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沉降菌检测操作规程
沉降菌检测操作规程沉降菌检测操作规程一、实验材料和仪器设备准备1. 培养基：选择适合于沉降菌生长的培养基，如营养琼脂、脑心提取物琼脂等。
2. 试管：清洁且干燥的试管，用于制备培养基和盖儿。
3. 平板培养皿：密封性好、无明显污损的平板培养皿。
4. 无菌纱布：用于对培养皿进行覆膜。
5. 显微镜：高倍显微镜，用于观察沉降菌。
6. 其他常规的无菌操作用具和试剂。
二、实验操作步骤1. 准备培养基：根据所选的培养基配方，按照要求将培养基配制成液体状态，并进行无菌过滤。
将液体培养基倒入试管中，每个试管约倒满的1/3，悬挂液体培养基放置在试管架上，待培养基凝固后，封闭试管盖儿。
2. 取样：将待检测的样品进行无菌采样，如空气、水、土壤、食品等，确保取样时避免污染和杂菌的进入。
3. 塑料膜覆盖：将待检测的培养基倒入平板培养皿中，约倒满1/2，然后用无菌纱布覆盖培养皿口，并用橡皮筋固定好。
确保培养基表面整齐平坦，无明显凸起或凹陷。
4. 样品接种：将取样时采集的样品（空气、水、土壤等）用滴管或铁丝等工具，均匀地接种到培养基的表面上，每个培养皿大约接种2～3滴，然后迅速盖上试管上的盖子。
5. 培养条件：将培养皿置于恒温箱中，一般温度设定为30-35°C，培养时间为24小时至72小时不等，具体视沉降菌生长速度而定。
三、结果判读1. 观察培养皿：取出培养皿，观察上面是否出现菌落。
正常情况下，如果检测的样品中存在沉降菌，培养皿上会出现可见的菌落。
2. 菌落形态观察：使用高倍显微镜观察菌落的形态特征，确定是否为沉降菌。
3. 菌种的鉴定：对形态特征与已知的沉降菌标准比对，进行菌种鉴定。
四、注意事项1. 所有操作必须在无菌条件下进行，避免外界杂菌的污染。
2. 严格控制培养基、试管和平板培养皿等材料的无菌。
3. 样品采集要避免手部接触，使用无菌工具进行采样。
4. 培养条件要保持稳定，避免温度、湿度等因素对实验结果的影响。
5. 观察菌落时要细心，准确判断是否为沉降菌。
沉降菌检测操作规程
●1、目的规范洁净区和洁净室沉降菌测试条件和测试方法。
●2、适用范围适用于公司洁净区、洁净室或局部空气净化区域（如：洁净工作台）的沉降菌的测试和环境验证。
●3、引用文件⏹化妆品卫生规范-2007⏹GB/T 16294-2010 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法●4、定义⏹ 4.1 沉降菌：用本测试规定的方法收集空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖的可见菌落数。
⏹ 4.2 沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以（个/皿）表示●5、仪器和设备⏹ 5.1 灭菌培养皿90mm *15mm⏹ 5.2 培养基。
⏹ 5.3 恒温培养箱。
⏹ 5.4 高压灭菌器。
⏹ 5.5 放大镜●6、培养基和试剂⏹ 6.1 生理盐水：成份﹕氯化钠 8.5g蒸馏水加至 1000ml制法﹕溶解后﹐分装到加玻璃珠的三角瓶内﹐每瓶90ml﹐121℃（15 1b）2 0 mi n，高压灭菌。
⏹ 6.2 卵磷脂、吐温80—营养琼脂培养基6.2.1 成分：蛋白胨20g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂15g卵磷脂1g吐温80 7g蒸馏水1000mL6.2.2制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80，将其他成分（除琼脂外）加到其余的蒸馏水中，溶解。
加入已溶解的卵磷脂、• 吐温80，混匀，调pH 值为7.1～7.4，加入琼脂，103.43kPa（121℃15 lb）20min 高压灭菌，储存于冷暗处备用。
●7、操作步骤⏹7.1 取样：7.1.1 取样点的设置：A) 最少取样点数：灌装间、制造间3个，其他洁净区2 个；B) 取样点的位置：取样点应均匀分布在待测试区域内，一般离地高度为0.8m左右，关键设备处可增加取样点；C）每个取样点一般取样一次，每次一般为2个取样皿；D) 布置采样点时，应避免回风口；7.1.2 取样时间：可采用动态取样和静态取样：A) 动态取样：正常生产，且空气净化系统正常运转30分钟后开始取样；B）静态取样：员工己撤离生产区域，且空气净化系统正常运转至少20分钟后；静态取样时人员不得多于2人；7.1.3 取样A）将制备好的培养皿逐个放置到采样点，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养皿暴露在空气中；B）静态测试时，培养皿的暴露时间为30分钟以上；动态测试时，培养皿的暴露时间不得大于4个小时⏹7.2 置于37±1℃恒温培养箱内培养至少48小时，记录每个平皿的菌落数；●8、菌落计数方法：⏹8.1先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5 倍～10 倍的放大镜检查，以防遗漏；⏹每个测点的沉降菌总数为该测点所有培养皿菌落数的平均数；●9、结果评定：⏹9.1 每个测点的菌落数必需低于该洁净区的标准时判定符合要求；⏹9.2 静态测试时，如某测点的的菌落平均数超过标准，应再重新取样两次，两次都低于标准时才能判定符合；。
