高效液相色谱法测定辣椒制品中的碱性橙和碱性玫瑰精含量

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固相萃取-高效液相色谱法快速测定饮料中3种碱性橙含量

固相萃取 -高效液相色谱法快速测定饮料中 3种碱性橙含量摘要：目的：建立了一种固相萃取-高效液相色谱法快速测定饮料中的碱性橙2（chrysoidineG，CDG）、碱性橙21（orangeG，AOG）和碱性橙22（astrazonorangeR，AOR）共3种禁用色素添加剂的方法。

方法：样品采用C18-SPE小柱净化，洗脱液在35℃下用氮气吹至近干后用定容液溶解并定容，过有机相滤膜后在AgilentXDBC18色谱柱上，以20mmol·L-1的乙酸铵溶液和甲醇（体积比为35∶65）作为流动相进行分离，采用二极管阵列检测器（DAD）在449nm波长处检测CDG，在485nm波长处检测AOG及AOR，以外标峰面积法定量。

结果3种碱性橙染料在0.50～20.0mg·L-1浓度范围内线性关系较好，方法回收率为86.8%～96.5%，相对标准偏差均小于2%（n=6），方法的检出限为0.01mg·kg-1。

结论：本方法操作简便、快速、准确，可适用于美年达和芬达等橙色饮料中碱性橙的检测。

关键词：高效液相色谱法；固相萃取；碱性橙染料；饮料引言碱性橙染料是一类碱性工业染料，主要用于纺织品、木制品及皮革制品的染色，根据《中华人民共和国食品添加剂使用卫生标准》的相关规定，碱性橙染料是禁止用作食品添加剂的化学制品。

由于碱性橙染料比柠檬黄、日落黄等水溶性染料更易上色且不易褪色，因此一些不法商贩将碱性橙染料用于黄鱼、辣椒、饮料和腐竹等豆制品的染色，以次充好，严重危害消费者的身体健康。

食品中禁用的碱性橙染料主要有3种，包括碱性橙2（CDG）、碱性橙21（AOG）及碱性橙22（AOR）。

目前主要有高效液相色谱法（HPLC）、反相高效液相色谱法（RP-HPLC）[2]和超高效液相色谱-串联质谱法等检测方法。

食品检测的国家标准主要是GB/T23496-2009《食品中禁用物质的检测碱性橙染料高效液相色谱法》，该方法中对于饮料等液体样品的前处理方法操作时间长、过程易损失，碱性橙染料回收率不好。

高效液相色谱法测定辣椒及辣椒制品中辣椒素类物质

高效液相色谱法测定辣椒及辣椒制品中辣椒素类物质
1.范围：
用高效液相色谱法测定辣椒及辣椒制品中辣椒素类物质的方法及辣度表示方法。

本方法的检出限：辣椒素、二氢辣椒素均为1mg/Kg，线性范围为
1mg/L-150mg/L。

2.试样提取：
在样品中加入甲醇—四氢呋喃混合溶剂25ml，用保鲜膜封口，用针扎几个小孔，然后在60℃浴条件下，使用超声波清洗器提取30min。

用滤纸过滤，收集滤液，然后将滤渣连同滤纸重新加甲醇—四氢呋喃混合溶剂25ml，使用超声波清洗器提取10min，重复两次，将三次过滤收集的滤液合并，用氮吹仪在70℃温度下浓缩至10ml—20ml，然后用甲醇—四氢呋喃混合溶剂定容至50ml，经过滤器(0.45µm微孔过滤膜)过滤后进行色谱分析。

根据样品中辣椒素类物质总量和检测器的灵敏度，必要时可以适当调整稀释倍数。

3.色谱参考条件：
色谱柱：Kromasil C-18 (4.6mm*250mm 5um)
流动相：甲醇：水=65：35
进样量：10 µl
流速：1.0 ml/min
紫外检测波长：280nm
柱温箱温度：30℃
4.结果：
按照色谱条件，进行HPLC分析，用标准物质色谱峰的保留时间定性；根据辣椒素、二氢辣椒素标准曲线及试样中的峰面积定量。

