雌激素诱发大鼠原位与移植垂体催乳素瘤中催乳素基因与TGF#alpha#和TGF#beta#1基因的表达
雌激素诱发大鼠垂体腺瘤模型的实验研究的开题报告
雌激素诱发大鼠垂体腺瘤模型的实验研究的开题报
告
标题：雌激素诱发大鼠垂体腺瘤模型的实验研究
背景：垂体腺瘤是一种常见的神经内分泌肿瘤，常常导致内分泌失调和眼球运动障碍。
雌激素曾被认为是导致垂体腺瘤发生的致瘤因素之一。
然而，雌激素诱发大鼠垂体腺瘤的研究还比较有限。
因此，本研究旨在建立一种雌激素诱发大鼠垂体腺瘤的模型，以便进一步研究雌激素在垂体腺瘤发生中的作用。
方法：选取40只雄性Wistar大鼠，随机分成两组，每组20只。
实验组和对照组分别注射雌激素和生理盐水，注射剂量为每天2毫克/公斤体重，注射持续4周。
在注射期间，每周测量一次鼠体重和血液生化指标，包括血糖、血脂、肝功能和肾功能等指标。
注射结束后，对实验组和对照组的大鼠进行MRI检查，并取下垂体腺进行病理学检查和雌激素受体的免疫组化检测。
预期结果：预计实验组大鼠的垂体腺出现病变，可能包括垂体腺瘤和垂体增生等。
MRI检查可以明确病变范围和大小，并进行初步鉴别诊断。
病理学检查和免疫组化检测可以用于确定病变类型和表型，以及评估雌激素受体在病变发生和发展中的作用。
结论：建立雌激素诱发大鼠垂体腺瘤模型可以为进一步研究垂体腺瘤的发生机制和治疗提供重要的实验依据。
同时，对于了解雌激素在垂体腺瘤发生中的作用也具有一定的指导意义。
临床医学概论(简答题)
呼吸系统：1.慢性阻塞性肺疾病的常见病因、早期症状、临床特点，标志性症状？最具价值的诊断方法是什么？有关诊断的病程规定是？病因：.吸烟；职业粉尘和化学性污染、空气污染；感染；蛋白酶和抗蛋白酶失衡；其他因素：营养、自主神经功能失调、气候突变。
早期症状:早期可无任何异常体征，或劳力时气短、呼吸困难临床特点：慢性咳嗽、咳痰、劳力性呼吸困难(标志性)、喘息和胸闷、体重下降、食欲减退最具价值的诊断方法：排他性诊断肺功能检查有关诊断的病程规定是：1肺功能检查2 X线检查3血气分析4痰液检查5血常规检查。
①主观条件（病程：咳嗽、咳痰，或伴有喘息，每年发病三个月，连续二年以上）+排除其它心肺疾病②客观条件（明确的X线、肺功能表现）+排除其它心肺疾病2.肺炎的常见致病菌？病理分期、临床表现？常见致病菌：细菌性感染最常（80%）尤其是肺炎链球菌。
肺炎球菌葡萄球菌克雷白杆菌绿脓杆菌大肠杆菌流感杆菌军团菌厌氧菌支原体流感病毒念珠菌。
病理分期：典型肺炎球菌肺炎病理分期●充血期●红色肝变期●灰色肝变期●消散期临床表现特点：（1）.咳嗽、咳痰的特点①反复发作的慢性咳嗽。
②晨起夜眠时明显（迷走神经的活性、体位改变有关）。
③痰液由稀薄变为粘稠一般说明病情加重。
（2）.干、湿罗音的易变性。
3.结核病治疗原则：化学治疗原则：早期、规律、全程、适量、联合心血管系统:1.冠心病稳定型心绞痛的临床特点有哪些？阵发性的前胸压榨性疼痛感觉，主要位于胸骨后部，可放射至心前区和左上肢，在劳动或情绪激动、饱餐、受寒等时诱发。
历时短暂，持续几秒到十几分钟，一般不超过20min，休息或舌下含服硝酸甘油片即可缓解。
2.常见的冠心病的临床类型有哪些？心绞痛、心肌梗死、无症状性心肌缺血、缺血性心肌病、猝死3.WHO/ISH成人高血压诊断标准是什么？收缩压≥140mmHg（18.62kPa）和（或）舒张压≥90mmHg（11.97kPa）即能诊断为高血压4.高血压的病因有哪些？１.遗传因素；２.性格因素；３.神经精神因素；４.肥胖；５.膳食影响外科感染:1.外科感染按病变性质分为哪些感染？1）特异性感染：由特异的病菌和真菌引起的感染，如结核病、破伤风、气性坏疽等（致病菌：结核杆菌、破伤风梭菌、产气荚膜梭菌、炭疽杆菌）2）非特异性感染（又称化脓性感染或一般性感染，占外科感染大多数）疖、痈、丹毒、急性乳腺炎、急性阑尾炎等，有化脓性感染的共同特征：红、肿、热、痛和功能障碍（致病菌：金黄葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠杆菌、变形杆菌）主要病因：1）阑尾管腔阻塞，阑尾管腔的阻塞最常见的原因是淋巴滤泡的明显增生，粪石也是常见原因之一。