药典沉降菌检测操作规程
程，保证药品质量，防止生产环境对产品的污染。
2.范围：适用于本公司洁净区(室)的沉降菌的监测。
3.责任：沉降菌检测员。
4.内容：4.1基本概念：4.1.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。
4.1.2沉降菌：用GB/T16292-2010提及的方法收集空气中的活性微生物粒子，通过专门的培养基在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。
4.1.3沉降菌菌落数:规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以个/皿表示。
4.2测试原理:本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。
4.3测试方法：4.3.1使用的仪器设备和培养基:高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。
恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。
培养皿:一般采用φ90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。
使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20min。
培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。
将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8℃的坏境中存放。
4.3.2测试时间:对单向流，如A级净化房间内及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。
对非单向流，如B级、C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟开始。
4.3.3采样点数目及其布置:最少采样点数目:沉降菌的最少采样点数可按表1确定。
在满足最少测点数的同时，不宜满足最少培养皿数，见表2表1 最少采样点数目表2 最少培养皿数采样点的布置:除受洁净区的设备限制外，取样点应在整个洁净区均匀布置。
沉降菌操作规程
沉降菌操作规程
《沉降菌操作规程》
一、目的
为了保证实验室中沉降菌的安全操作，防止交叉污染和实验材料受到污染，特制定本规程。
二、适用范围
本规程适用于实验室中进行沉降菌相关实验操作的人员。
三、操作规程
1. 实验室通风通风设备应保持良好，并且实验室中应保持整洁。
2. 操作前应洗手，并穿戴好实验服、手套、口罩和护目镜。
3. 实验材料应在消毒柜中进行高温消毒处理。
4. 操作过程中，严禁食品、饮料进入实验室，严禁吸烟。
5. 实验后，实验台面、仪器设备等应进行彻底清洁消毒。
6. 任何实验室内的废弃物均应按照相关规定进行处理。
7. 操作结束后，要将实验台面、仪器设备等进行彻底清洁消毒。
四、注意事项
1. 在操作实验室中时，严禁搔抓头发、脸部等地方，以免对实验材料造成污染。
2. 如果在操作过程中发生污染，应立即停止操作，通知相关人员进行处理。
3. 如果发生意外或者突发情况，应及时向实验室负责人汇报并进行处理。
通过严格遵守《沉降菌操作规程》，可以确保实验室中的沉降菌实验得以安全进行，保障操作人员的健康安全，有效防止实验材料的污染和交叉感染。
沉降菌检测操作规程
沉降菌检测操作规程1. 引言沉降菌是指在液体中沉淀并附着在容器底部的微生物。
在许多行业中，沉降菌的检测是非常重要的，例如制药、食品加工、饮水安全等领域。
本文档旨在介绍沉降菌检测的操作规程，以确保检测结果准确可靠。
2. 检测设备和试剂准备在进行沉降菌检测之前，需要准备以下设备和试剂：•沉降菌检测容器：一般选择具有透明底部和标有刻度的容器，容量不小于100 mL。
•色谱纸：用于制作沉降菌检测培养基。
•高温灭菌器：用于灭菌沉降菌检测容器和试剂。
•干燥烘箱：用于干燥沉降菌检测容器和试剂。
•取样器：用于抽取待检测样品。
•生物安全柜：用于操作中的生物安全。
试剂准备：•培养基：可根据需要选择适当的培养基，例如Luria-Bertani（LB）培养基。
•蒸馏水：用于制备培养基和洗涤操作。
•山梨醇盐溶液：用于沉降菌悬浮液的稀释。
3. 检测操作步骤步骤1：沉降菌检测容器准备1.将需要检测的沉降菌检测容器放入高温灭菌器中，设定适当的温度和时间进行灭菌。
2.灭菌后，将沉降菌检测容器取出，放入干燥烘箱中进行干燥，确保容器完全干燥。
步骤2：制备培养基1.准备适量的色谱纸，切成小块。
