盐酸小檗碱提取纯化及生物活性测定
黄连中盐酸小檗碱的提取纯化及抑菌活性研究
黄连中盐酸小檗碱的提取纯化及抑菌活性研究一、引言黄连（Coptis chinensis Franch）是一种广泛分布在中国东南部的常见中药材，具有清热燥湿、泻火解毒的功效。
其中盐酸小檗碱是黄连的主要有效成分之一，具有抗菌、抗炎、抗肿瘤等多种药理活性。
对盐酸小檗碱的提取纯化及抑菌活性的研究具有重要的理论和应用意义。
二、盐酸小檗碱的提取纯化1. 提取盐酸小檗碱的提取通常采用乙醇提取法，即将黄连粉碎后，用乙醇浸泡，反复浸泡、过滤，收集提取液，然后蒸发乙醇，得到黄连提取物。
2. 分离黄连提取物中含有多种成分，因此需要进一步分离得到纯化的盐酸小檗碱。
常用的方法包括硅胶柱层析、凝胶层析、反相层析等。
硅胶柱层析是一种简便有效的方法，通过不同成分在硅胶上的吸附力不同，实现了盐酸小檗碱和其他成分的分离。
3. 结晶得到纯化的盐酸小檗碱后，通过结晶、结晶重结晶等方法，可得到更纯净的盐酸小檗碱，提高药效。
三、盐酸小檗碱的抑菌活性研究1. 实验方法采用平板法测定不同浓度盐酸小檗碱对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌的抑菌活性。
将分别制备不同浓度的盐酸小檗碱溶液加入琼脂平板，接种相应的细菌或真菌，培养一段时间后观察对菌落的影响。
2. 结果实验结果表明，盐酸小檗碱对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌均具有较强的抑菌活性。
随着盐酸小檗碱浓度的增加，抑菌效果也随之增强。
3. 分析盐酸小檗碱具有明显的抗菌活性，对多种细菌和真菌均具有一定的抑制作用。
这为其在临床上的应用提供了有力的依据，表明其具有广泛的抗菌潜力。
四、结论通过对黄连中盐酸小檗碱的提取纯化及抑菌活性的研究发现，盐酸小檗碱具有显著的抑菌活性，并且其纯化技术相对简便有效。
这为盐酸小檗碱的临床应用提供了重要的理论和实验基础。
由于盐酸小檗碱的毒性较大，临床上仍需要更多的研究来确定其剂量和安全性，以实现更好的药用价值。
希望未来能有更多的研究对盐酸小檗碱的活性、毒性、药代动力学等方面进行深入探讨，为其临床应用提供更加可靠的依据。
黄连中盐酸小檗碱的提取纯化及抑菌活性研究
黄连中盐酸小檗碱的提取纯化及抑菌活性研究摘要黄连是一种常用的中药材，具有抗菌作用。
其中的盐酸小檗碱是其主要活性成分之一，具有广谱抑菌活性。
本研究旨在提取纯化黄连中的盐酸小檗碱，并探究其抑菌活性。
采用超声波提取法提取黄连中的活性成分，然后使用TLC和HPLC对提取物进行纯化。
通过红外光谱（IR）和质谱（MS）对纯化产物进行鉴定。
采用平板扩散法和微量平板法对盐酸小檗碱的抑菌活性进行评价。
实验结果表明，超声波提取法对黄连中的盐酸小檗碱具有高效的提取效果，提取物中的盐酸小檗碱含量较高。
TLC和HPLC纯化方法能够有效去除提取物中的杂质，提高盐酸小檗碱的纯度。
红外光谱和质谱结果表明，通过超声波提取和纯化得到的产物确实为盐酸小檗碱。
抑菌实验结果显示，盐酸小檗碱对多种常见病原菌具有一定的抑制效果，其抗菌活性与目前常用的抗菌药物相当。
本研究成功提取纯化了黄连中的盐酸小檗碱，并证明其具有一定的抑菌活性。
这为开发利用盐酸小檗碱作为抗菌剂提供了一定的理论和实验基础。
