实验七--食品中金黄色葡萄球菌的检验
食品中金黄色葡萄球菌检测方法(依据GB4789)
食品中金黄色葡萄球菌的检测方法1.范围本标准规定了食品中金黄色葡萄球菌的检测方法。
本标准第一法适用于金黄色葡萄球菌的定性检测；第二法适用于金黄色葡萄球菌含量较高的食品中金黄色葡萄球菌的计数。
第三法适用于金黄色葡萄球菌含量较低而杂菌含量较高的食品中金黄色葡萄球菌的计数。
2.设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：2.1恒温培养箱：36℃±1℃。
2.2冰箱：2℃～5℃。
2.3恒温水浴箱：37℃～65℃。
2.4天平：感量0.1g。
2.5均质器。
2.6振荡器。
2.7无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器。
2.8无菌锥形瓶：容量100mL、500mL。
2.9无菌培养皿：直径90mm。
2.10注射器：0.5mL。
2.11 pH计或pH比色管或精密pH试纸。
2.12全自动微生物生化鉴定系统。
（BD Crystal或Phoenix）。
2.13比浊仪。
（BD Phoenix比浊仪，货号440910）。
2.14比浊仪定标盒。
（BD Phoenix定标盒，货号440911）。
3.培养基和试剂3.110 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤。
3.27.5 %氯化钠肉汤。
3.3血琼脂平板。
（BD 货号脑心浸液琼脂241830胰蛋白大豆琼脂236950作为基础加兔血浆）3.4Baird-Parker 琼脂平板。
（BD 货号 276840）3.5脑心浸出液肉汤(BHI)。
（BD 货号 237400）3.6稀释液：磷酸盐缓冲液。
(BD 货号211544)3.7营养琼脂小斜面。
（BD 货号212000）3.8革兰氏染色液。
（BD 货号212539）3.9无菌生理盐水。
第一法金黄色葡萄球菌的定性检验4.检验程序金黄色葡萄球菌定性检验程序见图1：图1 金黄色葡萄球菌检验程序5.操作步骤5.1样品的处理称取25g样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或放入盛有225mL7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min。
浅析食品中金黄色葡萄球菌检验方法
浅析食品中金黄色葡萄球菌检验方法摘要：金黄色葡萄球菌在自然界中有着十分广泛的分布，能造成食品污染以及细菌性食物中毒，因此在食品检测中必须重点关注金黄色葡萄球菌的检测。
目前，金黄色葡萄球菌的检测方法主要包括反向胶乳凝结法、PCR法、酶联免疫吸附法等，检测人员必须深入了解金黄色葡萄球菌的生物学特性、流行病学特点、致病性等才能保证检测的顺利进行。
关键词：金黄色葡萄球菌；葡萄球菌肠毒素；检测方法[abstract] Staphylococcus aureus is widely distributed in nature，which can cause food contamination and bacterial food poisoning. Therefore，the detection of Staphylococcus aureus should be paid more attention in food detection. At present，the detection methods of Staphylococcus aureus mainly include reverse latex coagulation，PCR，enzyme-linked immunosorbent assay and so on. Only by thoroughly understanding the biological characteristics，epidemiological characteristics and pathogenicity of Staphylococcus aureus，can the detection be carried out smoothly.[Key words] Staphylococcus aureus；Staphylococcal enterotoxin；Detection method隨着经济社会的发展，人们的生活水平逐渐提升，对食物的要求也越来越高。
食品中微生物的检测金黄色葡萄球菌检验
法国梅里埃公司生产的RPF培养基
将兔血浆包括在培养基中作为直接确认菌落的手段
-
+
凝固酶阳性葡萄球菌 : 菌落周围形成沉淀圈 (例) 金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌污染的控制 防止食品污染
防止带菌人群对各种食物的污染： 定期对生产加工人员进行健康检查，患 局部化脓性感染（如疥疮、手指化脓等 ）、上呼吸道感染（如鼻窦炎、化脓性 肺炎、口腔疾病等）的人员要暂时停止 其工作或调换岗位。
金黄色葡萄球菌 在甘露醇盐平板上的菌落
Staphylococcus aureus on mannitol salts agar
3、血浆凝固酶试验：
吸取1:4新鲜兔血浆0.5 mL，放入小试 管中，再加入培养24 h的金黄色葡萄球菌 肉浸液肉汤培养物0.5 mL，振荡摇匀， 置 36±1℃温箱或水浴内，每半小时观察 一次，观察6 h，如呈现凝固,即将试管倒 置或 倾斜时，呈现凝块者，被认为阳性结 果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及 肉汤作为对照。