2.在高温灭菌器中加热蒸馏水至沸腾，将色谱纸块放入烧杯中，倒入足够的蒸馏水。
3.候色谱纸块充分吸水后，取出备用。
步骤3：取样1.在生物安全柜内，使用取样器抽取待检测样品，确保样品干净无杂质。
2.将样品转移到沉降菌检测容器中，注意不要沾到容器外表面。
步骤4：制备沉降菌悬浮液1.取一定量的山梨醇盐溶液，进行稀释，制备合适的浓度。
2.将制备好的山梨醇盐溶液加入沉降菌检测容器中，使样品充分悬浮。
步骤5：培养和观察1.将沉降菌检测容器放入培养箱中，设定适当的温度和时间进行培养。
2.观察培养后的沉降菌情况，记录菌落数量和特征。
4. 结果记录和分析根据观察到的沉降菌情况，记录菌落数量和特征。
根据结果进行分析和判断，判断样品是否符合标准要求。
5. 安全注意事项•操作过程中要戴好实验手套和口罩，避免直接接触待检测样品。
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题目：洁净区（室）沉降菌监测标准操作规程编码：颁发部门：质量部起草：日期：2015年月日修订日期：年月日审核：日期：2015年月日生效日期：2016年月日批准：日期：2015年月日发放份数：版次：第1版分发部门：质量部、中心化验室1.目的：阐述洁净室空气中沉降菌检测操作规程，保证药品质量，防止生产环境对产品的污染。
2.范围：适用于本公司洁净区(室)的沉降菌的监测。
3.责任：沉降菌检测员。
4.内容：4.1基本概念：4.1.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。
4.1.2沉降菌：用GB/T16292-2010提及的方法收集空气中的活性微生物粒子，通过专门的培养基在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。
4.1.3沉降菌菌落数:规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以个/皿表示。
4.2测试原理:本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。
4.3测试方法：4.3.1使用的仪器设备和培养基:高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。
恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。
培养皿:一般采用φ90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。
使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20min。
培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。
将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72 小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8℃的坏境中存放。
4.3.2测试时间:对单向流，如A级净化房间内及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。
对非单向流，如B级、C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟开始。
沉降菌检测操作规程
1.目的：建立沉降菌监测标准操作程序，以确保洁净室（区）洁净度满足生产/检验需要。
2.范围:适用于洁净区沉降菌指标监测。
3. 职责:洁净区沉降菌监测人员对本规程实施负责，质量部负责人对本规程的有效执行承担监督检查责任。
4. 内容4.1 检测依据:4.1.1 GB/T 16294-2010《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》4.1.2 YY0033-2000《无菌医疗器具生产管理规范》4.2 仪器设备：培养皿、培养基、恒温恒湿培养箱、高压蒸汽灭菌器4.2.1 培养皿：一般采用Ф90mm×15mm规格的培养皿；121℃高压蒸汽灭菌30min 后使用。
4.2.2 培养基：大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）或沙氏培养基（SDA）或用户认可并经验证了的培养基，其配置方法见《培养基配制操作规程》。
4.2.3 恒温恒湿培养箱：按《恒温恒湿培养箱操作及维护保养操作规程》进行操作。
4.2.4 高压蒸汽灭菌器：按《高压灭菌器操作及维护保养操作规程》进行操作。
4.3 检测周期：日常环境监测应每周一次，如长时间未生产，恢复生产前需检测沉降菌。
4.4采样点：采样点的布置力求均应，避免采样点在某局部区域过于集中，按照洁净区的面积大小，而制定最小采样点数目，在满足最少测定数的同时，还宜满足最少培养皿数。
4.4.2 最少培养皿数：在满足最少采样点数目的同时，还宜满足最少培养皿数，见下表。