AbstractIn conclusion, this study successfully extracted and purified berberine hydrochloride from Huanglian, and demonstrated its antibacterial activity. This provides a theoretical and experimental basis for the development and utilization of berberine hydrochloride as an antibacterial agent.Keywords: Huanglian; berberine hydrochloride; extraction; purification; antibacterial activity。
黄连中盐酸小檗碱的提取分离及鉴定
实验七黄连中盐酸小檗碱的提取分离及鉴定黄连为毛茛科黄连属植物黄连（coptis chinensis Eraneh）、三角叶黄连（coptis deltoidca C．Ycheng et Hsiao）或云连（coptiteetoidesC.Y.cheng）的干燥根茎。
黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。
黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。
其中小檗碱含量最高，可达10%左右，是以盐酸盐的状态存在于黄连中。
小檗碱有很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床，掌叶防己碱也作药用，其抗菌性能和小檗碱相似。
[目的要求]1．学习和掌握水溶性生物碱的提取方法。
2．学习和掌握生物碱的柱色谱分离方法。
3．学习和掌握生物碱的化学检识及薄层色谱的鉴定方法。
[实验原理]小檗碱为黄色针状结晶，mp为145℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。
盐酸盐为l：500，枸橼酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。
小檗碱常以季铵碱形式存在，碱性强（pka11.53），能溶于水中，其水溶液有三种互变形式。
N +OH -O OOCH 3OCH 3N OOOCH 3OCH 3OHNHCHOOOOCH 3OCH 3季铵式（红棕色） 醇式（黄色） 醛式（黄色）N +OOOCH 3OCH 3小檗碱（黄连素）掌叶防己碱又称巴马亭，为黄色结晶，溶于水、乙醇、几乎不溶于三氯甲烷、乙醚等有机溶剂。
盐酸掌叶防已碱为黄色针状结晶，并有强烈的黄色荧光。
易溶于热水或热乙醇，在冷水中的溶解度也比盐酸小檗碱大。
N +H 3COH 3COOCH 3OCH 3掌叶防己碱本实验是利用小檗碱和掌叶防己碱的硫酸盐在水中溶解度大的性质，用硫酸水提取出来总生物碱，再利用其盐酸盐难溶于水及盐析作用，使生物碱盐析出，以除去水溶性杂质。
黄连中盐酸小檗碱的提取纯化及抑菌活性研究
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黄连中盐酸小檗碱的提取纯化及抑菌活性研究
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'$'北方民族大学生物科学与工程学院#银川)*&&#$+ #'宁夏特殊生境微生物资源开发与利用重点实验室#银川)*&&#$(
