食物总抗氧化能力(TAC)比色法(DPPH)定量检测试剂盒
总抗氧化能力(DPPH 法)试剂盒说明书
总抗氧化能力(DPPH法)试剂盒说明书分光光度法50T/48S 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
研究意义：测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。
在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。
测定原理：DPPH为稳定的自由基，溶于甲醇、乙醇等极性溶剂中，在515nm处有最大吸收。
向DPPH 溶液中加入抗氧化剂时，会发生脱色反应，因此可用吸光度的变化并以Trolox作为对照体系量化抗氧化物质的抗氧化能力。
自备实验用品：恒温水浴锅、低温离心机、分光光度计、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制：提取液：液体60mL×1瓶，使用前预冷。
试剂一：液体60mL×1瓶，避光保存。
样品的制备：(1) 血清、血浆、唾液或尿液等液体样品血浆（制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用EDTA抗凝）4℃，5000rpm 离心10min，取上清待测。
血清、唾液或尿液样品直接用于测定，也可以-80℃冻存（不宜超过30 d）后再测定。
(2) 组织样品按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
(3) 细胞样品按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎（功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
操作步骤：1、分光光度计预热30min，调节波长至515nm。
2、操作表（在EP 管中反应）空白管测定管提取液（μL）50样品（μL）50试剂一（μL）950 950充分混匀，室温避光反应20min，于1mL玻璃比色皿测定515nm吸光值，△A= A空白-A测定注意：空白管只需测定一次，若A测定小于0.2，需用提取液稀释后检测。
食品成品中抗氧化活性的检测方法研究
食品成品中抗氧化活性的检测方法研究引言食品中的抗氧化活性是食品质量和营养价值的一个重要指标。
抗氧化活性不仅可以延缓食品的衰老和品质变化，还可以对抗自由基的损害，减少慢性疾病的发生风险。
因此，对食品抗氧化活性进行准确的检测具有重要意义。
本文将介绍常用的食品成品中抗氧化活性的检测方法，并对其优缺点进行分析。
一、化学法化学法是一种常见的食品抗氧化活性检测方法，常用的化学法有DPPH法、抗坏血酸法和总酚法等。
这些方法主要通过与氧化剂反应产生颜色变化或电子转移来评估食品中的抗氧化能力。
其中，DPPH法是一种简单易行的方法，通过检测食品成品中抗氧化剂与DPPH自由基发生反应时产生的颜色变化程度来判断样品的抗氧化活性。
抗坏血酸法则是通过检测食品样品中抗坏血酸的含量来评估其抗氧化活性。
总酚法是通过测量食品中的总酚含量来确定其抗氧化能力。
这些方法简便易行，且成本较低，是常用的食品抗氧化活性检测方法。
然而，化学法也存在一些局限性。
首先，这些方法只能评估样品中某一种抗氧化剂的抗氧化活性，不能全面评估样品的整体抗氧化能力。
其次，由于食品中存在多种复杂的化合物，这些方法往往无法准确区分其中的抗氧化剂。
因此，在实际应用中需要结合其他方法进行综合分析。
二、生物法生物法是近年来新兴的食品抗氧化活性检测方法，涉及到生物学方面的研究。
生物法的一种常见方法是细胞实验法，利用细胞对氧化应激的响应来评估食品中的抗氧化活性。
这种方法可以模拟人体内的环境，较好地反映食品对于人体健康的实际影响。
例如，使用人体肝细胞株进行细胞实验，通过测量细胞存活率、ROS产生水平等指标来评估样品的抗氧化能力。
生物法的主要优势在于可以全面评估样品的整体抗氧化能力，且具有较好的生物学意义。
然而，生物法也存在一些限制。
首先，该方法在实验操作上较为繁琐，需要较长的实验时间。
其次，细胞实验法所涉及的细胞株选择和实验条件的控制都会对结果产生影响，需要进行更多的标准化工作。
总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法)
