免疫学检测原理
免疫学检测原理及临床应用
免疫学检测原理及临床应用免疫学检测是一种通过检测体内免疫系统的反应来确定疾病状态或病原体存在的诊断技术。
其基本原理是利用体内自身的免疫系统对外来物质（如细菌、病毒或人工合成物质）做出特异性反应，产生特异性抗体或细胞免疫反应，并将其检测出来。
免疫学检测可分为血清学检测和细胞免疫学检测两种。
血清学检测是指通过检测血清中特异性抗体的存在来确定疾病状态或病原体存在的诊断方法。
主要有ELISA、免疫荧光、免疫印迹等方法。
其基本原理是将目标抗原或建立细胞突变株制备成特异性抗原，与患者血清中的特异性抗体结合，用酶、荧光或其他标记物检测出来。
例如，ELISA是一种广泛应用的免疫学检测技术，用于检测抗体和抗原的相互作用。
它的原理是将抗原吸附到多孔板上，在体外将待测样本加入其中，样品中如有特异性抗体，则与抗原结合，未结合的抗体被洗掉，再加入标记抗体，标记物与抗原相互结合形成复合物，可以根据标记物的性质来检测复合物的形成。
细胞免疫学检测是指通过检测免疫细胞的反应来确定疾病状态或病原体存在的诊断方法。
主要有淋巴细胞转化试验（LTT）、流式细胞术等方法。
其基本原理是将血液或其他体液样本中的免疫细胞与特异性抗原共同孵育，在体外激活免疫细胞产生抗体或细胞反应，使用流式细胞术分离、检测不同类型的免疫细胞。
例如，LTT可用于检测细菌或病毒等病原体感染及免疫功能异常等疾病。
其原理是将血液或其他体液样本加入培养基中，与特定抗原刺激后，在体外培养一段时间，测定培养物中的淋巴细胞增殖情况，反映细胞免疫应答功能的多样性和复杂性。
免疫学检测在临床实践中的应用非常广泛。
它被用来诊断多种感染性疾病，例如乙型肝炎、艾滋病、结核病等。
通过检测患者体内是否存在相应的抗体或细胞反应，可以确定疾病病原体是否存在以及疾病的严重程度。
此外，免疫学检测还被用于诊断自身免疫性疾病，例如狼疮、风湿性关节炎等。
通过检测患者体内是否存在特定的自身抗体，可以确定患者的疾病类型和严重程度。
免疫检测原理
免疫检测原理免疫检测是一种常用的生物学实验技术，通过检测抗体与抗原之间的相互作用来确定特定物质的存在。
这种检测方法通常用于诊断疾病、监测生物分子的表达水平以及研究生物分子相互作用等领域。
免疫检测的原理主要基于免疫学中的抗体-抗原相互作用原理，下面将详细介绍免疫检测的原理及其应用。
1. 免疫检测的原理免疫检测的原理基于抗体与抗原之间的特异性相互作用。
抗体是免疫系统产生的一种蛋白质，可以识别并结合特定的抗原分子。
当抗体与抗原结合时，会发生特定的免疫反应，形成抗原-抗体复合物。
免疫检测利用这种抗原-抗体相互作用来检测特定的生物分子。
常见的免疫检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫印迹（Western blot）、免疫荧光等。
2. ELISA检测原理ELISA是一种常用的免疫检测方法，其原理基于酶与底物之间的特异性相互作用。
在ELISA实验中，首先将待检测的抗原或抗体吸附在微孔板上，然后加入特异性抗体或抗原，使其与待检测物相结合。
接着加入与特异性抗体结合的酶标记二抗，形成抗原-抗体-酶标记二抗复合物。
最后加入底物，酶与底物发生反应产生可测量的信号，通过测量信号强度来确定待检测物的存在量。
3. Western blot检测原理Western blot是一种用于检测蛋白质的免疫检测方法，其原理基于蛋白质的分子量和特异性抗体的结合。
在Western blot实验中，首先将待检测的蛋白质经电泳分离并转移到膜上，然后将膜与特异性抗体结合，形成蛋白质-抗体复合物。