崔乳素(PRL)及其受体基区在猪中应用的研究进展
（ Ｂ ｏ ｌ ｅ — Ｆ ｅ ｙ ｓ ｏ ｔ 等， １ ９ ９ ８ ） 。 催乳素除 了有催乳 激素 的作用外 ， 还 具有溶黄体作用 ， 可以诱导 黄体 细胞 的程序性死亡 。它 的溶
黄体作用是在 Ｃ Ｄ 阳性淋 巴细胞 的介导 下完 成的 。Ｃ Ｄ 阳 性淋 巴细胞能增强 Ｆ ａ ｓ 配体在膜上 的表达 ， Ｆ ａ ｓ 配体通过 Ｆ ａ ｓ 受体介导 黄体 细胞 的死亡 （ Ｋ ｕ ｍｎ ａ ｇ ａ 等， １ ９ ９ ９ ） 。催乳素既可 以促进黄体的分泌又可以溶化黄体的机制 目前 还不 太清楚 。 在雄性动物 中， Ｐ Ｒ Ｌ在睾酮 的协 同作用下 ，可 以促进前列腺
转换及脂肪酸的合成 ， 刺激乳腺腺泡发育 和促进乳 汁的生成 与分泌 。 在青春发育期 ， 催乳素在雌激素 、 孕激素及其他激素
成增加 。
１ ． １ 对乳腺 的作用 催乳素对乳腺 的作用主要表 现在 促进
乳腺 的生长 、 发育 ， 促进乳 的合成和维持乳的分泌。 催乳素与 乳腺 上皮 细胞 的催乳素 受体结合 ， 产生一 系列反应 ， 包括 刺 激ａ 一乳 白蛋 白的合成 、 尿 嘧啶核苷酸转换 、 乳腺 细胞 Ｎ ａ ＋ 的
催乳 素（ Ｐ ｒ ｏ ｌ ａ ｃ ｔ ｉ ｎ ， Ｐ Ｒ Ｌ ） 是 由垂体前叶合成和分泌 的一 种
的协 同作 用下 ， 促使 乳腺导管 系统 开始生长 ， 形成分支 复杂
蛋 白质激素 ， 广泛作用于动物 的乳腺 和性 腺 ， 是动物繁殖 成
功 所 必 须 的激 素 之 一 。
的细小导管系统 ， 乳腺体积开始膨大 。妊娠期在催乳素的作
摘 要： 本文综述 了催乳素（ Ｐ ＲＬ ） 及其受体基 因的生物学作用和作 用机理 ， Ｐ Ｒ Ｌ Ｒ 基 因的结构和在猪 中的染 色体 定
雌激素受体β与雌激素相关肿瘤的研究进展
ｔ ｖ２０ ，８ １ ：２ ． ｅ ，０３５ （ ） １４ ｒ
ｃ ｅ ｎ ｏ ｌ ｄｃｒ ａ ｔｐ ｉ Ｉ［ ］ Ｊ ａ ｍ Ｆｔ ｏａ ｌ Ｓ ｒ ｏ ｃ ｄ ｂ ｏ ａ ｉ ｏ ｎ Ｊ ． Ｍ ｔ ｅ ｌ ｅｎｔ ｏ ｒ ｏ ｄｃｒｏｎ ｅ ａＮ ａ
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玮． 新生儿窒息后 Ｃ ｎ 的变 化及其 临床意义 ［］ 实用全 科 Ｔｌ Ｊ． 虹， 虹， 台 王 凡 ， ． 生儿窒息后 血清心肌 肌钙蛋 白 Ｔ 等 新
Ｍ ，０４ １（ ）３５ ｄ ｅ ２０ ，６５ ：１ ． ［７ ＧｅｖＳＫ Ｏ ｆｒ Ｊ ，ｒ ｅＣ ，ｔ ． ｅｐｅａｅｃ ｆ ｙ ａｄｔ ｎ １ ］ ｒ ｅ ， ｘｏ Ｓ Ｐ ｃ Ｐ ｅ ａ Ｔ ｒ ｌ ｅｏ ｍ ｅ ｒｉｓａｄ ａ ｄ ｉ ｈ １ ｖ ｎ ｃ ｉ
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［１ Ｃ ｒｔ ｓ ｉ， ｕ Ｉ， ｐｌ Ｆ ，ｔ ．ｔ ｄｒｉ ｔｎｏ ｃｒｉ ｏ ２ ］ ｈｉｅ ｏ Ｂｔ Ｄ ｈＳ Ａ ｐｅ Ｓ ｅａ Ｓ ａ ｚ ｉ ｆ ａ ａ ｔ － ｓｎ ｎ ｔ ａ ｄ ａｏ ｄ ｃ ｒ １ ｎ ｐｎｎ Ｉ ｓａｓ Ｒ ｕｄｒ ｉ ｏ ｅｃ ｄ ａ ｅ ｒｎｅｍａ ｒ ｓＪ ． ｏｉ ａｓｙ： ｏｎ ｏ ｎ ｆ ｈ ａ ｉ ｔ ｒｅｅｃ ｔ ａ ［ ］ ｂ ｔ ｎ ｄｅ ｆ ｅｌ ｉ
大熊猫垂体泌乳素（PRL）基因的克隆与表达
关键词：大熊猫；垂体泌乳素：基因克隆；同源分析；进化建树；重组蛋白诱导表达。
