高效液相色谱法操作规程
高效液相色谱法含量测定操作规程全文编辑修改
精选全文完整版可编辑修改高效液相色谱法含量测定1检验方法高效液相色谱法2检验原理高效液相色谱法系采用高压输液泵，将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对样品进行测定的色谱方法。
注入样品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依此进入检测器，由数据处理系统记录和处理色谱信号。
3检验试剂甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）、纯水（高纯水）、磷酸等。
4供试品溶液制备取要测试的供试品适量，参照《药典》及《制剂规范》，用规定的溶剂适宜的提取精制方法，配制成一定浓度的供试品溶液。
供试品溶液注入色谱柱前要经适宜的0.45nm的滤膜滤过。
5对照品溶液制备根据供试品所要测定的成分取相应的对照品，用适宜的溶剂配制成相应浓度的对照品溶液。
6流动相配制用高纯度的试剂配制流动相，水应为新鲜配制的高纯水。
配制好的流动相通过适宜的0.45nm 的滤膜滤过，用前脱气。
7操作7.1打开自动进样器、检测器、泵、柱温箱，进入工作站。
7.2自动进样器排气自动进样器排气用50%甲醇（用前脱气），点击自动进样器界面上的purge键，自动排气25分钟。
7.3泵排气分析界面中，设置方法参数，下载方法参数。
用流动相冲洗吸滤头，再把吸滤头浸入流动相中，逆时针旋转排气阀90-180度，点击purge键，排气3-4分钟，顺时针旋转排气阀90-180度，激活仪器。
7.4进样操作7.4.1.将对照品溶液和供试品溶液分别置于样品瓶中，盖上带有垫片的瓶盖，顺时针旋紧，7.4.2将样品瓶按顺序放置于样品瓶架上。
7.4.3设置方法参数，选择波长、柱温、流速、结束时间等，下载并保存方法文件，待色谱系统充分稳定，基线平直。
7.4.4设置批处理分析表。
分析界面主项目中，点击批处理分析，依次设置样品瓶号、样品瓶架号、样品名、方法文件、数据文件、进样体积，保存批处理分析表，点击批处理分析开始，开始数据采集。
7.4.5不同浓度的对照品溶液和同一浓度的供试品溶液应分别进样不少于5针。
高效液相色谱测定法标准操作规程
标准操作规程1目的：建立高效液相色谱测定法操作规程，以使检验操作规化。
2适用围：适用于高效液相色谱测定法检验操作全过程。
3责任：QC人员对本SOP实施负责。
4容高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入色谱柱，各组分在柱被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
4.1.对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。
色谱柱径一般为3.9~4.6mm，填充剂粒径为3~10μm。
超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。
4.1.1.色谱柱反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。
常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。
正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。
常用的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。
氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。
离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。
有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。
手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。
色谱柱的径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。
温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。
为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。
残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相pH值一般应在 2〜8之间。