接着加入与特异性抗体结合的辅助抗体，再加入底物产生可视化的信号，通过检测信号强度来确定待检测蛋白质的存在量。
4. 免疫检测的应用免疫检测在医学诊断、生物学研究和生物工程等领域有着广泛的应用。
在医学诊断中，免疫检测可以用于检测病毒、细菌和肿瘤标志物等，帮助医生诊断疾病。
在生物学研究中，免疫检测可以用于检测蛋白质表达水平、研究蛋白质相互作用等。
在生物工程中，免疫检测可以用于检测重组蛋白质的纯度和活性等。
免疫学检验
免疫学检验概述免疫学检验是一种通过检测人体免疫系统的功能和状态来评估健康状况的方法。
免疫学检验主要用于检测和诊断免疫相关疾病、监测免疫治疗效果和评估免疫功能。
在免疫学检验中，通常使用抗体和抗原相互作用的原理进行检测。
抗体是一种由免疫系统产生的特异性蛋白质，可以与抗原结合，形成免疫复合物。
通过检测免疫复合物的形成和浓度变化，可以获得相关信息和数据来评估免疫系统的功能和状态。
常见的免疫学检验方法免疫荧光检测免疫荧光检测是一种常用的免疫学检验方法。
它利用荧光标记的抗体与目标分子（如抗原、细胞表面分子等）发生特异性结合，然后使用荧光显微镜观察荧光信号的强度和分布情况。
免疫荧光检测具有高灵敏度和特异性的优势，可以用于检测抗体、抗原和免疫细胞的分布和表达情况。
在临床诊断中，免疫荧光检测常用于检测自身抗体、病毒抗体和细胞免疫功能等方面。
免疫酶联免疫吸附试验（ELISA）免疫酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种常见的免疫学检验方法。
它基于酶标记的抗体与抗原特异性结合的原理，利用酶催化的反应产生可测量的信号。
ELISA具有高精确性和灵敏度的特点，可用于检测抗体、抗原和细胞因子的浓度。
在临床检验中，ELISA常用于检测病毒感染、风湿性疾病和免疫调节等方面。
流式细胞术流式细胞术是一种免疫学检验方法，可以同时检测和分析多种免疫细胞类型和功能的改变。
它基于细胞表面标志物的特异性结合和荧光标记的抗体的检测，通过流式细胞仪实现高通量的细胞检测和分析。
流式细胞术广泛应用于免疫学研究和临床诊断中。
它可以用于检测细胞表面分子的表达情况、分析细胞亚群的比例和功能状态，并可进行细胞分选和细胞功能实验等。
免疫学检验的临床应用免疫学检验在临床诊断和治疗中具有重要的应用价值。
它可以用于检测和诊断多种免疫相关疾病，如自身免疫病、感染性疾病和免疫缺陷病等。
在自身免疫病的诊断中，免疫学检验可以检测自身抗体的产生和水平变化，帮助确定疾病类型和活动度。
免疫检测技术的基本原理
免疫检测技术的基本原理1.抗原与抗体的特异性结合：免疫检测首先需要获得特定的抗体，该抗体与特定的抗原结合。
抗原可以是病原体的蛋白质或其他特定分子，也可以是细胞表面的标记分子。
抗体与抗原结合时形成免疫复合物，这种结合是高度特异性的，可以通过这种复合物实现对抗原的检测。
2.标记物的选择：在免疫检测中，通常需要选择一种标记物来标记抗体或抗原。
常用的标记物包括放射性同位素、荧光染料、酶和金纳米颗粒等。
标记物的选择需要考虑到标记物的稳定性、灵敏度和安全性等因素。
3.免疫反应的检测方法：免疫检测方法包括放射免疫测定法（RIA）、酶联免疫吸附测定法（ELISA）、荧光免疫测定法和免疫组化等。
不同的检测方法适用于不同的实验需求，选择适当的方法可以提高检测的灵敏度和特异性。
4.检测结果的定量或定性分析：通过检测生成的信号，可以对抗原或抗体进行定量或定性分析。
定量分析通常测定免疫反应的信号强度来判断抗原或抗体的浓度，定性分析则仅判断免疫反应是否发生。