＊＊＊当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较 多的食品，如牛奶和乳制品、肉、蛋等，在温度条 件适宜时，经过8～10小时即可产生相当数量的肠毒 素，肠毒素可耐受100℃煮沸30分钟而不被破坏。人 摄食该菌污染的食物 2 ～ 3 小时后可引起中毒症状， 它引起的食物中毒症状是呕吐和腹泻。 此外，金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素、明胶 酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。
金黄色葡萄球菌检测实验报告
金黄色葡萄球菌检测实验报告一、实验目的金黄色葡萄球菌是一种常见的病原菌，能够引起多种感染性疾病。
本次实验的目的是通过一系列的检测方法，准确检测出样本中是否存在金黄色葡萄球菌，并确定其数量和特性，为食品安全、临床诊断和环境卫生等领域提供可靠的检测依据。
二、实验原理金黄色葡萄球菌具有一些独特的生物学特性和生化反应，可通过以下几种方法进行检测：1、血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌能够产生血浆凝固酶，使血浆发生凝固。
2、甘露醇发酵试验：金黄色葡萄球菌可发酵甘露醇产酸。
3、革兰氏染色：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈葡萄串状排列。
三、实验材料1、样本：食品样本（如乳制品、肉类）、临床样本（如脓液、血液）等。
2、培养基和试剂：血琼脂平板甘露醇氯化钠琼脂培养基兔血浆革兰氏染色液生理盐水3、仪器设备：恒温培养箱显微镜无菌接种环、移液管等四、实验步骤1、样本处理食品样本：称取一定量的样品，加入适量生理盐水进行均质处理，制成稀释液。
临床样本：直接进行涂片或适当稀释。
2、增菌培养将处理后的样本接种于 75%氯化钠肉汤中，置于 36±1℃恒温培养箱中培养 18 24 小时。
3、分离培养从增菌培养物中分别划线接种于血琼脂平板和甘露醇氯化钠琼脂培养基上，于 36±1℃培养 18 24 小时。
4、形态观察观察血琼脂平板上的菌落形态，金黄色葡萄球菌菌落呈金黄色，周围有明显的透明溶血圈。
观察甘露醇氯化钠琼脂培养基上的菌落，金黄色葡萄球菌能使培养基变黄。
5、革兰氏染色挑取可疑菌落进行革兰氏染色，在显微镜下观察，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈葡萄串状排列。
6、血浆凝固酶试验取兔血浆与可疑菌落混合，置于 36±1℃培养箱中观察，若血浆发生凝固，则为阳性。
7、甘露醇发酵试验接种可疑菌落于甘露醇氯化钠琼脂培养基中，观察是否产酸。
五、实验结果1、形态观察在血琼脂平板上观察到金黄色、周围有透明溶血圈的菌落。
在甘露醇氯化钠琼脂培养基上观察到变黄的菌落。
食品卫生微生物学检验金黄色葡萄球菌检验
金黄色葡萄球菌的流行病学
金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在， 空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可 找到。作为人和动物的常见病原菌，其主要 存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上， 50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球 菌存在。因而，食品受其污染的机会很多。
金黄色葡萄球菌的流行病学
近年来，美国疾病控制中心报告，由 金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅 次于大肠杆菌。
目前，随着研究的深入，一些快速和采用 现代技术的检测方法不断出现，这些新的快速 方法，一般都缩短了传统检测方法的时间，能 够较快地得到检测结果，并且操作相对简单。 比如：法国梅里埃公司生产的RPF培养基 、API检测系统等。梅里埃公司生产的mini VIDAS利用荧光免疫的方法检测葡萄球菌 肠毒素，在仪器上45 min可以得到结果。
金黄色葡பைடு நூலகம்球菌的致病性
金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可 引起局部化脓 感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等， 甚至败血症、脓毒症等全身感染。 金黄色葡萄球菌的致病力 强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶： a.溶血毒素：外毒素，分甲、乙、丙、丁、戊五种，能损伤 血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死； b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液 或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞 的吞噬作用。 葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关； d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶 能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌； e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋 白质性肠毒素，分为A、B、C、D、E及F六种血清型。
金黄色葡萄球菌的流行病学特点
食品中金黄色葡萄球菌的检测分析
食品中金黄色葡萄球菌的检测分析作者：逯岩来源：《中国卫生产业》 2015年第3期逯岩抚顺市疾病预防控制中心，辽宁抚顺 113006[摘要] 目的对食品中金黄色葡萄菌检测方法中的纸片法进行分析。
方法 2013年6月—2014年6月对三类食品分别定量进行纸片法及B-P平板法的金黄色葡萄球菌检测，将各数据进行记录对比分析。