残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH 值小于2或大于8 的流动相。
GMP认证全套文件资料37-高效液相色谱法标准操作规程
高效液相色谱法标准操作规程目的：建立高效液相色谱法标准操作规程。
适用范围：高效液相色谱法。
责任：质检员实施本操作规程，检验室主任负责监督本规程正确执行。
程序：高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器，色谱信号由记录仪或积分仪记录。
1.对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪。
色谱柱的填充剂和流动相的组分应按各品种项下的规定。
常用的色谱柱填充剂有硅胶和化学键合硅胶，后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶次之，氰基或氨基键合硅胶也有使用。
离子交换填充剂用于离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等填充剂用于分子排阻色谱等。
除另有规定外，柱温为室温，检测器为紫外吸收检测器。
在用紫外吸收检测器时，所用流动相应符合紫外分光光度法（附录ⅣA）项下对溶剂的要求。
正文中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应具体品种并达到系统适用性试验的要求。
一般色谱图约于20分钟内记录完毕。
2.系统适用性试验按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整。
应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子。
(1) 色谱柱的理论板数（n ） 在选定的条件下；注入供试品对仪器或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间t R （以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和半峰高宽（W h/2），按n=5.54(t R /（W h/2）计算色谱柱的理论板数。
如果测得理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数，应改普通色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的优劣等），使理论板数达到要求。
高效液相色谱仪操作规程
高效液相色谱仪操作规程一、目的：建立高效液相色谱仪的标准操作规程二、适用范围：本规程适用于本公司高效液相色谱仪操作规程的操作三、职责：质量检验员对本标准的实施负责四、正文：1.工作原理高效液相色谱是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,经进样阀注入供试品,由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器，色谱信号由积分仪记录，得到的信号-时间曲线。
2.系统适用性按各品种项下要求对仪器进行适用性试验,包括以下要求：色谱柱的理论板数（N）：理论板数应高于各品种项下规定的最小理论板数，若理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数,应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的优劣等）使理论板数达到要求。
分离度和拖尾因子：除另有规定外,分离度应大于1.5T应在0.95～1.05之间。
3.仪器组成本系统由LC-15ATvp溶剂输送泵、手动进样阀7725i、SPD-15Avp紫外检测器、Lcsolution工作站、电脑和柱温箱等组成。
4.准备4.1根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（箭头依次朝上）。
4.2检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
4.3准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，用吸气减压装置脱气。
4.4按标准操作规程配制样品和对照溶液，用合适的0.45 m滤膜过滤。
5.开机接通电源，依次开启泵，检测器（在进样前30min打开）、Lcsolution工作站。