总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法)产品编号产品名称包装S0116 总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法) 100次产品简介：总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法)，即Total Antioxidant Capacity Assay Kit with FRAP method，简称T-AOC Assay Kit，是一种采用Ferric Reducing Ability of Plasma (FRAP)方法，可以对血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液、或各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力进行检测的试剂盒。
活性氧(Reactive oxygen species, ROS)主要包括羟基自由基、超氧自由基和过氧化氢。
在细胞或组织的正常生理代谢过程中会产生活性氧，同时一些环境因子例如紫外照射、γ射线照射、吸烟、环境污染等也可以诱导活性氧的产生。
活性氧产生后，可以导致细胞内脂、蛋白和DNA等的氧化损伤，诱发氧化应激(Oxidative stress)，继而导致各种肿瘤、动脉粥样硬化、风湿性关节炎、糖尿病、肝损伤、以及中枢神经系统疾病等。
机体中存在多种抗氧化物，包括抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶等，可以清除体内产生的各种活性氧，以阻止活性氧诱导的氧化应激(oxidative stress)的产生。
一个体系内的各种抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶的总的水平即体现了该体系内的总抗氧化能力。
因此测定血浆、血清、尿液、唾液等各种体液，细胞或组织等裂解液中的总抗氧化能力具有非常重要的生物学意义。
植物或中草药抽提液、或各种抗氧化物溶液的总抗氧化能力的检测可以用于检测各种溶液的抗氧化能力的强弱，可以用于筛选强抗氧化能力的药物。
FRAP法测定总抗氧化能力的原理是酸性条件下抗氧化物可以还原Ferric-tripyridyltriazine (Fe3+-TPTZ)产生蓝色的Fe2+-TPTZ，随后在593nm测定蓝色的Fe2+-TPTZ即可获得样品中的总抗氧化能力。
总抗氧化能力(T-AOC)比色法测试盒(ABTS酶催化法)
用途本试剂盒适用于检测血清（浆）、尿液、动植物组织、细胞等样本中总抗氧化能力。
检测范围及灵敏度检测范围：0.047-1.50 mmol/L灵敏度：0.047 mmol/L背景介绍机体存在两类抗氧化系统，一类是酶抗氧化系统，包括超氧化物歧化酶(SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px）；另一类是非酶抗氧化系统，包括尿酸、维生素C、维生素E、谷胱甘肽、胆红素、α-硫辛酸、类胡萝卜素[1-3]。
抗氧化能力被认为是血液和体液中所有抗氧化剂的累积效应[3]。
检测原理ABTS在适当的氧化剂作用下氧化成绿色的 ABTS●+，在抗氧化物存在时ABTS●+的产生会被抑制，在414 nm测定ABTS●+的吸光度即可测定并计算出样本中的总抗氧化能力。
Trolox是一种维生素E的类似物，具有和维生素E相近的抗氧化能力，用作其他抗氧化物总抗氧化能力的参考。
例如，Trolox的总抗氧化能力为1，相同浓度情况下，其他物质的总抗氧化能力用其抗氧化能力和Trolox相应的倍数来表示。
本试剂盒测组织和细胞样本时，需测定总蛋白浓度，推荐使用BCA法（货号：E-BC-K318-M）。
提供试剂和物品注：试剂严格按上表中的保存条件保存，不同批次试剂盒中的试剂不能混用。
Focus on your research Service for life science 耗材：枪头（1000 μL ，200 μL ，10 μL ）。
仪器：酶标仪（405-425 nm ）、微量移液器（1000 μL ，200 μL ，100 μL ，10 μL ）。
所需自备物品配制试剂之前，请穿戴好防护装备。
试剂盒中部分试剂含有危险性物质。
禁止食入，吸入，直接接触眼睛、皮肤和衣物。
使用完后的试剂瓶经彻底清洗后再处理。
安全提示试剂：双蒸水、生理盐水（0.9% NaCl ）、PBS （0.01 M，pH 7.4）、80%乙醇。
实验关键点ABTS工作液配制完成后，室温避光保存，在30 min内使用完毕。
总抗氧化能力(T-AOC)定量检测试剂盒
大鼠总抗氧化能力(T-AOC)定量检测试剂盒(ELISA)使用说明书【大鼠总抗氧化能力(T-AOC)Elisa试剂盒试剂盒名称】大鼠总抗氧化能力(T-AOC)定量检测试剂盒(ELISA)【大鼠总抗氧化能力(T-AOC)Elisa试剂盒试剂盒用途】定量检测大鼠血清、血浆及相关液体样本中总抗氧化能力(T-AOC)的含量。
【大鼠总抗氧化能力(T-AOC)Elisa试剂盒检测原理】本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。
