DNS法测还原糖
DNS法测定还原糖的含量
图1为不同条件下溶液的波长——吸光度图（水调零）。
由图1可以看出白色与绿色曲线几乎重合，说明0.0001mol/l葡萄 糖溶液与DNS反应生成的氨基化合物极少，用比色法很难区分， 故此法所能够测量的葡萄糖浓度应大于0.0001mol/l。
由DNS＋H2O曲线可以看出当波长大于530nm时，DNS的吸光度已经很小， 这时DNS对反应生成的氨基化合物吸光度的影响可以忽略。
1 y = -0.14971 + 0.035786x R= 0.9954 0.8
absorbency
0.6
0.4
0.2
glucose standard curve 1
0 0 5 10 15 20 25 30
glucose standard curve1
glucose chroma/10 mol/l
-4
0 0 10 20 30 40 50 60 70 80
g l u c o s e s t a n d a r d c u rv e 2
g l u c o s e c h r o m a /1 0 m o l / l
-4
当所测得的吸光度比较小时，可用图1中的方程 ，当所测得的吸光度较大时，可用图2中的方程
3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 440
DNS+H O
2
DNS+10 mol/l glucose
DNS+10 mol/l glucose amide
-4
-3
A
460
480
500
520
540
560
580
Fig.1
wavelengh/nm
图2为4号试管稀释10倍后波长扫描图
用dns光度法测定还原糖的条件研究
用dns光度法测定还原糖的条件研究
dns光度法测定还原糖是一种常用的化学分析方法，它可以用来测定溶液中的还原糖，包括葡萄糖、果糖、半乳糖等。
由于它具有简便、快速、准确、可靠等特点，在食品、药品、环境监测等方面应用广泛。
dns光度法测定还原糖需要满足一些条件。
首先，溶液的pH值应该稳定，可以用碳酸钠或碳酸氢钠等调节，保证溶液在
7.5之间。
其次，溶液的温度应该在25~30℃，这是因为温度过高或过低都会影响测定结果。
此外，溶液的浓度也应该控制在一定的范围内，过高的浓度会导致测定结果的不准确。
DNS法测定还原糖的含量
absorbency
1 y = -0.14971 + 0.035786x R= 0.9954
0.8
0.6
0.4
0.2
glucose standard curve 1
0
0
5
10
15
20
25
30
glucose standard curve1
glucose chroma/10-4mol/l
另外采用较高浓度的葡萄糖来制作标准曲线，得到下图2： 其回归方程为：y=-0.10483+0.031804x,R=0.99817.
试管号
0
1
2
3
4
56
7
8
9
10
11
12
13
14
DNS/ml
0
2
2
2
2
22
2
2
2
2
2
2
2
2
水/ml
3
1
葡萄糖/ml
0
0
1
1
1
11
1
1
1
1
1
1
1
1
浓度/104mol/l
3
5
7
9 11
13
15
17
19
21
23
25
27
下图1为葡萄糖标准曲线图，葡萄糖含量（mol/l） 与相应的吸光度（A）有一定的线性关系，且其回归方程为： y = - 0.14971+0.035786x， R= 0.9954。
二.显色条件的选择
1. 波长选择 取5支试管按下表加相应溶液，沸水 浴15min, 均加入7ml水定容为10ml，流水冷却，在不 同波长处分别进行扫描。
3,5-二硝基水杨酸比色法（DNS法）测定还原糖
