临床检验技师-微生物检验(2020)讲义第十四章-肠杆菌科及检验
微生物学检验肠道杆菌概述
抵抗力
胆盐、煌绿对该菌有抑制作用 对氯霉素、链霉素、庆大霉素敏感，但 易产生耐药性
临床意义
致病物质：K抗原、菌毛、内毒素、肠 毒素（LT、ST） 所致疾病： 肠外感染：多为机会感染，表现为泌尿 系感染（多见），胆囊炎、腹膜炎等 肠内感染：由致病大肠埃希菌引起，表 现为腹泻。
微生物学检验
标本采集： 肠外感染：根据病变部位不同采集不同 标本，如血液、尿液、分泌物等 肠内感染：采集新鲜粪便
分子 生物 学法
基因探针
ST 家兔或小白鼠肠袢试验
乳鼠灌胃试验 ELISA
基因探针
EPEC的鉴定
生化反应符合大肠埃希菌 血清学分型 先用多价诊断血清做玻片凝集试验，如凝 集再用单价诊断血清确定血清型
EIEC的鉴定
生化反应特点（与志贺菌相似） 发酵葡萄糖产酸不产气 不发酵或迟分解乳糖 多数菌株动力阴性 与志贺菌的鉴别： 毒力测定：豚鼠眼结膜试验 血清学分型：O152、O124
遗传变异：S-R变异、H-O变异 临床意义：
☆致病物质：菌毛、表面抗原、内毒素、 肠毒素
☆传染途径：肠道传染、肠道外传染 ☆所致疾病：
○肠道致病菌引起肠道传染病（细菌性痢疾、 伤寒等）
○条件致病菌：是医院感染的主要病原
常用培养基
选择性培养基： ☆SS平板：含乳糖、中性红指示剂、胆盐、煌 绿、硫代硫酸钠等 ☆ Mac平板：含乳糖、中性红指示剂、胆盐等 ☆中国蓝平板：含乳糖、中国蓝和玫瑰红酸指 示剂、 ☆ EMB平板：含乳糖、伊红和美蓝指示剂
致病大肠埃希菌种类
菌株 ETEC EPEC EIEC EHEC EAggec
侵袭部位 小肠
小肠 结肠 结肠 小肠
疾病与症状
致病机制
旅行者腹泻、婴幼 儿腹泻、水样便、 腹痛等
肠杆菌科的鉴定
肠杆菌科的鉴定1、标本要求：1.1 尽量用药前采集标本。
1.2 痰液：病人清晨咳痰于无菌、防漏小塑料盒内，切勿唾液送检。
1.3 尿液：病人留取12h尿液，送检。
1.4 粪便：病人留取粪便5 10g，送检。
1.5 脑脊液及其它无菌体液：用无菌瓶直接送检。
血标本不要冷冻。
1.6 不可接受的标本：干的拭子、蜡盒、未消毒容器、留取24h后的尿或痰、破裂的瓶子、标本泄漏、标本无标签。
2、仪器35℃孵箱、普通光学显微镜3、试剂羊血平皿、麦康凯平皿、硝酸盐培养管、葡萄糖蛋白胨水、葡萄糖酸盐培养管、苯丙氨酸脱氨培养管、氨基酸脱羧培养管、拘橼酸盐培养管、尿素培养管、糖醇发酵管、湖南长沙天地人肠杆菌鉴定板。
4、试验方法及原理：4.1 硝酸盐还原试验：方法：将待检菌接种硝酸盐培养基中，孵育过夜，加入等量A、B液1～3滴，观察结果。
结果：红色为“+”，即还原硝酸盐。
注意点：（1）．培养基不应含亚硝酸盐，以避免假阳性。
（2）．某些肠杆菌还原硝酸盐的能力很强，还原硝酸盐为亚硝酸盐后，进一步将亚硝酸盐分解为氨、氮、氧化氮，造成假阴性。
所以，观察结果时，如无红色出现，应加少量锌粉，仍无色，说明亚硝酸盐进一步分解，硝酸盐反应为阳性。
若加锌粉后出现红色，说明锌使硝酸盐还原为亚硝酸盐，而待检菌无还原硝酸盐的能力，即硝酸盐还原试验阴性。
4.2 甲基红试验方法：将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水中，孵育过夜，加甲基红试剂1～2滴，观察结果。
结果：红色为阳性，桔黄色为阴性。
4.3 尿素培养基方法：将待检菌穿刺接种于尿素培养基中，孵育过夜，观察结果。