4.4.3采样点的位置4.4.3.1 洁净室（区）采样点的布置力求均应，避免采样点在某局部区域过于稀疏。
可参考下图。
平面采样点布置图4.4.3.2 100级单向流区域，洁净工作台或局部空气净化设施的采样点宜布置在正对气流方向的工作面上，气流形式参考下图。
水平单向流气流形式垂直单向流气流形式4.4.3.3 工作区采样点的位置离地0.8米～1.5米左右（略高于工作面）。
并在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。
4.4.4 采样次数：每个采样点一般采样一次。
沉降菌测试方法..
沉降菌测试方法1、把ф90m m×15mm硼硅酸玻璃培养皿包在报纸里，放入恒温烤箱中加热至180℃后，干烤2小时。
2、取X克培养基放入X克蒸馏水，放入高压消毒锅中加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
3、待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于33℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可采样用。
制备好培养皿宜在2—8℃环境中保存。
4、采样时，一般在100级层流罩中放置3个培养皿，在100000级，10000级按面积大小一般放2个培养皿。
打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖上后倒置于恒温培养箱33℃—1.5m左右。
5、将培养皿举起用肉眼直接计数，用记号笔点记然后用5—10倍放大镜检查是否遗漏，若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，分辨时仍以2个或2个以上菌落计数，不要漏计培养皿边缘生长菌落，并注意细菌菌落与培养基沉淀物区别。
6、沉降菌测试前，被测洁净室已消毒。
被测洁净室温湿度须达到规定要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内，测试状态有静态和动态两种，测试状态选择须符合生产要求，并在报告中注明测试状态。
7、测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别工作服，静态测试时，室内测试人员不得多于2人。
测试时间对单向流100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始，对非单向流，100000级以上净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。
8、平均菌落数计算：M 1+M 2+M 3平均菌落数=.........21nMn M M ++ n —培养皿总数M 1—1号培养皿菌落数M 2—2号培养皿菌落数M n —n 号培养皿菌落数用平均菌落数判断洁净空气中微生物。
洁净室内平均菌落数必须低于所选定的评定标准，（100级≤1个；10000级≤3个；100000级≤10个）。
若某洁净室内平均菌落数超过标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。
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题目：洁净区（室）沉降菌监测标准操作规程
编码：颁发部门：质量部
起草：日期：2015 年月日修订日期：年月日
审核：日期：2015 年月日生效日期： 2016 年月日
批准：日期：2015 年月日发放份数：版次：第 1 版
分发部门：质量部、中心化验室
1.目的：阐述洁净室空气中沉降菌检测操作规程，保证药品质量，防止生产环境
对产品的污染。
2.范围：适用于本公司洁净区 ( 室) 的沉降菌的监测。
3.责任：沉降菌检测员。
4.内容：
基本概念：
菌落 : 细菌培养后 , 由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落 , 简称 CFU.通常
用个数表示。
沉降菌：用 GB/T16292-2010 提及的方法收集空气中的活性微生物粒子，通过
专门的培养基在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。
沉降菌菌落数 : 规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以个 / 皿表示。
测试原理 : 本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒
子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。
测试方法：
使用的仪器设备和培养基:
高压消毒锅 : 使用时应严格按照操作规程进行。
恒温培养箱 : 必须定期对培养箱的温度计进行检定。
培养皿 : 一般采用φ 90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。
