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基因工程课后习题答案
基因工程课后习题答案基因工程课后习题答案基因工程是一门涉及生物学、遗传学和生物技术的综合学科，它的发展和应用在医学、农业、环境保护等领域具有重要意义。
在学习基因工程的过程中，我们常常会遇到一些习题，下面是一些常见的基因工程课后习题及其答案，希望能对大家的学习有所帮助。
1. 什么是基因工程？基因工程是利用生物技术手段对生物体的基因进行操作和改变的过程。
它包括了基因的克隆、重组、转染和编辑等技术，旨在实现对基因组的精确控制和改造。
2. 请简要介绍基因克隆的步骤。
基因克隆是指将感兴趣的基因从一个生物体中复制并插入到另一个生物体中的过程。
其步骤主要包括：DNA提取、DNA片段的切割、载体DNA的准备、DNA片段的连接、转化和筛选等。
3. 什么是重组DNA技术？重组DNA技术是指将来自不同生物体的DNA片段进行切割，然后通过连接酶将其重新组合成新的DNA分子的过程。
重组DNA技术的应用广泛，可以用于基因克隆、基因表达、基因治疗等领域。
4. 请简要介绍PCR技术。
PCR（聚合酶链反应）是一种体外扩增DNA的技术。
它通过不断重复DNA的变性、退火和延伸等步骤，可以在短时间内大量复制目标DNA序列。
PCR技术在基因工程中被广泛应用于基因克隆、基因检测和DNA测序等方面。
5. 什么是基因编辑技术？基因编辑技术是指通过直接对基因组进行修改，实现对目标基因的精确编辑和改造的技术。
目前最常用的基因编辑技术是CRISPR-Cas9系统，它可以实现高效、精确和经济的基因编辑，对于研究基因功能和治疗基因相关疾病具有重要意义。
6. 基因工程在医学领域有哪些应用？基因工程在医学领域的应用非常广泛，包括基因治疗、药物生产、疫苗研发等方面。
例如，通过基因工程可以将治疗性基因导入患者体内，用于治疗遗传性疾病和癌症等疾病；还可以利用基因工程技术生产重组蛋白药物，如胰岛素和生长激素等。
7. 基因工程在农业领域有哪些应用？基因工程在农业领域的应用主要包括转基因作物的培育和农业有害生物的控制。
基因工程课后习题答案
2．质粒DNA和病毒（噬菌体）DNA作为载体的主要特征是什么为外源基因提供进入受体细胞的转移能力；为外源基因提供在受体细胞中的复制能力或整合能力；为外源基因提供在受体细胞中的扩增和表达能力；具有多种单一的核酸内切酶识别切割位点，具有合适的选择标记3．如何理解质粒的不相容性及其在DNA重组克隆过程中的运用意义质粒的不相容性：具有相同或相似复制子结构及调控模式的两种不同的质粒不能稳定存在于同一受体细胞内.4．列举表达质粒、穿梭质粒、探针质粒和cos质粒的不同用途表达质粒:在多克隆位点的上下游分别装有两套转录效率较高的启动子、合适的核糖体结合位点序列（SD）序列以及强有力的终止子结构，使得克隆在合适位点上的任何外源基因均能在受体细胞中高效表达。
穿梭质粒：质粒分子上含有两个亲缘关系不同的复制子以及相应的选择性标记，能在两种不同的受体细胞中复制并检测。
探针质粒：用来筛选克隆基因的表达调控元件。
通常含有报告基因，但缺少相应的调控序列（如启动子或终止子），只有含有启动子或终止子的调控序列被克隆进入载体后，报告基因才能别表达，表达量的大小直接反应了克隆进入的调控元件的强弱。
cos质粒：人工构建的含有λDNA的cos位点序列和质粒复制子的特殊类型的质粒载体。
具有大的装载量，可以用于构建基因组文库。
5． II类限制性核酸内切酶的主要酶学特征是什么分子量较小的单体蛋白，双链识别和切割活性仅需Mg2+，识别位点为4-6个bp的回文序列，切割位点在识别序列中或靠近识别序列7． KLenow酶与大肠杆菌DNA聚合酶I在结构和功能上的主要区别DNA聚合酶I包括大片段(klenow片段)和小片段功能上：DNA聚合酶I比klenow酶多了5’→3’核酸外切酶活性，两者都具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性。
8．影响限制性核酸内切酶活性的主要因素有哪些？温度、盐度等物理因素，DNA样品纯度，DNA甲基化程度，限制性核酸内切酶的缓冲液性质，甘油和微量的金属离子会抑制限制性内切酶的活性9.如何理解粘性末端比平头末端更容易连接在退火条件下，粘性末端的连接为分子内反应，平头末端是分子间反应，平头末端的连接反应更加复杂，速度也慢。