将标准品、待测样本加入到预先包被大鼠总抗氧化能力(T-AOC)单克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。
依次加入底物A、B，底物(TMB)在辣根过氧化物酶(HRP)催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中大鼠总抗氧化能力(T-AOC)浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中大鼠总抗氧化能力(T-AOC)含量。
【大鼠总抗氧化能力(T-AOC)Elisa试剂盒试剂盒组成】备注：标准品(1号→6号)浓度依次为：1600、800、400、200、100、50 U/L.【大鼠总抗氧化能力(T-AOC)Elisa试剂盒需要而未提供的试剂和器材】1、37℃恒温箱2、标准规格酶标仪3、精密移液器及一次性吸头4、蒸馏水5、一次性试管6、吸水纸【大鼠总抗氧化能力(T-AOC)Elisa试剂盒操作步骤】1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。
2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍)；空白对照孔不加。
4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
抗氧化性测定的方法
抗氧化性测定的方法
抗氧化性测定的方法多种多样，常用的方法包括：
1. 自由基清除能力（DPPH）法：使用DPPH自由基来评估样品中抗氧化物质的清除能力。
通过测定样品对DPPH自由基的清除率来评估其抗氧化性能。
2. 铁螯合法：使用铁离子与配位剂（如TPTZ）反应生成有色物质，利用其吸光度的变化来评估样品的抗氧化能力。
3. 脂质过氧化抑制能力法：使用脂质过氧化反应体系，通过测定样品对脂质过氧化的抑制能力来评估其抗氧化性能。
4. 总抗氧化能力（TAC）测定法：采用化学反应体系测定样品中总抗氧化物质的含量，从而评估其整体抗氧化能力。
5. 脂质自氧化反应法：将脂质与氧气接触后，测定样品对脂质自氧化的影响，评估其抗氧化性能。
不同的抗氧化性测定方法适用于不同类型的样品和抗氧化物质，选择合适的方法可以更准确地评估样品的抗氧化性能。
总抗氧化能力检测试剂盒 (FRAP 法 )
总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法)产品编号产品名称包装S0116 总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法) 100次产品简介：总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法)，即Total Antioxidant Capacity Assay Kit with FRAP method，简称T-AOC Assay Kit，是一种采用Ferric Reducing Ability of Plasma (FRAP)方法，可以对血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液、或各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力进行检测的试剂盒。
活性氧(Reactive oxygen species, ROS)主要包括羟基自由基、超氧自由基和过氧化氢。
在细胞或组织的正常生理代谢过程中会产生活性氧，同时一些环境因子例如紫外照射、γ射线照射、吸烟、环境污染等也可以诱导活性氧的产生。
活性氧产生后，可以导致细胞内脂、蛋白和DNA等的氧化损伤，诱发氧化应激(Oxidative stress)，继而导致各种肿瘤、动脉粥样硬化、风湿性关节炎、糖尿病、肝损伤、以及中枢神经系统疾病等。
机体中存在多种抗氧化物，包括抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶等，可以清除体内产生的各种活性氧，以阻止活性氧诱导的氧化应激(oxidative stress)的产生。
一个体系内的各种抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶的总的水平即体现了该体系内的总抗氧化能力。
因此测定血浆、血清、尿液、唾液等各种体液，细胞或组织等裂解液中的总抗氧化能力具有非常重要的生物学意义。
植物或中草药抽提液、或各种抗氧化物溶液的总抗氧化能力的检测可以用于检测各种溶液的抗氧化能力的强弱，可以用于筛选强抗氧化能力的药物。