由真菌和细菌引起的植物病害严重影响作物的 产量和 品 质#是 造 成 巨 大 经 济 损 失 的 主 要 原 因 之 一)$#*%喷施化学 抑 菌 剂 是 目 前 控 制 病 害 采 取 的 主 要手段#但存在食品安全$环境污染以及易诱导病原 物产生ห้องสมุดไป่ตู้性等问题%因此#开发新型$安全$环保的 农业病 害 防 控 技 术 是 当 前 生 产 中 亟 待 解 决 的 问 题)0*%已有研究证实植物多种次生代谢产物对病害 具有良好的抑制作用)!**#通过植物获取抑菌成分用 于预防和控制农业病害的发生#具有低毒$安全$环
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盐酸小檗碱实验报告
一、实验目的1. 熟悉盐酸小檗碱的提取、分离与鉴定方法；2. 掌握薄层色谱法、紫外光谱法等分析方法；3. 提高实验操作技能，培养实验思维。
二、实验原理盐酸小檗碱是从黄连、黄柏等植物中提取的一种生物碱，具有抗菌、抗炎、抗癌等药理作用。
本实验采用溶剂提取法、柱层析法等方法对盐酸小檗碱进行提取、分离，并通过薄层色谱法、紫外光谱法等对其进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：黄连、黄柏、盐酸小檗碱标准品；2. 实验仪器：电热恒温水浴锅、旋转蒸发仪、紫外分光光度计、薄层色谱仪、硅胶G薄层板、硅胶柱、微量注射器等。
四、实验方法与步骤1. 提取（1）将黄连、黄柏药材粉碎，过40目筛；（2）称取2g药材，加入20ml甲醇，超声提取30min；（3）过滤，滤液旋蒸浓缩至约1ml；（4）加入1ml盐酸溶液，搅拌，静置，沉淀完全后过滤，滤液即为粗提液。
2. 分离（1）将硅胶G加入适量甲醇，搅拌均匀，倒入玻璃层析柱中；（2）将粗提液加入层析柱中，用甲醇洗脱；（3）收集盐酸小檗碱洗脱液，旋蒸浓缩至约1ml；（4）加入1ml盐酸溶液，搅拌，静置，沉淀完全后过滤，滤液即为盐酸小檗碱精制品。
3. 鉴定（1）薄层色谱法：取盐酸小檗碱标准品和精制品适量，分别点于薄层板上，以氯仿为展开剂，展开后晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热显色，观察斑点颜色和位置；（2）紫外光谱法：取盐酸小檗碱标准品和精制品适量，分别用无水乙醇溶解，制成溶液，在紫外分光光度计上测定其在256nm处的吸光度。
五、实验结果与分析1. 薄层色谱法：盐酸小檗碱标准品和精制品在薄层板上形成相同颜色的斑点，且位置一致，证明精制品中含盐酸小檗碱。
2. 紫外光谱法：盐酸小檗碱标准品和精制品在256nm处的吸光度基本一致，证明精制品中含盐酸小檗碱。
六、实验结论本实验成功提取、分离了黄连、黄柏中的盐酸小檗碱，并通过薄层色谱法、紫外光谱法对其进行了鉴定，结果表明精制品中含盐酸小檗碱。
实验三黄连中盐酸小檗碱的提取分离与鉴定
实验三黄连中盐酸⼩檗碱的提取分离与鉴定实验三黄连中盐酸⼩檗碱的提取分离与鉴定⼩檗碱⼜称黄连素，是在⾼等植物中分布⽐较⼴泛的、有明显⽣理活性的化学成分。
主要存在于黄连、黄柏、三颗针等中草药中。
⼩檗碱具有显著的抗微⽣物、抗原⾍的作⽤，临床⽤其盐酸盐（即盐酸黄连素）治疗细菌性感染如痢疾、急性肠胃炎、呼吸道感染等症。
黄连为⽑茛科黄连属植物黄连（Coptis chinensis Franch 。
），三⾓叶黄连（C 。