基因工程试题及答案.doc
基因工程试题一、名词解释(4 ‘*10)1.基因工程技术：按照人们的愿望，进行严密的设计，通过体外DNA 重组和转移等技术，有目的地改造生物种性，使现有物种在较短的时间内趋于完善，创造出新的生物类型。
2.感受态细胞：受体细胞经一些特殊方法(如CaC12、RbCl (KC1) 等化学试剂)处理后，细胞膜的通透性发生了暂时性改变，成为能允许外源DNA 分子进入的细胞状态。
3.cDNA文库：从组织细胞中分离得到纯化的mRNA,然后以mRNA为模板，利用逆转录酶合成其互补DNA,再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后导入受体菌内，扩增，构建cDNA文库。
4.鸟枪法：指将某种生物体的全基因组或单一染色体切成大小适宜的 DNA 片段，分别连接到载体DNA上，转化受体细胞，形成一套重组兑隆，从中筛选出含有目的基因的期望重组子。
5.SD序列(Shine-Dalgarno):位于翻译起始密码了•上游的6-8个核苷酸序列(5’ UAAGGAGG 3’)，它通过识别大肠杆菌核糖体小亚基中的16S rRNA 3’端区域3’ AUUCCUCC 5’并与之专一性结合，将mRNA定位于核糖体上，从而启动翻译。
6.包涵体：胞内高效表达时，工程菌因大景合成异源蛋白质所形成的水不溶性积聚物。
7.复合转座子：是由两个重复序列夹着一个或多个结构基因如某些抗药性基因和其它基因组成。
存在于R因子及其它质粒中。
复合转座子两端的组件由IS和类IS组成。
8.菌落原位杂交：是将菌落或噬菌斑转到固相膜上，原位裂解细胞后使核酸固定在膜上，然后与探针杂交。
用标记的核酸探针，经放射自显影或非放射检测体系，在组织细胞间期染色体上对核酸进行定位和相对定量研究的一种手段。
9.RACE：是一种通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术，是以mRNA 为模板反转录成cDNA第一链后用PCR技术扩增出某个特异位点到3, 或5，端之间未知序列的方法。
10.连续式发酵：即在连续发酵反应器中，细胞的总数和培养液总体积同时维持恒定，前提是由培养液流出所造成的细胞损失正好为细菌分裂所产生的新细胞弥补。
基因工程课后习题答案
基因工程课后习题答案基因工程，也称为遗传工程，是一种通过直接操作生物体的基因来改变其遗传特性的技术。
这项技术在医学、农业、工业和环境科学等领域有着广泛的应用。
以下是一些基因工程课后习题的答案：1. 基因工程的定义：基因工程是利用分子生物学技术，将外源基因插入到宿主生物体的基因组中，使其表达出新的或改变的遗传特性。
2. 基因工程的基本步骤：- 目标基因的获取：通过PCR扩增、基因克隆等方法获得目标基因。
- 基因载体的构建：将目标基因插入到合适的载体中，如质粒、病毒等。
- 转化：将构建好的载体导入到宿主细胞中。
- 筛选：通过抗生素抗性标记等方法筛选成功转化的细胞。
- 表达：在宿主细胞中表达目标基因，产生所需的蛋白质或性状。
3. 基因工程在农业中的应用：基因工程可以用于培育抗虫、抗病、抗旱、耐盐碱等性状的作物品种，提高作物的产量和质量。
4. 基因工程在医学中的应用：- 生产药物：利用基因工程技术生产胰岛素、干扰素等生物药物。
- 基因治疗：通过修复或替换缺陷基因来治疗遗传性疾病。
5. 基因工程可能带来的伦理问题：基因工程可能引发生物安全、生物多样性丧失、基因歧视等伦理问题，需要在实施过程中进行严格的伦理审查和监管。
6. 基因工程的安全性问题：基因工程产品可能存在潜在的食品安全和环境安全问题，如转基因作物可能对非目标生物产生影响，需要进行长期的环境影响评估。
7. 基因工程的未来发展趋势：随着基因编辑技术如CRISPR-Cas9的发展，基因工程将更加精准和高效，有望在治疗遗传病、提高作物产量等方面发挥更大的作用。
8. 基因工程的法律和政策：不同国家和地区对基因工程的法律和政策不同，需要遵守当地的法律法规，确保基因工程的安全和合法性。
通过这些习题答案，学生可以更好地理解基因工程的基本概念、技术流程、应用领域以及面临的挑战和未来发展。
基因工程原理习题参考答案
基因工程原理习题集参考答案一、名词解释1、DNA分子克隆技术：克隆，指含有单一的DNA重组体的无性繁殖系，或指将DNA重组体引入宿主细胞建立无性繁殖系的过程。