结果纸片法的检测符合良好，纸片检测与B-P平板法检测结果差异无统计学意义（P>0.05），线性相关密切。
纸片法检测与B-P平板法检测的结果一致性高。
结论纸片法检测具有易操作，省时省力的优点，可以在针对金黄葡萄球菌的食品快速检测中加以推广应用。
[关键词] 食品检测；金黄色葡萄球菌；纸片法；B-P平板法[中图分类号] R155.5[文献标识码] A[文章编号] 1672-5654（2015）01（c）-0020-02Analysis and detection of Staphylococcus aureus in foodLU YanFushun City Center for Disease Control and prevention of Liaoning，Fushun 113006，China[Abstract] Objective The paper detecting method of aureus in food analysis of. Methods In 2013 June to 2014 June detection of Staphylococcus aureus in three types of foods were quantitatively. Disk diffusion method and B-P plate method， eachdata record comparison analysis. Results The detection of paper method accord well，no significant difference between the detection results of slip detection and B-P plate method (P>0.05)， linear correlation closely. Test paper method detection and B-P plate method results consistency. Conclusion Disc assay is easy to operate，time-saving advantages， can be extended and applied in the rapid detection of Staphylococcus aureus in food for.[Key words] Food detection；Staphylococcus aureus；Slip method；B-P plate method[作者简介] 逯岩（1978-），女，黑龙江拜泉县人，主管检验师，本科，研究方向：微生物检验。
食品中金黄色葡萄球菌检验方法
食品中金黄色葡萄球菌检验方法金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus ) 是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属(Staphylococcus)，有“嗜肉菌"的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染。
而对于金黄色葡萄球菌在速冻食品中的存在量，卫生部于2011年11月24日公布食品安全国家标准《速冻面米制品》，允许金葡菌限量存在。
实验设备耗材吸管(1ml、10ml)、恒温培养箱(36±1℃)、冰箱、均质器、振荡器、平皿、稀释瓶、天平、显微镜、接种棒等培养基和试剂普通肉汤培养基、胰蛋白胨大豆肉汤、Baird-Prker琼脂平板、缓冲蛋白胨水(BP)、凝固酶试验冻干血浆检验程序(非选择性增菌法)检样25g+225mlBP胨水10ml匀液+10ml双料胰胨肉汤操作步骤1.称取25g固体样品;吸取25mL液体样品，加入225mLBP胨水，固体样品研磨或置均质器中制成混悬液。
2.吸取10mL上述混悬液，接种于10mL双料胰蛋白胨大豆肉汤中，置36±1℃培养2h。
3.再加入20ml 含20%NaCl的单料胰蛋白胨大豆肉汤，置36±1℃培养24±2h。
4.划线转种2个表面干燥的Baird-Parker琼脂平板上，36±1℃培养46±2h。
5.挑取可疑菌落移种到肉汤培养基中，置36±1℃温箱培养24h。
6.取肉汤培养物0.3ml同0.5ml凝固酶试验冻干血浆于8mm*100mm试管内充分混合，置36±1℃培养，定时观察是否有凝块形成，至少观察6h，以内容物完全凝固，使试管倒置或倾斜时不流动为阳性。
试验中需同时做已知阳性和阴性对照。
对可疑结果，应进行革兰氏染色、镜检和其他辅助试验。
7.本菌为革兰氏阳性球菌，排列是葡萄球状，无芽胞，无荚膜，致病性葡萄球菌菌体较小，直径约为0.5～1μm。
在Baird-Parker平板上为圆形、光滑凸起、湿润、直径为2～3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。
食品中微生物的检测-金黄色葡萄球菌检验
血平板上金黄色葡萄球菌 菌落形态
金黄色葡萄球球菌的单个菌落在血 平板上呈金黄色，有时也为白色， 平板上呈金黄色，有时也为白色，大而 突出、圆形、不透明、表面光滑， 突出、圆形、不透明、表面光滑，周围 有溶血圈。 有溶血圈。
金黄色葡萄球菌 BP平板上的菌落形态 在BP平板上的菌落形态
琼脂平板上菌落呈圆形， 在Baird-Parker琼脂平板上菌落呈圆形，表面光 琼脂平板上菌落呈圆形 凸起、 直径2～ 滑、凸起、湿 润，直径 ～3 mm。灰黑色至黑色，有 。灰黑色至黑色， 光泽，常有浅色（非白色）的边缘， 光泽，常有浅色（非白色）的边缘，周围绕以不透明 沉淀），其外常有一清晰带。 ），其外常有一清晰带 圈 （沉淀），其外常有一清晰带。当用接种针触及 菌落时具有黄油样粘稠感。 菌落时具有黄油样粘稠感。有时可见到不分解脂肪的 菌株，除没有不透明圈和清晰带外， 菌株，除没有不透明圈和清晰带外，其他外观基本相 水食品中分离的菌落， 同。从长期贮存的冷冻或脱 水食品中分离的菌落， 其黑色常较典型菌落浅些，且外观可能较粗糙， 其黑色常较典型菌落浅些，且外观可能较粗糙，质地 较干燥。 较干燥。
