血管内皮生长因子受体
血管内皮生长因子及其受体的研究进展
（ 收稿 日期 ： ２ ０ １ ６ － １ １ － ２ ７ ）
血 管内 皮 生 长 因子 及其 受体 的研 究 进展
刘朝辉 高 晓 虹
血管 内皮生 长因子（ Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ ） 家族及其 受体在血管生成 和 血管通 透性 中有很重要 的作用 。当前 Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ家族 有 ７个 ， 分
别 是 Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ ． Ａ、 Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ ． Ｂ、 Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ ． Ｃ、 Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ — Ｄ、 Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ ． Ｅ 、 Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ ． Ｆ 及 胎盘生长因子 （ ｐ ｌ ａ ｃ ｅ ｎ ｔ ａ ｇ ｒ ｏ ｗ ｔ ｈ ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ ， Ｐ Ｉ Ｇ Ｆ ） 。 Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ家族 的 受 体分为酪氨酸激酶受体 ［ Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ Ｒ ． １ （ 或 Ｆ ｉ ｔ ． １ ） 、 Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ Ｒ ． ２ （ 或
２ ０ １ １ ， ２ ６ （ ７ ） ： ２ ２ ４ ４ — ２ ２ ５ ０
［ １ ５ ］Ｎ ｉ ｃ ｈ ｏ ｌ ｌ Ｄ Ｄ ， Ａ ｈ ｍ ｅ ｄ Ｓ Ｂ ，Ｌ ｏ ｅ ｗ ｅ ｎ Ａ Ｈ ． Ｄ ｅ ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｎ ｇ ｋ ｉ ｄ ｎ ｅ ｙ ｆ ｕ ｎ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｃ ｒ ｅ ａ ｓ ｅ ｓ ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｅ ｖ ａ ｌ ｅ ｎ ｃ ｅ ｏ ｆ ｓ ｌ ｅ ｅ ｐ ［ Ｊ ］ ． Ａ ｐ ｎ ｅ ａ Ｎ ｏ ｃ ｔ ｕ ｎａ ｒ ｌ Ｈ ｙ ｐ ｏ ｘ ｉ ａ
［ １ ７ ］Ｋ ｒ ｉ ｅ ｇ ｅ ｒ Ｊ ， Ｓ ｃ ｈ ｍ ｉ ｄ ｔ Ｍ， Ｓ ｏ ｆ ｒ ｚ ａ Ｅ， ｅ ｔ ａ １ ． Ｕ ｉ ｒ ｎ ａ ｒ ｙ ｅ ｘ ｃ ｒ ｅ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｇ ｕ ａ ｎ ｏ ・
ｓ ｉ ｎ ｅ ３ 一 ５ 一 ｃ ｙ ｃ ｌ ｉ ｃ ｍｏ ｎ ｏ ｐ ｈ ｏ ｓ ｐ ｈ ａ ｔ ｅ ｄ ｕ ｉｎ ｒ ｇ ｓ ｌ ｅ ｅ ｐ ｉ ｎ ｏ ｂ ｓ ｔ ｒ ｕ ｅ ｔ ｉ ｖ ｅ ｓ ｌ ｅ ｅ ｐ