5.1 LC-15C泵操作5.1.1逆时针转动泵的排液阀180°，打开排液阀；5.1.2按泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min(可设定)的流速冲洗，5min（可设定）后自动停止；5.1.3将排液阀顺时针旋转到底,关闭排液阀。
如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。
5.2 SPD-15A检测器参数设定5.2.1检测器显示屏显示λ（NM） abs (AV) range (AUFS) 1amp254 0.000 0.001 D“λ（NM）”项为波长，“abs (AV) ”项为吸光度，“range (AUFS) ”项表示量程，“1amp”项表示氘灯。
高效液相色谱仪操作规程
高效液相色谱仪操作规程1．开关机顺序●开机顺序：打开LC各单元电源－控制器电源－电脑－LC-Solution工作站，开机后能听到“哔”声。
●关机顺序：与开机顺序相反，即先关闭LC-Solution工作站－控制器－LC各单元电源2．流动相及样品的准备●流动相配制所用的有机相必须是色谱级的，所用的水必须是双重蒸馏水。
流动相必须经0.45um 的微孔滤膜过滤后方能进入LC系统。
水和有机相所用的微孔滤膜不同，有机相（如甲醇）的过滤用F膜，水用水膜。
●样品溶液亦必须用0.45um 的微孔滤膜过滤后才能进样。
3．工作站的进入及系统的开启●双击桌面上的“labsolution”图标，选择“operation”项并单击，在弹出窗口后按OK进入工作站。
●首先打开A、B泵上的排空阀（open方向旋转180度）。
然后按二泵面板上的“purge”键开始自动清洗A、B流路3分钟，然后在分析参数设置页中设置流速1ml/min，BCONC 0％，并设置合适的检测波长，柱温，停止时间。
在完成后点击“Download”将分析参数传输至主机。
●分析方法的保存：选择file－save method file as－取名保存文件●系统的启动：点击“instrument on/off”键开启系统（此时泵开始工作。
4．进样准备●观察基线及柱压，待基线平直（－5～80mv），压力稳定（0.5Mpa内）时方可进样。
5. 进样●点击助手栏中的“single start”键，弹出对话框，在对话框中输入“sample name”“method”“data file”等。
●填完后点击“start”，出现触发窗口，进样，仪器开始自动采样分析。
6. 数据文件的调用及查看●点击助手栏中的“Postrun analysis”键，打开数据处理窗口。
●打开文件搜索器，定位至数据文件所在文件夹，选择文件的类型，双击文件名即可打开数据文件（此时可以查看峰面积、保留时间等参数）。
HPLC操作规程
HPLC高效液相色谱操作规程
1、仪器操作前应仔细阅读操作手册，并在专人指导下进行。
2、打开电源前，检测仪器与电脑的电源线，数据线以及输液管道
是否连接正常。
3、打开电源，在仪器通过自检后，打开操作软件，选择合适的检
测器，建立仪器方法，设定实验方法。
4、将处理好的样品注入样品瓶，封好杯口，将样品瓶按顺序放入
样品盘中。
5、实验结束后，根据色谱柱类型用相应的流动相清洗柱30分钟，
若使用过缓冲液，应该用不少于10%的甲醇或者乙腈水溶液冲洗系统，以防堵塞。
冲洗完成后要用规定的液体保存色谱柱，长期不用要将柱子取下，两端拧紧，密封保存。
6、退出色谱工作站，关闭各模块电源开关，清洁实验工作面。
7、关闭仪器总电源开关，结束实验, 填写仪器使用记录。
注意事项：
1、所使用的流动相、缓冲溶液在使用前需经膜过滤、超声脱气，
样品经针头过滤器（0.02um）过滤。
2、流动相过滤时应注意用相应的有机膜或无机膜，不能混用。
3、停泵时应将泵的流量设置为0，使泵缓慢停止工作。
4、拆装柱时应注意柱子的方向。
高效液相色谱仪使用与操作规程
4 、检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正
常。
第二步、开 机
接通电源，依次开启不间断电源、四 元泵、自动进样器、柱温箱、检测器，待 泵和检测器自检结束后，打开电脑显示器、
主机，最后打开色谱工作站。
一）参数设定
1、 波长设定： 2 、流速设定： 3 、流动相规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积
的流动相。
检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。
观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如