免疫检测技术在临床诊断、疫苗研发、药物研发等领域有着广泛的应用。
例如，在临床上，免疫检测技术可以用于检测病毒感染、细胞因子水平、肿瘤标志物等，为疾病的早期诊断和治疗提供依据。
在疫苗研发中，免疫检测可以评估疫苗的免疫原性和免疫保护效果。
在药物研发中，免疫检测可以用于评估药物对免疫系统的影响。
总而言之，免疫检测技术是一种基于免疫学原理的生物学技术，基于抗原与抗体之间的高度特异性和亲和性进行定量或定性检测。
通过选择合适的抗体和标记物，并使用适当的检测方法，可以实现对抗原或抗体的准确检测和分析，为生物学研究和临床诊断提供有力的工具。
免疫学检测技术基本原理及其应用课件
探讨免疫学检测技术在环境污染监测中的应 用，如检测水中的污染物。
生物医学研究
了解免疫学检测技术在研究领域的应用，如 免疫组织化学和流式细胞术。
食品安全监测
介绍免疫学检测技术在食品安全监测中的作 用，如快速检测食品中的有害物质。
免疫学检测技术的前景展望
展望免疫学检测技术未来的发展方向和应用 前景。
述
3 免疫学检测技术分
类
介绍免疫学检测的基本 原理，如抗原-抗体相互 作用和信号放大。
探讨不同类型的免疫学 检测技术，如免疫层析、 免疫荧光和酶联免疫吸 附实验。
免疫学检测技术的应用
临床诊断
探索免疫学检测技术在疾病诊断和监测中的 广泛应用，如病毒检测和肿瘤标志物。
生物工业
探索免疫学检测技术在生物工业中的应用， 如生物制药和工业发酵。
免疫学检测技术基本原理 及其应用课件
欢迎来到免疫学检测技术基本原理及其应用的课件！本课程将带您深入了解 免疫学检测技术的基本原理以及广泛的应用领域。让我们开始这段令人兴奋 的学习旅程吧！
免疫学检测技术基本原理1 来自疫学基础知识回顾回顾免疫学的基本概念 和原理，为后续的技术 解释提供基础。
2 免疫学检测原理概
免疫学检测技术的挑战与改进
1 技术难点
探讨当前免疫学检测技术所面临的挑战，如灵敏度、特异性和自动化。
2 改进方向
讨论改进免疫学检测技术的可能方向，如新的标记方法和数据分析技术。
免疫学检测方法及其原理
原理：利用抗原抗体特异性结合 的原理，通过酶催化底物产生颜 色反应，检测抗原或抗体的存在。
步骤：将抗原或抗体固定在固相 载体上，加入待测样品，再加入 酶标记的抗体或抗原，最后加入
底物，产生颜色反应。
优点：灵敏度高，特异性强，操 作简便，可定量检测。
应用：广泛应用于免疫学检测、 疾病诊断、药物研发等领域。
评估药物的疗效和安全性
03
检测方法：使用免疫细胞进 04
筛选结果：根据检测结果，
行药物筛选，如ELISA、流
选择具有治疗效果的药物进
式细胞术等
行进一步研究
科学研究
01
免疫学检测在科学
研究中的应用
02 免疫学检测在生物
医学研究中的应用
03
免疫学检测在生物
技术研究中的应用
04 免疫学检测在生物
制药研究中的应用
2 免疫学检测原理
抗原抗体特异性结合
抗原：能够引起免疫反应的物质，如病毒、细菌 等
抗体：由B细胞产生的，能够识别并结合抗原的 蛋白质
特异性结合：抗原与抗体之间具有高度特异性， 即一种抗原只能与一种抗体结合
结合原理：抗原与抗体结合后，形成抗原抗体复 合物，从而激活免疫系统，产生免疫反应
信号放大技术
免疫学检测方法及其 原理
演讲人
目录
01. 免疫学检测方法 02. 免疫学检测原理 03. 免疫学检测应用
1 免疫学检测方法
抗原抗体反应
01
抗原：能够引起 免疫反应的物质， 如病毒、细菌等
02
抗体：由免疫系 统产生的，能够 识别和结合抗原 的蛋白质
03