血管内皮生长因子及其受体的生物学特点
血管内皮生长因子及其受体的生物学特点血管内皮生长因子（VEGF）是一类广泛存在于哺乳动物中的多肽分子，主要通过与其受体结合，在血管内皮细胞生长、迁移和存活等方面发挥着重要的作用。
VEGF家族成员包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D和VEGF-E等，其中VEGF-A是目前研究最多的成员。
VEGF-A主要通过与其在血管内皮细胞表面的受体结合，如VEGFR-1（Flt-1）和VEGFR-2（KDR或Flk-1），发挥其生物活性。
VEGF-A与VEGFR-2结合后可以引起多种的生物学效应，如刺激血管内皮细胞增殖、迁移和微血管形成等。
VEGF-A与VEGFR-1结合后则主要起到负调节的作用，调节VEGF-A和VEGFR-2之间的信号传导。
VEGFR-2是VEGF-A信号转导的主要受体。
它是一种在血管内皮细胞中主要表达的酪氨酸激酶受体。
VEGF-A与VEGFR-2结合，激活VEGFR-2的酪氨酸激酶活性，进而引起下游的信号转导通路的激活，如Ras/Raf/MEK/ERK、PI3K/Akt和Src等信号通路。
这些信号通路的激活后，会导致多种细胞生理功能的变化，包括细胞增殖、迁移、微血管形成和存活等。
在VEGF的信号传导过程中，VEGF与受体的结合是一个非常紧密的过程。
VEGF通过其结构域与VEGFR的结构域进行相互作用，并形成可靠的结合。
VEGF结构域与VEGFR结构域之间存在着多个非共价的相互作用，包括氢键、范德华力、电荷配对等。
这些相互作用使得VEGF与其受体的结合具有高度特异性和亲和力。
此外，VEGF的生物学特点还包括其高度的选择性和多功能性。
VEGF家族成员具有不同的组成和结构，使得它们在不同的生物过程中发挥不同的作用。
例如，VEGF-A主要参与血管生成和血管内皮细胞增殖、迁移等过程，而VEGF-C和VEGF-D参与淋巴管生成和淋巴血管内皮细胞的增殖、迁移等过程。
总之，血管内皮生长因子及其受体在血管发生、维持和修复等过程中扮演着重要的角色。
血管内皮生长因子及其受体在正常绒毛及葡萄胎组织中的表达及意义
第25卷第6期2004年12月西安交通大学学报（医学版）Journal of Xi'an Jiaotong University （Medical Sciences ）7ol8259o86:ec82004血管内皮生长因子及其受体在正常绒毛及葡萄胎组织中的表达及意义安瑞芳1，周 玮2，王 姝1，朱克修1，张 晨1（1.西安交通大学第一医院妇产科，陕西西安 710061；2.重庆医科大学第二附属医院妇产科，重庆 400010）摘要：目的 观察血管内皮生长因子（VEGF ）及其受体（Flk-1）在正常绒毛及葡萄胎组织中的表达，探讨其在葡萄胎发生、转归及恶变方面的作用及意义。
方法 应用免疫组织化学方法检测VEGF 及其受体Flk-1在葡萄胎组织中的表达。
结果 VEGF 、Flk-1在葡萄胎中的表达与葡萄胎的孕周、胎次及病理类型无明显相关性；但在疾病发展中，VEGF 和受体Flk-1具有促进血管生成及增加滋养细胞侵袭性的双重作用。
结论 VEGF 和其受体的表达水平可以作为反映滋养细胞生物学行为、判断病情发展和预后的一项新指标。