８７．ＳｏｎｇＨ，ＳａｉｔｏＫ，ＦｕｊｉｇａｋｉＳ，ＮｏｍａＡ，ＩｓｈｉｇｕｒｏＨ，ＮａｇａｔｓｕＴ，ｅ｝ａ－．ＩＬ一１ｂｅｔａａｎｄＴＮＦ—ａｌｐｈａｓｕｐｐｒｅｓｓａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ（ａｐｏ）ＥｓｅｃｒｅｔｉｏｎａｎｄａｐｏＡ一工ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＨｅｐＧ２ｃｅｌｌｓ．９亡Ｄ七ｆ刀己１９９８，１０：２７５—８０．８８．ＳｍｉｔｈＪＤ，ＴｒｏｇａｎＥ，ＧｉｎｓｂｅｒｇＭ，ＧｒｉｇａｕｘＣ，ＴｉａｎＪ，ＭｉｙａｔａＭ．Ｄｅｃｒｅａｓｅｄａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓｉｎｍｉｃｅｄｅｆｉｃｉｅｎｔｉｎｂｏｔｈｍａｃｒｏｐｈａｇｅｃｏｌｏｎｙ—ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ（ｏｐ）ａｎｄａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎＥ．。
／‘，’口ｃ／Ⅵ竹』爿Ｉ豫ｄ．５０，例，１９９５，９２：８２６４—８．８９．ＴａｎｇｉｒａｌａＲＫ，ＲｕｂｉｎＥＭ，ＰａｌｉｎｓｋｉＷ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎｏｆａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓｉｎｍｕｒｉｎｅｍｏｄｅｌｓ：ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎ１ｅｓｉｏｎｓｉｎｔｈｅａｏＰｔｉｃＯｒｉｇｉｎａｎｄｉｎｔｈｅｅｎｔｉｒｅａｏｒｔａ，ａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｅｅｓｉｎｔｈｅｅｘｔｅｎｔＯｆ１ｅｓｉｏｎｓｂｅｔｗｅｅｎｓｅｘｅｓｉｎＬＤＬｒｅｅｅｐｔｏｒ—ｄｅｆｉｃｉｅｎｔａｎｄａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎＥ—ｄｅｆｉｃｉｅｎｔｍｉｃｅ．，￡，ｐｊｄ五旮．ｓ１９９５，３６：Ｚ３２０一８．９０．ＹｏｓｈｉｄａＨ，ＨａｓｔｙＡＨ，ＭａｊｏｒＡＳ，ＩｓｈｉｇｕｒｏＨ，ＳｕＹＲ，ＧｌｅａｖｅｓＬＡ，日｝ａ』．Ｉｓｏｆｏｒｍ—ｓｐｅｃｉｆｉｃｅｆｆｅｃｔｓｏｆａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎＥＯｎａｔｈｅｒｏｇｅｎｅｓｉｓ：ｇｅｎｅｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｓｔｕｄｉｅｓｉｎｍｉｃｅ．“，ｃ以ａ芒ｆｎ门，２００ｌ，１０４：２８２０一５．９１．ＳｃａｎｄｉｎａｖｉａｎＳｉｍｖａｓｔａｔｉｎＳｕｒｖｉｖａｌＳｔｕｄｙＧｒｏｕｐ．Ｒａｎｄｏｍｉｓｅｄｔｒｉａｌｏｆｃｈ０１ｅｓｔｅｒ０１１０ｗｅｒｉｎｇｉｎ４４４４ｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｃｏｒｏｎａｒｙｈｅａｒｔｄｉｓｅａｓｅ：ｔｈｅＳｃａｎｄｉｎａＶｉａｎ引言大熊猫（』池，叩Ｄ出川ｇ肠＂ＤｆＰ“ｃｏ）属食肉目（Ｃ衍Ｈｆｖｏｒ口）大熊猫科（爿ｆ，“ｍ，，ｏ矾如ｅ），是该科的唯’。
大鼠乳腺发育过程中雌激素、孕激素、催乳素及相应受体水平变化规律的研究
４，２．１乳腺组织中总ＲＮＡ的检测结果圈１０．乳腺组织中总舟帆电泳结果Ｆｉｌ．１０ＥｘａｍｉｎａｔｉｏｌｌｏｆｔｏｔｓＩＲＮＡｉｎａⅫｌｍａｒｙｔｉｓｓｕｆｅ为检测ＲＮＡ的完整性、含量和纯度，吸取乳腺组织总ＲＮＡ提取液５Ⅱ，用１％琼脂糖凝胶电泳（９０Ｖ，４０ｍｉｎ）检查，发现有两条清晰的，无拖尾的带（图１２），即１８ＳｒＲＮＡ和２８ＳｒＲＮＡ。
结果说明样品ＲＮＡ是完整的。
此外，通过凝胶成像系统软件分析，根据ＤＮＡＭａｒｋｅｒ标准含量得出２８ＳｒＲＮＡ的含量是３３５ｎｇ，１８ＳｒＲＮＡ的含量是１６１ｒｉｇ，即２８ＳｒＲＮＡ的含量约为１８ＳｒＲＮＡ两倍，也说明所提取的ＲＮＡ是完整的。
