铁标准曲线的绘制
邻二氮菲分光光度法测定铁
七、思考题
1．本实验量取各种试剂时应分别采取何种量 器较为合适？为什么？ 答：本实验所用的溶液量都比较少，用移液 管或吸量管比较合适。标准铁试样的量取要 特别准确，而其他的试剂，如phen、NaAc 等，都为过量，相对要求不是很严格。
二、实验原理
2、光度法原理
本方法的选择性高。 Ca2+ 、Hg 2+、Zn2+ 及Ag+ 等离子与邻二氮菲作用生 成沉淀，干扰测定; 相当于铁量40倍的Sn2+、Al3+、Ca2+、Mg2+ 、Zn2+ 、 SiO32-，20倍的Cr3+、Mn2+、V(V)、PO3-4，5倍的Co2+、 Ni2+、Cu2+等离子不干扰测定。 共存金属离子量大需掩蔽或分离。
1mL盐酸羟胺，摇匀，再加入2mL邻二氮菲（phen）， 5mLNaAc ，加水至刻度，摇匀放置10min，用1cm比色 皿，以试剂空白为参比，在510nm波长下，测定样品溶液 吸光度。从标准曲线上查出或由回归方程计算样品液中铁 的含量（mg/L）。 3、光度计与比色皿使用 4、结束工作
测量完毕,关闭电源,取出吸收池, 清洗晾干保存.清理工 作台,罩上
吸光度的测定：用1cm比色皿，以试剂空白为参比(调节吸光 度A为0），在510nm波长下，测定各溶液吸光度A。
标准曲线的绘制：以铁质量为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘 制标准曲线。
*注意：每加入一种Βιβλιοθήκη 剂均需摇匀。下同。四、实验步骤
2、样品铁含量的测定 移取适量铁样品液(5.00mL)于50mL比色管中，加入
二、实验原理
1.方法原理
邻二氮菲(phen)是光度法测定微量铁的较好试剂。该法灵敏度高， 稳定性好，干扰易消除，故应用广泛。
铁标准曲线的绘制
铁标准曲线的绘制方法1.方法原理亚铁在pH3~9之间的溶液中，可与邻菲啰啉生成很稳定的橙红色络合物。
高铁离子可以通过还原剂还原成亚铁进行测定。
测量波长在510nm处，用邻菲啰啉分光光度法可测量Fe2+、Fe3+及总铁含量。
2.方法适用范围此方法适用于一般环境水和废水中铁的监测，最低检出浓度为0.03mg/L，测定上限为5.00 mg/L。
对铁离子大于5.00 mg/L的水样，可适当稀释后再按照本方法进行测定。
3.仪器及试剂3.1使用仪器分光光度计，10mm比色皿3.2试剂3.2.1铁标准贮备溶液称取0.7020g硫酸亚铁铵，溶于 (1+1)硫酸50mL中，转移至1000mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
此溶液含铁浓度为100μg/mL。
3.2.2 铁标准使用液准确移取标准贮备溶液25.00mL置于100mL容量瓶中，加水至标线，摇匀。
此溶液含铁浓度为25.0μg/mL。
3.2.3盐酸(ρ1.19g/mL)，(1+3)盐酸溶液3.2.4盐酸羟胺溶液OH·HCl)=100g/L]：称取10g盐酸羟胺溶于水中，稀盐酸羟胺溶液[ρ(NH2释至100mL。
3.2.5 缓冲溶液：40g乙酸铵加50mL冰乙酸用水稀释至100mL。
3.2.6邻菲啰啉溶液：邻菲啰啉溶液：称取0.5g邻菲啰啉溶于水中，加数滴盐酸帮助溶解，稀释至100mL。
3.2.7饱和乙酸钠溶液4.铁标准曲线的绘制方法4.1 标准曲线的绘制将25.0μg/mL的铁标准溶液稀释5倍，变成5mg/L的铁标准溶液。
再依次移取铁标准液0、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL置于50mL比色管中，加(1+3) 盐酸1mL，100g/L盐酸羟胺溶液2~3mL，再加适量蒸馏水，在水浴中加热。
然后冷却至室温，加一小片刚果红试纸，滴加饱和乙酸钠溶液至刚果红试纸刚刚变红，加入5mL缓冲溶液和邻菲啰啉溶液2mL，加水至标线，摇匀。
显色15min后，用10mm 比色皿，以空白调零，在510nm处测量吸光度。
分光光度法测定微量铁
分光光度法测定微量铁分光光度法是指利用物质吸收和透过不同波长的可见光或紫外线，对试样中的成分进行测定的方法。
微量铁是指含铁浓度较低的样品。