关键词：血管内皮生长因子；血管内皮生长因子受体；葡萄胎；绒毛中图分类号：R737・33 文献标识码：A 文章编号：1671-8259（2004）06-0573-03The expression of VEGF and VEGF receptor （Flk-1）in hydatidiform mole and its significanceAn Ruifang ，Zhou Wei ，Wang Shu ，Zhu Kexiu ，Zhang Chen （Department of Obstetrics and Gynecology ，First Hospital ofXi’an Jiaotong University ，Xi’an 710061，China ）ABSTRACT ：Objective ;o ins<ect t=e e><ression of 7?@A and its rece<tor （AlBC 1）in t=e norDal villous and=ydatidiforD Dole tissue ，and to discuss its significance in t=e develo<Dent ，transforDation and Dalignancy of =ydatidiforD Dole8Methods ;=e e><ression of 7?@A and 7?@A rece<tor （AlBC 1）in =ydatidiforD Dole Eas investigated using iDDuno=istological staining Det=od8ResuIts ;=ere Eas no significant correlation FetEeen t=e e><ression of 7?@A and AlBC 1in =ydatidiforD Dole s<eciDen and its clinical <araDeters ，suc=as gestational EeeB ，tiDes of <arturition and <at=ological classification8GoEever ，7?@A and AlBC 1could Fot=<roDote t=e develo<Dent of Flood vessel and en=anced t=e invasive ca<aFility of tro<=oFlatic cells in t=e Dole8ConcIusion 7?@A and AlBC 1can Fe a neE inde>E=ic=could reflect t=e Fiological activities of tro<=oFlatic cells and =el<us Hudge t=e <rogression and <rognosis of t=is disease8KEY WORDS ：vascular endot=elial groEt=factor （7?@A ）；7?@A rece<tor （AlBC 1）；=ydatidiforD Dole ；gestationaltro<=oFlastic tuDor （@;;）收稿日期：2004-02-05 修回日期：2004-07-12作者简介：安瑞芳（1963-），女（汉族），副主任医师，医学硕士.研究方向：妇科肿瘤.Tel ：（029）85324014；E-mail ：anruifang@葡萄胎的发生与许多因素有关，绝大多数葡萄胎经清宫可有效地治愈，但仍有约15%～20%患者发展为妊娠滋养细胞肿瘤（gestational trophoblastictumor ，GTT ）［1］。
血管内皮生长因子及其受体与骨肉瘤关系的研究进展
ａｎｄ ｈｉｇｌｌ ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ．Ｔｈｅｒｅ
ｅｔｏｎ
ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｉｎ
ｃｅｒｅｂｒｕｎｌ，ｋｉｄｎｅｙ，ｌｉｖｅｒ，ｓｐｌｅｅｎ，ａｂｄｏｍｉｎａｌ ｓａｌｉｖａｒｙ ｓｌａｎｄ ａｎｄ ｓｋｅｌ—
ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ａｎｄ ａｎｉｍａｌｓ．ＶＥＧＦ ｐｒｏｍａｔｅｓ ｔｈｅ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｍｉｔｏｔｉｃ ｄｉｖｉｓｉｏｎ，ｓｔｉｍｕｌｕｓ ｃｅｌｌ ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｖａｓｃｕｌａｒ
１．２
ＶＥＧＦ—Ｃ是目前肿瘤的一个研究热点，人类
ＶＥＧＦ；ＶＥＧＦＲ；Ｏｓｔｅｏｓａｌｌｅｏｍａ；Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ
【Ｋｅｙ Ｗｏｒｄｓ】
血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒ
ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，
而完成，在正常生理性血管生长过程中，如胚胎形成、骨骼生 长等。ＶＥＧＦ信号代表重要的限制酶（ｒａｔｅ・ｌｉｍｉｔｉｎｇ ｓｔｅｐ）ＬＳ］， 通常表达量较少。但在病理情况下，ＶＥＧＦ的异常表达和缺 氧可刺激ＶＥＧＦ表达上调，通过与其特异性受体ＶＥＧＦＲ结 合，引起一系列信号传导，对内皮细胞具有强烈的促有丝分 裂作用，刺激血管内皮细胞增殖和血管通透性增加，促进新 生血管形成，改善组织供血。艾莉等”ｏ在肝癌缺血再灌注损 伤研究中发现，缺氧促进了癌旁组织转移相关基因ＶＥＧＦ的 表达。 ＶＥＧＦ家族的５个受体，即ＶＥＧＦＲ－ｌ（Ｆｉｔ－１）、ＶＥＧＦＲ．２ （ＫＤＲ／Ｆｌｋ．１）、ＶＥＧＦＲ－３（ｎｔ．４）、Ｎｐｎ・ｌ（Ｎｅｕｒｏｐｉｌｌｉｎ一１）和
监废鲑擅堂盘查兰Ｑ！Ｑ生鱼旦筮！墨鲞筮鱼翅垦ｂｉ望竺曼ｇ！鲤趔Ｑ翌！尘竺臣：』塑：垫！Ｑ：！塑：！！：堕Ｑ：鱼
血管内皮细胞生长因子受体及其抑制剂的肿瘤治疗研究
管 形 成 。抑 制 血 管 内皮 细胞 生长 因子 介 导 的途 径 可使 肿 瘤 缩 小 ， 目前抗 血 管 内皮 细 胞 生 长 因子 治
疗 已成 为靶 向治 疗 的 热 点 。
关 键 词 ： 管 生 成 ； 管 内皮 生长 因 子 ； 管 内皮 生长 因子 受 体 血 血 血
Ｓ ｕ ｙｏ Ｅ Ｆ ｎ ｓＩ ｈｂｔｒ ｈ ｒａｍｅ ｔｏ ｕ ｒ Ｗ Ｎ ｉ － ａ ． Ｈ Ｏ Ｌ ｇ ｄ ． Ｉ ｔ ｄ ｆＶ Ｇ Ｒ ａ ｄ ｉ ｎ ｉｉ ｓｉ ｔｅ Ｔ ｅ ｔ ｎ Ｔ ｍｏ ｓ ｔ ｏ ｎ ｆ Ａ Ｇ Ｙ ｇｊ ｎ Ｚ Ａ ｉ － ｉ Ｓ ｎ ｕ ｎ
血 管 内皮细胞 生长 因子 受体 及 其抑 制剂 的肿 瘤 治疗 研 究
王 英 娟 ， 玲 娣 ， 玉玲 赵 司
（ 天津 市 第 四中 心 医 院 肿瘤 血 液 科 ， 津 ３ｏ４ ） 天 ０ ｌ０
中图 分 类 号 ： ７ Ｒ３ 文 献 标 识码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ６２ ８ （ｏ ７ ２ ．５ ６０ １０ ．Ｏ ４ ２ ｏ ） １６ ．３ ０
简述血管内皮细胞生长因子_VEGF_的研究进展_常影
学术探讨Academic study简述血管内皮细胞生长因子（VEGF）的研究进展常影1姜新21.吉林医药学院基础学院药理教研室，吉林吉林132013；2．吉林医药学院护理学院基护教研室，吉林吉林132013【关键词】血管内皮细胞生长因子；VEGF；研究【中图分类号】R322.1+2【文献标识码】A【文章编号】1007－8517（2010）21－0065－01VEGF受体（VEGFR）只存在于血管内皮细胞表面，具有酪氨酸激酶活性。