高效液相色谱法测定辣椒制品中的合成辣椒碱

关键词：高效液相色谱法；辣椒制品；合成辣椒碱
中图分类号：Ｔ２７３Ｓ０．文献标识码：Ａ文章编号：１００６—２１（０）３— ２５—０５３２１００２１４
ＤｅｅｍｉａｉｎｏｏｉａｍｉｅｉｈｌｐｏｃｓｂｔｒｎｔｆｎｎｖｏｄｎｃｉｒｄｕｔｙＨＰＬｉＣ
ｔｅｌｅｒｅｕｔｎｗａ＝７８．Ｃ＋２５６（ｈｉａｑａｉｓＹｎｏ１０５１．ｒ＝０９９．９５），ｎｈａｇｒｏｅｏｅｙｗｓ９１８ａｄｔｅｒｎｅｆｒｃｖｒａ．０～９．０．ｏｃｕ９２％Ｃｎｌ—
ｍ呈良好的线性关系，回归方程为Ｙ＝７８．ｃ＋２５６（＝．９５，方法回收率９．０～９．０之Ｌ１０５１．ｒ０９９）１８９２％间。结论：该方法简便、重现性好，可作为辣椒制品中合成辣椒碱的检测方法。
Ｎａｉｇ５００１；２．ＧｕｎｘｉｅＭｏｍｒｃｌｕａｃｎｌｇｓａｃｎｎｎ３０ａｇｉＢａｓｄｅＡｇｉｕｔｒｌＴｅｈｏｏｙＲｅｅｒｈ
ａｄＰｏｔｎＣｎｒ，Ｂｉ３６２ｎｒｉｅｔｍｏｏｅａｅ５３１）ｓ
ＣＩＥＮｉ－ＩＭｎｇ．ｉＤＥＮＧ，ＨＵＡＮＧｕ — ｕｅ＇，ＬＩＰｉ，ＬＩＸｉｏ－ｉｗｅ，ＹｕＨｉｘｎｇＵａｌ

高效液相色谱法同时测定豆制品中的碱性橙和碱性嫩黄O染料

法，利用反相ＨＬ同时检测碱性橙和碱性嫩黄ＯＰＣ
的含量，得了满意的效果。取
色谱柱：罗门ＧｍｉｉＣ８５ｉ，．菲ｅｎ】（ｍ４６ｍｍ × ｘ
１０ｍｍ）柱温：０℃ ；测波长：性橙４８ａ，５；３检碱５ｍ碱性嫩黄Ｏ４６ｎ进样量：０ｘ；速：．３ｍ；１ｔ流Ｌ１０ｍＬｍｉ。流动相及梯度：为００％磷酸溶液，／ｎＡ．３Ｂ为甲醇；０～１ｎ，５０ｍｉ７％Ａ＿５％Ａ；０～１ｎ５１１ｍｉ，
林钦
（建省中心检验所，福建福州３００）福５０２
摘要：用高效液相色谱法（Ｌ同时测定了豆制品中的碱性橙和碱性嫩黄Ｏ染料的含量，品用乙腈提取后采ＨＰＣ）样用正己烷脱脂净化，后在碱性条件下用乙醚萃取，后溶于甲醇中进行ＨＰＣ分离、测。所使用的色谱柱为然最Ｌ检
维普资讯
２００７年９月
Ｓｅｅｂｅ０７ｐｔｍｒ２０
色
谱
Ｖｏ．５Ｎｏ．１２５
７６～７７７７
ＣｉｅｅＪｕｎｌｆＣｒｍａｏｒｐｙｈｎｓｏｒａｏｈｏｔｇａｈ
高效液相色谱法同时测定豆制品中的碱性橙和碱性嫩黄。染料
关键诃：效液相色谱法（Ｌ）豆制品（ｅｎｐｏｕｔ）碱性橙（ｈｙｏｄｎ）碱性嫩黄Ｏ（ｕａｎ高ＨＰＣ；ｂａｒｄｃｓ；ｃｒｓｉｉｅ；ａｒｍｉｅＯ）中图分类号：６８０５文献标识码：Ｂ文章编号：００８１（０７０ —７６０１０ —７３２０）５０７ —２栏目类别：术与应用技