反应原理：抗原 与抗体结合，形 成抗原抗体复合 物，引发免疫反 应
免疫学检测技术基本原理
1:8
1:16
Ag
Ab
扩散
免疫学检测技术基本原理
15
免疫学检测技术基本原理
16
３、免疫电泳 （immuno electrophoresis)
+
-
标本先电泳
**** **** ****** **** ***** ***
两侧挖槽加Ab孵 育后出现肉眼可
见沉淀
免疫学检测技术基本原理
17
免疫学检测技术基本原理
抗体直接结合所出现的凝集现象 ：
（1）玻片法—定性试验：已知 Ab 未知 Ag(?) ABO血型鉴定， 细菌种属抗原型别的鉴定
+
免疫学检测技术基本原理
10
（2）试管法—半定量试验： 诊断伤寒副伤寒的“肥达氏反应”
病人血清 倍比稀释
伤寒细菌悬液
1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 对照
1、免疫荧光技术
（immunofluorescence techniques）
利用荧光素标记抗体或抗抗体以检测细胞表面或 细胞内抗原的技术。
免疫学检测技术基本原理
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1、免疫荧光技术 （immunofluorescence techniques）
直接法
间接法
免疫学检测技术基本原理
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免疫学检测技术基本原理
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间接免疫荧光检测自身抗核抗体
免疫学检测技术基本原理
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2、免疫酶标技术： 免疫酶标技术：酶联免疫吸附试验 （enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）
用酶标记Ab(或Ag)与标本中的Ag(或Ab)发生 特异性结合
加入酶的底物，在酶作用下产生有色物质 根据颜色可作出判断或测量光密度值
免疫学检测方法与操作规范
免疫学检测方法与操作规范免疫学检测方法一直是生物医学领域中的重要技术之一，广泛应用于免疫学研究、临床诊断和治疗监测等方面。
本文将介绍免疫学检测方法的基本原理、常用实验步骤以及操作规范，旨在为科研人员和实验室从业人员提供参考。
一、免疫学检测方法简介免疫学检测方法是通过检测人体免疫系统特异性抗原与抗体之间的相互作用来实现。
其原理基于人体免疫系统对外界病原体的免疫应答，通过检测抗原-抗体反应可以确定某种特定的抗原或抗体是否存在于样本中。
免疫学检测方法常见的类型包括ELISA（酶联免疫吸附测定法）、免疫印迹、流式细胞术等。
每种方法都有其特定的优势和适用范围，具体选择方法要根据实验目的和样本特点来确定。
二、常用免疫学检测方法及操作步骤1. ELISA方法ELISA是一种定性和定量检测抗原或抗体的常用方法。
其操作步骤包括：（1）涂底板：将包含目标抗原的溶液加入微孔板中，并在相应孔中加入阴性对照和阳性对照，孵育后洗涤；（2）加入特异性抗体：将标记有酶的特异性抗体加入孔中，并进行孵育和洗涤；（3）底物反应：加入酶底物，允许产生显色反应；（4）终止反应：加入终止液停止底物反应；（5）测定吸光度：使用酶标仪测定吸光值，计算样品中目标抗原或抗体的浓度。
2. 免疫印迹方法免疫印迹是一种用于检测特异性抗原和抗体的方法，常用于蛋白质的鉴定和定量。