金黄色葡萄球菌的流行病学
近年来，美国疾病控制中心报告，由 近年来，美国疾病控制中心报告， 金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位， 金黄色葡萄Байду номын сангаас菌引起的感染占第二位，仅 次于大肠杆菌。 次于大肠杆菌。
金黄色葡萄球菌的流行病学特点
季节分布，多见于春夏季； 季节分布，多见于春夏季；中毒食品 种类多，如奶、 鱼及其制品。 种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此 剩饭、油煎蛋、 外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起 的中毒事件也有报道。 的中毒事件也有报道。 上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%， 上呼吸道感染患者鼻腔带菌率 ， 所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。 所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。
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实验七食品中金黄色葡萄球菌的检验
一、实验目的要求
1、了解食品的质量与金黄色葡萄球菌检验的意义。
2、掌握金黄色葡萄球菌的生物学特性。
3、掌握金黄色葡萄球菌检验的生化试验的操作方法和结果的判断。
4、掌握食品中金黄色葡萄球菌检验的方法和技术。
二、原理
葡萄球菌在自然界分布极广，空气、土壤、水、饲料、食品(剩饭、糕点、牛奶、肉品等)以及人和动物的体表粘膜等处均有存在，大部分是不致病，也有一些致病的球菌。
金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属一个种。
可引起皮肤组织炎症，还能产生肠毒素。
如果在食品中大量生长繁殖，产生毒素，人误食了含有毒素的食品，就会发生食物中毒，故食品中存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜在危险，检查食品中金黄色葡萄球菌及数量具有实际意义。
金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固，多数致病菌株能产生溶血毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，在试管中出现溶血反应。
这些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。
三、试剂和仪器
（一）最先准备的器材
规格名称数量用途
1、500ml广口瓶1个稀释样品
2、500ml三角瓶1个制生理盐水
3、250ml三角瓶3个制培养基等
4、10×100mm试管6支血浆凝固酶试验
5、1ml移液管2支
6、10ml移液管 2 支
7、直径为90 mm平皿12套制血平板B-P平板
8、250ml量筒1支
（二）应灭菌的其它器材
剪刀1把不锈钢汤匙1把称量纸适量
（三）应制备的培养基
培养基总量所用容器
1.无菌水50ml/瓶1瓶250ml三角瓶（全班共用）
2.0.85%生理盐水70ml/瓶1瓶250ml三角瓶（全班共用）
3.0.85%生理盐225ml/瓶1瓶500ml三角瓶
4.7.5%NaCl肉汤50ml/瓶1瓶250ml三角瓶
5.普通营养琼脂100ml/瓶1瓶250ml三角瓶
6.B—P培养基95ml/瓶1瓶250ml三角瓶
7.兔血液5ml
四、实验内容
（一）、增菌培养法
样品处理→→选择性增菌→→选择性平板分离→→血浆凝固酶试验鉴别→→结果报告
第一天样品处理和增菌培养
（一）、样品处理
固体或半固体食品：以无菌操作称取25g样品，放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌均质杯内，于8000r/min均质1～2min，制成1:10样品匀液。
液体食品:：用灭菌吸管吸取25mL样品，放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，经充分振摇制成1:10样品匀液。
（二）、增菌培养
接种操作：吸取5mL稀释液接入7.5%NaCl肉汤或胰蛋白胨肉汤中。
37°C培养24小时。
培养：放于36±1℃培养24h。
培养结果：在NaCl肉汤中呈混浊生长，胰蛋白胨肉汤中有时液体澄清，菌量多时呈混浊生长。
第二天接种选择性平板进行分离培养
（一）、接种选择性平板
取增菌液1环，划线接种于血平板或B－P平板。
（二）、培养
放于36±1℃培养24h。
第三天观察分离结果、镜检、做血浆凝固酶试验
（一）、观察分离结果
结果：金黄色葡萄球菌，在血平板上呈：金黄或白色菌落，大而凸起，表面光滑，周围有溶血圈；在Baird-Parker平板上：菌落为圆形，直径2-3mm，颜色灰或黑色，周围有一浑浊带，在其外层有一透明圈。
（二）、革兰氏染色、镜检
操作：革兰氏染色→镜检
结果：金黄色葡萄球菌，革兰氏阳性，显微镜下呈葡萄状排列无芽胞，直径0.5-1μm。
（三）、结果报告：
综合形态特征，血平板情况以及血浆凝固酶试验结果，判别检样有否金黄色葡萄球菌作出报告。
五、思考题
1、金黄色葡萄球菌在血平板或B－P平板上的菌落特征如何？为什么？
2、食品中能否允许有个别金黄色葡萄球菌存在？为什么？
3、鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标是什么？。