结果：培养基变红为尿素阳性，不变色为阴性。
4.4 拘橼酸盐试验(Simmons法)方法：将待检菌接种于拘橼酸盐培养基中，孵育过夜，观察结果。
结果：有细菌生长培养基变蓝色为阳性，无颜色改变为阴性。
4.5 氨基酸脱羧试验方法：取待检菌接种于氨基酸脱羧培养基和对照管中，封石腊油，35℃培养过夜，观察结果。
结果：培养基变紫色为阳性，黄色为阴性。
2020临床初级检验技士考试《微生物》章节训练题库：肠杆菌科及检验
2020临床初级检验技士考试《微生物》章节训练题库：肠杆菌科及检验一、A11、下列关于肠道感染大肠埃希菌的病原群，说法错误的是A、ETEC引起霍乱样肠毒素腹泻B、EPEC主要引起婴儿腹泻C、EIEC引起黏液脓血便D、EHEC可引起严重的腹痛、痉挛，严重者可发展为急性肾衰竭E、EAggEC其中O157:H7可引起出血性大肠炎2、S-R变异是A、抗原性变异B、鞭毛变异C、耐药变异D、菌落变异E、毒力变异3、志贺菌属分群、分型的依据是A、O抗原B、H抗原C、K抗原D、V抗原E、O抗原和K抗原4、无鞭毛的细菌是A、埃希菌属B、沙门菌属C、志贺菌属D、变形杆菌属E、枸橼酸杆菌属5、肠杆菌科细菌的鞭毛抗原是A、O抗原B、H抗原C、Vi抗原D、K抗原E、Vi抗原和K抗原6、志贺菌属是主要的肠道病原菌之一，包括哪些血清群(型)A、痢疾志贺菌B、福氏志贺菌D、宋内志贺菌E、以上都是7、大肠埃希菌与沙门菌、志贺菌具有鉴别性的生化反应是A、发酵乳糖B、发酵山梨醇C、发酵葡萄糖D、硫化氢试验E、明胶水解试验8、下列细菌中，引起细菌性痢疾症状最轻的是A、痢疾志贺菌B、福氏志贺菌C、鲍氏志贺菌D、宋内志贺菌E、以上都不对9、根据O抗原，志贺菌属分为多个群，其中A群为A、痢疾志贺菌B、福氏志贺菌C、鲍氏志贺菌E、痢疾杆菌10、宋内志贺菌A、为A群志贺菌B、为B群志贺菌C、包括10个血清型D、培养中常有扁平的粗糙型菌落E、快速发酵乳糖11、志贺菌属与类志贺邻单胞菌的鉴别试验是A、氧化酶和动力试验B、血清凝集试验C、加热破坏K抗原D、在KIA上培养24小时以上E、免疫荧光菌球法12、在志贺菌中，其中一个血清群的菌落有光滑型和粗糙型两种，诊断血清中同时含有Ⅰ相和Ⅱ相抗血清，这个血清群是A、A群B、B群C、C群D、D群E、以上都不对13、粪便中分离到一种细菌，欲检验其是否为志贺菌属，分离培养出可疑菌落，初步鉴定可用A、试探性凝集试验B、耐药性变异C、传代法D、初步生化反应E、A+D14、下列哪种抗原为沙门菌分群的依据A、O抗原B、H抗原C、Vi抗原D、M抗原E、S抗原15、动力试验为阴性的细菌有A、霍乱弧菌B、肺炎克雷伯菌C、摩根菌D、伤寒沙门菌E、产气肠杆菌16、沙门菌在选择培养基S-S琼脂上其菌落呈现出A、浅红或无色B、深红C、微黄或无色D、浅蓝或无色E、深灰17、沙门菌的抗原容易发生变异，变异的种类有A、H-O变异B、S-R变异C、V-W变异D、相位变异E、以上都是18、下列关于沙门菌属的致病性下列说法错误的是A、致病因素有侵袭力、内毒素和肠毒素3种B、由伤寒和副伤寒沙门菌引起的慢性发热症状C、食物中毒D、慢性肠炎E、菌血症属于法定传染病19、沙门菌属中亚利桑那菌与其他菌区别之处为能够发酵A、乳糖B、葡萄糖C、蔗糖D、麦芽糖E、山梨醇20、伤寒沙门菌引起伤寒症状，除伤寒沙门菌外的其他致菌性沙门菌能够引起食物中毒。
临床检验技士-微生物检验 讲义 14
第十四章肠杆菌科及检验概述和通性——分类根据细菌的形态、生化反应、抗原性质以及核酸相关性进行分类。
大多数属于正常菌群（条件致病菌）。