目前已确认的VEGFR有2种，即：胎－肝激酶－1/含激酶插入区受体（flk－1/KDR）及fms 样酪氨酸激酶（flt－1）共属于酪氨酸激酶受体［1］。
KDR 具有强烈的酪氨酸激酶活性，是血管形成的主要信号传递［2］，Habeck等人通过研究发现［3］，它具有明显的趋化作用和促有丝分裂活性，活化后可引起血管内皮细胞的分裂、增殖和迁移，说明KDR是血管形成的主要调控因子。
flt－1对VEGF的亲和力强于KDR10倍，但其酪氨酸激酶活性却大大弱于前者，对生理条件下胚胎血管的形成具有负向调节作用。
但是，Hiratsuka等人研究发现［2］，不同条件下，flt－1具有促进或抑制血管生成的双重活性。
而且，这两类受体在血管发育及血管通透性调节中可能起协同作用［4］。
1VEGF在生物学中的功能1.1增加血管内皮细胞的通透性VEGF是已知最强的血管通透剂，主要作用于毛细血管后静脉和小静脉，增加血管内皮的通透性，使血浆蛋白溢出血管外，致纤维蛋白凝结，形成血管生成的临时基质，同时促间质细胞进一步形成成熟的血管基质，从而促血管生成。
其机制可能是血管内皮细胞胞质中存在一引起VVO（Vascular－vascular organ-elle）的作用［5］。
其增加血管通透的作用比组织胺强5000倍，快速（5min）而短暂（持续30min）且不伴有肥大细胞的颗粒减少，不为组织胺抑制剂所阻断，并使血浆蛋白包括纤维蛋白原外渗，形成纤维素网络，为毛细血管芽延伸生长提供良好基质。
血管内皮生长因子(专业知识值得参考借鉴)
血管内皮生长因子(专业知识值得参考借鉴)一概述血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor，VEGF），又称血管通透因子（vascularpermeabilityfactor，VPF）是一种高度特异性的促血管内皮细胞生长因子，具有促进血管通透性增加、细胞外基质变性、血管内皮细胞迁移、增殖和血管形成等作用。
血管内皮生长因子有5种不同的亚型，根据氨基酸的数目命名为：VEGF121、VEGF145、VEGF165、VEGF189、VEGF206，其中VEGF165为VEGF主要存在形式。
二家族及受体1.家族血管内皮生长因子是一个家族，包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E和胎盘生长因子（PGF）。
通常VEGF即VEGF-A。
VEGF-A可促进新生血管形成和使血管通透性增加，VEGF-B在非新生血管形成的肿瘤中起作用，VEGF-C和VEGF-D在癌组织的新生血管和新生淋巴管的形成过程中起作用，VEGF-E也是一种潜在的新生血管形成因子，PGF促进新生血管形成，使血管通透性增加，在实验性脉络膜新生血管中PGF的表达明显增高。
2.受体与血管内皮生长因子进行特异性结合的高亲和力受体称为血管内皮生长因子受体（vascularendothelialgrowthfactorreceptor，VEGFR），主要分为3类VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3。
VEGFR-1和VEGFR-2主要分布在肿瘤血管内皮表面，调节肿瘤血管的生成；VEGFR-3主要分布在淋巴内皮表面，调节肿瘤淋巴管的生成。
三生物学功能1.促进内皮细胞增生VEGF是一种血管内皮细胞的特异性有丝分裂原，在体外可促进血管内皮细胞的生长，在体内可诱导血管增生。
尤其是在低氧环境下，VEGF与内皮细胞膜上VEGF 受体结合，引起受体的自身磷酸化，从而激活有丝分裂原活化蛋白激酶（MAPK），实现VEGF的有丝分裂原特性，诱导内皮细胞增生。