超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按检查管路后再操
作。
观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min，噪声
二、样品
1、采用过滤或离心方法处理样品，
确保样品中不含固体颗粒； 2、用流动相或比流动相弱（若为反
相柱，则极性比流动相大；若为
正相柱，则极性比流动相小）的 溶剂制备样品溶液，尽量用流动
相制备样品液；
3、手动进样时，进样量尽量小，使 用定量管定量时，进样体积应为 定量管的3～5倍；
第四步、注意事项
人的方法及实验结果；
3、使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒， 洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针
筒3遍以上，并排除针筒中的气泡；
4、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过 滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用 5%稀硝酸溶液浸泡后再洗
四、出现肩峰或分叉
1.样品体积过大
1.用流动相配样,总的样品体积小于第一峰 的15% 2.样品溶剂过强 3.柱塌陷或形成短路通道 4.柱内烧结不锈钢失效 2.采用较弱的样品溶剂 3.更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件
hplc操作规程
hplc操作规程HPLC（高效液相色谱）是一种高效、准确、灵敏的分析技术，广泛应用于化学、生物、药物等领域。
为了确保HPLC分析的准确性和可靠性，有必要制定一份详细的HPLC操作规程。
以下是一个HPLC操作规程的示例，共计1200字。
HPLC操作规程1. 实验前准备工作(1) 确保仪器处于正常工作状态。
检查HPLC系统的压力、流速、温度等参数，确保所有泵、检测器和采样器都能正常工作。
(2) 根据实验的需求，准备好HPLC色谱柱和色谱柱保护柱。
(3) 检查溶液的pH值、浓度等参数，确保样品溶液的配制准确无误。
2. 样品制备(1) 根据实验需求，准确称取适量的样品，并将其溶解于适量的溶剂中。
(2) 需要注意的是，溶解样品时要完全溶解，避免残留物对HPLC柱造成损害。
(3) 使用过滤器或离心机去除样品中的杂质和固体颗粒。
3. 系统平衡(1) 打开HPLC系统的所有阀门，确保流路畅通。
(2) 开始系统平衡前，关闭检测器和采样器，以避免样品流入检测器和采样器。
(3) 启动系统，调整流速至实验所需的流速。
通常流速为0.2-2 mL/min。
(4) 进行15-30分钟的系统平衡，确保系统稳定。
4. 校正和质量控制(1) 定期校正流速、温度和检测器灵敏度等参数，确保实验结果的准确性。
(2) 进行质量控制，包括运行标准曲线、检测器灵敏度和峰面积的稳定性等测试，以确保分析结果的可靠性。
5. 样品注射(1) 将样品以合适的方式注入采样环或自动采样器中。
(2) 确保注射量适当，一般不超过色谱柱的容量的10%。
(3) 使用空白样品作为对照，进行注射前和注射后的检测，以排除注射器、柱等可能引起的峰偏移或异常的情况。
6. 数据采集和分析(1) 设置合适的检测波长和积分时间，以获得准确的检测结果。
(2) 在实验过程中定期检查系统的稳定性和峰形。
(3) 根据实验要求，对分析结果进行计算和解释，包括峰高、峰面积、保留时间等指标。
(4) 记录得到的数据和结果，保存实验记录和报告。
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目的：建立高效液相色谱法的标准操作规程，保证正确操作。
范围：本标准适用于高效液相色谱法的操作。
责任者：QC主任，设备使用人员。
规程：依据：《中华人民共和国药典》2000年版二部。
1 •定义及概述：1.1高效液相色谱法是一种现代液体色谱法,其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液作为流动相，用高压输液泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱留或进行数据处理，得到测定结果。
由于应用各种性质的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高，分析速度快的特点。