４．２．２ＥＲａ的表达水平从大鼠乳腺中提取的总ＲＮＡ经ＲＴ－ＰＣＲ扩增后，在约４３０ｂｐ位置有预期大小的特异性扩增条带（图１１）。
回收目的条带，经测序证实为特异性的ＥＲ。
扩增产物。
ＥＲ。
在大鼠乳腺中转录水平的相对定量结果见表５。
由表５和图ｌｌ可知，与处女期相比，妊娠和泌乳期的Ｅ＆表达水平降低，且差异显著（Ｐ＜ｏ．０５）。
整个妊娠过程中，以妊娠１２ｄ最高，并与妊娠１８ｄ相比差异显著（Ｐ＜ｏ．０５），与妊娠６ｄ相比差异不显著（Ｐ＞ｏ．０５）；随着泌乳期的进行，Ｅ＆的表达水平有所增加，但差异不显著（Ｐ＞ｏ．０５）．围１２乳腺组织中Ｅ凡Ｈ‘Ｍ的ＲＴ－ＰＣＲ产物电泳结果－，Ｍａｒｋｅｒ．１．２．３。
４．５．８．７分别为Ｖｉｒｇｉｎ，Ｐ－ｅｄ，Ｐ－１２ｄ、Ｐ－１８ｄ’Ｌ－６ｄ、Ｌ－１２ｄ、Ｌ＿１叫Ｆｉｇ．”ＥＩｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓａｌｉａｌｙｓｉｏｏｆＥＲａｃＤＮＡＲＴ—ＰＣＲｐｒｏｄｕｃｔ■．Ⅸ＿２０００Ｏ队ｉａｒｋｅｒ；１．２．３．４，５．８，７，ｅ卵ｒ毒ｔｅｌｙ搴ｈ鲫ｓｔｈｅ盯—Ｐ佩ｐｒｏｄｕｃｔｏｆＶｉｒｌｇｌｎ．ｄａｙｓＢ．１２，１８ｏｆｐｒｅｇｎａｎｃｙ．ｄａｙｓ６．１２．１８ｏｆＩａｃｔａｔｉａｌｌ裹５不同发育时期乳腺ＥＲＪＰａｃｔｉｎ电泳条带密度扫描结果Ｃｎ划Ｔａｂ５ＥｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓａｎａｌｙｓｉｓｏｆＥｔ≈，／ｐ－ａｃｔｉｎｄｕｒｉｎｇｅａｃｈｐｅｒｌｏｄｏｆｍａｍｍａｒｙ（ｎ＝６’ＴｉｍｅＥ凡／肛ａｃｔｉｎ（１０Ｄ）ＶｉｒｇｉｎＰ－６ｄＰ－１２ｄＰ．１８ｄＬ－６ｄＬ－１２ｄＬ．１８ｄ１．１６－２０．０４＂１．００士０．０３女１．０５：Ｌ－Ｏ．０４ｂ０．９１±－０．０５４０．８９±－０．０５４０．９ｌ：ｔ－Ｏ．１１３０．９３士０．１２４注：Ｐ－ＰｒｅｇｎａｎｏｙＬ－Ｌａｃｔａｔｉｏｒｌ组间不同字母为差异显著Ｐ＜Ｏ．０５Ｆｉｇ．１２Ｍ；蛐ｍａＩｙｔｉｓｓｕｅＥ凡／ｐ－ａｅｔｍ（１１３Ｄ）４．２．３ＰＲ的表达水平从大鼠乳腺中提取的总ＲＮＡ经ＲＴ－ＰＣＲ扩增后。
雌激素受体和选择性雌激素受体调节剂的研究进展
收稿日期:2005-04-07基金项目:国家高技术研究发展计划项目(2003AA235031)作者简介:贵春山(1979-),男(汉族),浙江衢州人,博士,从事计算机辅助药物设计和计算生物学研究,E 2mail :csgui @mail. ;蒋华良(1965-),男(汉族),江苏常州人,博士,研究员,博士生导师,从事计算机辅助药物设计、化学生物学和计算生物学研究,T el :(021)50806600-1210,E 2mail :hljiang @ 。
文章编号:1005-0108(2005)05-0313-08雌激素受体和选择性雌激素受体调节剂的研究进展贵春山,沈建华,罗小民,朱维良,沈旭,蒋华良(中国科学院上海药物研究所药物发现与设计中心,上海201203)摘 要:雌激素受体属于核受体超家族成员,是一类重要的核转录因子,它在生殖系统、骨组织、心血管和中枢神经系统中发挥着重要的生理作用,是治疗骨质疏松和乳腺癌的重要药物作用靶标。
已知的雌激素受体有α和β两种亚型,它们由两个不同的基因编码组成。
选择性雌激素受体调节剂是一类在不同的组织细胞中对雌激素受体发挥不同调节作用的化合物,用于治疗绝经后妇女的骨质疏松和乳腺癌等。
对近年来有关这两方面的研究情况进行综述。