本文将介绍如何利用分光光度法测定微量铁的原理、仪器、操作步骤及数据处理方法。
一、原理铁离子在紫外-可见吸收光谱中有很强的特征吸收峰。
在波长范围为200-800nm处，铁离子的最强吸收峰位于400-500nm区域内。
因此，利用紫外-可见分光光度法测定铁离子可以选定适当的波长进行测定。
对于微量铁的测定，常采用1，10-菌落素橙（1，10-phenanthroline orange）作为配合剂，形成铁离子和1，10-菌落素橙配合物，从而实现铁离子的高选择性分析。
配合物的吸收峰位于510～530nm，可以通过分光光度法进行测定。
二、仪器分光光度计三、操作步骤1、制备标准曲线：将铁标准溶液分别加入一系列标准量瓶中，其浓度可控制在0-1.2μg/mL之间，然后分别加入一定量的1,10-菌落素橙溶液，通常为1mL。
用去离子水稀释至刻度线，搅拌均匀。
最后在分光光度计上，以510-530nm为波长进行测定吸收度，根据标准曲线计算出所测样品中铁的浓度。
2、取待测样品：取适量的待测样品，加入足够的1,10-菌落素橙溶液，在水浴中加热混合溶液，待其冷却后取1mL加入10mL容量瓶中，用去离子水稀释至刻度线，搅拌均匀即可。
3、测量：在分光光度计上以510-530nm为波长进行测定吸收度，记录读数。
四、数据处理方法1、标准曲线的绘制：以铁标准溶液的浓度为横坐标，以吸收度为纵坐标，绘制浓度-吸收度曲线。
2、计算未知样品的铁浓度：根据标准曲线计算出所测样品中铁的浓度。
3、参考范围：根据不同的样品类型和所测铁的含量确定参考范围。
铁含量的测定.
铁含量的测定一、实验原理铁的吸光光度法所用的显色剂较多，有邻二氮菲（又称邻菲罗啉、邻菲绕啉）及其衍生物、磺基水杨酸、硫氰酸盐等。
其中邻二氮菲分光光度法的灵敏度高，稳定性好，干扰容易消除，是较普遍采用的一种方法。
在pH值为2—9的溶液中，Fe2+可与邻二氮菲生成极稳定的橙红色络合物[Fe(Phen)3]2+该络合物在波长510mm处有最大吸收，其吸光度与铁含量成正比，可用比色法测定。
二、试剂和器材10%盐酸羟胺溶液（用时配制）；0.12%邻菲罗啉显色剂；乙酸钠溶液（1mol/L）；HCl溶液（2mol/L）；HCl溶液（1:1）。
铁标准储备液；铁标准使用液；比色管（50ml），电子天平，分光光度计。
三、实验步骤1、样品处理精确称取样品3~5g，用干灰化法灰化后，加少量水润湿，加盐酸溶液（1:1）10mL 溶解，移入100mL容量瓶中，用水冲洗坩埚3~4次，并入容量瓶中，用水定容后过滤。
2、标准曲线的绘制吸取10ug/mL的铁标准使用液0、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL，置于6个50mL比色管中，分别加入1mL盐酸羟胺溶液、2mL邻菲罗啉显色剂、5mL乙酸钠溶液，每加入一种试剂都要摇匀。
然后用水稀释至刻度。
10min后，用1cm比色皿，以不加铁标准使用液的试剂空白作参比，在510nm波长处测定各溶液的吸光度。
以铁含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3、测定准确吸取上述待测溶液1~5mL于50mL比色管中，按标准曲线的绘制步骤，加入各种试剂，测定吸光度，在标准曲线上查出相应的铁含量（ug）。
4、结果计算x=m0/(m× V 1/ V2) ×100x—样品中铁的含量，ug/100g；m0—从标准曲线上查得测定用样液相应的铁含量，ug；V 1—测定用样液的体积，ml；V2—样液定容的总体积，ml；m—样品质量，g四、注意事项1. 应该注意显色时所加试剂的顺序不能改变，否则影响测定结果2. 由于高氯酸对显色剂有干扰，故不能采用硝酸-高氯酸体系消化样品，可采用硝酸-盐酸体系。
邻二氮菲分光光度法测定铁的含量
邻二氮菲分光光度法测定铁的含量邻二氮菲分光光度法测定铁的含量一. 实验目的1．掌握邻二氮菲分光光度法测定铁的原理及方法。
2．学习标准曲线的制作方法。
3．了解721型分光光度计的构造及使用方法。
二．实验原理在测定微量铁时，通常以盐酸羟胺还原Fe3+为Fe2+，在PH为2—9的范围内，Fe2+与邻二氮菲反应生成稳定的橙红色配合物，其lgK fθ=21.3。