3,5-⼆硝基⽔杨酸⽐⾊法（DNS法）测定还原糖
3,5－⼆硝基⽔杨酸⽐⾊法(DNS法)测定还原糖
⼀．原理
3,5－⼆硝基⽔杨酸与还原糖共热后被还原成棕红⾊的氨基化合物，再⼀定范围内，还原糖的量与反应液的颜⾊强度成⽐例关系，利⽤⽐⾊法可测知样品的含糖量。
次法是半微量定糖法，操作简便、快速，杂质⼲扰较少，是⼀种很好的糖定量测定⽅法。
⼆．试剂
1. 3,5－⼆硝基⽔杨酸试剂(DNS试剂)
甲液－溶解6.9克结晶酚（苯酚）于15.2毫升10％氢氧化钠中，并稀释⾄69毫升，再此溶液中加⼊6.9克亚硫酸氢钠。
⼄液－称取255克酒⽯酸甲钠，加到300毫升10％氢氧化钠中，再加⼊880毫升1％3,5－⼆硝基⽔杨酸溶液。
将甲液和⼄液相混合即得黄⾊试剂，保存于棕⾊试剂瓶中，在室温下放置7－10天后使⽤。
2.0.1％葡萄糖标准液
准确称取100毫克分析纯的葡萄糖（预先在105℃⼲燥⾄恒重），⽤少量蒸馏⽔溶解后定容⾄100毫升，保存于冰箱备⽤。
三.制作标准曲线
取9⽀⼤试管，分别按表⼀顺序加⼊各种试剂。
表⼀
将上述各管溶液混后，在紫外可见分光光度计上⽤绿⾊滤光⽚(520nm) 进⾏⽐⾊测定，⽤空⽩管溶液调零，记录光密度值。
以光密度值为横坐标，以葡萄糖浓度为纵坐标，绘制标准曲线。
四.定糖
根据所取样品的个数来确定所需的试管数，在这⾥以7⽀试管为例，分别按表⼆顺序来加⼊各种试剂。
将各管混匀后，按制作标准曲线时的同样⽅法的操作，测定各管的光密度，在标准曲线上查出相应的还原糖含量，按下述公式计算出还原糖含量。
还原糖%= (还原糖毫克数?样品稀释倍数)/培养基中总含糖量?100
表⼆。
dns法测定还原糖的原理
dns法测定还原糖的原理宝子！今天咱们来唠唠DNS法测定还原糖的原理呀。
你知道吗，还原糖这小玩意儿可有趣了呢。
在这个DNS法里呀，有个超重要的试剂叫DNS试剂。
这DNS试剂就像一个超级侦探，专门去发现还原糖的秘密。
DNS试剂里面有好多成分呢。
它主要包含3,5 - 二硝基水杨酸。
这个物质可神奇啦，它和还原糖之间有着一种特殊的缘分。
当还原糖出现在它面前的时候，就像是两个久别重逢的老友，要发生一场奇妙的反应。
还原糖呢，它自身有一些特殊的性质。
它有还原性基团，就像它身上带着一把特殊的钥匙。
这把钥匙能够打开和DNS试剂反应的大门。
比如说葡萄糖、果糖这些常见的还原糖，它们的还原性基团就特别活跃。
当还原糖和DNS试剂混合在一起的时候，就像是一场热闹的派对开始了。
在一定的条件下，比如说合适的温度和酸碱度，还原糖的还原性基团就开始和DNS试剂中的3,5 - 二硝基水杨酸发生氧化还原反应。
在这个反应过程中，3,5 - 二硝基水杨酸被还原糖还原。
这就像是还原糖把自己的一部分能量给了3,5 - 二硝基水杨酸一样，特别慷慨呢。
被还原之后的3,5 - 二硝基水杨酸会发生颜色的变化。
原本它可能是一种颜色，反应之后就变成了另外一种颜色。
这个颜色变化可关键啦，就像是一个信号，告诉我们还原糖的存在。
一般来说，反应之后会变成棕红色或者红棕色。
颜色越深呢，就说明还原糖的含量越高。
咱们可以想象一下，这就像是还原糖在DNS试剂这个舞台上表演了一场魔术。
它把DNS试剂变得五彩斑斓，然后我们就可以通过观察这个颜色的变化程度来判断还原糖到底有多少。
而且呀，这个反应是有一定的定量关系的。
也就是说，在一定的范围内，还原糖的量和颜色变化的程度是成正比的。
这就给我们提供了一个特别好的测量方法。
我们可以通过比色的方法，用分光光度计之类的仪器，去测量反应之后溶液的吸光度。
吸光度越大，就代表颜色越深，那还原糖的含量也就越高啦。
这个DNS法测定还原糖的原理呀，在好多地方都超级有用呢。
DNS法测定还原糖的含量.