关键词:药物化学;研究进展;综述;雌激素受体;选择性雌激素受体调节剂中图分类号:R914 文献标识码:AR esearch progress in estrogen receptor andselective estrogen receptor modulatorsGU I Chun 2shan ,SHEN Jian 2hua ,L UO Xiao 2min ,ZHU Wei 2liang ,SHEN Xu ,J IAN G Hua 2liang(Drug Discovery and Design Center ,S hanghai Instit ute of M ateria Medica ,Chi nese A cadem y ofSciences ,S hanghai 201203,Chi na )Abstract :Estrogen receptor (ER ),an important transcription factor belonging to the nuclear receptor super 2family ,plays a key role in reproductive ,cardiovascular and central nervous systems and bone tissue.Thus ,it is a key drug target for the treatment of osteoporosis and breast cancer.ER comprises two subtypes ER αand ER β,which encoded by two distinct genes.Selective estrogen receptor modulators (SERMs )are kinds of compounds that exert different biological effects on ER in different tissues and can be used in the treat 2ment of osteoporosis and breast cancer of postmenopausal women.K ey w ords :medicinal chemistry ;research progress ;review ;ER ;SERMs 经过长期的基础研究和临床观察,人们发现骨质疏松、乳腺癌、结肠癌、卵巢癌、精神分裂症和老年痴呆症等疾病与雌激素信号通路的异常有密切的联系[1～5]。
肿瘤中雌激素信号转导通路的研究进展
肿瘤中雌激素信号转导通路的研究进展陈安安;汪炬【摘要】@@ 雌激素(estrogen,E2)可通过特异性结合并激活其受体传递信号,广泛调控机体的各种功能,如生殖功能、骨骼及其它组织的分化和维持等.雌激素受体属于核受体超家族,有3个亚类即雌激素受体α(estrogen receptor α,ERα)、Erβ和最近发现的G蛋白偶联受体--GPR(G protein-coupled receptor)30/GPER (G protein-coupled estrogen receptor).典型的ER作用机制是ERα或ERβ结合配体、同源或异源二聚化进入核内与靶基因的反式元件直接结合,或与共激活及共抑制因子结合,从而与靶基因间接结合并调控其转录,被称为基因组作用.此外,雌激素还可通过定位于膜上ER以及定位于胞质的ER介导,在不同的细胞发生不同的信号转导过程,即非基因组作用.非基因组作用通常会涉及与其它多个信号通路相互作用.虽然这2种途径的作用机制不同,但一些研究表明两者紧密联系,共同发挥作用,见图1[1].%In recenl years, accumulaled evidence indicates lhal lhe expression level of eslrogen is relaled Lo cancer development, especially in breasl cancer. This review is an overall inlroduclion aboul lhe progress of recenl years in lhe regulalion of eslrogen receplor