deltoidea C 。
Y 。
Cheng et Hsiao ）或云连（C 。
teetoides C 。
Y 。
Cheng ）的根茎，含有⼩檗碱(1)、巴马汀(2)、黄连碱(3)、甲基黄连碱(4)、药根碱(5)等⽣物碱，其中以⼩檗碱含量最⾼，可达10%左右，⼩檗碱以盐酸盐的形式存在于黄连中。
⽬前制药⼯业提取⼩檗碱主要以三颗针为原料。
三颗针来源于⼩檗科⼩檗属（Berberis ）多种植物，其根⽪含⽣物碱约2%，主要含⼩檗碱、⼩檗胺、药根碱、巴马汀等⽣物碱。
N +OH ￡-R 1O OR 4OR 3R 2OR 5R 1 R 2 R 3 R 4 R 5CH 3 CH 3 HCH 3 CH 3 CH 3 CH 3 H H CH 3 H CH 3 CH 3 CH 3 HCH 212345CH 2CH 2CH 2CH 2⼩檗碱 (Berberine)属异喹啉类⽣物碱，⾃⽔和⼄醇中结晶出来的⼩檗碱为黄⾊长针状结晶，含5个结晶⽔，在100℃⼲燥时即失去结晶⽔，转为棕黄⾊，加热⾄110℃时，其颜⾊加深变暗⾊。
Mp.145℃⾄160℃即分解。
N HH 3NO CH 3O CH 3O O HON HH 3COC H 3⼩檗胺游离⼩檗碱能缓缓溶于⽔，在热⽔及热⼄醇中易溶，⽽在冷⼄醇中溶解度为1：100，但难溶于苯、氯仿、丙酮等溶剂。
醇式和醛式⼩檗碱则具有⼀般⽣物碱的通性，难溶于⽔，易溶于有机溶剂。
⼩檗碱的盐类除中性硫酸盐、磷酸盐外，⼀般在⽔中的溶解度均较⼩。
小檗碱的提取分离及鉴定
盐酸小檗碱得提取分离及鉴定黄连具有清热燥湿、清心除烦,泻火解毒得功效。
黄连得有效成分主要就是生物碱，已分离出得主要生物碱有小檗碱(berbｅrｉｎe)、掌叶防己碱（palmaｔine)、黄连碱(jatrorrｈizine）等。
其中小檗碱含量最高，可达1０%左右,就是以盐酸盐得状态存在于黄连中。
小檗碱有很强得抗菌作用,已广泛地应用于临床,掌叶防己碱也作药用,其抗菌性能与小檗碱相似。
［目得要求]1．学习与掌握水溶性生物碱得提取方法。
2.学习与掌握生物碱得柱色谱分离方法。
[实验原理]小檗碱为黄色针状结晶,ｍp为145℃，游离得小檗碱能缓缓溶于水(1：2０)及乙醇中（1:1０0）,易溶于热水及热醇,难溶于乙醚,石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂,其盐在水中溶解度很小，尤其就是盐酸盐。
盐酸盐为l：50０，枸橼酸盐1:１25,酸性硫酸盐1:1０0，硫酸盐ｌ:3０,但在热水中都比较容易溶解。
小檗碱常以季铵碱形式存在,碱性强(pka11、5３),能溶于水中，其水溶液有三种互变形式。
O33NHCHOOOOCH3OCH3季铵式(红棕色）醇式(黄色) 醛式(黄色)N+OOOCH33小檗碱（黄连素)掌叶防己碱又称巴马亭，为黄色结晶,溶于水、乙醇、几乎不溶于三氯甲烷、乙醚等有机溶剂。
盐酸掌叶防已碱为黄色针状结晶,并有强烈得黄色荧光。
易溶于热水或热乙醇,在冷水中得溶解度也比盐酸小檗碱大。
N +H 3COH 3COOCH 3OCH 3掌叶防己碱 本实验就是利用小檗碱与掌叶防己碱得硫酸盐在水中溶解度大得性质,用硫酸水提取出来总生物碱,再利用其盐酸盐难溶于水及盐析作用,使生物碱盐析出,以除去水溶性杂质。
再利用两种生物碱极性不同,采用柱色谱分离。