该配合物的最大吸收波长为510nm。
本方法不仅灵敏度高（摩尔吸光系数ε=1.1×104），而且选择性好。
相当于含铁量40倍的Sn2+、Al3+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、SiO2-3，20倍的Cr3+、Mn2+、V(V)、PO3-4，5倍的Co2+、Cu2+等均不干扰测定。
Fe2+与邻二氮菲在PH=2—9范围内均能显色，但酸度高时，反应较慢，酸度太低时Fe2+易水解，所以一般在PH=5—6的微酸性溶液中显色较为适宜。
邻二氮菲与Fe3+能生成3:1的淡蓝色配合物（lgK fθ=14.1），因此在显色前应先用还原剂盐酸羟胺将Fe3+全部还原为Fe2+（2Fe3++2NH2OH·HCl=2Fe2++N2↑+2H2O+4H++2Cl-）。
三．仪器与试剂1. 仪器：(1) 721型分光光度计。
(2) 50mL容量瓶7只/组。
(3) 10mL、5mL、2mL、1mL移液管。
2. 试剂：(1)100µg·mL-1的铁标准溶液：准确称取0.8634gNH4Fe(SO4)2·12H2O于烧杯中，加入20mL1:1的HCl和少量水溶解后，定量转移至1升容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
所得溶液含Fe3+100µg·mL-1。
(2) 10µg·ml-1的铁标准溶液：准确移取25.0mL 100µg·mL-1的铁标准溶液于250mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
铁的测定
铁的测定（硫氰酸钾比色法）一、目的要求1．了解硫氰酸钾比色法测定铁的原理。
2．掌握硫氰酸钾比色法测定铁的方法。
二、实验原理在酸性溶液中，铁离子与硫氰酸钾作用，生成砖红色的硫氰酸铁络合物，其颜色的深浅与铁离子浓度成正比，故可以比色测定。
三、仪器与试剂1．仪器分光光度计2．试剂①浓硫酸（分析纯）②20%硫氰酸钾溶液。
③2%过硫酸钾溶液④2%高锰酸钾溶液。
⑤铁标准溶液。
准确称取0.4979 g硫酸亚铁溶于100mL水中，加入5mL浓硫酸微热，溶解后随即逐滴加入2%高锰酸钾溶液，至最后一滴红色不褪色为止，用水定容至1000mL ，此溶液每毫升含Fe3+100μg。
使用前将标准工作液准确稀释10倍，此溶液每毫升含Fe3+10μg。
四、实验步骤1．样品处理：称取均匀样品10. 0g，干法灰化后，加2mL(1+1)盐酸于水浴上蒸干，再加入5mL蒸馏水，加热煮沸，冷却，移入100mL容量瓶用水定容，摇匀。
2．标准曲线绘制：准确吸取铁标准溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL,分别置于25 mL容量瓶中，各加人5 mL水，0.5 mL浓硫酸，0.2 mL 2%过硫酸钾，2 mL 20%硫氰酸钾，混匀后稀释至刻度，用1 cm比色皿在485 mn处以试剂空白作为对照，测定吸光度。
以铁含量（μg）为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3．样品测定：准确吸取样品溶液5～10 mL置于25 mL容量瓶或比色管中，以下操作同标准曲线的绘制。
根据测得的吸光度，从标准曲线上查得相对应的铁含量。
五、结果计算g/100g)(100V m V C 12μ⨯⨯⨯铁含量＝式中：C —从标准曲线上查得相当于铁的标准量，；V —测定用样液体积，mL; V 2—样液总体积，mL;m —为测定时样品溶液相当于样品的重量，go 六、说明及注意事项1．测定用蒸馏水一定要用无铁蒸馏水。
2．样品灰化时注意安全，并且灰化要彻底。
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食品中铁的测定(邻菲罗啉比色法)实验报告
食品中铁的测定（邻菲罗啉比色法）1 目的熟练掌握直接灰化法的原理，操作及注意事项。
以铁的测定为代表，掌握灰化法作为矿物质测定的前处理方法的应用；掌握消化法的原理，操作及注意事项。
以铁的测定为代表，掌握消化法作为矿物质测定的前处理方法的应用；掌握邻菲罗啉比色法测铁的原理、操作及注意事项。