DNA分子克隆技术也称基因克隆技术，是在体外将DNA分子片段与载体DNA片段连接，转入细胞获得大量拷贝的过程。
其基本步骤包括：制备目的基因→将目的基因与载体用限制性内切酶切割和连接，制成DNA重组→导入宿主细胞→筛选、鉴定→扩增和表达。
载体在细胞内自我复制，并带动重组的分子片段共同增殖，从而产生大量的DNA分子片段。
主要目的是获得某一基因或DNA片段的大量拷贝，有了这些与亲本分子完全相同的分子克隆，就可以深入分析基因的结构与功能，随着引入的DNA片段不同，有两种DNA库，一种是基因组文库，另一种是cDNA库。
2、分子杂交：两条不同来源的DNA（或RNA）链或DNA与RNA之间存在互补顺序时，在一定条件下可以发生互补配对形成双螺旋分子，这种分子称为杂交分子。
形成杂交分子的过程称为分子杂交。
3、限制性片段长度多态性：从不同个体制备的DNA，使用同一种限制性内切酶酶切，切得的片段长度各不相同。
酶切片段的长度可以作为物理图谱或者连接图谱中的标记子。
通常是在酶切位点处发生突变而引发的。
4、报告基因：一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因,也就是说,是一个表达产物非常容易被鉴定的基因、5、多聚酶链式反应（PCR）：一种体外扩增DNA的方法。
PCR使用一种耐热的多聚酶，以及两个单链引物。
以过高温变性将模板DNA分离成两条链。
低温退火使得引物和一条模板单链结合，然后是中温延伸，反应液的游离核苷酸紧接着引物从5/端到3/端合成一条互补的新链。
而新合成的DNA又可以继续进行上述循环，因此DNA的数目不断倍增。
6、核酸的凝胶电泳：将某种分子放到特定的电场中，它就会以一定的速度向适当的电极移动。
某物质在电场作用下的迁移速度叫做电泳的迁移率，它与电场强度成正比，与该分子所携带的净电荷数成正比，而与分子的摩擦系数成反比（分子大小、极性、介质的粘度系数等）。
基因工程考核试题标准答案及评分细则.doc
《基因工程技术》题库第一章概论一、名词解释题基因，基因工程技术，内含子，外显子%1.简答题1.基因具有什么功能？2.基因工程技术的主要操作内容是什么？3.用图示筒要说明基因工程技术的技术路线。
4 .简述基因工程技术的巨大意义有我国在该领域取得的成就?5.生物制药专业的学生为什么要学习基因工程技术？第二章DNA重组一、名词解释题遗传密码，变性，复性，复制子，翻译与转录，基因突变与突变基因，表达二、简答题1.DNA的组成单位是什么？组成元素有哪些？组成成分是什么？2.基因突变的生物学效应是什么？3.D NA的复制与转录有何异同点？如何利用基因突变为制药服务？4 .简述生物物种的遗传稳定性和进化原理与DNA的性质与功能的关系第三章植物基因工程技术一、名词解释题转基因植物，植物细胞反应器，抗逆性，叶盘法二、简答题1.从用途出发，转基因植物FI前可以分为儿类？2.图示植物遗传转化基本过程3.简述农杆菌介导法生产转基因植物的注意事项。
4.植物基因工程技术研究应用在医药上的优势是什么？5.什么是抗虫转基因植物？第四章动物基因工程技术一、名词解释题动物乳腺生物反应器，转基因动物，显微注射法，胚胎干细胞1.简述转基因动物技术路线2.显微注射法制备转基因动物的主要过程及注意事项是什么？3.简述动物基因工程技术与医药领域的应用。
一、名词解释题细胞因子，基风工程技术抗体，基风工程技术疫苗，基因治疗二、简答题1.举例说明细胞因子的种类、功能及其临床应用2.简述基因工程技术抗体种类及结构特点3.举例说明基因工程技术激素类药物及其临床应用4.简述基因诊断和治疗的原理第六章基因工程技术工具酶一、名词解释题限制性内切酶，平末端与粘性末端，酶活性单位，回文序列二、简答题1.限制性内切酶的特点与使用注意事项有哪些？2.影响限制性内切酶反应的因素有哪些？3.简述限制性内切核酸酣在基|大I工程技术中的作用。
4.举例说明不同类型DNA片段是如何连接的。
《基因工程》习题及参考答案