血管内皮生长因子家族及其受体的结构、功能分析及应用研究进展
染 色 体 长 臂 ， 其 基 因 结 构 的 研 究 显 示 ４， Ｅ Ｆ基 因 由 ８ 对 １Ｖ Ｇ 个 外显 子组 成 ， 一 因转 录后 经 Ｒ Ａ 的 差 异 剪接 可 形 成 不 同 基 Ｎ 同 的单 体 、 Ｖ Ｇ １１Ｖ Ｇ １５ Ｖ Ｇ １９以 及 Ｖ Ｇ ２ ６等 ４ 以 Ｅ Ｆ２ 、 Ｅ Ｆ ６ 、Ｅ Ｆ ８ Ｅ Ｆ０ 种 单 体 最 为 常 见 。最 近 还 发 现 存 在 另 一 种 单 体 Ｖ Ｇ １５ Ｅ Ｆ４ ｂ 。 Ｊ 在 这些 单体 中 ， Ｅ Ｆ２ Ｖ Ｇ １１由外 显 子 １ ５ 及 ８等 部 分 编 码 ， 到
Ｖ Ｇ １ ５ Ｖ Ｇ Ｉ１的 基 础 上 含 有 外 显 子 ６的 编 码 ， Ｅ Ｆ ６ Ｅ Ｆ ４ 在 Ｅ Ｆ２ Ｖ Ｇ １５ 比 Ｖ Ｇ １ １ 广 显 Ｆ ７的 编 码 ， Ｅ Ｆ ８ Ｅ Ｆ２ 多 外 Ｖ Ｇ １９在 Ｖ Ｇ １ ５基 础 Ｅ Ｆ６ 上 还含 有外 显 子 ６的 编 码 ， Ｅ Ｐ ０ Ｖ Ｇ ２ ６较 Ｖ Ｇ １９多 了 一 段 插 Ｅ Ｆ８
维普资讯
ｌ２ ９
医学 综 述 ２Ｏ ０２年 第 ８卷第 ４ 期
Ｍ ｄ ａ Ｒ ｐ ａ ０ ２ Ｖ １ ． ０４ ｅｉ ｌ ￣ａｉ ｅ２Ｏ ， ｏ． Ｎ ． ｃ ｍｈ ８
血管内皮生长园子家族及其受体的结构、 功能分析及应用研究进展
朱 建伟 （ 综述】郁 宝铭 （ 枝） ， 审
３ Ｖ Ｇ 、 ｑＧ Ｒ 的 生 物 学 功 能 爰 其 应 用研 究 进 展 Ｅ Ｆ ￣Ｅ Ｆ ，
痘疮病 毒 Ｖ Ｇ ， ￣ Ｇ 等 ５种 因子 ， 些 因 子组 成 了 Ｅ Ｆ 即 Ｅ ＦＥ 这 ＶＧ Ｅ Ｆ家 蘸 。 其 中对 原 型 Ｖ Ｇ Ｅ Ｆ的 基 因 及 蛋 白质 结 构 的 研
血管内皮细胞生长因子及受体对脑损伤的保护作用
保 护和修复 的作用。本文对其生物学效应 、 表达 的规律和外源性治疗可能性等方面综述 ， 认为应用 Ｖ Ｇ Ｅ Ｆ及
受体对脑损伤具有保护意义 ， 可望成为一种新的治疗脑损伤的方法 。
关 键词 ：脑 损 伤 ；脑 保 护 ；血 管 内皮 ；细 胞 生 长 因 子 ；受 体
中图 分 类号 ：Ｒ６ １１ ５ 、 文 献 标 识 码 ：Ａ
ｅｆ ｃ ｃ ｎ ｅｏ ｘ ｒ ｓｉ ｎ ａ ｄ ａ ｆｅ ｔ，ｈａ ｇ ｆｅ ｐ ｅ ｓｏ ｎ ｄｍｉｉｔａｉｎ ｏ ｎ ｓｒ ｔｏ ｆＶＥＧＦ／ＶＥＧＦ ａｅ ｒｖ ｅ ｄ， ｔ ｈ ｏ ｃ ｕ ｉ ｈ ｔＶＥＧＦ Ｒ ｒ ｅ ｉｗｅ ｗｉｈ ｔ ｅｃ ｎ ｌ ｓｏｎｔ ａ ／ＶＥＧ—
Ｆ ａ ｉ ｉｃ ｎ ｐｏ ｃ ｖ ｆ ｃ ｏ ｒ ｎｉ ｕ ． Ｒ ｈ ｓ ｇ ｆ ａ ｔ ｒｔ ｔ ｅｅ ｅｔ ｎｂ ａ ｎ ｒ ｓｎ ｉ ｅｉ ｆ ｉ ｊｙ
Ｋｅ ｏｄ ：ｂａ ｎ ｒ；ｂａ ｒｔ ｔｎ ａｃｌ ｎｏｈｌ ｍ；ｃｌｇｏ ｔ ｆ ｔ ；ｒｃｐｏ ｙｗ ｒ ｓ ｒｉ ｉ ｕ ｎ ｊｙ ｒｉ ｐｏ ｃ ｏ ；ｖｓｕａ ｅｄｔｅｕ ｎ ｅｉ ｒ ｉ ｅ ｒｗｈ ａ ｏ ｅｅ ｔ ｌ ｃｒ ｒ
应。体 内一些其它的因素也参与了 Ｖ Ｇ Ｅ Ｆ的调节 ， 白介 素一 如
６ Ｉ－） 转 化 生 长 因子 （ Ｇ ） 血 小 板 源 内 皮 细 胞 生 长 因 （Ｌ６ 、 ＴＦ及
子 （ Ｄ Ｆ 。 ＰＧ ）
研究表明 ， Ｅ Ｆ及 Ｖ Ｇ ＶＧ Ｅ Ｆ受体（ Ｅ Ｆｒｃｐｏ， Ｅ Ｆ 不仅 Ｖ Ｇ ｅｔ Ｖ Ｇ Ｒ） ｅ ｒ
转 录 水平 ， 时 发 生 在 转 录 后 水 平 。Ｖ Ｇ 同 Ｅ Ｆ通 过 ｆｓ样 酪 氨 ｍ
