抗生素筛选浓度
最小抑菌浓度方案
最小抑菌浓度方案1. 引言在医学和生物科学领域，抑菌浓度是指能够抑制或杀死细菌生长的最低药物浓度。
准确确定最小抑菌浓度方案对于选择合适的抗生素和治疗感染病情非常重要。
本文将介绍最小抑菌浓度方案的定义、测定方法以及在临床应用中的重要性。
2. 最小抑菌浓度的定义最小抑菌浓度（Minimum Inhibitory Concentration，MIC）是指在特定培养条件下，使细菌生长受到抑制的最低抗生素浓度。
MIC可以用来评估抗生素对细菌的抑制能力，通常用于确认细菌的敏感性和抗药性。
3. 最小抑菌浓度的测定方法3.1 平板稀释法平板稀释法是最常用的测定最小抑菌浓度的方法之一。
该方法将不同浓度的抗生素溶液加入培养基中，通过稀释系列的方法获得一系列浓度。
然后将细菌接种在含有不同浓度抗生素的培养基上，观察生长情况来确定最小抑菌浓度。
3.2 微量稀释法微量稀释法在测定最小抑菌浓度方面也有广泛应用。
该方法将不同浓度的抗生素加入微量培养孔内，再加入一定量细菌悬液，通过观察细菌的生长情况来确定最小抑菌浓度。
3.3 E测试法E测试法结合了可扩散法和稀释法的优点，被广泛应用于快速准确地测定抗生素的最小抑菌浓度。
E测试法使用由抗生素浸渍的试纸片，在培养基表面形成抗生素浓度梯度。
然后将细菌接种在含有试纸片的培养基上，观察出现菌落抑制区的最低浓度，即为最小抑菌浓度。
4. 最小抑菌浓度的临床意义4.1 选药指导确定细菌的敏感性及抗药性对于选择合适的抗生素非常重要。
最小抑菌浓度可以帮助医生确定特定细菌对抗生素的敏感性，从而指导治疗方案的选择。
根据细菌的最小抑菌浓度结果，医生可以选择适合的抗生素进行治疗，以提高疗效并避免抗药性产生。
4.2 抗生素疗效评估最小抑菌浓度还可以用于评估抗生素的疗效及治疗效果。
根据细菌的最小抑菌浓度水平，可以判断抗生素对细菌的杀菌作用及疗效。
如果最小抑菌浓度较低，则说明抗生素对细菌的抑制作用较强，治疗效果可能较好。
抗生素筛选浓度
①以水为溶剂的抗生素贮存液应用0.22卩山滤器过滤除菌；
②用乙醇溶解的抗生素溶液无须过滤除菌；
③所有抗生素贮液都应放于不透光的容器中保存。
注意：镁离子是四环素的拮抗剂。
对于以四环素为筛选抗性的细菌，应使用不含镁离子的培养基，如LB 培养基。
下面是常用抗生素的贮液浓度及工作浓度
氨苄青霉素：贮液浓度50 mg/ml溶于水-20 C保存工作浓度20卩g/ml （严紧型质粒）60卩g/ml （松弛型质粒）
羧苄青霉素：贮液浓度50 mg/ml溶于水-20 C保存工作浓度20卩g/ml （严紧型质粒）60卩g/ml （松弛型质粒）
氯霉素：贮液浓度34 mg/ml溶于乙醇-20 C保存工作浓度25
卩g/ml （严紧型质粒）170卩g/ml （松弛型质粒）
卡那霉素：贮液浓度10 mg/ml溶于水-20 C保存工作浓度10
卩g/ml （严紧型质粒）50卩g/ml （松弛型质粒）
链霉素：贮液浓度50 mg/ml溶于水-20 C保存工作浓度10
卩g/ml （严紧型质粒）50卩g/ml （松弛型质粒）
四环素：贮液浓度5 mg/ml溶于乙醇-20 C保存工作浓度10
卩g/ml （严紧型质粒）50卩g/ml （松弛型质粒）质粒类型：。
G418详细信息
保存于运输说明：2-8℃详细信息：G418 sulfate (Geneticin) 现货供应说明：真核表达筛选用抗生素，可以用于筛选表达特定抗性基因的稳定细胞株。
筛选哺乳动物细胞，推荐起始筛选浓度为400微克/毫升；筛选植物细胞，推荐起始筛选浓度为10微克/毫升；筛选酵母，推荐起始浓度为500微克/毫升。
根据起始浓度的效果可以再适当升高或降低G-418的使用浓度。
分子式：C20H 40N4O10·2H2SO4分子量：692.71CAS＃：108321-42-2外观：白色粉末特性：溶解性：可溶于水、甲醇、缓冲液和培养基。
溶解后，0.22μm过滤除菌，分成小包装，4℃可保存12个月，-20℃保存时间更长。
最常用的储存液使用100mM HEPES(pH7.3)配制，浓度为50mg/ml。
使用HEPES配制的好处是：加入储存液不会改变培养体系的pH值。
储存条件：2-8℃Ordering InformationDescription Quantity Price(RMB)Cat. no.产地G418 sulfate 1g45011811-023 Invitrogen 5g200011811-023 Invitrogen其他公司产品：产地货号规格促销价赠送Gibco11811-0231G450(元)单道计时器一个Gibco11811-0235G2000元送4G优盘一个Amresco E5891G380元单道计时器一个Amresco E5895G1250元送4G优盘一个Merck3458101G400元单道计时器一个Merck3458105G1610元送4G优盘一个Promega V79831G420元单道计时器一个Promega V79835G1700元送4G优盘一个G418溶液的配制配的时候就是用配好的HEPES溶G418，然后过滤，不用高压灭菌了，配好后分装，-20度保存，用的时候取一管放4度。
