分子生物学实验中常用的抗生素配置及工作浓度
AbMole 生物实验中常用的抗生素讲解
AbMole|生物实验中常用的抗生素讲解抗生素主要是由细菌、霉菌或其他微生物产生的次级代谢产物或人工合成的类似物，在筛选稳定表达株、抑制微生物或肿瘤细胞、调节细胞等方面发挥重要作用。
针对研究中常用的抗生素，为大家逐一介绍。
实验筛选用抗生素01G-418disulfate(遗传霉素)G-418disulfate（M2719）是一种氨基糖苷类抗生素，在原核和真核细胞的蛋白质合成过程中，能够阻止蛋白质的延伸，进而抑制蛋白质的合成。
G418浓度在1-300mg/毫升时，能抑制多种原核和真核生物；来自Tn5（编码氨基糖苷3'-磷酸转移酶，APT3'II）的neo基因能产生G418抗性，通常用在实验室研究中用于筛选基因工程细胞。
一般作用于细菌和藻类的浓度为5mg/L或更低，筛选哺乳动物细胞的浓度为400mg/L，维持哺乳动物细胞的浓度为200mg/L。
02Puromycin Dihydrochloride(嘌呤霉素)Puromycin dihydrochloride（M3637）是一种氨基核苷类抗生素，能够特异地抑制原核和真核核糖体上的肽链转移，常用于筛选通过质粒转染/转化、病毒感染等方法能表达pac基因（puror）的真核或原核多克隆或单克隆细胞。
嘌呤霉素能够通过抑制蛋白质合成而抑制革兰氏阳性菌和各种细胞的生长，在某些特定条件下也可用于大肠杆菌转化子的筛选。
哺乳动物细胞一般对1-10µg/ml浓度敏感，最佳浓度需要杀灭曲线来确定；LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌，则多数情况下使用浓度为125µg/ml。
03Hygromycin B(潮霉素B)Hygromycin B（M2761）是由吸水链霉菌代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成，从而杀死原核（如细菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳动物真核细胞。
抗生素工作浓度
常用抗生素氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml～50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。
羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。
卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以10ug/ml～50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。
氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
链霉素（streptomycin）（50mg/ml）溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
四环素（tetracyyline）（10mg/ml）溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。
分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。
常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
生命科学科研领域常用抗生素概要
生命科学科研领域常用抗生素北京华越洋生物G418溶液 (geneticin,20mg/ml 10ml 抗生素 40% --‐ 20℃ , 避光 ,6个月又称遗传霉素 , 新霉素 , 对细菌、酵母、高等植物、原生生物、哺乳动物细胞具有氨基苷类毒性 , 对真核细胞进行筛选。
无菌溶液。
pH7.2--‐7.9, 经一般工作浓度为 50--‐1000ug/ml。
氨苄青霉素溶液 (Ampicillin,50mg/ml 10ml 抗生素 40% --‐ 20℃ , 避光 ,12个月细菌培养常用抗生素 , 用于配制含氨苄的 LB 或 LB 平板等。
干扰肽聚糖的交联从而抑制细胞壁的合成。
无菌溶液。
工作浓度为 50--‐100ug/ml。
氨苄青霉素溶液 (Ampicillin,100mg/ml 10ml 抗生素 40% --‐ 20℃ , 避光 ,12个月细菌培养常用抗生素 , 用于配制含氨苄的 LB 或 LB 平板等。
干扰肽聚糖的交联从而抑制细胞壁的合成。
主要由氨苄青霉素溶于水 ,0.22um 滤膜过滤除菌 , 工作浓度为 50--‐100ug/ml。
潮霉素 B 溶液 (Hygromycin B ,50mg/ml 10ml 抗生素 40% 4℃ , 避光 ,12个月抑制原核细胞、真核细胞中蛋白质合成,多种细胞类型的重组克隆的筛选。
无菌溶液,水溶液,经过滤除菌。
潮霉素 B 溶液 (Hygromycin B ,50mg/ml 20ml 抗生素 40% 4℃ , 避光 ,12个月抑制原核细胞、真核细胞中蛋白质合成,多种细胞类型的重组克隆的筛选。
无菌溶液,水溶液,经过滤除菌。
相当于 1个的包装。
丁胺卡那霉素溶液 (Amikacin,50mg/ml 10ml 抗生素 40% --‐ 20℃ , 避光 ,12个月抗菌谱与庆大霉素相似 , 但对耐卡那霉素、妥布霉素和庆大霉素的细菌包括绿脓杆菌和沙雷氏杆菌仍有效。
无菌溶液,经过滤除菌。
各种抗生素的配制
抗生素
（一）溶剂存储浓度一般使用浓度保存条件Kana（卡那霉素）水10mg/ml50ug/ml-20℃Amp（氨苄霉素）水50mg/ml50ug/ml-20℃Strp（链霉素）水10mg/ml50ug/ml-20℃Hyp（潮霉素）水50mg/ml-20℃Ca（头孢霉素）水50mg/ml-20℃Cm（氯霉素）乙醇34mg/ml50ug/ml-20℃