2 原理2.1 灰化食品经高温灼烧至恒重，残留物称重称为灰分；2.2 消化样品与浓硫酸和催化剂一同加热，可使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化成二氧化碳和水逸出，食品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵；2.3 比色法测铁样品经灰化(或消化)，用抗坏血酸将三价铁还原为二价铁，二价铁与邻菲罗啉反应生成红色络合物，在520nm下测其光吸收强度A，根据A值在，再计算样品中铁的含量。
标准曲线上查对应二价铁浓度得C样3 试剂硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸、邻菲罗啉、铁标准溶液（C=10ug/mL）。
4 仪器4.1 灰化：瓷坩埚、灰化炉、干燥器、精密天平；4.2 消化：定氮瓶、铁架台、电炉；4.3 比色法测铁：水浴锅、可见光分光光度计、25mL比色管。
5 样品学生营养奶粉6 操作方法6.1 样品的灰化处理及样品中灰分的测定6.1.1恒重处理取大小适宜的两个瓷坩埚（标号1、2）置于高温炉中，在600℃下灼烧0.5h，冷却至200℃以下后，取出，放入干燥器中冷却置室温，精密称量，并重复灼烧至恒重。
6.1.2 样品称量分别向1、2号瓷坩埚中加入奶粉5.0001g和5.0000g后，精密称量。
6.1.3 预灰化把两个坩埚置于电炉上，半盖坩埚盖，以小火加热至样品充分炭化无黑烟产生，取下坩埚，各加入两滴HNO3溶液。
6.1.4 正式灰化炭化后，把两个坩埚放置在600℃高温炉中灼烧至无炭粒，打开炉门，将坩埚移至炉口处冷却至200℃左右，放入干燥器中冷却至室温，称量。
重复灼烧至前后两次称量之差不超过0.5mg为恒重。
6.1.5制备灰化液分别向1、2号坩埚中加入盐酸2mL溶解，并移入100mL容量瓶中，用少量水洗坩埚，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀，制成1、2号灰化液备用。
水质分析铁、磷标准曲线的绘制
一、试剂的配制：2M硫酸溶液：56mL浓硫酸溶于944mL蒸馏水中。
过硫酸铵溶液：12g过硫酸铵溶于500mL蒸馏水中。
钼酸铵溶液：钼酸铵在110℃烘干一个半小时，用电子天平称取7g，称准至0.001g，溶于约500mL蒸馏水中，加入0.2g酒石酸锑钾及80mL浓硫酸，冷却后用蒸馏水稀释至1000mL，摇匀，贮于棕色瓶中，保质期2个月。
抗坏血酸溶液：称取17.6g抗坏血酸溶于约500mL蒸馏水中，加0.2gEDTA 及8mL甲酸，用蒸馏水稀释至1000mL，贮于棕色瓶中，保质期1个月。
10%盐酸羟胺溶液：10g盐酸羟胺溶于90mL蒸馏水中，贮于棕色瓶中。
0.12%邻啡啰啉溶液：0.12g邻啡啰啉溶于40mL蒸馏水中，加热至80℃（77℃时拿下），使其溶解，稀释至100mL，贮存于棕色瓶中，暗处保存一周。
二、磷标准曲线：1、磷酸根标准溶液的配制：称取0.7165g预先在100~105℃干燥过的磷酸二氢钾（分析纯），溶于约500mL蒸馏水中，移入1000mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，静置≥12小时，此溶液1L含0.5g磷酸根离子，再吸取10mL此溶液移入250mL容量瓶中，用水稀释至刻度，此溶液1L含0.02g磷酸根离子（PO43－）。
m（KH2PO4） 0.7165gm（PO43－）=————————×M（PO43－）=———————×94.97 g/mol M（KH2PO4） 136.09g/mol=0.5g即1L溶液中，n（PO43－）=0.5g/L稀释 0.5g/L10mL———→250mL n（PO43－）=—————=0.02g/L251mL此溶液移入50mL容量瓶中，n（PO43－）=0.02g/L÷50=0.0004 g/L=0.4 mg/L2、磷标准曲线的绘制：用10mL吸量管移0mL，1mL（10~9），2mL（10~8），3mL（10~7），4mL （10~6），5mL（10~5）于50mL容量瓶中，浓度分别为0，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0（mg/L）。