HPLC法测定辣椒精中辣椒碱和二氢辣椒碱的含量

ＤｅｅｍｉｔｏｏｐｓｃｎａｔｒｎａｉｎｆＣａａｉｉｎｄｈＤｉｙｄｒａａｃｎｎＧｅｒｌＡｌｌｉｆＣａａｉｉｂｙＨＰＬＣＯｃｐｓｉｉｉｎｅａｋａｏｄｓｏｐｓｃｎ
ＳＩｏｓｅｇＺＬ—ｏｇｒｈｎｚｏｓｉｌｆＣＺｅｇｈｕ４００ｈｎ）Ｈ —ｈｎ，ＵｉｎｅｇｈｕＢｈＺＨｏｐｔＴＭ，ｈｎｚｏ５０ＺＣｉａａｏＡｓａｔｂｔｃ：ＯｂｅｔｅＴｓｂｉｈａＬｔｏｅｅｍｉｅｔｅｔｒｃｐｌｏｓｉｅｔｃｐａｃｎｒｊｃｉｏｅｔｌｎＨＰＣｍｅｈｄｔｄｔｒｎｖａｓｏｈｗｏｐｉｉａｎｔｕｎ — ａｓｉｉｎｃｔ
ｐｒｎｃｐｏｔｔｎｔｉｅｒ／ｌａｏｄｓｏｐｓｉｉ．ｉｉａｃｎｓｉｕｅｇｎｅａａｋｌｎｌｉｆＣａａｃｎＫｅｒｓｅｅａｌｌｏｄｆＣａｓｉｉｙｗｏｄ：ｇｎｒａｋａｉｓｏｐａｃｎ：ｃｐｓｉｉ；ｄｈｄｒｃｐａｃｎ；ＨＰＣ：ｃｎｔｎｔｄｔｒｉａｔｎｌａａｃｎｉｙｏａｓｉｉＬｏｅｅｅｍｎｉｏ
ｍｅｈｄｉｏｖｎｉｎｔｔｅｒｓｔｉｃｕｒｔｎｄｒｌｂｅｎｄｃｎｅｏｄｔｒｉｅｔｅｃｎｔｎｔｏｏｔｏｓｃｎｅｅ，ｈｅｕｌｓａｃａｅａｅｉｌ，ａａｂｅｕｓｄｔｅｅｍｎｏｅｆｔａｈｗ

高效液相色谱法测定不同品种辣椒药材中辣椒碱的含量

高效液相色谱法测定不同品种辣椒药材中辣椒碱的含量郑创钦【期刊名称】《中国医学创新》【年(卷),期】2017(014)004【摘要】目的:探讨不同品种辣椒药材中辣椒碱的含量的测定方法.方法:采用高效液相色谱法,色谱柱选择Hanbon Sci.&Tech.Lichrospher C18(250.0×4.6 mm,5μm)进行分离,流动相为甲醇:0.1%磷酸水溶液(65%~90%,0~45 min)梯度洗脱,检测波长为280 nm,柱温为28℃.结果:辣椒碱的线性回归方程为:Y=11.918×106X-3.925×103(r=0.9997),辣椒碱在1.0007~4.0261μg范围内呈良好的线性关系,辣椒碱的平均回收率为99.93%,RSD=1.32%.结论:高效液相色谱法用于测定辣椒中辣椒碱的含量,成分分离效果好,系统稳定性高,操作简单,同时适用于不同品种辣椒药材中辣椒碱的含量测定,不同品种不同成熟度的辣椒中辣椒碱的含量具有差异性.【总页数】4页(P19-22)【作者】郑创钦【作者单位】广东省珠海市斗门区侨立中医院(广东省珠海市第二中医院) 广东珠海 519125【正文语种】中文【相关文献】1.反相高效液相色谱法测定辣椒中4种辣椒碱类成分的含量 [J], 韩玉珠;石磊岭;金莎;张晶2.HPLC法测定辣椒精中辣椒碱和二氢辣椒碱的含量 [J], 师伯省;祖丽红3.高效液相色谱法测定辣椒中的辣椒碱和二氢辣椒碱 [J], 谷岩;刘广福;黄旭;陈晓迪;祝旭;白树田4.反相高效液相色谱法测定辣椒风湿软膏中总辣椒碱含量 [J], 毛庆;张小松;何华5.HPLC法测定不同品种辣椒药材中辣椒碱的含量 [J], 李坚;龙晓英;孙娟;张俊华;张华明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