引起腹泻和肠道感染：埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、耶尔森菌属等。
导致院内感染：枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、多源菌属、沙雷菌属、变形杆菌属、普罗威登菌属和摩根菌属等。
概述和通性——生物学特性形态与结构形态：杆菌。
染色：G-。
特殊结构：多数有周鞭毛，能运动。
志贺菌属和克雷伯菌属无鞭毛。
均不形成芽胞，少数菌属（埃希菌属和克雷伯菌属）可形成荚膜。
培养特性营养要求：不高。
气体环境：需氧或兼性厌氧。
菌落特征：普通琼脂培养基和麦康凯培养基上均能生长，并形成中等大小的菌落，湿润光滑。
抗原变异：包括菌落S-R变异和鞭毛H-O变异。
表现为耐药性或生化反应性质的改变。
抵抗力：不强。
加热60℃，30分钟即被杀死。
不耐干燥，对一般化学消毒剂敏感。
对低温有耐受力，能耐胆盐。
概述和通性——微生物检验及鉴定标本采集形态学检查：革兰阴性杆菌。
分离培养：将粪便或肛拭标本立即接种在肠道菌选择培养基上或先增菌后再分离。
克氏双糖铁琼脂（KIA）培养基：葡萄糖/乳糖发酵；产气；硫化氢试验。
动力-吲哚-尿素（MIU）培养基生化反应：糖类发酵试验触酶试验氧化酶试验硝酸盐还原试验分解葡萄糖产酸或产酸产气+ 大部分- +①用葡萄糖氧化-发酵试验及氧化酶试验与弧菌科和非发酵菌鉴别；②用苯丙氨酸脱氨酶和葡萄糖酸盐试验，分为苯丙氨酸脱氨酶阳性、葡萄糖酸盐利用试验阳性和两者均为阴性反应三个类群；③选择生化反应进行属种鉴别；④用诊断血清做凝集反应。
埃希菌属——分类包括5个种，即大肠埃希菌、蟑螂埃希菌、弗格森埃希菌、赫尔曼埃希菌和伤口埃希菌。
临床最常见的是大肠埃希菌，俗称大肠杆菌，是人类和动物肠道正常菌群。
埃希菌属——生物学特性形态与结构形态：短杆菌。
染色：G-。
特殊结构：多数有周鞭毛，能运动，有菌毛、荚膜或微荚膜。
培养特性营养要求：不高。
4.肠杆菌科
分离培养
标本接种血琼脂和（或）MAC培养 基，37℃孵育过夜，挑选血琼脂上 灰白色、大而粘的菌落和,MAC上红 色、大而肥厚、粘液型光亮且形成 菌丝的菌落。
肠杆菌科
2020年5月28日
肠杆菌科
肠杆菌科是一大群生物学性状相似 的革兰阴性杆菌，长栖居在人和动 物的肠道内，亦存在于水、土壤和 腐败的物质中。肠杆菌科细菌种类 繁多，根据生化反应、抗原结构、 核酸序列分析，目前确定的有44个 属，170多个种，临床标本中约有 40个种可以检出。
肠杆菌科
共同特性 埃希菌属 沙门菌属 志贺菌属 克雷伯菌属 变形杆菌属
抵抗力
肠杆菌科细菌抵抗力不强，加热 60℃、30min既被杀死，不耐干燥， 对一般化学消毒剂如漂白粉、酚、 甲醛和戊二醛等均敏感。对低温有 耐受力。能耐胆盐，并在一定程度 上能抵抗染料的抑菌作用，次特性 已被用于制作肠道选择培养基。
变异性
1.S-R变异：自标本中初次分离的细 菌，菌体抗原上都有特异性多糖链， 菌落为光滑型。在人工培养基中反 复传代或保存日久时，其细胞壁上 的特异性多糖链消失而核心多糖仍 保留，菌落变为粗糙型。
D群为宋内志贺菌（S.sonnei）而沿 用至今。但在最近的CDC分类系统 （1989）中将生化性状相近的A、B、 C群归为一群，统称为志贺菌A、B、 C血清群；而将生化特征与之相异， 鸟氨酸脱羧酶和β-半乳糖苷酶均阳 性的宋内志贺菌单列出来。志贺菌 属的DNA G+Cmol%为49~53.