质粒抗生素的选择原理
质粒抗生素的选择原理质粒抗生素是一种广泛应用于分子生物学实验中的工具，可以将目的基因转移到宿主细胞中，实现基因克隆、表达和筛选等目的。
然而，在选择质粒抗生素时，需要考虑多种因素，以确保实验结果的准确性和可靠性。
本文将从质粒抗生素的类型、浓度、毒性等方面探讨其选择原理。
1. 质粒抗生素的类型常用的质粒抗生素主要包括氨苄青霉素（Ampicillin, Amp）、卡那霉素（Kanamycin, Kan）、克拉霉素（Chloramphenicol, Cm）、四环素（Tetracycline, Tet）等。
每种抗生素具有不同的抗菌谱和作用机理，应根据实验需要选择合适的抗生素。
例如，Amp主要用于筛选质粒，抑制未转化的细胞生长；Kan可用于筛选质粒和选择带有抗性基因的细胞；Cm可用于选择带有抗性基因的细胞，但其毒性较大；Tet则可用于选择带有抗性基因的细胞，但对某些细胞有毒性。
因此，在选择质粒抗生素时，应根据实验需要和细胞对不同抗生素的敏感性进行综合考虑。
2. 质粒抗生素的浓度质粒抗生素的浓度直接影响着细胞的生长和质粒的复制。
一般来说，抗生素浓度越高，对细胞的选择性越强，但也会增加毒性和细胞死亡率。
因此，在选择抗生素浓度时，应根据实验需要和细胞的生长情况进行综合考虑。
例如，对于Amp，一般浓度为50-100 μg/mL；对于Kan，一般浓度为50-100 μg/mL；对于Cm，一般浓度为10-25 μg/mL；对于Tet，一般浓度为5-20 μg/mL。
但具体浓度还需要根据实验情况进行优化和调整，以保证实验结果的准确性和可靠性。
3. 质粒抗生素的毒性质粒抗生素除了具有选择性的作用外，还会对细胞产生毒性影响。
毒性包括细胞死亡率、生长受损、基因表达受影响等方面。
因此，在选择质粒抗生素时，应尽可能选择毒性较小的抗生素，以保证实验结果的准确性和可靠性。
例如，对于Amp，可能会对细胞的膜结构和细胞壁合成产生影响，导致细胞死亡率增加；对于Kan，可能会造成细胞膜的电荷失衡和蛋白质合成受到抑制，导致细胞死亡率增加；对于Cm，可能会对细胞的蛋白质合成产生影响，导致生长受损；对于Tet，可能会对细胞的核酸合成和蛋白质合成产生影响，导致基因表达受影响。
潮霉素B溶液(Hygromycin B)
leagene 。
com 北京雷根生物技术有限公司
潮霉素B 溶液
产品简介：
潮霉素B(Hygromycin B) 是一种由吸水链霉菌产生的抗生素，能够抑制细菌、真菌和一些高等真核生物细胞内的蛋白质生物合成来。
潮霉素B 属于是氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质的合成来阻止微生物生长，对原核细胞与真核细胞都是抑制作用。
Leagene Hygromycin B solution 常用于转基因实验的抗性筛选，筛选具有潮霉素B 的抗性基因。
产品组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 根据实验具体要求操作。
2、 一般植物细胞筛选浓度在20～200μg/ml ，动物细胞筛选浓度50～1000μg/ml ，应根据具体实验选择最佳筛选浓度。
编号 名称 CA0012 CA0012 Storage Hygromycin B solution (50mg/ml) 10ml 20ml 4℃ 避光
使用说明书 1份。
抗生素的配制
抗生素的配制储存液工作浓度(mg/ml)保存条件严紧型质粒(ug/ml)松驰型质粒(ug/ml)氨苄青霉素50(溶于水) -20℃20 60羧苄青霉素50(溶于水) -20℃20 60氯霉素34(溶于乙醇) -20℃25 170卡那霉素10(溶于水) -20℃10 50链霉素10(溶于水) -20℃10 50四环素5(溶于甲醇) -20℃10 50常用抗生素溶液抗生素贮存液a工作浓度浓度保存条件严紧型质粒松弛型质粒氨苄青霉素50mg/ml(溶于水)-20℃20μg/ml60μg/ml羧苄青霉素50mg/ml(溶于水)-20℃20μg/ml60μg/ml氯霉素34mg/ml(溶于乙醇)-20℃25μg/ml170μg/ml卡那霉素10mg/ml(溶于水)-20℃10μg/ml50μg/ml链霉素10mg/ml(溶于水)-20℃10μg/ml50μg/ml四环素b5mg/ml(溶于乙醇)-20℃10μg/ml50μg/mlDocument number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UTa：以水为溶剂的抗生素贮存液通过μm滤器过滤除菌。