1.2高效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定，特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。
有的药品需要在色谱分离前或后经过衍生化反应，方能进行分离或检测。
常用的色谱柱填充剂有：硅胶用于正相色谱；化学键合固定相，根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱，其中最常用的是十八烷基硅烷（又称ODS）键合硅胶，可用于反相色谱或离子对色谱离子交换填料，用于离子交换色谱，是有一定孔径的大孔填料，用于排阻色谱。
1.3高效液相色谱仪基本由泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理机组成。
检测器最常用的为可变波长紫外检测器或紫外一可见检测器。
色谱信息的收集和处理常用积分仪或数据工作站进行。
梯度洗脱，可用两台泵或单台泵加比例阀进行程控实现。
2. 高效液相色谱仪的使用要求：2.1按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“实验室液相色谱仪检定规程（JJG705-90）”的规定作定期检定，应符合规定。
2.2,仪器各部件应能正常工作，管路为无死体积连结，流路中无堵塞或漏液，在设定的检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。
2.3具体仪器在使用前应详细参阅各操作说明书。
3. 操作前的准备：3.1流动相的制备：用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；水应为新鲜制备的高纯水。
对规定PH值的流动相，应使用精密PH计进行调节。
配制好的流动相应通过0.45a m。
适宜的滤膜滤过，用前脱气。
应配制足量的流动相及时待用。
3.2供试溶液的配制：供试品用规定溶剂配制成供试溶液。
定量测定时, 对照品溶液和样品供试溶液均应分别配制2份。
供试溶液在注入色谱仪前，一般应经0.45a m适宜的滤膜滤过。
必要时，在配制供试溶液前，样品需经提取净化，以免对色谱系统产生污染。
3.3检查上次使用记录和仪器状态:检查色谱柱是否适用于本次试验，色谱柱进出口位置是否与流动相的流向一致，原保存溶剂与现用流动相能否互溶，流动相的PH值与该色谱柱是否相适应，仪器是否完好，仪器的各开关位置是否处于关断的位置。
4操作：4.1泵的操作；用流动相冲洗滤器，再把滤器浸入流动相中，启动泵。
打开泵的排放阀，用专用注射器从阀口抽出流动相约20ml,设置高流速（9ml/min）或用冲洗键PURGE进行充泵排气，观察出口处流动相呈连续液流后，将流速逐步回零或停止（STOP冲洗，关闭排放阀。
4.1.3将流速调节至分析用流速，对色谱柱进行平衡，同时观察压力指示应稳定，用干燥滤纸片的边缘检查柱管各连接处应无渗漏。
初始平衡时间一般约需30分钟，如为梯度洗脱，应在程序器上设置梯度状态，用初始化比例的流动相对色谱柱进行平衡。
4.2紫外可见光检测器和色谱数据处理机的操作。
4.2.1开启检测器电源开关，选择光源（氘灯或钨灯），选定检测波长，待稳定后，测试参比和样品光路的信号应符合要求，设置吸收度方式和检测响应时间（一般不大于1秒），设置满刻度吸收值（适用于记录仪）。
422开启色谱处理机，设定处理方法，初步设定衰减、纸速、记录时间、最小峰面积等参数，或设定记录仪的纸速和衰减。
423进行检测器回零操作，检查处理机的电平（LEVEL），应符合要求，或检查记录仪的笔应处在设定的起始位置，如有变动，可继续加零操作直至符合要求。
424记录基线，待稳定后，进行处理机斜率测试符合要求方能进行操作。
4.3进样操作（六通阀式进样器）4.3.1把进样器手柄放在载样位置（LOAD ）。
4.3.2用供试溶液清洗配套的注射器，再抽取适量，如用定量环（LOOP）载样，则注射器抽取量应不少于定量环容积的5倍，用微量注射器定容进样时，进样量不得多于环容积的50%。
在排除气泡后方能向进样器中注入供试溶液。
4.3.3把注射器的平头针直插至进样器的底部，注入供试溶液，除另有规定外，注射器不应取下。
4.3.4把手柄转至注样位置（INJECT）,定量环内供试溶液即被流动相带人流路。
4.4色谱数据的收集和处理：441注样的同时启动数据处理机，开始采集和处理色谱信息，如采用记录仪，则注样同时按一下记号键，作起始记号。
4. A.2最后一峰出完后，应继续走一段基线，确认再无组分流出，方能结束记录。
4.4.3根据第一张预试的色谱图，适当调整各有关参数，使色谱峰信号在色谱图上有一定强度。