《基因工程》习题及参考答案一、习题：1. What are biotechnology and genetic engineering?2. What is a gene?3. What are genetically engineered medicines?4. What do genome research and human genetics deal with?5. What potentials are held out by genetic diagnosis?6. What options are given by gene therapy?7. What is an embryo - and what is a fetus?8 What is a genetic fingerprint?9 What does the term "therapeutic cloning" mean?10 What are stem cells?11 What is a transgenic organism?12 What does xenotransplantation mean?13 How will genetic engineering be used in agriculture?14 How are genetically modified organisms assessed?15 What does the German Embryo Protection Act regulate?16. What is a genome?17. Is there a risk of bioterrorism?18. How does genetic engineering affect the environment?19. Are genetically engineered crops good for farmers?20.What is the difference between restriction digestion and restriction mapping?21.Can you combine two different restriction enzymes in the same reaction tubes todigest the DNA molecules?22.Why should we need to generate restriction mapping data?23.How many restriction enzymes available now on the market?24.Why do you consider mutagenesis in vitro as one of the most critical techniquesfor us to understand in genetic engineering class?25.How do we choose the methods for DNA modification?26.How do we choose a gene expression system?27.How can we express eukaryotic gene in E.coli?28.What should we consider before we start the recombinant protein expressionexperiment?29.What is the advantage of yeast expression system?30.What is the advantage of insect expression system?31.Why there are so many different types of vectors available for cloning?32.What is the difference between cloning vector and expression vector?33.What is a genetic fingerprint?34. 基因具体分成多少种类？35. 什么叫印记基因？36．什么叫遗传漂变？37．人类基因组图谱和初步分析结果是在哪一年公布的？38．人类基因组共有多少基因?39. 克隆羊成功的技术关键是什么？40. 有人计划将两个不同物种的动植物体细胞进行融合，然后将融合体的核移植到其中一种生物的未受精卵细胞中，进行体细胞克隆。
《基因工程》各章内容及参考答案(42页).docx