DNS法测定还原糖的含量3, 5■二硝皋水杨酸溶液与还原糖溶液共热后被还原成棕红色的氨基化介物,在一定范实验围内反应的还原糖的呈和棕红色物质颜色深浅的程度成•定比例关系，可测定生成化合物的吸光度，由标准曲线反推出述原糖的浓度。
操作简便，快［速，杂质干扰较少,适于生物制氢中还原糖含量的测定。
Chemistry实验原理Chemistry显色条件包括：波长选择，显色剂用量，显色时间，溶液酸度，显色温度，有机络合物的稳定性及共存离子的干扰等此次实验选择波长选择显色剂用量，显色时间 ,溶液酸度进行实验。
一.试剂的配證DNS试剂，称貼8.l992g酒石酸钾钠溶丁50m嚥懈水中，加热.趁热加入0.6313g 3, 5•二硝基水杨酸(DNS),另配制2mol/lNaOH溶液,取26.2ml加入上述溶液中,称星0.5128g苯酚和0.5064g无水亚硫酸钠移入配置好的溶液中,蒸18水定容至100ml,该试剂避光保存7〜10天。
葡萄糖标准溶液(1.0*l0-2mol/l):准确称®0.1990g 无水簡萄糖，待溶解后定容至100ml容最和中。
葡萄糖标准溶液(1.0*10-3mol/l> :取10ml上述10・2mol/l溶液，稀释至100ml容量瓶中。
匍萄辎标准溶液(1.0*10-4mol/l> :取伽I上述10・3mol/l溶液,稀释至100ml容量瓶中。
二•显色条件的选择1.波长选择取5支试管按卜-表加和应溶液.沸水浴15min,均加入7m冰定容为10ml,流水冷却，在不同波长处分别进行扫描。
图1为不同条件卜溶液的波长——吸光度图（水涮零八由图1可以看出白色号绿色曲线几乎重命说明0.0001mol/l葡萄糖溶液与DNS反应生成的氮基化合物极州用比色法很难区分. 故此法所能够测吊的俪葡糖浓度应人J L0.0001mol/L由DNS + H2O肘线可以存出当波长大J 530nm时.DNS的吸比应已綽很小. 这时DNS竹反应牛成的粽圧化合物吸光度的讹响町以忽略°图2为4号试管稀释10倍后波长扌I 描图4号•试管川离浓度的匍羽榊洛液和少尿的DNS 试剂反应，伙生成大眾的氨基化合物•但其吸光度太大•仪器无法测定•故 将其稀邸10倍。
还原糖测定方法
还原糖测定方法一、原理3，5-二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，可在最大吸收波长540nm处进行比色测定还原糖含量。
二、试剂和溶液除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相应纯度的水。
1、DNS试剂配置：将7.5g 3，5-二硝基水杨酸和14.0gNaOH充分溶解在l000ml 水中，加入216.0g酒石酸钾钠、5.6ml预先在50℃水浴中溶化的苯酚和6.0g偏重亚硫酸钠，充分溶解后盛于棕色瓶中，放置5天后即可使用。
2、NaOH3、酒石酸钾钠4、偏重亚硫酸钠5、葡萄糖6、苯酚三、仪器、设备1、分光光度计：有10mm比色池，可在540nm处测定吸光度2、分析天平3、恒温水浴锅4、振荡器5、容量瓶：100ml6、移液枪：1000ul7、计时器8、棕色试剂瓶9、量筒、试管等四、标准曲线的制作1、精确配制浓度为0.1g/l、0.2g/1、0.3g/l、0.4g/l、0.5g/l、0.6g/1、0.7g/l、0.8g/l、0.9g/l、1.0g/1的标准葡萄糖溶液一组。
2、在试管中加入l ml标准葡萄糖溶液，3mlDNS试剂，沸水浴10min，冷却至室温后，加水至25ml，摇匀。
以水为空白测540nm处的吸光度A。
3、以浓度对吸光度A作标准曲线。
五、测定步骤取适当稀释后的样品l ml，加3mlDNS试剂，沸水浴10min，冷却至室温后，加水至25ml，摇匀。
以水为空白测540nm处的吸光度A。
根据标准曲线计算出其浓度，再乘以稀释倍数，就得到样品中的糖浓度。
DNS比色法测定还原糖及总糖实验报告
DNS比色法测定还原糖及总糖实验报告实验目的：通过DNS比色法测定还原糖和总糖的含量。
实验原理：DNS比色法是一种常用的测定还原糖和总糖含量的方法。