4.4.4含量测定的对照溶液和样品供试液每份至少注样2次，由全部注样结果（n>4）求得平均值，相对标准偏差（RSD）应不大于1.5%o4.4色谱系统适用性试验应符合中国药典的要求，如按指定峰计算的理论板数t R(1) n =5.54 ( ------ ) 2W h/2其中：tR 为保留时间;Wh/2为半高峰宽，取相同单位。
W o.O5(2) t= ------------2d i其中:W0.05为离基线5%峰高处的峰宽,di 为峰上升边离5%峰高处的距离。
(3) R =(t R2_ t R1) /(W 1 +W 2)其中：tR1和tR2分别为相邻前后二峰的保留时间；W1和W2则分别为其峰 的底宽，t 和W 取相同单位；W 为峰1, 2的半高峰宽。
(4)重复性，取各品种项下对照溶液，连续进行进样5次，除另有规 定外，其峰面积测定值的相对标准偏差应不大于2.0%。
也可按各品种校正因 子项下，配制相当于80%、100% 120%的对照品溶液，加入规定量的内标 准溶液，配成三种不同浓度的溶液，分别进样3次，计算平均校正因子，其 相对标准偏差也应不大于2.0%。
4.测定结果处理：4.1峰面积归一法，按药品标准有关项下进行峰面积归一法求组分含量的按下式计算： 百分含量[C%] =[刀Ai /刀A]X 100%其中：E Ai 为被测含量组分峰面积，刀A 为参与计算的全部峰面积之和。
4.2内标法：用含对照品和内标物质的对照溶液所得色谱峰响应值，按下式算出校正因子(f )：As/msAr/mr其中：As 和Ar 分别为内标物质和对照品的峰面积或峰高；ms 和mr 分别为 加入内标物质和对照品的量。
再根据含内标物质的供试品溶液色谱峰响应值， 计算含量(mi )AiMi=f x ——As/ms其中：Ai和AS分别为供试品和内标物质的峰面积或峰高，ms为加入内标物质的量。
4.3外标法：用含对照品的对照溶液所得色谱峰响应值，按下式计算比值(r)：r=Cr/Ar其中：Cr和Ar分别为对照品的浓度和相应的峰面积或峰高。
再根据供试品溶液的色谱峰响应值，计算供试品中被测成分的浓度(Ci)：Ci=r XAi其中：Ai为供试品溶液中被测成分的峰面积或峰高。
清洗和关机：5.1分析完毕后，先关检测器和数据处理机，再用适当经滤过和脱气的溶剂清洗色谱系统，正相柱一般用正己烷，反相柱如使用过含盐流动相，则先用水洗，然后用甲醇一水冲洗，冲洗前先按4.1.1—4.1.2操作，再用分析流速冲洗，各冲洗溶剂一般冲洗15-30分钟，特殊情况应延长冲洗时间。
5.2冲洗完毕后，逐步降低流速至0,关泵，进样器也应用相应溶剂冲洗，可使用进样阀所附专用冲洗接头。
5.3关断电源，作好使用登记，内容包括日期、检品、色谱柱、流动相、柱压、使用小时数、仪器完好状态等。
6.注意事项：6.1色谱柱与进样器及其出品端与检测器之间应无死体积连接，以免试样扩散影响分离。
6.2新住或被污染柱用适当溶剂冲洗时，应将其出口端与检测器脱开，避免污染。
6.3使用的流动相应与仪器原保存溶剂互溶，如不互溶，则先取下上次的色谱柱，照4.1.1-4.1.2的方法用异丙醇冲洗过渡，过渡完毕后，接上相应的色谱柱，换上本次使用的流动相，再按4.1.1顺序操作。
6.4压力表无压力显示或压力波动时不能进行分析,应检查泵中气泡是否已排除，各连接处有无漏液，排除故障后方能进行操作。
如压力升高，甚至自动停泵，应检查柱端有无污染堵塞，可小心卸开柱的进口端螺帽，挖出被污染填冲剂后，补入同类填充剂，仔细安装好，再进行操作。
6.5发现记录基线波动，出现毛剌等现象，首先应检查检测器流通池中是否有气泡或污染，如不是流通池引起，可等待氘灯稳定，同时检查仪器的接地是否良好，必要时换上新的氘灯。
仪器稳定后方能进行操作。
6.6进样前，色谱柱应用流动相充分冲洗平衡，如系统适用性并不符合规定，或填充剂已损坏，则应更换新的同类色谱柱进行分析，由于同类填充剂的化学键合相的键合度及性能等存在一定差异，往往依法操作达不到预定的分离时，可更换另一牌号的同类色谱柱进行试验。
6.7以硅胶作载体的化学键合相填充剂的稳定性受流动相pH值的影响，使用时，应详细参阅说明书，在规定的pH值范围内选用流动相，一般PH 范围为（2.5—7.）。
使用高PH值流动相时，可在泵与进样器之间连接一硅胶短柱，以饱和流动相，保护分析柱，并尽可能缩短在高PH值下的使用时间，用后立即冲洗。
6.8各色谱柱的使用应登记，以方便选择和更新。
6.9色谱流路系统，从泵、进样器、色谱柱到检测流通池，在分析完毕后，均应按1.充分冲洗，特别是用过含盐流动相的，更注意先用水，再用甲醇一水，充分冲洗。
如发现泵漏液等较严重的情况，应请有经验的维修人员进行检查、维修。
6.10上述操作法为通用方法，各该仪器的特殊操作要求，详见说明书及SOP-QC-238-0设备的操作规程。