以福氏志贺菌为例
革兰阴性直短杆 状，1.1~1.5μm ×2.0~6.0μm， 多数有鞭毛，能 运动，某些菌株 尤其是引起肠外 感染的菌株有荚 膜（微荚膜）和 周身菌毛
培养特性
在血琼脂平 板上菌落呈 圆形，直径 为2~3mm， 稍凸，边缘 整齐，灰白 色，不透明， 少数菌株产 生β溶血环；
临床常见病原菌检验—肠杆菌(微生物检验课件)
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二、临床意义
（二）所致疾病
在各类感染中的比例，居各种细菌之首 1、肠外感染（机会感染）：如泌尿系感染、胆 囊炎、腹膜炎、败血症等 2、肠内感染：由致病性大肠埃希菌引起，主要 表现为腹泻。
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二、临床意义
引起肠内感染的大肠杆菌主要有五类，其生化特性基本相 同（EIEC除外），抗原构造及毒素不同。
• 生化反应符合大肠埃希菌
• 血清学鉴定符合EPEC血清型
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三、微生物学检验
——肠道内感染大肠埃希菌检验
（2）检验方法 ——EIEC的鉴定
• 生化反应特点与志贺菌相似：
发酵葡萄糖产酸不产气、不发酵或迟缓分解乳糖 (ONPG试验)、多数菌株动力阴性
• 与志贺菌鉴别：
醋酸钠试验、葡萄糖铵利用试验、黏质酸盐产酸试验，
菌株 肠产毒型大肠埃希菌
（ETEC） 肠致病型大肠埃希菌
（EPEC） 肠侵袭型大肠埃希菌
（ EIEC ） 肠出血型大肠埃希菌
（ EHEC ）
肠集聚型大肠埃希菌 （ EAEC ）
侵袭部位 小肠 小肠 结肠 结肠
小肠
疾病与症状
旅行者腹泻、婴幼儿 腹泻、水样便、腹痛
婴幼儿腹泻、水样便 （有黏液无血液）、
志贺样腹泻，脓血黏 便
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一、生物学性状
（五）抵抗力
对理化因素抵抗力不强； 对常用的化学消毒剂敏感； 煌绿等对大肠埃希菌有抑制作用。
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二、临床意义
（一）致病因素
侵袭力： K抗原、菌毛等——有助于细菌定植 毒素：
内毒素——导致发热、DIC等 志贺样毒素——上皮细胞死亡脱落、肠出血 肠毒素（外毒素）——引起腹泻
肠杆菌科细菌检验课件
12 0.5
25 0.33 22.5 1000
配方二
配方三
1000
850
7.5（胨）
15
10
10 （ 透 析 ） 150（ml）（牛
胆汁）
5
11
15
11
1
4
5
4
18
20
0.33
1.0
37
70
配方四 5
5 10
8.5（混合）
8.5
8.5 1
13.5 0.33
25
1000
MACC SS
大肠埃希杆菌呈典型粉红色，乳糖发酵菌落。福氏 痢疾杆菌 菌落小，无色透明，非乳糖发酵菌。 （18hr,37℃)
双糖铁培养基(KIA)
蛋白胨 氯化钠 牛肉膏 琼脂 水
10g 5g 3g 16g 1000ml
葡 萄 糖 1g 乳 糖 10g 硫代硫酸钠 0.2g 硫酸亚铁 0.2g 0.4%酚红 6ml