Rif（利福平）二甲基亚砜
（DMSO）
50mg/ml50ug/ml-20℃
以水为溶剂的抗生素贮存液应通过0.22um水膜滤器过滤除菌。
以有机溶剂为溶剂的抗生素贮存液应通过0.22有机膜滤器过滤除菌。
以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理，所有抗生素容易均应保存于不透光的容器中。
乙酰丁香酮（AS）的配置：200mM/L=39.24mgAS+1ml二甲基亚砜（DMSO）使用有机滤器过滤除菌；
使用浓度200ug/ml：2ul的200mM/L的配置好的AS
异丙基-b-D-硫代半乳糖苷（IPTG）的配置：用水配置成50mg/ml，后使用水膜滤器过滤除菌；使用浓度：0.1mM/L-1mM/L
MES溶液：1mol/L，精确称量2.1320gMES，加入95ml的ddH2O，使用5M KOH调节PH至5.3后，定容至100ml，超净台内过滤除菌，-20℃冻存。
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各种抗生素的配制
溶剂存储浓度一般使用浓度保存条件Kana（卡那霉素）水10mg/ml 50ug/ml -20℃Amp（氨苄霉素）水50mg/ml 50ug/ml -20℃Strp（链霉素）水10mg/ml 50ug/ml -20℃Hyp（潮霉素）水50mg/ml -20℃Ca（头孢霉素）水50mg/ml -20℃Cm（氯霉素）乙醇34mg/ml 50ug/ml -20℃
Rif（利福平）二甲基亚砜
（DMSO）
50mg/ml 50ug/ml -20℃
以水为溶剂的抗生素贮存液应通过0.22um水膜滤器过滤除菌。
以有机溶剂为溶剂的抗生素贮存液应通过0.22有机膜滤器过滤除菌。
以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理，所有抗生
素容易均应保存于不透光的容器中。
乙酰丁香酮（AS）的配置：200mM/L=39.24mgAS+1ml二甲基亚砜（DMSO）使用有机滤器过滤除菌；
使用浓度200ug/ml：2ul的200mM/L的配置好的AS
异丙基-b-D-硫代半乳糖苷（IPTG）的配置：用水配置成50mg/ml，后使用水膜滤
器过滤除菌；
使用浓度：0.1mM/L-1mM/L
MES溶液：1mol/L，精确称量2.1320gMES，加入95ml的ddH2O，使用5M KOH 调节PH至5.3后，定容至100ml，超净台内过滤除菌，-20℃冻存。
抗生素的配制
抗生素的配制储存液工作浓度(mg/ml)保存条件严紧型质粒(ug/ml)松驰型质粒(ug/ml)氨苄青霉素50(溶于水) -20℃20 60羧苄青霉素50(溶于水) -20℃20 60氯霉素34(溶于乙醇) -20℃25 170卡那霉素10(溶于水) -20℃10 50链霉素10(溶于水) -20℃10 50四环素5(溶于甲醇) -20℃10 50常用抗生素溶液抗生素贮存液a工作浓度浓度保存条件严紧型质粒松弛型质粒氨苄青霉素50mg/ml(溶于水)-20℃20μg/ml60μg/ml羧苄青霉素50mg/ml(溶于水)-20℃20μg/ml60μg/ml氯霉素34mg/ml(溶于乙醇)-20℃25μg/ml170μg/ml卡那霉素10mg/ml(溶于水)-20℃10μg/ml50μg/ml链霉素10mg/ml(溶于水)-20℃10μg/ml50μg/ml四环素b5mg/ml(溶于乙醇)-20℃10μg/ml50μg/mlDocument number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UTa：以水为溶剂的抗生素贮存液通过μm滤器过滤除菌。
以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。
所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。
b：镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基（如LB培养基）。
常用抗生素氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）溶解羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。
各种抗生素的配制
抗生素溶剂存储浓度一般使用浓度保存条件Kana卡那霉素水10mg/ml50ug/ml-20℃Amp氨苄霉素水50mg/ml50ug/ml-20℃Strp链霉素水10mg/ml50ug/ml-20℃Hyp潮霉素水50mg/ml-20℃Ca头孢霉素水50mg/ml-20℃Cm氯霉素乙醇34mg/ml50ug/ml-20℃
Rif利福平二甲基亚砜
DMSO
50mg/ml50ug/ml-20℃
以水为溶剂的抗生素贮存液应通过水膜滤器过滤除菌;以有机溶剂为溶剂的抗生素贮存液应通过有机膜滤器过滤除菌;以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理,所有抗生素容易均应保存于不透光的容器中;
乙酰丁香酮AS的配置：200mM/L=+1ml二甲基亚砜DMSO使用有机滤器过滤除菌；
使用浓度200ug/ml：2ul的200mM/L的配置好的AS
异丙基-b-D-硫代半乳糖苷IPTG的配置：用水配置成50mg/ml,后使用水膜滤器过滤除菌；
使用浓度：L-1mM/L
MES溶液：1mol/L,精确称量,加入95ml的ddH2O,使用5M KOH调节PH至后,定容至100ml,超净台内过滤除菌,-20℃冻存;。
实验室分子生物学实验基本操作规范及注意事项