操作步骤包括：（1）蛋白质分离：将待测蛋白经SDS-PAGE电泳分离；（2）膜转移：将分离后的蛋白转移到膜上，如PVDF或NC膜；（3）阻断：用蛋白阻断剂阻断膜上非特异性结合位点；（4）孵育抗体：使用特异性抗体孵育膜，结合目标蛋白；（5）洗涤：洗去未结合的抗体；（6）显色：加入特定底物进行显色反应；（7）图像分析：使用成像系统记录和分析显色结果。
3. 流式细胞术流式细胞术常用于分析和鉴定细胞表面标记物的表达情况，以及细胞在不同状态下的功能。
操作步骤包括：（1）细胞准备：对待测细胞进行处理，包括细胞培养、致死和洗涤等步骤；（2）标记抗体：使用荧光标记的特异性抗体孵育待测细胞，与目标表面标记物结合；（3）洗涤：洗涤去除未结合的抗体；（4）流式细胞仪分析：将标记后的细胞放入流式细胞仪中进行荧光检测和数据分析。
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流式细胞仪工作原理
凝集反应 (Agglutination)
细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合 后形成凝集 现象，称为凝聚反应。 1、直接凝集：将细菌或红细胞与相应的抗体 直接反应，出现细菌凝集或红细胞凝集现象。 又分为玻片法和试管法。 2、间接凝集：将可溶性抗原包被在红细胞或 乳胶颗粒表面，与相应抗体反应出现颗粒凝 集现象。
* 丝裂原主要有PHA、Con A和PWM； * 抗原刺激物有破伤风类毒素、PPD和白色念 珠菌等； * 同种MHC及抗CD3单抗等 * 肿瘤细胞-自体淋巴细胞混合培养
淋巴细胞转化试验（形态学示意图）
• 原理：人T细胞表面有PHA或ConA受体， T细胞在体外受PHA或ConA的刺激后能 转化为体积较大、代谢旺盛、且能进行 分裂的淋巴细胞，以此测定T细胞的功能。
第二十二章 免疫学检测原理
▪ 概述
主 要 内 容
▪ 抗原抗体的检测技术 ▪ 免疫细胞的检测 ▪ 细胞因子及其受体的检测 ▪ 粘附分子的检测 ▪ 免疫相关基因的检测
▪ 免疫标记技术
▪ 细胞凋亡的检测
一、概 述
免疫学检测是应用免疫学理论设计 的一系列测定抗原、抗体、免疫细胞及 其分泌的细胞因子的实验手段及分子生 物学技术在免疫学研究中的应用。
凝集试验
间接凝集抑制试验
沉淀反应 （Precipitation)
血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等 可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀 物，这一类反应称为沉淀反应。沉淀反 应可在液体中进行，如絮状沉淀。大多 沉淀反应是用半固体琼脂凝胶为介质， 进行琼脂扩散故也称免疫扩散。
沉淀反应
单扩与双扩 原理
2. B细胞功能判定
(1) B细胞增殖(转化)试验： (2) 溶血空斑形成试验 (3) 反向溶血空斑试验 (4) 酶联免疫斑点法(ELISPOT):
一种可检测抗体分泌细胞，又可测定抗体分泌 量的体外实验方法。
溶 血 空 斑 实 验
ELISPOT实验
① 稳定、特异，且抗原用量少； ②可同时检测不同抗原诱导的 抗体分泌，并可定量检测 ③可检测组织切片中分泌抗体的 单个细胞
三、免疫细胞的检测
对机体参与免疫应答的细胞进行鉴定, 计数及功能测定。
(一) 淋巴细胞及亚群的分离
(1) 抗凝 静脉血
(2) 加等 量NS
(3) 混匀后，缓 慢加于分离液上
(4) 密度梯度离心
血浆
PBMC 分离液 PMN RBC