HPLC法检测辣椒不同部位中辣椒碱和二氢辣椒碱的含量

Ａｂｔａｔｈｕｎｎｓｆｅｐｒｓｏｔｂｔａｓｉｉａｄｉｏｐｕｄｅｉｄｆｍｃｐａｉ（ａｓｉ— ｓｃ：Ｔｅｒｉｔｔｏｐｅｉｃｎｒｕｄｔｃｐａｎｎｓｃｍｏｎｓｒｅｏａｓｉｎｃｐａｉｒｂｇａｅｐｉｅｏｃｔｄｖｒｃｃ
ｎｉｓ．Ｃｐａｃｎｉｙｒｃｐａｃａｅｔｅｓｏｇｓｂｒｉｇｅｅｔａｄａｅｍｒａ０ｏｅｔａｃｍｏ）ａｓｉｉａｄｄｈｄｏａｓｉｎｈｖｔｎｅｔｕｎｆｃｓｎｒｏｅｔｎ９％ｆｈｔｌｏ — ｄｎｉｈｒｎｆｈｔｏ
ｄｆｒｎａｔｆｐｐｅｓｂｉｅｅｔｐｒｏｅｐｒｙＨＰＬｆｓＣ
ＺＨＯＵＬ，ＬＡｎｈ，ＣＮＧＹｕｎｘｎｉＩＮＹｕ・ｅＨＥａ－ｉ，ＺＮＧＱｉｇｑｎＨＡｎ－ｉｇ
（ｎｉｅｎｎｅｅｒｈＣｎｅｆａｒｌｉｎｅｅＰｏｉｃ，Ｈｎａ５２０ＥｇｅｉｇＲｓａｃｅｔｏｔａＰｇｔｎＨｂｉｒｖｅａｄｎ０７５）ｎｒＮｕｍｅｉｎ
ｔｒａ０Ｃａｄｔｅｄｔｃｉｎｗａｅｅｇｈｗｓ２ｎｕｅＷ３￣ｎｈｅｅｔｖｌｎｔａ８ｍ．Ｔｈｔｏｓｃｎｅｉｎ，ｔｅｒｓｌｉａｃｒｔ，ａｄｉｃｎｓｏ１ｅｍｅｈｄｉｏｖｎｅｔｈｅｕｔｓｃｕａｅｎｔａｂｓｄｔｅｅｉｅｔｅｃｎｅｔｆａｓｉｉｎｉｙｒｃｐａｃｎｉｅｐｒＦｎｌ，ｗｔｉｅｈｓｍｅｈｄｔｅｅ－ｅｕｅｏｄｔｒｎｈｏｔｎｐａｃｎａｄｄｈｄｏａｓｉｉｎｐｐｅ．ｉａｙｍｏｃｌｅｕｉｚｄｔｉｔｏｄｔｒｌｏｍｉｅｃｐａｃｎａｄｄｈｄｏａｓｉｉｏｔｎｉｅｅｔｒｉｐｒｆｉｅｅｔｅｐｒ．Ｔｈｉｈｓｏｔｎｆａｓｉｉｎａｓｉｉｎｉｙｒｃｐａｃｎｃｎｅｔｎｄｆｒｎｕｔａｔｏｆｒｎｐｅｓｉｆｆｓｄｆｐｅｈｇｅｔｎｅｔｐａｃｎｃｏｃ