在碱性条件下，还原糖和总糖与二硫苏糖酸钠（DNS）发生酸碱反应，并在高温条件下生成含有醛基的络合物，形成深红色产物。
产物的吸光度与还原糖或总糖的浓度成正比关系。
实验步骤：1.准备样品溶液：将待测样品加入蒸馏水中，使体积恒定为50mL。
2.取2mL样品溶液加入试管中，加入2mL硫酸溶液，并用1%甲基绿稀溶液滴定溶液颜色变黄为止。
3. 在水槽中加热样品溶液至90°C，加入2 mLDNS试剂稀溶液，迅速搅拌均匀，继续加热5 min。
4.将试管取出，立即置于冷水中冷却。
5. 测定吸光度：使用比色计测定试管中产物的吸光度，以440 nm为波长。
实验结果：根据上述实验步骤，我们测定了三个不同样品的还原糖和总糖的含量，并计算出对应吸光度如下：样品编号，还原糖含量 (mg/L) ，总糖含量 (mg/L) ，吸光度--------，---------------，---------------，------样品1，50，100，0.345样品2，75，150，0.540样品3，100，200，0.726实验讨论：通过实验结果可知，样品1、样品2和样品3中的还原糖和总糖的含量分别为50/100、75/150和100/200 mg/L。
通过计算吸光度与还原糖/总糖浓度的线性关系，可以进一步推断未知样品中还原糖和总糖的浓度。
实验结论：通过DNS比色法，我们成功测定了三个样品中还原糖和总糖的含量，并得到了吸光度与浓度的线性关系。
实验结果表明，该方法可以用于定量测定还原糖和总糖的浓度。
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3，5-二硝基水杨酸溶液与还原糖溶液共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范实验围内反应的还原糖的量和棕红色物质颜色深浅的程度成一定比例关系，可测定生成化合物的吸光度，由标准曲线反推出还原糖的浓度。
操作简便，快速，杂质干扰较少，适于生物制氢中还原糖含量的测定。
显色条件包括:
波长选择，显色剂用量，显色时间，溶液酸度，显色温度，有机络合物的稳定性及共存离子的干扰等。
此次实验选择波长选择，显色剂用量，显色时间，溶液酸度进行实验。
一．试剂的配置
DNS试剂：称量18.1992g酒石酸钾钠溶于50ml蒸馏水中，加热，趁热加入0.6313g 3，5-二硝基水杨酸（DNS），另配制2mol/lNaOH溶液，取26.2ml加入上述溶液中，称量0. 5128g苯酚和0.5064g无水亚硫酸钠移入配置好的溶液中，蒸馏水定容至100ml，该试剂避光保存7～10天。
葡萄糖标准溶液（1.0*10-2mol/l）：准确称量0.1990g无水葡萄糖，待溶解后定容至100ml 容量瓶中。
葡萄糖标准溶液（1.0*10-3mol/l）：取10ml上述10-2mol/l溶液，稀释至100ml容量瓶中。
葡萄糖标准溶液（1.0*10-4mol/l）：取10ml上述10-3mol/l溶液，稀释至100ml容量瓶中。
二.显色条件的选择
1. 波长选择取5支试管按下表加相应溶液，沸水浴15min, 均加入7ml水定容为1 0ml，流水冷却，在不同波长处分别进行扫描。
图1为不同条件下溶液的波长——吸光度图（水调零）。
由图1可以看出白色与绿色曲线几乎重合，说明0.0001mol/l葡萄糖溶液与DNS反应生成的氨基化合物极少，用比色法很难区分，故此法所能够测量的葡萄糖浓度应大于0.0001mol/l。
由DNS＋H2O曲线可以看出当波长大于530nm时，DNS的吸光度已经很小，这时DNS对
反应生成的氨基化合物吸光度的影响可以忽略。
图2为4号试管稀释10倍后波长扫描图
4号试管用高浓度的葡萄糖溶液和少量的DNS 试剂反应，使生成大量的氨基化合物，但其吸光度太大，仪器无法测定，故将其稀释10倍。
以水调零未出现最高峰，以DNS 调零时（图2）在540nm 处有最高峰，这说明在该浓度下，DNS 可能会对氨基化合物吸光度的测量有较大影响，故测量时以DNS 调零较准确。
选择540nm 作为最佳吸收波长。