FRAP法测定总抗氧化能力的原理是酸性条件下抗氧化物可以还原Ferric-tripyridyltriazine (Fe3+-TPTZ)产生蓝色的Fe2+-TPTZ，随后在593nm测定蓝色的Fe2+-TPTZ即可获得样品中的总抗氧化能力。
食品中抗氧化剂的提取与分析
食品中抗氧化剂的提取与分析导言:抗氧化剂是当今食品工业中一种重要的添加剂。
它们可以防止食品中的脂肪和油脂氧化，从而延长食品的保质期和稳定性。
本文将探讨食品中抗氧化剂的提取与分析方法，以及目前在该领域的研究进展。
一、食品中抗氧化剂的种类目前，常见的食品中抗氧化剂包括维生素C、维生素E、多酚类物质（如儿茶素、花青素）等。
这些化合物可以通过提取和分离的方法从天然植物中获得。
二、食品中抗氧化剂的提取方法1. 水浸提法: 这种方法适用于含有水溶性抗氧化剂的食材，如柑橘类水果。
将食材切碎后与适量的水浸泡，再经过滤、浓缩和干燥等步骤，最终得到抗氧化剂的提取物。
2. 有机溶剂提法: 大部分抗氧化剂是脂溶性的，采用有机溶剂提取可获得较高的提取效率。
常用的有机溶剂包括乙醇、醚类和酯类溶剂。
将食材与有机溶剂混合，加热搅拌后经过过滤等步骤，得到抗氧化剂的溶液。
三、食品中抗氧化剂的分析方法1. 高效液相色谱法（HPLC）: 这是目前最常用的抗氧化剂分析方法之一。
HPLC通过将样品溶液通过固体填料的柱子，利用样品中化合物在流动相和固定相之间的差异来分离和检测抗氧化剂。
此方法准确性高，分析速度快。
2. 气相色谱法（GC）: 气相色谱法常用于分析食品中的脂溶性抗氧化剂。
样品经过提取后，通过升温挥发获得蒸馏液，然后通过GC柱分离和检测目标化合物。
3. 质谱法（MS）: 质谱法结合先进的质谱仪器，可以对抗氧化剂进行准确的定性和定量分析。
通过质谱法，可以确定抗氧化剂的分子结构以及其在食品中的含量。
四、抗氧化剂研究进展近年来，随着人们对健康饮食的追求，越来越多的研究关注于天然食材中的抗氧化剂。
一些研究表明，某些草药和植物提取物中含有丰富的抗氧化剂，具有抗氧化、抗炎和抗肿瘤等功效。
这些天然抗氧化剂被广泛应用于食品工业，以提高食品的品质和保质期。
总结:食品中抗氧化剂的提取与分析是一个复杂而重要的过程。
通过合适的提取方法和准确的分析技术，可以有效地提取食品中的抗氧化剂，并对其进行定性和定量分析。
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9． 可以使用比色皿检测 10．如果样品抗氧化剂浓度过高或过低， 建议稀释或增加样品容量或浓度 11．如果测试样品很多，建议使用排枪移液 12．本公司提供系列抗氧化分析试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定 2． 本产品经鉴定检测敏感
4
2、液态食品处理 1． 移取 5 毫升待测液态食品到 15 毫升锥形离心管 2． 放进台式离心机离心 10 分钟，速度为 1500g 3． 移取上清液到新的 15 毫升锥形离心管 4． （选择步骤）可以加入适量的清理液（Reagent A） 5． （选择步骤）过滤纸过滤（如果离心处理，样品仍然不清澈） 6． 置于冰槽里备用或放进-20 冰箱里保存
二、标准液准备
1． 准备好 5 个 1.5 毫升离心管，标记为 1 至 5 号管 2． 移取 xx 微升标准液（Reagent D）到 1 号管 3． 小心移取 xx 微升缓冲液（Reagent B）和 xx 微升标准液（Reagent D）到 2 号管，混匀 4． 小心移取 xx 微升缓冲液（Reagent B）和 xx 微升标准液（Reagent D）到 3 号管，混匀 5． 小心移取 xx 微升缓冲液（Reagent B）和 xx 微升标准液（Reagent D）到 4 号管，混匀 6． 小心移取 xx 微升缓冲液（Reagent B）到 5 号管 7． 将 1 至 5 号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表
实验开始前，将－20 冰箱里的试剂置于室温下融化，实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置于室温下融化， 移取 xx 毫升染色液 B（Reagent C2）到 xx 瓶染色液 A（Reagent C1）里，混匀，置于暗室里，标记为染 色工作液，避免光照。然后进行下列操作。
1． 准备 1 个 96 孔板，做好标记：空白对照孔、标准对照孔、样品孔 2． 分别移取 xx 微升缓冲液（Reagent B）到 96 孔板里的每个孔里 3． 分别加入 xx 微升染色工作液 4． 加入 xx 微升缓冲液（Reagent B）到空白对照孔 5． 加入 xx 微升上述配制的标准液（Reagent D）到相应标准对照孔里 6． 加入 20 微升裂解样品（100 微克食品总量）到样品孔里 7． 轻轻摇动 96 孔板，使其混匀 8． 室温下孵育 15 分钟 9． 即刻放进酶标仪里测读：515nm 波长 10． 分析结果：