使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌 20min。
培养基 : 胰酪大豆胨琼脂培养基。
将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每
皿约 15ml。
待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72
小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在
2-8 ℃的坏境中存放。
测试时间 :
对单向流，如 A 级净化房间内及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运
行不少于 10 分钟后开始。
对非单向流，如 B 级、 C级、 D 级以上的净化房间，测试应在净化空调系
统正常运行不少于 30 分钟开始。
采样点数目及其布置 :
最少采样点数目 : 沉降菌的最少采样点数可按表 1 确定。
在满足最少测点数的
同时，不宜满足最少培养皿数，见表 2
表 1 最少采样点数目洁
净度等级
2
面积（ m）
A、B级 C 级D级
＜10 2-3 2 2
≥10- ＜20 4 2 2
≥20- ＜40 8 2 2
≥ 40- ＜ 100 16 4 2
≥100- ＜200 40 10 3
注：表中的面积，对于单向流洁净室，指的是送风面积，对于非单向流洁净室，
指的是房间面积。
表 2 最少培养皿数
洁净度等级所需φ 90mm培养皿数（以沉降4h 计）
A 14
B 2
C 2
D 2
采样点的布置 :
除受洁净区的设备限制外，取样点应在整个洁净区均匀布置。
在日常监控时，那些与产品相邻近的区域，以及可能与产品直接接触的空气及设备附近应考虑增加取样点和取样次数 ( 与产品非接触区相比，这些区域应视为关键区 ): 人员活动频繁或人员较集中的区域也应视为关键区，需加强监控。
取样点一股布置在趾离地面之间或操作平台的高度。
取样时，取样没备会对气流产生干扰，取样时应避免可能对气流组织的干扰。
尽量避免在回风口附近取样 ( 距离 lm 以上 ) ，且测试人员应在取样口的下风侧，并尽量少走动。
测试步骤：
采样方法 :
用无菌容器 ( 如不锈钢储槽 ) 将预先培养的培养皿 ( 无菌平皿 ) 带至待测区，将培养皿取出，放置在预先确定取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露小时，再将培养皿盖上，盖后倒置。
检测时记下培养皿打开的起始时间和结束时间。
培养：
全部采样结束，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
32℃培养，时间为 72 小时。
每批培养基应有对照试验，检查培养基本身是否污染，可每批选定三个培养皿做对照培养。
菌落计数 :
用肉眼直接计数，然后用5-10 倍放大镜检查，是否有遗漏。
若培养皿上有
2 个或 2 个以上菌落重叠，可分辨时仍以 2 个或 2 个以上计数。
注意事项：
测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。
采取一切措施防止人为对样本的污染。
对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。
由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，必要时用显微镜鉴别。
采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。
测试状态 :
沉降菌测试前，被测试洁净区的温湿度须达到规定的要求，静压差必须控制在规定值内。
沉降菌测试前，被测试洁净区己经过消毒。
测试状态有静态和动态两种，在空调系统验流时、长期停产恢复生产前、设施设备大修复产前进行静态测试，在日常监测时进行动态监测。
测试人员 : 测试人员必须穿戴符合环境级别的工作服。
静态测试时，室内
测试人员不得多于 2 个人。
结果计算 :
用计数方法得出各个培养皿的菌落数。
平均菌落数的汁算见下式:
计算公式：
ΣM i
M=
n
式中 M为平均菌落数（ CFU）
Mi 表示 1， 2， 3， n 号平皿菌落数； n 表示平皿总数。
6．标准：
洁净度级别沉降菌平均菌落数（ CFU/皿）以
4h 计
A ＜1
B 5
C 50
D 100
7.结果评定 :
用平均菌落数判断洁净室的空气中的微生物。
洁净区内的平均菌落数必须符合所选定的评定标准。
若某洁净区的菌落数超过评定标准，则必须对此区域先行消毒，然后重新测试两次，测试结果必须合格。
8.偏差纠正
一旦发现空气微生物监测结果超标，一般可以采取以下行动进行调查和评估:
回顾最近一次的悬浮粒了数的检测结果;
回顾最近一次的表面微生物的检测结果;
检查人员的更衣程序是否正确;
检查空调系统的运行情况;
检查操作人员的行为的正确性;
必要时空调系统需要重新验证。
采样点布置图：。