复习题1 （包括分子生物学基础知识）（请各位同学将所有题目翻译成英文后再做!）一、解释下列名词1.Gene manipulation2.Promotor3.Cloning:4.Subcloning二、填空题：将下列各题空缺部分的答案填在后面的方框内，两者用“；”隔开。
1.基因操作（Gene manipulation）的核心部分是基因克隆（gene cloning）, gene cloning的基本要点有（），（）和（）。
2.（）是遗传物质的基木单位，也是作为遗传物质的核酸分子上的一段片段。
它可以是连续的，也可以是（）；可以是（），也可以是RNA；可以存在于染色体上，也可以（）3.基因操作并不是一个法律概念，除了包括基因克隆外，还包括基因的（）、（）、（）和（）等与基因研究相关的内容。
4.启动子（Promo（or）是指（）。
通常一个Gene是否表达，（）是关键的一步，是起决定作用的。
在转录过程屮，Promoter还是（）的结合位点。
5.原核生物的RNApolymerase主要由两部分组成：（）和（），其屮。
■因子并不参与RNA 的合成，它的作用主要是（）。
6.从（）到（）的这一段距离称为一个转录单位，或者一个转录产物，其屮可包括一个或者多个Gene。
7.转录终止子主要有两种，一种是（），另一种是（）。
8.重叠基因（Overlapping gene）是指（）,间隔基因（Interrupted gene）是指（）三、选择题：从备选答案中选出正确的结果，正确答案是唯一的。
四、简答题：1.简述基因克隆的两个基本特征？参考答案：基因克隆的两个基本特征是一是强调外源核酸分子（一般情况下都是DNA）在不同宿主屮的繁殖，打破自然种的界限将来自于不相关物种的基因放入一个宿主中是基因操作的一个重要特征，基因操作的另一个重要特征是繁殖。
2.什么是gene cloning ?什么是亚克隆（subcloning） ?参考答案：基因克降：一定程度上等同于基因的分离，即从复杂的生物体基因组中，经过酶切，消化等步骤，分离带有目的基因的DNA片段。
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名词解释基因工程：用人工方法, 在体外对DNA分子进行切割、连接，组成重组DNA分子，再导入生物体内,并使其在异种生物内复制、表达,从而使受体生物获得新的遗传性状,这一全过程称为基因工程。
（PPT）限制酶：限制酶是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链结构的核酸内切酶。
（P 21页）DNA连接酶：DNA连接酶是一种能够将两段DNA拼接起来的酶称为DNA连接酶。
（或DNA连接酶是一种能够催化双链DNA片段紧靠在一起的3`羟基末端与5`磷酸基团末端之间形成磷酸二酯键，使两末端连接起来的酶）（P 27页）DNA聚合酶：DNA聚合酶是能够催化DNA复制和修复DNA分子损伤的一类酶。
（P 30页）DNA修饰酶：DNA修饰酶是一类通过添加或删除化学基团来修饰DNA分子的酶，主要有末端脱氧核苷酸转移酶（简称末端转移酶）、碱性磷酸酶、T4噬菌体多核苷酸激酶等。
（P 22页与网上整理结合）质粒：质粒是一些存在于微生物细胞染色体外的小型闭合环状双链DNA分子，是能够进行独立复制并保持恒定遗传的复制子。
（P 42页）穿梭质粒：穿梭质粒载体是指一类由人工构建的具有两种不同复制起点和选择标记，因而可在两种不同的寄主细胞中存活和复制，并可以携带着外源DNA在不同物种的细胞之间往返穿梭的质粒载体。
（P 56页）：噬菌粒：噬菌粒是一类由质粒载体和单链噬菌体载体结合而成的新型载体系列。
（P 77页）粘粒载体：粘粒又称柯斯质粒，是一类由人工构建的含有λDNA粘性末端cos序列和质粒复制子的杂种质粒载体。
（P 70页）M13噬菌体载体：M13噬菌体是一种含有6.4kb环状单链DNA分子的大肠杆菌丝状噬菌体。
（73页及PPT）克隆载体：克隆载体是指具有在细胞内进行自我复制能力的DNA分子，是外源基因的运载体，又称无性繁殖载体。
末端脱氧核苷酸转移酶：末端脱氧核苷酸转移酶是一种来源于小牛胸腺，为核酸末端加上一个同聚物尾巴的DNA修饰酶。
T4噬菌体多核苷酸激酶：T4多聚核苷酸激酶（T4 polynucleotide kinase）酶是由T4噬菌体的pseT基因编码的一种蛋白质。
该酶催化r(是拉丁文不是字母)-磷酸从ATP分子转移给DNA 或RNA分子的 5’-OH末端,生成5’－P。