[实验内容]一、提取分离黄连粗粉50ｇO 4５０0ml,浸渍20分钟加石灰乳调ＰH 值至中性放置１0分钟，抽滤滤液加HC ｌ调PH2～3加滤液体积4~5%得NaCl,放置30分钟,抽滤沉淀 滤液(主要含小檗碱、掌叶防己碱、黄连碱等生物碱）加２00ml 水加热至澄明趁热抽滤滤液放置、抽滤沉淀二、生物碱类检识１．化学检识:(1)丙酮加成反应:取样品０.05ｇ,溶于50mｌ热水中,加入10％N ａＯH溶液2mｌ,混合均匀后，于水浴中加热至５0℃,加入丙酮5ml,放置,即有柠檬黄色结晶析出。
实验三 黄连中盐酸小檗碱的提取分离与鉴定
实验三黄连中盐酸小檗碱的提取分离与鉴定小檗碱又称黄连素，是在高等植物中分布比较广泛的、有明显生理活性的化学成分。
主要存在于黄连、黄柏、三颗针等中草药中。
小檗碱具有显著的抗微生物、抗原虫的作用，临床用其盐酸盐（即盐酸黄连素）治疗细菌性感染如痢疾、急性肠胃炎、呼吸道感染等症。
黄连为毛茛科黄连属植物黄连（Coptis chinensis Franch。
），三角叶黄连（C。
deltoidea C。
Y。
Cheng et Hsiao）或云连（C。
teetoides C。
Y。
Cheng）的根茎，含有小檗碱(1)、巴马汀(2)、黄连碱(3)、甲基黄连碱(4)、药根碱(5)等生物碱，其中以小檗碱含量最高，可达10%左右，小檗碱以盐酸盐的形式存在于黄连中。
目前制药工业提取小檗碱主要以三颗针为原料。
三颗针来源于小檗科小檗属（Berberis）多种植物，其根皮含生物碱约2%，主要含小檗碱、小檗胺、药根碱、巴马汀等生物碱。
R1 R2 R3 R4 R51R1OR2OR5£-OR3OR4+3 CH3 HCH2CH3 CH3 CH3 CH3 HCH2CH2CH2CH23H CH3 CH3 CH3 H2345小檗碱 (Berberine)属异喹啉类生物碱，自水和乙醇中结晶出来的小檗碱为黄色长针状结晶，含5个结晶水，在100℃干燥时即失去结晶水，转为棕黄色，加热至110℃时，其颜色加深变暗色。
Mp.145℃至160℃即分解。
OCH3H3NHOCH3OH小檗胺H3COHCH3游离小檗碱能缓缓溶于水，在热水及热乙醇中易溶，而在冷乙醇中溶解度为1：100，但难溶于苯、氯仿、丙酮等溶剂。
醇式和醛式小檗碱则具有一般生物碱的通性，难溶于水，易溶于有机溶剂。
小檗碱的盐类除中性硫酸盐、磷酸盐外，一般在水中的溶解度均较小。
小檗碱及其盐类在水、乙醇中的溶解度如下表：小檗碱还能与苯、氯仿、丙酮等溶剂结合成分子缩合物，有完好的结晶状态，可作为小檗碱的识别之用。
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打制菌饼
带药培养基的制备
接菌
用接种环小心将菌饼置于培养基上，菌丝一面 向下，每皿1个菌饼（一般做三个重复），后加 盖并标记，置于28℃恒温箱中培养。
检查
待培养72h或96h后取出培养皿，用卡尺量菌落 直径（须十字交叉量取两次，用其平均数）。 菌落直径=两次直径平均数-0.4
实验结果及数据处理
盐酸小檗碱精制
取所得粗品(未干燥)放入20倍量沸水中，搅拌 溶解后，继续加热数分钟，趁热过滤。滤液滴 加一滴浓盐酸，静置(过夜),滤取结晶，用蒸馏 水洗数次,抽干，50℃以下真空干燥，即为精制 盐酸小檗碱ຫໍສະໝຸດ 氧化铝柱层析分离纯化盐酸小檗碱
层析柱制备：2.0cm×30cm柱，层析氧化铝120140目,25-30g 进样：取约50mg盐酸小檗碱粗品，用尽量少的 无水乙醇溶解制成溶液 洗脱样品：按每流分5-10mL收集洗脱液 氧化铝再生回收 展开剂:氯仿-氨-甲醇(30∶1∶8)