expression, degradation and complicaled eslrogen signaling palhways in Lumors, including lhe genomic and non - genomic pathways. We also inlegrales lhe eslrogen palhways inlo a network for beller understanding the molecular mechanisms of estrogen signaling in the development of related tumors.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2012(028)003【总页数】7页(P570-576)【关键词】受体,雌激素;雌激素类;肿瘤;信号通路【作者】陈安安;汪炬【作者单位】暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所,广东,广州,510632;暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所,广东,广州,510632【正文语种】中文【中图分类】R737.9△通讯作者Tel*************;E-mail：******************雌激素(estrogen，E2)可通过特异性结合并激活其受体传递信号，广泛调控机体的各种功能，如生殖功能、骨骼及其它组织的分化和维持等。
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生理学报,1999年12月,51(6),675～680 675 Acta Physiologica Sinica研究简报雌激素诱发大鼠原位与移植垂体催乳素瘤中催乳素基因与TGFα和TGFβ1基因的表达3吴雪梅 许建萍33 张 荣 许荣 333(中国医学科学院基础医学研究所、中国协和医科大学基础医学院生理研究室,北京100005;33中国医学科学院、中国协和医科大学肿瘤医院内科,北京100021)摘 要 利用本实验室建立的17β2雌二醇(17β2estradiol,E2)诱致S prague2Dawley(S D)大鼠原位垂体和异体移植于肾囊的垂体同时形成催乳素(prolactin,PR L)瘤的动物模型,采用N orthern印迹杂交方法,我们观察了E2长期作用(120d)后诱发的原位与移植垂体PR L瘤中PR L基因和两种转化生长因子(trans forming growth factor,TG F)TG Fα和TG Fβ1基因表达水平的改变。
结果表明:在E2长期作用后,原位垂体与异体移植于肾囊,从而远离下丘脑的垂体均可形成垂体PR L瘤;原位与移植垂体PR L瘤中均表现PR L基因的高表达,但移植瘤中的PR L基因表达水平低于原位垂体瘤;此外,仅在原位垂体PR L瘤中发现上述两种转化生长因子呈较高水平的表达,移植垂体PR L瘤与正常垂体中均检测不到这两种转化生长因子的表达。
上述结果提示,TG Fα和TG Fβ1可能涉及E2诱发的原位垂体PR L瘤形成;E2诱发原位与移植垂体形成PR L瘤的机制可能不尽相同。
关键词:PR L瘤;移植;转化生长因子;N orthern印迹杂交学科分类号:Q453 垂体催乳素(prolactin,PR L)瘤的发病原因一直是人们争论的焦点之一,即垂体PR L 瘤的发生是继发于下丘脑病变还是原发于腺垂体本身[1];此外,17β2雌二醇(E2)长期作用可以诱发敏感种系大鼠形成垂体PR L瘤并伴发高PR L血症[2],其机制至今尚不完全清楚。
近年来,生长因子作为机体内广泛存在的自分泌/旁分泌调节性多肽,在肿瘤发生过程中的作用越来越引起重视。
在雌激素敏感性乳腺癌的研究中发现,生长因子,特别是转化生长因子(trans forming growth factor,TG F)TG Fα和TG Fβ1可能是雌激素作用的局部介质[3]。