实验室分子生物学实验基本操作规范及注意事项实验室分子生物学实验基本操作规范及注意事项一、酶与载体的分装酶类与载体：T载体(50 ng/μl)用灭菌水稀释4倍（12.5 ng/μl）后分装成10 μl 或20 μl；连接酶（solutionΙ）按5 μl分装；dNTP（10 mM）分装成50 μl；无菌水分装成1 ml；注意：（1）所有分装都必须用已灭菌的管。
（2）所有工具酶和载体的使用过程均在冰浴中进行。
（3）工具酶、载体以及试剂盒等实验室共用物品，用完后必须及时放回原处，以免耽误他人使用。
（4）当你发现你使用的是最后一管（盒）公用物品时，请马上告知负责人购买，以免耽误使用。
（5）感受态，氨苄青霉素和IPTG由研究生轮流负责制备。
每人负责六个月。
其他试剂则由第一位使用新包装的同学分装。
由于分子实验工具酶比较容易失活，必须在冰上进行分装。
二、常见抗生素及IPTG的配置以氨苄青霉素为例：1．准备足够量的1.5 ml的EP管、两个100 ml的离心管、0.22 μm水系滤器、注射器、蒸馏水，以上用品均要进行高压灭菌。
2. 洁净工作台紫外灭菌，然后进行以下操作。
3．称取2 g的氨苄青霉素粉末于离心管中，加入灭菌水至总体积为20 ml，轻摇离心管，至氨苄青霉素粉末完全溶解，以免过滤时堵塞滤膜。
4．用注射器吸取配制好的溶液，然后把滤器安在注射器上，缓缓推动注射器活塞，把溶液经滤膜推至100 ml的离心管中。
注意：动作要缓和，使滤出液出口正对着离心管，还要防止染菌。
5．把100 ml离心管中已除菌的氨苄青霉素溶液分装到1.5 ml的EP管中，每管0.5 ml。
在EP管上做好标记，包括名称、浓度、日期等。
6．把做好标记的盛有氨苄青霉素的EP管于-20℃保存。
注意：当你发现你使用的是最后一管抗生素时，请马上告知有关人员及时配制，以免耽误使用。
表1.常见抗生素的储存浓度及工作浓度名称储存浓度工作浓度氨苄青霉素（ampicillin）100 mg/ml 50 μg/ml～100 μg/ml卡那霉素（kanamycin）10 mg/ml 10 μg/ml～50 μg/ml氯霉素（chloramphenicol）25 mg/ml 12.5 μg/ml～25 μg/ml链霉素（streptomycin）50 mg/ml 10 μg/ml～50 μg/ml四环素（tetracyyline）10 mg/ml10 μg/ml～50 μg/mlIPTG 1 M 0.05-0.6 mM五、基因扩增1．引物与合成：设计引物序列，发至生工公司进行合成（jinan@）。
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常用抗生素：
备注：(摘自《分子克隆》第三版附录 2 )
①以水为溶剂的抗生素贮存液应使用0.22 ym滤器过滤除菌；
②用乙醇溶解的抗生素溶液无须过滤除菌；
③所有抗生素贮液都应放于不透光的容器中保存。
氨苄青霉素( ampicillin )(100mg/ml )
溶解1g 氨苄青霉素钠盐于足量的水(最好是高压后的灭菌水)中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20C贮存。
常以25ug/ml〜
50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。
羧苄青霉素( carbenicil l in )( 5 0 m g/m l )
溶解0.5g 羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20C贮存。
常以25ug/ml〜50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
甲氧西林( methicillin )(100mg/ml )
溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20C贮存。
常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。
卡那霉素( kanamycin)( 10mg/ml)
溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20C贮存。
常以10ug/ml〜50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
氯霉素( chloramphenicol)(25mg/ml)
溶解250mg 氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml 。
分装
成小份于-20C贮存。
常以12.5ug/ml〜25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
链霉素( streptomycin)(50mg/ml)
溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20C贮存。
常以10ug/ml〜50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
萘啶酮酸( nalidixic acid )( 5mg/ml )
溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装
成小份于-20C贮存。
常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
四环素( tetracyyline)(10mg/ml )
溶解100mg 四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。
分装成小份用铝箔包裹装液管以
免溶液见光，于-20C贮存。
常以10ug/mI〜50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。