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铁标准曲线的绘制方法
1.方法原理
亚铁在pH3~9之间的溶液中，可与邻菲啰啉生成很稳定的橙红色络合物。
高铁离子可以通过还原剂还原成亚铁进行测定。
测量波长在510nm处，用邻菲啰啉分光光度法可测量Fe2+、Fe3+及总铁含量。
2.方法适用范围
此方法适用于一般环境水和废水中铁的监测，最低检出浓度为0.03mg/L，测定上限为5.00 mg/L。
对铁离子大于5.00 mg/L的水样，可适当稀释后再按照本方法进行测定。
3.仪器及试剂
3.1使用仪器
分光光度计，10mm比色皿
3.2试剂
3.2.1铁标准贮备溶液
称取0.7020g硫酸亚铁铵，溶于 (1+1)硫酸50mL中，转移至1000mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
此溶液含铁浓度为100μg/mL。
3.2.2 铁标准使用液
准确移取标准贮备溶液25.00mL置于100mL容量瓶中，加水至标线，摇匀。
此溶液含铁浓度为25.0μg/mL。
3.2.3盐酸(ρ1.19g/mL)，(1+3)盐酸溶液
3.2.4盐酸羟胺溶液
OH·HCl)=100g/L]：称取10g盐酸羟胺溶于水中，稀盐酸羟胺溶液[ρ(NH
2
释至100mL。
3.2.5 缓冲溶液：40g乙酸铵加50mL冰乙酸用水稀释至100mL。
3.2.6邻菲啰啉溶液：
邻菲啰啉溶液：称取0.5g邻菲啰啉溶于水中，加数滴盐酸帮助溶解，稀释至100mL。
3.2.7饱和乙酸钠溶液
4.铁标准曲线的绘制方法
4.1 标准曲线的绘制
将25.0μg/mL的铁标准溶液稀释5倍，变成5mg/L的铁标准溶液。
再依次移取铁标准液0、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL置于50mL比色管中，加(1+3) 盐酸1mL，100g/L盐酸羟胺溶液2~3mL，再加适量蒸馏水，在水浴中加热。
然后冷却至室温，加一小片刚果红试纸，滴加饱和乙酸钠溶液至刚果红试纸刚刚变红，加入5mL缓冲溶液和邻菲啰啉溶液2mL，加水至标线，摇匀。
显色15min后，用10mm 比色皿，以空白调零，在510nm处测量吸光度。
由经过空白校正的吸光度对铁的含量作图。
4.2 总铁的测定
采样后立即将样品用盐酸酸化至pH为1，分析时取一定量混匀水样至50mL比色管中，加(1+3) 盐酸1mL，100g/L盐酸羟胺溶液2~3mL，再加适量蒸馏水，在水浴中加热，以保证全部铁的溶解和还原。
若仍有沉淀应过滤除去。
4.3 Fe2+的测定
采样时将2mL盐酸放在一个100mL具塞的水样瓶内，直接将水样注满样品瓶，盖紧瓶塞以防氧化，一直保存到进行测量和显色。
分析时只需取适量水样，直接加入缓冲溶液和邻菲啰啉溶液，显色5~10min后，用10mm比色皿，以空白调零，在510nm处测量吸光度。
4.4 Fe3+的测定
Fe3+ = 总铁 - Fe2+
4.5 计算
m
铁（Fe，mg/L）=
V
式中，m——由标准曲线查得的铁量，mg/L
V——水样体积，mL
5.标准曲线绘制实例
标准溶液配制方法同4.1，用10mm比色皿，以空白调零，在510nm处测量吸光度。
由经过空白校正的吸光度对铁的含量作图。
铁含量测试数据见表1，铁含量标准曲线见图1。
表1 铁含量测试数据 序号
铁含量，mg/L 吸光度 1
0 0 2
0.2 0.050 3
0.4 0.099 4
0.6 0.150 5
0.8 0.200 6
1.0 0.256
曲线参数：
a = -2.900×10-3
b = 0.2565
γ= 0.9997 -0.050
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
吸光度
图1 铁含量标准曲线
6.注意事项
6.1各批试剂的铁含量如不相同，每新配一次试液，都需重新绘制标准曲线。
6.2若试样铁含量较高，可适当稀释；浓度低时可换用30mm 或50mm 的比色皿。