在正常垂体前叶细胞中已发现了某些生长因子(如表皮生长因子,转化生长因子α和β1等)及其受体的表达,表明生长因子可能是垂体生长与功能的生理性调节因子;在垂体瘤或垂体瘤细胞株中某些生长因子的表达和/或功能发生改变,又提示这些生长因子可 1999201230收稿 1999204212修回 3国家自然科学基金资助项目(N o139770287;N o139870341) 333联系作者.T el:010*********676生 理 学 报 51卷能参与垂体瘤的形成[4]。
本实验首先采用S D大鼠垂体异体移植及背部埋植药泵方法,观察在E2长期作用条件下对原位与移植垂体重量及血浆PR L水平的影响,证明了E2诱发的垂体PR L瘤可以原发于腺垂体水平;随后利用Northern印迹杂交检测了原位与移植垂体瘤中PR L、TG Fα和TG Fβ1mRNA表达水平的改变,从整体与分子水平探讨了E2诱发垂体PR L瘤形成的部分机制。
实验选用S D大鼠,雄性,体重80～100g。
17β2雌二醇为美国Sigma公司产品;PR L 放免(RI A)测定试剂盒由美国NI DDK提供;PR L2SP65#I质粒(含PR L cDNA,725bp EcoRI)由美国I owa大学R1A1Maurer博士惠赠;pmTG Fβ12A质粒(含TG Fβ1cDNA,900bp, SmaI)、pM MT V2TG Fα质粒(含TG FαcDNA,974bp,EcoRI)由美国Vanderbilt大学H1L1M ose 博士赠送;DNA随机引物标记试剂盒购于美国Promega公司;[α232P]dATP购于亚辉生物医学公司。
其它试剂为国产分析纯。
E2诱发垂体异体移植大鼠形成PR L瘤动物模型的制备 取体重及年龄相匹配的大鼠分别作为垂体供体鼠与受体鼠,将一只大鼠断头处死,无菌条件下迅速取出垂体,置于生理盐水中;同时麻醉另一只大鼠,无菌手术暴露左侧肾脏,将前面取出的垂体移植于肾包膜下,缝合切口。
然后使其俯卧位,在腰椎右侧剪开皮肤,游离皮下组织,植入装有10 mg E2的硅橡胶管(长1cm,内径115mm),缝合皮肤。
设正常大鼠为对照,背部植入空的硅橡胶管。
上述大鼠于洁净环境饲养120d,断头处死,称原位与移植垂体重量,冻存于液氮中;取血留作RI A用。
PR L的RI A测定 按照NI DDK提供的标准程序改进后测定血浆PR L浓度。
垂体组织总RNA提取 取约100mg的垂体组织(正常垂体、原位垂体瘤、移植垂体瘤),置于组织匀浆器中,加入112ml冰预冷变性液(42mm ol/L柠檬酸钠、0183%十二烷基肌氨酸、012mm ol/Lβ巯基乙醇、4m ol/L异硫氰酸胍),冰浴中高速匀浆30s,加入1/ 10体积2m ol/L NaAc(pH410),充分混匀,加等体积酸酚/氯仿/异戊醇(25∶24∶1)抽提1次,转移水相,加等体积异丙醇-20℃沉淀过夜,离心(10000r/min、4℃、15min),弃上清,70%乙醇洗沉淀1次,干燥后溶于100μl无RNase水中,测OD260/OD280确定RNA浓度与纯度,-70℃贮存备用。
Northern印迹杂交 cDNA探针的放射性同位素标记按照Promega公司提供的标准程序进行。
3种垂体总RNA各取22μg,在1%甲醛变性琼脂糖凝胶(含212m ol/L甲醛)中电泳分离RNA,凝胶经011%DEPC水淋洗、0105m ol/L NaOH浸泡、再经011%DEPC水淋洗后,以20×SSC为介质,虹吸法转膜(硝酸纤维素膜)18h,剥离硝酸纤维素膜,6×SSC浸泡后,80℃干燥1h;将膜放入杂交袋,68℃预杂交2h,加入变性的α232P标记探针(25ng),68℃杂交16～24h,依次用含或不含S DS的2×、011×SSC洗膜,保鲜膜包裹滤膜,置于暗盒中,压X光片1～2张,-70℃放射自显影24～48h,暗室中取出X光片,显影、定影后观察。