碱性磷酸酶：碱性磷酸酶有两种不同来源，一种是从大肠杆菌中纯化出来的细菌碱性磷酸酶，另一种是从小牛肠中纯化出来的小牛肠碱性磷酸酶。
它们的共同特性是能够催化核酸分子脱掉5’磷酸基团,从而使DNA（或RNA）的5’-P末端转化为 5’-OH末端。
（P 36）定向克隆：当用两种不同的限制酶消化外源DNA时，可以产生非互补突出末端的外缘DNA片段，此种片段可采用定向克隆法，即只以一个方向很容易地将其插入到同样用这两种限制酶进行消化而产生相匹配粘端的载体当中。
（P 104）DNA体外重组：DNA体外重组是将目的基因用DNA连接酶在体外连接到合适的载体DNA上，这种重新组合的DNA称为重组DNA。
（P 101）转化：将带有目的基因的重组质粒DNA引入受体细胞的过程。
转染：将带有目的基因的重组噬菌体DNA直接引入受体细胞的过程。
转导：将带有目的基因的重组噬菌体DNA包装到噬菌体头部成为有感染力的颗粒，再导入受体细胞中的过程。
电穿孔转化法：将宿主细胞置于高压脉冲电场中，通过电击使细胞产生可逆性的穿孔，瞬时提高细胞膜的通透性周围基质中的DNA可渗进细胞化学转化法：化学药物如氯化钙等的转化氯化钙法转化细胞：细菌处于0℃及CaCl低渗溶液中时，菌细胞膨胀成球形。
转化混合物2中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42℃短时间热击处理促进细胞吸收DNA复合物。
适用于大部分大肠杆菌菌株，并具有简单快速、重复性好的优点。
感受态细胞：受体细胞经过电穿孔、CaCl、 RbCl(KCl,铷)等处理后，细胞膜的通透性暂时2改变，允许外源DNA分子进入。
放射性探针：是指一段带有放射性同位素标记的、与目的DNA或RNA片段的序列互补的单链核苷酸，将它与一个DNA片段进行杂交可检测该片段中是否含有目的序列（放射自显影技术）。
抗生素抗性基因插入失活法：许多质粒载体都含有抗生素抗性基因，这些基因内有某些酶的识别位点。
当用某种限制酶消化并插入外源目的基因时，抗药性基因将不被表达，从而在药物筛选平板上培养时，可区分出重组转化子的菌株的方法。
β-半乳糖苷酶插入失活法：许多载体带有来自大肠杆菌Lac操纵子DNA区段（含β-半乳糖苷酶的头146个编码信息和调控序列，还插入了一个多克隆位点）。
而宿主细胞可编码β-半乳糖苷酶C端，两者之间可以实现基因内的互补，成为具有酶学活性的蛋白质。
Lac+细菌在有诱导物，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）和生色底物5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷（X-gal）存在下形成蓝色菌落。
当多克隆位点上插入了外源基因时，LacZ的N端片段失活。
因此带有重组质粒的细菌将产生白色菌落。
基因产物鉴定法：通过鉴定产物从而确定所克隆的DNA片段或分离的mRNA是否是目的片段或其mRNA。
复制子：DNA复制从起始点开始直到终点为止，每个这样的DNA单位称为复制子或复制单元(replicon)。
启动子：是一段能被宿主RNA聚合酶特异性识别和结合并指导目的基因转录的DNA序列，是基因表达调控的重要元件。
终止子：是一段终止RNA聚合酶转录的DNA序列。
转录启动后，RNA酶沿着DNA链移动，持续合成RNA链，直到遇到终止信号为止。
起始密码：也称翻译起始密码子，是翻译的起始位点,通常为AUG（ATG）,是首选的起始密码子，编码甲硫氨酸，也有极少数生物利用其他密码子作为翻译的起始位点。
终止密码：即翻译终止密码子，翻译过程中，当核糖体移动遇到终止密码子，核糖体就从mRNA上模板上脱落，终止蛋白质的翻译过程。
密码偏好性：编码氨基酸的密码子具有简并性，而每种生物对同义密码子的选择都有自己的偏好性。
SD序列：核糖体结合位点，指原核基因转录起始位点下游的一段DNA序列，即SD序列。
基因定点诱变法：是在体外特异性地取代、插入或缺失DNA序列中任何一个特定碱基的技术,包括盒式取代诱变、寡核苷酸引物诱变及PCR定点诱变等。
电镜R-环检测法：是一种采用mRNA作探针，用于检测具有外源DNA插入片段重组体分子的核酸杂交法。
其原理是：在临近双链DNA变性温度下和高浓度（70%）的甲酰胺溶液中，双链的DNA-RNA杂交分子要比双链的DNA-DNA分子更稳定。
