其形状为圆盘状，直径仅10厘米C．可完成纳升级标本的Sanger DNA测序D．微瓣膜的功能包括在热循环反应时封闭反应小室，为反应提供封闭的空间E．毛细管电泳通道由上下来回迂回的U型管道构成，总长度为30cm三、问答题1．简述双脱氧链末端终止法测序原理。

第18章 全自动DNA测序仪和蛋白质自动测序仪习题