数据处理 将Northern杂交结果在Pharmacia L K B Ultroscan X L激光光密度计上于633nm波长下作灰度扫描,以其吸收峰的积分值作为mRNA含量的参数;Northern印迹杂交重复3次(n=3)。
以两小样本均数的t检验进行统计分析。
实验结果如下:11 E2长期作用对垂体异体移植大鼠原位与移植垂体的影响E 2作用120d 后,原位垂体与移植于肾囊的异位垂体体积与重量均较正常大鼠垂体显著升高(图1),达对照组的3倍以上(P <0105～01001);同时血浆PR L 水平较正常大鼠显著升高,可达对照组的200倍(P <01001)(表1)。
根据Clifton 等[2]的标准,垂体重量升高为正常大鼠的3倍以上,并伴高PR L 血症即可诊断为垂体PR L 腺瘤形成。
本实验E 2长期作用后的原位垂体与移植垂体均达到形成垂体PR L 瘤的诊断标准。
图 1 E 2给药120d 后S D 大鼠原位和移植垂体同时形成PR L 瘤Fig 11Eutopic and ectopic pituitary PR L tu 2m ors in S D rats formed simultaneouslyafter treatment with E 2for 120days1.Ectopic pituitary treated with E 2for 120d.2.Eutopic pituitary treated with E 2for 120d.3.N ormal pituitary of control rat.表1 E 2诱发S D 大鼠形成PR L 瘤期间大鼠垂体重量和血浆PR L 水平的比较T able 1 C om paris on of the weight of the pituitary and plasma PR L level during the formationof prolactinoma induced by E 2G roupn PW (eutopic )PW (ectopic )(mg ,x ±s )Plasma PR L (ng/ml ,x ±s )C ontrol10915±0151412±416 T ransplantation +E 21117111±4414332818±7123308217±22615333P <0105,33P <01001vs control group.21 E 2诱发的原位与移植垂体PR L 瘤中PR L 、TGF α和TGF β1基因表达水平的改变Northern 印迹杂交结果表明,E 2诱发的原位与移植垂体PR L 瘤中PR L 基因的表达水平均较正常对照组显著增高,其中又以原位垂体PR L 瘤组织中PR L 基因表达水平最高;同时,原位垂体PR L 瘤组织中TG F α和TG F β1基因也呈较高水平的表达,而正常垂体与移植垂体瘤组织中检测不到上述两种转化生长因子基因的表达(图2)。
对PR L 基因的Northern 印迹杂交结果进行灰度扫描,表明原位与移植垂体PR L 瘤中PR L 基因的表达水平分别为正常对照组的411倍和216倍(P <0105～0101);原位垂体PR L 瘤中PR L 基因的表达水平显著高于移植垂体PR L 瘤,约为后者的116倍(P <0105)(图3)。
以前的工作已表明,E 2长期作用于敏感种系大鼠可以导致原位垂体前叶PR L 细胞增生、PR L 大量分泌,以及PR L 腺瘤形成[5～7]。
虽然体内许多因素都可以导致血浆PR L 水平升高,但除垂体PR L 腺瘤外,一般不超过200ng/ml [8]。
这种动物模型虽然已被公认是一种最佳的PR L 瘤的实验模型,但不能判断PR L 瘤形成的病因是继发于下丘脑异常还是原发于腺垂体的功能自主性腺瘤。
为了判断PR L 瘤原发于腺垂体的可能性,我们把一异体垂体移植于外周远离下丘脑的肾囊,但E 2诱发移植于肾囊的垂体PR L 瘤的生长远小于原位垂体瘤,根据形态学的观察结果,推测可能与肾包膜限制其生长有关。