可溶性血管内皮生长因子受体-1与胎盘生长因子在子痫前期诊断中的应用
平 降低 。 总结 ｓ Ｆ ｈ 一 １ 、 Ｐ Ｌ Ｇ Ｆ预 测 诊 断 子 痫前 期发 生及 病 情 严 重 程 度 的研 究 进 展 ， 探讨 ｓ Ｆ ｌ ｔ 一 １ 、 Ｐ Ｌ Ｇ Ｆ在 子 痫 前 期 临床 诊
断 中 的意 义 。
【 关键词】 先兆子痫 ；血管 内皮生长 因子受体一 ｌ ；胎盘生长 因子 Ｔ ｈ ｅ Ｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｉ ｆ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｏ ｆ Ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ Ｓ ｔ ｕ ｄ ｉ ｅ ｓ ｆ ｏ ｓ Ｆ ｌ ｔ 一 １ ａ ｎ ｄ Ｐ Ｌ Ｇ Ｆ ｉ ｎ Ｐ ｒ ｅ ｅ ｄａ ｍｐ ｓ ｉ ａ Ｙ Ａ ＮＧ Ｚ ｈ ｉ － ｙ ｕ ， Ｃ Ｈ Ｅ ＮＬ ｉ ｆ ｅ ｎ ． Ｍｏ ａ ｎ ｓ ｈ ａ ｎ Ｍａ ｔ ｅ ｒ ｎ ａ ｌ
ａ ｎ ｇ ｉ ｏ ｇ ｅ ｎ ｅ ｓ ｉ ｓ ａ ｎ ｄ ｔ ｒ ｏ ｐ ｈ ｏ ｂ ｌ ａ ｓ ｔ ｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ． Ｔ ｈ ｅ ｓ ｅ ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ｌ ａ ｆ ｕ ｎ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｃ ａ ｎ ｂ ｅ ｂ ｌ ｏ ｃ ｋ ｅ ｄ ｂ ｙ ｓ Ｆ ｈ 一 １ ｒ ｅ ｃ ｅ ｐ ｔ ｏ ｒ ， ｓ Ｆ ｈ 一 １ ｐ ｌ ａ ｙ ｓ ａ ｎ ｉ ｍｐ ｏ ｒ －
・
２ ２ ２・
国际 妇 产 科 学 杂 志 ２ ０ １ ３年 ６月 第 ４ Ｏ卷 第 ３期 Ｊ Ｉ ｎ ｔ Ｏ ｂ ｓ ｔ ｅ ｔ Ｇ ｙ ｎ ｅ ｃ ｏ ｌ ， Ｊ ｕ ｎ ｅ ２ ０ １ ３ ， Ｖ ｏ １ ． ４ ０， Ｎ ｏ ． ３
・综Leabharlann 述 ・ 可溶性血管 内皮生长 因子 受体一 １ 与胎盘 生长 因子在子痫前期 诊断 中的应用
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血管内皮生长因子受体对宫颈癌细胞凋亡的效应研究(一)
作者：刘琰，杨婉华，马湘一，陈睿，汪蕊，卢运萍，马丁，王世宣
【摘要】目的研究血管内皮生长因子受体（）在人宫颈癌细胞凋亡过程中的作用。
方法用基因重组方法构建人反义基因真核表达载体，用电穿孔法转染人宫颈癌细胞系Hela细胞。
采用WesternBlot分析转染前后细胞中蛋白的变化。
利用Hoechst33258染色和流式细胞仪观察转染后Hela细胞的凋亡情况。
结果转染反义
质粒后,Hela细胞的蛋白表达水平明显下降，细胞凋亡率明显增加(P0.01)。
结论抑
制的表达可促进宫颈癌细胞的凋亡，V可能是肿瘤基因治疗的一个潜在新靶点。
【关键词】反义核酸凋亡；宫颈癌
Keywords：；Antisensenucleicacid；Apoptosis；Cervicalcancer
血管内皮生长因子受体属于酪氨酸激酶受体家族,在胚胎发生的初始阶段存在于所有的内皮细胞，随后定位于小静脉和淋巴管，是成熟淋巴管内皮细胞的特异性标志物1]。
主要通过与其配体、结合后，促进淋巴内皮细胞的增殖、分化，诱导淋巴管生成，促进肿瘤细胞的侵袭和转移2]。