高效液相色谱法测定辣椒制品中的辣椒素类物质

高效液相色谱法测定辣椒制品中的辣椒素类物质孙胜枚【摘要】该研究采用了高效液相色谱法对辣椒制品中的辣椒素类物质进行检测,并对其提取条件和检测方法进行了研究.以乙醇∶水=70∶30 (V∶V)作为提取液,采用直接萃取法提取样品中的辣椒素和二氢辣椒素,以0.3％磷酸二氢钾溶液-乙腈(62∶38,V∶ V)为流动相,检测波长230 nm,Macherey-Nagel Nucleosil120-5 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)分离.结果表明,辣椒素和二氢辣椒素在20～100 μg/mL质量浓度范围线性关系良好(R12=0.999 8,R22=0.999 9),检出限为0.001 g/kg,加标回收率分别为93％～104％和86％～103％,相对标准偏差RSD ＜5％.该方法操作简单、快速,具有良好的准确性和精密度,可有效排除香辛料物质的杂峰干扰,适合各类辣椒制品中辣椒素类物质的检测.【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2016(035)003【总页数】4页(P148-151)【关键词】高效液相色谱;辣椒素类物质;测定【作者】孙胜枚【作者单位】广东省江门市李锦记(新会)食品有限公司,广东江门529100【正文语种】中文【中图分类】TS262.5日常所食用的辣椒制品中的辣味主要来源于辣椒当中的辣椒素类物质。

辣椒素类物质主要包含有以下5种：辣椒素（capsaicin，CAP）、二氢辣椒素（dihydrocapsaicin，DCAP）、高辣椒素（homocapsaicin）、高二氢辣椒素（homodihydrocapsaicin）、降二氢辣椒素（nordihydrocapsaicin）［1-2］。

其中辣椒类制品辣感的主要来源是辣椒素和二氢辣椒素，占辣椒素类物质总含量90%以上［3］，因此这两种辣椒素类物质也是辣味水平研究的主要对象［4-5］。

目前对于辣椒素类物质含量的检测主要方法有：比色法、薄层色谱法、紫外分光光度法和高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）法［6-9］。

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高效液相色谱法测定辣椒制品中的碱性橙和碱性玫瑰精含量杨琳1，陈青俊1，梁晶晶1，王京1，丁献荣2，吴平3(1.浙江公正检验中心有限公司，浙江杭州 310009 ；2.浙江公正检验中心有限公司浙中分公司，浙江义乌 322000；3.杭州娃哈哈集团有限公司，浙江杭州 310009)摘要：辣椒制品中的非食用色素工业染料经甲醇-水(7:3，V /V )超声振荡数次提取，高速离心，采用HPLC 系统用20mmol/L 醋酸铵溶液和甲醇梯度洗脱，采用二极管阵列检测器检测，用外标法峰面积定量。