以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。
所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。
b：镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基（如LB培养基）。
常用抗生素氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）溶解羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。
慢病毒介导SiRNA沉默SGMS2基因的单克隆细胞系构建中最佳MOI值及筛选抗生素浓度
慢病毒介导SiRNA沉默SGMS2基因的单克隆细胞系构建中最佳MOI值及筛选抗生素浓度金小花;秦高【摘要】目的：探究慢病毒介导RNAi沉默SGMS2基因的单克隆细胞系构建中最佳感染复数（ multiplicity of infection，MOI）及BSD基因筛选抗生素（ blasticidin）浓度。
方法荧光标记小鼠SGMS2干扰阴性对照慢病毒并按照MOI值0、10、30、60、120（ TU number／cell）分别侵染INS-1空白细胞，培养72 h后使用荧光显微镜拍照并计算细胞的荧光比率（％）及死亡率（％），以确定最佳MOI值。
小鼠胰岛素瘤INS-1空白细胞中加入0、1、2、3μg／mL blasticidin，第7天时采用MTT法检测细胞的死亡率，以确定细胞抗生素敏感浓度。
使用SGMS2干扰阴性对照慢病毒及SGMS2干扰慢病毒（病毒滴度：1×108 TU／mL）按照最佳MOI值侵染细胞，并用blasticidin敏感浓度进行阳性细胞筛选，获得混合系细胞。
当细胞的荧光率达90％时，进行单克隆稳转细胞系的构建。
结果最佳MOI值为60，此时细胞的荧光率达100％，但细胞的死亡率＜0.5％，细胞保持原有的形态。
当blasticidin敏感浓度为2μg／mL，此时空白细胞失去原有的贴壁性，全部死亡。
INS-1-SEMS2细胞第2次检测的Ct值28.21大于第1次检测的Ct值27.58，且siRNA的干扰效率为77.78％，siRNA 成功表达，混合稳转细胞系构建成功。
成功构建小鼠胰岛素瘤INS-1-SEMS2单克隆细胞系。
结论慢病毒介导RNAi沉默基因SGMS2的单克隆细胞系构建成功。
%Objective To optimize multiplicity of infection ( MOI) and antibiotics ( blasticidin) concentration selecting BSD gene in construction of monoclonal stable cell line by lentivirus vector-mediated RNA interence silenced gene SGMS2.Methods The INS-1 cells were transfected byfluorescence labeled negative control SGMS2-siRNA lentivirus at MOI of 0, 10, 30, 60 and 120 TU number/cell.The cells were photographed under fluorescent microscopy after 72 h cultivation, then fluorescence ratio and apoptosis rate were calculated to determine optimal MOI.The INS-1 cells were treated by blasticidin with different concentrations of 0, 1, 2, and 3 μg/mL, and the apoptosis rate was observed to acquire optimal concentration of antibiotics.The INS-1 cells were transfected by negative control SGMS2-siRNA lentivirus and SGMS2-siRNA lentivirus (virus titer:1 ×108TU/mL) at optimal MOI and positive-transfected cells were selected by blasticidin at optimal concentration, then mixed cell lines were acquired.The monoclonal cell line was constructed at fluorescence ratio