SOUTHERN BLOT：一种可以用来确定克隆的特定DNA序列，判明插入片段来自染色体基因组的哪一部位，还可以证明是否带有目的基因片段的方法。
1.基因工程操作步骤（1）获取外源目的基因. （2）外源目的基因的加工.（3）基因运载体的分离提纯. （4）重组DNA分子的形成.（5）重组DNA转入受体细胞．（6）重组菌的筛选、鉴定和分析．（7）工程菌的获得和基因产物的分离.2. 如何将基因信息转化成基因实物?3. PCR扩增目的基因的原理及步骤原理：由于DNA在高温下会裂解为两条链，当温度下降后能够复性成为双链，所以可以通过控制温度的变化，设计引物作为启动子，加入dNTP和taq DNA聚合酶，可以实现PCR体外扩增。
步骤：1、变性，温度升高至94o C，DNA双链裂解为单链；2、退火(复性）温度下降至40-60o C，使之与引物结合；3、延伸，在72 o C下，以dNTP为原料，按半保留复制和碱基互补配对原则合成新链。
4、重复1-3.4.大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的功能，Klenow如何获得,有那些特性及用途?功能：○1 5’至3’聚合酶活性○2 5’至3’核酸外切酶活性○3 3’至5’核酸外切酶活性获得：Klenow是枯草杆菌蛋白酶裂解完整的DNA聚合酶1而产生出来的大片段分子，或者通过克隆技术而得到的单一多肽链，由全酶中去除了5‘至3‘核酸外切酶活性。
特性：去除了5‘至3‘核酸外切酶活性,而5’至3’聚合酶活性和3’至5’核酸外切酶活性均不受影响。
用途：1、补平限制酶切割DNA后产生的3‘凹端；2、用[32P]dNTPPT对DNA片段的3‘凹端进行末端标记；3、在cDNA克隆中，用于合成cDNA第二链；4、应用Sanger双脱氧链末端终止法进行DNA测序。
5. 理想质粒的特点？质粒的基本构成(有哪几部分)pBR322的构成部件？为什么相同复制子的不同载体不能在同一宿主中共存？理想质粒的特点：1)具有复制起点（必不可少的基本条件）即具有复制子(Replicon)功能,且复制起始区中没有所需限制酶切位点2)具有两种易被检测的选择性标记理想的质粒克隆载体应具有两种抗菌素抗性基因，在插入外源DNA片断之后所形成的重组质粒中,至少保留一个强选择标记3)具有多种限制酶的单一识别位点具有多种限制酶单一切点,适用于各种限制酶产生的DNA片断的插入,满足克隆需要.4)具有尽可能小的相对分子量分子量小有利于分离纯化,有利于克隆较长DNA片断,有利于质粒DNA的制备以及使克隆基因的剂量增加,使限制酶的多重识别位点的机率降低.5)应该属于松弛复制型松弛复制型的质粒载体DNA在氯霉素存在下大量扩增其拷贝数,使细胞中克隆基因的剂量增加6)应为非传递性质粒。
从生物的安全防护考虑。
质粒的组成：必要区：在必要区中与质粒DNA复制有关的基因，他们对质粒的存活及复制功能都极为重要非必要区：在非必要区中，有直接影响细胞表现，如结合转移，对毒物的抗性等形状的基因存在。
pBR322质粒是由3个不同来源的部分组成。
1、pSF2124质粒易位子Tn3的氨苄青霉素抗性基因（Amp r）2、pSC101质粒的四环素抗性基因（Tet r）3、ColE1的派生质粒pMB1的DNA复制起点（ori）相同复制子的不同载体在细胞内复制时会相互竞争，由于大小不同，复制所需时间不同。
较小的载体所需时间短，经过一段时间的复制后其数量会远超过较大载体，从而将较大载体淘汰掉。
所以相同复制子的不同载体不能共存于同一宿主。
6. 穿梭质粒必备的功能元件。
以穿梭质粒为代表介绍：基因组成元件1)DNA复制启始序列，含大肠杆菌和酵母中复制的两套复制子。
2)选择标记，分为缺陷型 (与宿主基因有关，载体可弥补之，β-半乳糖苷酶)和显性两类(增加其性状，如抗生素抗性，常用)。
3)启动子 ---大小约1~2kb，一般活性低，故需强启动子，以及增强子。
4)分泌信号序列---提高蛋白的分泌?正常不能分泌.5)终止子---终止转录有丝分裂稳定区---保证能够平均分配到子代细胞7. 质粒、噬菌体、黏粒载体的运载DNA能力有多大? 原因是？质粒：大小4KB,一般复制能力10KB,所以运载能力小于10KB,一般在5KB左右噬菌体：其头部蛋白质外壳对所包装DNA大小有严格要求，只有75-105%的野生型λDNA长度(38-52kb DNA)才能被包装成噬菌体颗粒。