结果显示：4种工业染料在0.25～20.0μg/mL 范围内的峰面积与质量浓度的线性关系良好，加标回收率为94.4%～101.9%。

该方法简便易行，准确可靠。

关键词：辣椒制品；碱性橙；碱性玫瑰精；高效液相色谱；二极管阵列检测器Determination of Basic Orange and Basic Rhodamine B in Cayenne Pepper by RP-HPLCYANG Lin 1，CHEN Qing-jun 1，LIANG Jing-jing 1，WANG Jing 1，DING Xian-rong 2，WU Ping 3(1. Zhejiang Gongzheng Testing Center Co. Ltd., Hangzhou 310009, China ；2. Zhejiang Gongzheng Testing Center Co. Ltd.,Zhezhong Filiale, Yiwu 322000, China ；3. Hangzhuo Wahaha Group Co. Ltd., Hangzhou 310009, China) Abstract ：An HPLC method for the determination of inedible basic colorants (basic orange and basic rhodamine) in cayenne pepper was established. Samples were extracted with methanol-water (7:3, V /V ) under ultrasonic assistance and the extract was centrifuged. The supernatant was then analyzed by HPLC-DAD with gradient elution (20 mmol/L ammonium acetate and methanol as mobile phase) and quanti ﬁ ed by external standard method. The concentrations of four industrial dyes (basic orange 2, 21 and 22 and basic rhodamine) in the range of 0.25–20.0 μg/mL showed good linearity with peak area. Recovery rates of basic orange 2, 21 and 22 and basic rhodamine in a known sample were in the range of 94.4%–101.9%. The HPLC method was simple and accurate.Key words ：cayenne pepper ；basic orange ；basic rhodamine ；HPLC ；diode array detector (DAD)中图分类号：O657.7 文献标识码：A文章编号：1002-6630(2012)24-0303-04收稿日期：2011-08-15碱性橙是一种偶氮类碱性工业染料，俗名“王金黄”、“块黄”等，主要用于纺织品、皮革制品及木制品的染色[1]；碱性玫瑰精又称罗丹明B 或玫瑰红B ，主要用于纸张和化妆品着色，也用于制色淀和染蚕丝，这两种染料都已经被认定长期食用是可以使人致癌的物质[2]，都被列为食品禁用物质[3]。

但是在辣椒制品中，这两种染料却存在很严重的滥用现象，这就要求检测部门严格监督。

我国现行的检测标准很多，有GB/T 23496—2009《食品中禁用物质的检测：碱性橙染料：高效液相色谱法》[4]、DB33/T 703—2008《食品和农产品多种碱性工业染料的测定：液相色谱-串联质谱法》[5]、SN/T 2430—2010《进出口食品中罗丹明B 的检测方法》[6]、DB34/T 1107—2009《豆制品中碱性橙的测定：高效液相色谱法》[7]等，这些方法针对的主要是食品，针对辣椒制品在前处理染料的提取中还存在一些问题；食品中罗丹明B 的检测方法主要采用了荧光检测器[12]，虽然采用荧光法检测灵敏度更低，但是样品从提取到进样，不仅要增加仪器投入，还要花费很多时间。

本实验主要通过对样品的前处理研究，确立前处理条件，运用高效液相色谱分离，利用二极管阵列检测器进行检测，建立了一套可以快速准确同时测定辣椒制品中多种工业染料的方法。

1 材料与方法1.1材料与试剂甲醇(色谱纯)美国Tedia 公司；乙酸铵(分析纯)上海试四赫维化工有限公司；无水乙醇(分析纯) 杭州长征化学试剂有限公司；标准品碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22、碱性玫瑰精美国Sigma 公司；标准储备液：分别准确称取4种碱性工业染料标准物质0.1000g ，用甲醇-水(50:50)溶解并定容到100mL ，配成质量浓度为1.00mg/mL 的储备液；测定前将储备液稀释50倍到20mg/L ，此为标准工作液；提取液：甲醇:水＝7:3(V /V )。

1.2 仪器与设备1260高效液相色谱仪(配有二极管阵列检测器) 美国安捷伦公司；Anke TGL-16G 高速台式离心机上海安亭科学仪器厂；超声波振荡器上海科导超声仪器有限公司；R-210旋转蒸发器瑞士Buchi Labortechnik AG 公司。

1.3 方法1.3.1 样品前处理称取2～5g 均质样品，置于25mL 离心管中，加入10mL 提取液，超声提取20min ，以1000r/min 离心10min 后，上清液转移至鸡心瓶中，再加入10mL 提取液，重复上述操作，合并提取液，过0.45μm 滤膜，待测。

如样品的浓度过低，将提取液于45℃真空浓缩后定容至10mL 容量瓶中，样液用高速离心机以12000r/min 离心10min ，取上清液在仪器工作条件下进行测定.。

1.3.2 色谱条件色谱柱：Agilent C 18柱(4.6mm ×150mm ，5μm)；流动相：A ：0.02mol/L 乙酸铵溶液；B ：甲醇，梯度洗脱；流速：1.0mL/min ；参数见表1；柱温：25℃；检测波长：碱性橙2，430nm ；碱性橙21、碱性橙22，480nm ；碱性玫瑰精，550nm 。