细菌在KIA中的生长现象
• 观察高层与斜面颜色变化情况以及培养基是否变黑
上层固体斜面：乳糖+指示剂 下层固体：葡萄糖+指示剂+FeSO4
肠杆菌科细菌检验课件
目的要求
• 掌握常见肠杆菌科细菌的培养特性和形态染色特征 • 掌握常见肠杆菌科细菌的鉴定技术 • 掌握肠杆菌科微量生化管编码鉴定技术 • 掌握肠杆菌科临床常见致病菌的血清学凝集技术
实验材料
一、菌种： 大肠埃希菌、沙门菌、普通变形杆菌、肺炎克雷伯菌（BAP、 MAC、SS） 二、生化管： KIA、半固体、肠杆菌科微量生化管编码鉴定管（1套/2人） 三、诊断血清： 沙门菌多价 四、其他： 玻片、盐水、接种环（针）、革兰染液、3%H2O2、氧化酶试剂、 液体石蜡
临床医学检验考试辅导《微生物检验》第十四章 肠杆菌科及检验练习
第十四章肠杆菌科及检验一、A11、以下关于伤寒沙门菌感染后，人体免疫情况的描述中，错误的是（）。
A、病愈后，有牢固的免疫力B、主要是细胞免疫C、血流中的特异性抗体对胞内菌作用很大D、胃肠炎的恢复与局部生成的分泌型IgA有关E、可形成健康携带者2、在麦康凯培养基上，致泻性大肠埃希菌落呈现（）。
A、粉红色B、黑色C、微黄色D、无色E、深灰色3、根据O抗原，志贺菌属分为多个群，其中D群为（）。
A、痢疾志贺菌B、福氏志贺菌C、鲍氏志贺菌D、宋内志贺菌E、痢疾杆菌4、伤寒沙门菌的吲哚、甲基红、V-P和枸橼酸盐试验结果为（）。
A、---+B、--+-C、-+--D、+---E、++--5、急性中毒性菌痢（）。
A、以成人多见，无明显的消化道症状B、以成人多见，有明显的消化道症状C、以小儿多见，无明显的消化道症状D、以小儿多见，有明显的消化道症状E、只有痢疾志贺菌能引起6、鼠疫杆菌分离培养，需要的最适培养基是（）。
A、牛肉膏汤B、庆大霉素培养基C、1%溶血琼脂培养基D、活性炭酵母培养基E、罗氏改良培养基7、关于肥达反应，下列结果中有诊断价值的是（）。
A、O凝集价≥1:80，H凝集价≥1:80B、O凝集价≥1:80，H凝集价≥1:160C、O凝集价≥1:160，H凝集价≥1:80D、O凝集价≥1:160，H凝集价≥1:160E、O凝集价≥1:160，H凝集价≥1:3208、沙门菌的抗原容易发生变异，变异的种类不包括（）。
A、H～O变异B、S～R变异C、V～W变异D、位相变异E、细菌的L型变异二、A21、6岁男孩，无明显消化道症状，高热，抽搐多次，意识不清楚，送院体查，面色苍白，昏迷，时有惊厥，两瞳孔不等大，光反射迟钝，脉细，呼吸弱，粪便镜检，脓细胞4个，血象，白细胞数16×109/L，中性粒细胞0.75，脑脊液检查正常，可初步诊断为（）。
A、流行性乙型脑炎B、败血症C、中毒型细菌性痢疾D、暴发型流行性脑脊髓膜炎E、森林脑炎2、从腹腔感染患者腹腔液中出分离一革兰阴性杆菌，氧化酶阴性，苯丙氨酸脱氨酶阳性，在血平板上有迁徙生长，H2S阳性，它可能是（）。
肠杆菌科生化检测
吲哚（靛基质，无
色），与对二甲基氨 大
伤
基苯甲醛结合生成玫 肠
寒
瑰色的吲哚。本实验
主要用于肠杆菌科细
菌的鉴定。
尿素酶实验
原理：有些细菌能产生 尿素酶，将尿素分解、 产生2个分子的氨，使 培养基变为碱性，酚红 呈红色（指示剂）。
少数有荚膜