在肿瘤组织中可见肿瘤周边的新生淋巴管、扩张的淋巴管、有癌栓的淋巴管内皮细胞呈高表达3]。
现有研究表明在多数肿瘤细胞上也有相应表达4]，但关于其在肿瘤细胞中的效应及作用机制尚不清楚。
我们自行设计了的反义重组质粒，通过电穿孔转染法瞬时转染人宫颈癌细胞株Hela细胞，观察反义封闭VE后Hela细胞凋亡情况的变化，对在宫颈癌细胞中的作用及其机制进行初步探讨。
1材料与方法
1.1实验材料
1.1.1主要试剂与仪器培养基DMEM、Trizol购自美国GibcoBRL公司；胎牛血清为杭州四季青生物工程公司产品；逆转录酶、载体购自美国Promega公司；PCR引物购自上海博亚生物技术有限公司；兔抗人多克隆抗体、兔抗人多克隆抗体、HRP标记的羊抗兔IgG均购自美国SantaCruz公司；ECL显色试剂盒购自美国Pierce 公司。
1.1.2细胞培养人宫颈癌细胞株Hela购自美国典型物种保藏中心（ATCC）,培养在含10％胎牛血清的DMEM中，置饱和湿度5％CO2，37℃恒温培养箱中培养。
反义核酸载体的构建
目的基因的制备根据NCBIGenebank登录的的cDNA序列,利用Primer5.0设计胞外1～3区的引物，上游引物设计BamHⅠ酶切位点，下游引物设计EcoRⅠ酶切位点，上游引物序列为：3’下游引物序列为：。
按Trizol说明书从胎盘组织中提取总mRNA(由华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科提供)，再以方法大量扩增目的片断。
PCR循环条件：94℃预变性5min、94℃变性30s、56℃复性30s、72℃延伸45s，共35个循环，全部循环结束后，于72℃做10min终止前延伸。
1%琼脂糖凝胶电泳检测，PCR产物纯化试剂盒纯化目的片断。
1.2.2反义重组质粒的构建按常规分子生物学方法，将目的基因和载体连接。
连接产物转化，挑取阳性克隆,小量摇菌后酶切初步鉴定、测序。
1.3基因转染及细胞分组
参考《分子克隆》采用电穿孔转染法，将电击完的细胞转移至已加入适量培养基的35mm 培养皿中，培养皿置于含5％CO2的37℃孵箱,24h后观察转染效率。
细胞分组：空白组（不做处理的Hela细胞），对照组（转染空质粒的Hela细胞），实验组（转染反义质粒的Hela细胞）。
1.4WesternBlot分析转染前后细胞蛋白的表达
分别提取空白组细胞、转染空载体及转染反义质粒48h的Hela细胞总蛋白，参考《分子克隆》实验方法，按ECL显色试剂盒说明书曝光成像。
1.5转染细胞生物学效应的观察
1.5.1Hoechst33258观察转染前后细胞形态学的变化将空白组、对照组和实验组的Hela细胞分别置于预先放入玻片的六孔板中，待24h后取出玻片，PBS漂洗，固定，待干燥后由Hoechst33258室温避光染色30min，封片后荧光显微镜观察。
1.5.2流式细胞法检测Hela细胞凋亡率分别收集空白组、对照组和实验组48h后的Hela细胞，常规方法行PI染色后，上机检测。
1.6统计分析Hela细胞凋亡率以±s表示，用t检验在SPSS11.5统计软件上分析差异显著性，以P0.05为有统计学意义。
2结果
反义表达载体构建及鉴定
用1％琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，970bp处有明显扩增条带，其大小与预期目的基因片段相吻合，构建的反义表达载体经BamHⅠ，EcoRⅠ双酶切产生了两条带：载体片断（4.7kb）和目的片断（970bp）。
对酶切正确的质粒进行测序，结果表明其序列与插入方向正确，见图1。
1:1kbDNA标准；2:VEGFR产物（970bp）；3:双酶切产生的条带，可见目的条带（970bp）和载体片断（4.7kb）。