6） 根据下列公式计算测定体系中样品量的总抗氧化能力（实际抑制百分率）
7） IC50：50％抑制率所需的样品单位：TROLOX 等值或样品重量（毫克/毫升）或样品容量（微 升）
注意事项
1． 本产品为 50 次操作 2． 本产品测试范围为 25 至 800 微摩尔 Trolox 等值 3． 操作时，须戴手套 4． 样品制备的所有操作均须在 4℃状态下进行 5． 测试前，样品须新鲜收集 6． 样品须清澈 7． 空白对照孔的吸光读数应为 1.0 左右为佳 8． 样品读数越低，抗氧化能力越高
产品内容
清理液（Reagent A） 缓冲液（Reagent B） 染色液 A（Reagent C1） 染色液 B（Reagent C2） 标准液（Reagent D） 产品说明书
毫升 毫升 瓶 毫升 微升 1份
保存方式
保存在－20℃冰箱里，有效保证 6 月
用户自备
50 毫升烧杯：用于样品操作的容器
管号
1 2 3 4
缓冲液（Reagent B）
xx 微升 xx 微升 xx 微升 xx 微升
标准液（Reagent D）
xx 微升 xx 微升 xx 微升 xx 微升
测定体系 标准 Trolox 浓度
xx 微摩尔/升 xx 微摩尔/升 xx 微摩尔/升 xx 微摩尔/升
2
5
xx 微升
0
0
三、 样品测读
食物总抗氧化能力（TAC）比色法（DPPH）定量检测试剂盒产品说明书 （中文版）
主要用途
食物总抗氧化能力（TAC）比色法（DPPH）定量检测试剂是一种旨在通过有机氮自由基染料 DPPH 的参与， 在抗氧化剂的存在下，通过分光光度仪，观察其峰值下降的变化，来定量检测对应于标准水溶性生育酚 Trolox 的总抗氧化能力，即消除自由基等值浓度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实 验证明的。适用于各种新鲜组织（动物、人体、昆虫等）的总抗氧化能力检测。产品严格无菌，即到即用， 操作简易，性能稳定。
技术背景
超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基 （hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧 自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-） 次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等 细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡，甚而导致诸如 冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。在生物系统内，通过抗氧化酶例如超氧化物 歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶等，大分子，例如白蛋白、铜蓝蛋白（ceruloplasmin；CER）、 铁蛋白（ferritin）和抗氧化因子，例如生育醇、类胡萝卜素、抗坏血酸、还原性谷胱甘肽和尿酸胆红素 （bilirubin）等，产生抗氧化能力，即捕获自由基的能力，达到消除或降低ROS的损害。通过稳定的有机氮 自由基染料1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazylradical；DPPH），受到抗氧化剂的去自 由基作用，呈现深紫色转化为黄色的变化，衡量体系中抗氧化剂捕获自由基、消耗抗氧化剂的能力，在分 光光度仪（515nm波长）的帮助下，观察其峰值下降的变化，并与标准化抗氧化剂水溶性生育酚Trolox对照。
1） 构建标准曲线：纵座标（Y 轴）为吸光单位（OD730nm）；横座标（X 轴）为标准 Trolox位（OD515nm）读数 3） 标准对照孔和样品孔为实际吸光单位（OD515nm）读数 4） 根据标准曲线获得样品对应 Trolox 浓度（微摩尔/升） 5） 计算样品实际总抗氧化能力
1
15 毫升锥形离心管：用于样品操作的容器 1.5 毫升离心管：用于标准样品配制的容器 4℃台式离心机：用于样品操作 96 孔板：用于比色的容器 分光光度仪或酶标仪：用于比色分析
实验步骤
一、 样品准备
1、固态食品处理 1． 秤取 1 克固态食品或粉末到 50 毫升烧杯，杯口封口膜密封 2． 加入 xx 毫升清理液（Reagent A） 3． 搅拌 30 分钟，充分混匀 4． 继续加入清理液（Reagent A）到终容量为 10 毫升 5． 过滤纸过滤，去除不溶性固体颗粒 6． 封口膜封口备用