表 1流动相梯度Gradient composition of mobile phaseTable 1%时间/min 0712162528乙酸铵缓冲液50303005050乙腈50707010050502 结果与分析2.1标准图谱和样品图谱在色谱条件下，碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22、碱性玫瑰精的保留时间分别在12.7、10.5、13.5、18.1min ，标样图谱见图1。

按照色谱峰的保留时间定性，外标法峰面积定量。

样品图谱见图2，由图2可以看出，样品中未检测到碱性橙21、碱性橙22，因此，后续实验中未做样品的关于碱性橙21、碱性橙22含量的讨论。

䯈/min510152025m A U50100150200250300350⺅ ‭2䯈/min0510152025m A U50100150200250300⺅ ‭21⺅ ‭22䯈/min510152025m A U50100150200250300350⺅ ⥿⩄㊒图 1 三种碱性橙和碱性玫瑰精标准图谱HPLC chromatograms of four dye standardsFig.1䯈/min510152025m A U0100200300400500⺅ ‭2䯈/min510152025m A U0100200300400500 䯈/min0510152025m A U0100200300400500碱性玫瑰精样品中碱性橙和碱性玫瑰精图谱图 2HPLC chromatograms of cayenne pepper extractFig.22.2吸收波长的选择分别取适量的标样用甲醇-水(体积比1:1)溶液溶解，配制成质量浓度为10mg/L 的溶液，采用二极管阵列检测器在190～600nm 范围内进行在线光谱扫描，结果碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22、碱性玫瑰精的最大检测波长分别为439、485、485、550nm 。

为了可以同时测定其他黄色染料，减少对测定的干扰，选择430、480、550nm 为检测波长。

2.3流动相梯度条件的确定本实验采用0.02mol/L 醋酸铵缓冲液和甲醇体系作为流动相，在等度条件下，不能得到很好的分离度，峰形也受到影响，曾进行了大量的梯度洗脱条件作比较，结果确定最佳梯度条件，见表1。

在上述梯度条件下在较短的时间内可以将4个峰完全分离，也没有干扰，重现性和峰形都较好。

2.4 样品预处理条件的选择2.4.1提取时间的选择考察了10、15、20、25min 不同提取时间对样品中染料色谱峰面积的影响，结果见图3。

10152025䯈/minm A U图 3 提取时间对色谱峰面积的影响Effect of extraction time on peak areaFig.3从图3可以看出：随着提取时间的延长，样品中染料的测定值有所升高，但提取时间为20min 和25min ，重复提取2次时，染料测定值几乎无差别，因此选择提取时间为20min 。

2.4.2提取剂的选择任选一添加碱性染料的辣椒粉，分别加入不同的提取剂，超声提取后20min 上机测定，结果见表2。

表 2不同提取剂提取染料的结果(n ＝3)Table 2Effect of different extraction solvents on the recovery of basicorange 2 and basic rhodaminemg/kg无水乙醇乙腈甲醇乙腈:水(7:3，V /V )甲醇:水(7:3，V /V )正己烷:乙酸乙酯(1:1，V /V )碱性橙2 10.116.91131701658.5碱性玫瑰精140128705964961182从表2可以看出，不同的提取剂提取效果差异较大，特别是国家现行的标准中，大部分提取剂都采用了无水乙醇，碱性玫瑰精提取采用了正己烷:乙酸乙酯(1:1)；大多数文献[8-13]也采用了无水乙醇为提取剂；也有部分文献采用了酸化甲醇溶解并用饱和正己烷萃取[14]或过柱净化[15]的方法，但步骤繁琐；用无水乙醇作为提取剂，提取的效果很不理想；乙腈与水以7:3混合作为提取剂，提取效果大大提高；甲醇:水＝7:3(V /V )与乙腈:水＝7:3(V /V )的提取效果相当，考虑到乙腈对人体及环境的影响，本实验选用甲醇:水＝7:3为提取剂。