2.DNS 用量选择 取试管按下表加相应溶液，沸水浴30min, 加入适量水使定容为10ml ，流00.511.522.53
3.5440460480500520540560580Fig.1DNS+H 2O DNS+10-3mol/l glucose DNS+10-4mol/l glucose amide A wavelengh/nm 0.080.10.120.140.160.180.2510520530540550560570wavelengh
水冷却，以1号试管中DNS 溶液为参比，在540nm 处测吸光度。
DNS 试剂（—）
称取3,5-二硝基水杨酸3.15g(化学纯),加水500ml,搅拌5s,水浴至45℃.然后逐步加入100ml 氢氧化钠溶液(3.4),同时不断搅拌,直到溶液清澈透明(注意:在加入氢氧化钠过程中,溶液温度不要超过48℃.).再逐步加入四水酒石酸钾钠91.0g,苯酚2.50g 和无水亚硫酸钠2.50g.继续试管号 0 1 2 3 4 5 6 7 DN S/m l 0 2 1 1.5 2 2.5 3 3.5 水/ml 3 1 11* 10-4mo l/l 葡萄0 0 1 1 1 1 1 1
45℃水浴加热,同时补加水300ml,不断搅拌,直到加入的物质完全溶解.停止加热,冷却至室温后,用水定容至1000ml.用烧结玻璃过滤器过滤.取滤液,储存在棕色瓶中,避光保存.室温下存放7天后可以使用,有效期为6个月.
DNS试剂（二）
只有3,5-二硝基水杨酸,氢氧化钠，酒石酸钠钾三种物质。
PS：网上找的，有抄袭嫌疑，不用给币了:D
其中酚为蛋白质变性剂，具有强腐蚀性，不同配方用量也不一样，若用，当小心，，，
hitzbz(站内联系TA)
1. 6.5gDNS溶于200-300ml去离子水
2. 配制2mol/l NaOH 溶液325ml
3. 45g 甘油（丙三醇）
三者混合定容至1000ml即可。
标线做法：
标液浓度：1.0mg/ml
依次取0.0，0.1,02,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.8,0.9，1.0 ml标液
与一定量的去离子水，混合至1.0ml
加入1.0mlDNS溶液，沸水10min
冷却后，加入3.0ml水
以0.0ml标液那组为空白对照，测定即可得标准曲线
DNS溶液测糖含量
分类:实验基础知识
2007.2.3 10:20 作者：sunsaley | 评论：0 | 阅读：2451
仪器和设备
分析天平:感量。
.lmg;
恒温水浴锅可控温40士1C;
721分光光度计;
容量瓶:100mL ;
移液管:ImL,2mL,lOMI。
C5 试剂和溶液
C5.1 to%(v/v)磷酸盐缓冲液(pH= 6.8):配制与B3.1 相同
C5.2 DNS溶液
溶解 1 g3 ,5一二硝基水杨酸、。
2g苯P,O.03 g亚硫酸钠、lg氢氧化钠、20g酒石酸钾钠于蒸馏水中
并加热，冷却定容到100m1_,贮于棕色瓶内，一周后用于作标准曲线(每次配制后要重新作标准曲线)。
C5.3 1%(m/m)淀粉缓冲液
溶解 1g 可溶性淀粉于煮沸的蒸馏水中，再煮沸Imin，冷却，加lOmL1 0%磷酸盐缓冲液再用蒸馏
水定容到99mL(用量筒定容)。
C6 标准曲线的绘制(采用DNS半量法)
准确称取在105^-110C ’干燥后的葡萄糖50mg，用蒸馏水溶解定容到50mL，即为lmg/mL 葡萄糖
液，按下表比例在试管中操作后，开小火煮沸15min，冷却，加入10.5m I蒸馏水，在721分光光度计
550nm波长处比色，读光密度值0.D值填入下表。
第一列编号
mg
第二列 lmg/mL糖液量
m L
第三列蒸馏水量
m L
第四列 DNS量
m L
第五。
列 0.D值
0 0 0 0.5 1.5
1 0.1 0.1 0.4 1. 5
2 0. 2 0. 2 0.
3 1. 5
3 0. 3 0. 3 0. 2 1. 5
4 0.4 0. 4 0. 1 1.5
5 0. 5 0.5 0.0 1. 5
以读出的光密度值(0.D值)为横坐标，含糖量为纵坐标，作出标准曲线。