E花环实验
利用表面标志分 离淋巴细胞亚群
流式细胞术
（Flow Cytometry, FCM)
细胞因子及其受体的检测
免疫学检测法 生物学测定法 分子生物学测定法 细胞因子受体检测的基本技术
免疫学检测法
免疫学检测的基本原理是将细胞因 子作为抗原进行定量检测。如免疫斑 点法、ELISA法、RIA法和免疫印迹 法等均已用于细胞因子的检测。某些 细胞因子含量甚微的样品(如脑脊液) 可用免疫聚合酶链反应(immuno-PCR) 进行检测。
* 根据抗原抗体反应设计的试验 还有标记抗原(或抗体)检测相应物 质的标记技术。
抗原-抗体反应的特点
▪抗原-抗体的结合是特异性结合； ▪抗原抗体反应可分为两个阶段：
特异性结合阶段
可见的反应阶段
▪抗原和抗体结合是否呈现可见的反应
现象，与两者的分子比例密切相关。
抗原抗体的检测方法
▪凝集反应 ▪沉淀反应 ▪补体溶血反应 和补体结合反应 ▪中和反应 ▪用标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应
(2)中性粒细胞吞噬、杀菌功能测定
1) 显微镜检法 2) NBT试验 3) 化学发光测定法
(3) 巨噬细胞吞噬功能测定 (4) 巨噬细胞细胞毒测定
一、概述
主
二、抗原抗体的检测技术
要
三、免疫细胞的检测 四、细胞因子及其受体的检测
内
五、粘附分子的检测
容
六、免疫相关基因分析
七、免疫标记技术
八、细胞凋亡的检测
PHA刺激 48~72小时
淋巴细胞增殖试验（3H-TdR掺入法）示意图
培养液
PHA
3H-TdR
淋巴细胞
全 血
离心
分层液
过滤
测 量 放 射 性
细胞毒试验（51Cr释放法）示意图
靶细胞
51Cr
洗涤
去除游离 的51Cr
效应细胞
测量上清液中 释放的51Cr
混合培养4-6小时
(3)T细胞功能的体内检测法 * 移植物抗宿主反应(GVHR) * 迟发型超敏反应(DTH)
3. NK细胞活性测定
(1)形态学检查法 (2)放射性核素释放法：
用放射性核素(51Cr、125I －UdR)标记靶细胞。
(3)酶释放法：
测定靶细胞膜受损后从胞浆内释放至介质中的 乳酸脱氢酶(LDH)活性。
(4)化学发光法 (5)流式细胞术
4．吞噬细胞功能测定
(1)中性粒细胞趋化功能测定
滤膜渗透法(Boyden小室法) 。
单向琼脂糖 扩散实验
双扩实验 结果分析
火箭电泳
对流免疫电泳
补体结合试验
Western Blot 检测HIV
一、概述
主
二、抗原抗体的检测技术 三、免疫细胞的检测
要
四、细胞因子及其受体的检测
内 五、粘附分子的检测
容
六、免疫相关基因分析
七、免疫标记技术
八、免疫PCR(IM-PCR)技术
九、细胞凋亡的检测
免疫学技术的应用极为广泛, 疾病的 诊断、疗效评价及理论研究等。Fra bibliotek 概述主
▪ 抗原抗体的检测技术 ▪ 免疫细胞的检测
要 ▪ 细胞因子及其受体的检测
内 ▪ 粘附分子的检测
容
▪ 免疫相关基因分析 ▪ 免疫标记技术
▪ 免疫PCR(IM-PCR)技术
▪ 细胞凋亡的检测
二、抗原抗体的检测技术
* 根据反应的基本原理与表现主 要分为凝集反应、沉淀反应和补体 参与的各种反应。
FACS细胞分选
FACS 技术分析
用抗IgM单抗分 离B细胞克隆
Removal of T cells from marrow graft
Magnetic antibodies Magnet
(二) 免疫细胞功能的测定
1. T细胞功能测定： (1) 细胞增殖(转化)试验：可分为非特异性丝裂 原和特异性抗原两类。