固体：S 透明菌落
周鞭毛(志贺氏菌无） 液体：均匀浑浊
菌毛
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生化反应：活泼 生化鉴定-乳糖发酵 致病菌：不发酵乳糖 非致病菌：发酵乳糖
抗原结构复杂 O抗原、H抗原和荚膜抗原。 抵抗力 对理化因素抵抗力不强。 易变异 易出现变异菌株，最常见的是耐药性变异。
肠杆菌科生化检测
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概述
肠杆菌科:是一群生物学性状相似的G-杆菌，寄 居于人和动物的肠道。
目前已有44个属，170多个种。 多数是肠道的正常菌群 少数为致病菌，可引起人类肠道传染病 机会致病菌致病
Company Logo
肠杆菌科的共同特点
形态与结构
培养
G- 杆菌
兼性厌氧或需氧
无芽胞
营养要求不高
单糖发酵实验
胶塞颜色 红 黄 蓝 白 黑
指示剂：溴甲酚紫
红 pH 5.2-6.8
黄-紫
（产酸变黄）葡乳麦甘蔗Βιβλιοθήκη Department of
葡 乳麦 甘 蔗
Department of
葡 乳麦 甘 蔗
Department of
副甲
葡乳 麦甘 蔗
吲哚实验
原理：有些细菌具有
色氨酸酶，能分解蛋
白胨中的色氨酸产生
加入乳糖：当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌 带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫 黑色菌落，并带有绿色金属光泽。
临床微生物学检验理论课：08肠杆菌科
双纸片协同试验 ： 头孢他啶 特美丁 头孢噻肟
纸片确证试验 ： 头孢他啶 — 头孢他啶 /棒酸 头孢噻肟 — 头孢噻肟/棒酸
ESBL酶（+）判断标准
含克拉维酸复合制剂的抑菌圈较单 药的抑菌圈扩大5mm以上（纸片法）
含克拉维酸复合制剂的 MIC 较单 药的MIC 降低8倍以上（MIC法）
非发酵革兰阴性杆菌
耐药菌株极少
耐药性增强
抗生素暴露
耐药菌株为主
致病性强：鼠疫耶尔森菌和伤寒沙 门菌
常引起人类腹泻与肠道感染：沙门菌 属、志贺菌属、埃希菌属、耶尔森 菌属
与医院感染有关：克雷伯菌、沙雷 菌属、变形杆菌菌属等
主要内容
肠杆菌科细菌的共性 埃希菌属和克雷伯菌属
沙门菌属和志贺菌属
肠杆菌属
变形杆菌属
肠杆菌科细菌共同特性
肠杆菌科
Enterobactericaeae
Superbugs
阴克大 沟雷肠 肠伯杆 杆菌菌 菌属属 变 异 体 等
如何诊断 治疗？
病原学依 据在哪？
肠杆菌科细菌的检验
栖居在人和动物肠道内的一大群革兰 阴性杆菌
数量巨大,分布广泛
引起医院感染的重要病原菌（占80 % G-杆菌）
所致疾病（50 %败血症，70 %泌尿道 感染等）
细菌培养
血培养：第1-2周阳性率 最高 骨髓培养：阳性率高， 持续时间长，已抗菌治 疗尤适
粪尿培养：第3-4 周，阳性率最高
培养特性
MAC，BAP平板上形态类似大肠埃希菌 等肠杆菌科细菌 SS等肠道选择性培养基上，小至中等， 透明或半透明，乳糖不发酵，菌落中 心黑色
SS
BAP
MAC
生化反应
猪霍乱沙门菌引起胃肠炎和败血症， 儿童多见