盐酸小蘖碱的提取纯化及 生物活性测定
第一组 蒋攀振，蔡海龙，包文君，马洪智， 吴峰，何磊
实验目的与要求
学习生物碱的初步提取分离方法。 掌握利用柱层析分离纯化、薄层层析鉴定 药用植物成分的方法。
基本原理
小檗碱又名黄连素,是最先由毛莨科黄连和芸香科黄柏等植物中提出 的一种黄色生物碱。 三颗针及黄连中均含有小檗碱(分别为1%,5.1%)以及巴马亭(掌叶防已 碱)、药根碱等,它们均有明显的抗炎作用。 本实验即是用小檗属植物三颗针作为提取小檗碱的原料; 小檗碱是一种季铵碱,其游离碱为黄色针晶,Mp.145℃(乙醚),微溶于 水,能溶于热水和乙醇中，难溶于苯、丙酮、氯仿，几乎不溶于石油 醚。小檗碱与氯仿、丙酮、苯在碱性条件下均能形成加成物。小檗碱 盐酸盐难溶于冷水，易溶于热水；硫酸盐易溶于水。溶解度分别为: 小檗碱,1∶２０（冷水）,1∶100(冷乙醇);盐酸盐,1∶500(冷水);硫 酸盐,1∶30(冷水),利用这些特性提取盐酸小檗碱。
抑菌率 =
对照生长直径−处理生长直径 × 100% 对照生长直径
溶剂前沿线
1.9cm
1.65cm
1.8cm
比移值Rf从左到右依次为 1标品（淡黄）1.65/2.4=0.69 2橘红1.9/2.4=0.79 3淡黄1.8/2.4=0.75
2.4cm
点样线
谢谢大家
仪器与试剂
仪器
层析柱、研钵、烧杯、硅胶薄层板、滤纸、抽滤装置、紫外 灯、层析缸等电磁炉，SHP-250生化培养箱，XXQ-LS-50SⅡ 立式压力蒸汽灭菌器，SKJH-1109生化超净工作台，MP500Z 电子天平,BKH-BC型玻璃仪器快速烘干器，搪瓷缸，锥形瓶， 酒精灯，打孔器,接种环，培养皿，25mL具塞刻度试管，纱 布等。 三颗针根粉(或黄连根粉),0.5%硫酸，石英砂，脱脂棉，石 灰乳，10%盐酸，浓盐酸，氧化铝，95%乙醇，无水乙醇，10 ％氢氧化钠溶液,滤纸，硅胶，氯仿-氨-甲醇(30∶1∶8),氯 仿-乙醇-0.1mol.L－1盐酸(1∶1∶1，下层)，丙酮，葡萄糖， 琼脂粉，75%乙醇。
盐酸小檗碱的硅胶薄层层析鉴定
培养基
PDA（去皮马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、 水1000mL），分装，0.11Mp、121℃灭菌30分钟 在9cm平板连续培养几代，然后在试验前3天再 接种一次，在28℃培养基条件下培养备用。
菌种准备
药液准备
将25.2mg的供试药品溶于5mL丙酮中备用。 在无菌条件下，将供试菌种在同一半径下用 0.4cm的打孔器打出一定数量的菌饼备用。 待培养基溶化后，在定容好的252mL培养基中加 入准备好的5mL药液使其混合均匀，按12mL每皿 定容到具塞刻度试管中，然后趁热倒入9cm培养 皿中制成薄厚均匀的平板备用。
试剂与样品
供试菌种 供试药剂
由学院相关实验室提供 盐酸小檗碱
实验内容与步骤
小檗碱粗品的制备
取三颗针的根粗粉(过20目筛)20g,置于500mL烧杯中， 加入8倍量0.5%硫酸水溶液使之浸没药面,浸泡24h，用 脱脂棉过滤。滤液加石灰乳中和多余硫酸,调pH＝12, 静置30min，滤除沉淀,滤液用10%盐酸调至pH2-3,再向 滤液中加10%（W/V）量食盐[3],搅拌使完全溶解后， 继续搅拌至溶液出现为混浊现象为止，静置(过夜),滤 出沉淀。并用少量水洗涤至中性,抽干。50℃以下真空 干燥,即为盐酸小檗碱粗品。