of 90%.Results The optimal MOI was 60 with 100% fluorescence ratio, less than 0.5% apoptosis rate and keep original cellular morphology.The optimal concentration of blasticidin was 2 μg/mL with cell adherence disappear and all cells apoptosis.The Ct value of INS-1-SEMS2 cells detected at the second time was 28.21, which was greater than 27.58 at the first time.The interfering efficiency of siRNA was 77.78% which indicated a successful expression of siRNA and construction of monoclonal stable cell line ( INS-1-SEMS2 ).Conclusion The monoclonal stable cell line was successfully constructed by lentivirus vector-mediated RNA interence silenced gene SGMS2.【期刊名称】《中国生化药物杂志》【年(卷),期】2015(000)009【总页数】4页(P51-53,56)【关键词】小鼠胰岛素瘤INS-1细胞;感染复数;BSD基因筛选抗生素;细胞稳转株【作者】金小花;秦高【作者单位】苏州农业职业技术学院食品科学系化学与生物技术教研室，苏州215008;上海诺百生物科技有限公司，上海 200233【正文语种】中文【中图分类】Q78在动物细胞学和分子学试验中，将外源目的基因通过病毒介质转入动物细胞中，是一个非常重要的试验步骤[1]。
稳定细胞株筛选药物浓度确定方法
稳定细胞株筛选药物浓度确定方法
在使用G418、潮霉素B或嘌呤霉素筛选稳定细胞系细胞之前，需要先通过梯度实验确定适合该类细胞的最佳药物浓度。
对于一些常见的细胞系，通常可以在资料中找到推荐的药物浓度。
例如Hela细胞用400 μg/ml的G41或1 μg/ml的嘌呤霉素进行稳定细胞株筛选。
用G418或潮霉素B，选用在5天左右出现细胞大批死亡，2周全部死亡的浓度作为筛选浓度。
对于嘌呤霉素,通常采用在3-4天杀死全部细胞的浓度。
不同批次的药物活性有一定差异。
因此在使用新批次药物时，需要重新测定最佳浓度。
筛选抗生素的推荐使用浓度（μg/ml）
抗生素工作范围筛选浓度维持用量
G418 50-800 400-500 100
Hygromycin 50-800 200 100
Puromycin 0.25-2 0.5-10 0.25
1、在加入筛选药物前一天将细胞以50%密度接种到6孔板。
第二天在培养基中按G418(0,50,1000,200,400,800μg/ml)或者嘌呤霉素（0,1,2.5,5,7.5,10μg/ml）加入。
2、用G418筛选处理5-10天。
每2天观察细胞一次。
每4天跟换新的有抗生素的培养基（如果有必要可以更换得更勤）。
直到得到最佳浓度。
3、用嘌呤霉素处理4-7天。
每2天跟换新的有抗生素的培养基。
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LB培养基中抗生素的贮液配置和工作液浓度
①以水为溶剂的抗生素贮存液应用0.22 μm滤器过滤除菌；
②用乙醇溶解的抗生素溶液无须过滤除菌；
③所有抗生素贮液都应放于不透光的容器中保存。
注意：镁离子是四环素的拮抗剂。
对于以四环素为筛选抗性的细菌，应使用不含镁离子的培养基，如LB培养基。
下面是常用抗生素的贮液浓度及工作浓度
氨苄青霉素：贮液浓度50 mg/ml 溶于水-20℃保存工作浓度20 μg/ml （严紧型质粒）60 μg/ml （松弛型质粒）
羧苄青霉素：贮液浓度50 mg/ml 溶于水-20℃保存工作浓度20 μg/ml （严紧型质粒）60 μg/ml （松弛型质粒）
氯霉素：贮液浓度34 mg/ml 溶于乙醇-20℃保存工作浓度25 μg/ml （严紧型质粒）170 μg/ml （松弛型质粒）
卡那霉素：贮液浓度10 mg/ml 溶于水-20℃保存工作浓度10 μg/ml （严紧型质粒）50 μg/ml （松弛型质粒）
链霉素：贮液浓度50 mg/ml 溶于水-20℃保存工作浓度10 μg/ml （严紧型质粒）50 μg/ml （松弛型质粒）
四环素：贮液浓度 5 mg/ml 溶于乙醇-20℃保存工作浓度10 μg/ml （严紧型质粒）50 μg/ml （松弛型质粒）
质粒类型：。