DNA测序技术的发展历史与
测序技术的发展历程及技术的应用技术发展历程
测序技术的发展历程及技术的应用技术发展历程自从20世纪50年代确定了DNA的双螺旋结构并发现了基因DNA的作用以来，科学家们一直在致力于发展各种技术来更好地研究DNA和其重要作用。
自1977年Sanger首次提出了变性杂交和DNA测序技术以来，测序技术在不断地发展和完善，至今已经取得了重大的突破，使得分子生物学的研究得到了极大的促进和发展。
一、测序技术的发展历程1、手工测序：20世纪70年代到80年代初期，手工测序技术得到了广泛应用。
这种方法需要大量的时间和精力，需要对DNA进行多次克隆、限制酶切、PCR扩增等多道工序。
最终通过手工分离和去掉杂质、对碱基进行标记并辨认，并在薄层板上进行图解才能得到结果。
这种测序方法的操作繁琐、费时耗力、误差率高且成本高，因此已经很少被使用。
2、自动测序技术：1986年首次推出的自动测序技术使DNA分析得到了快速和高效的提高，实现了高通量DNA测序、准确性和速度的提高。
自动测序技术分为三代，其中第一代的荧光检测原理是通过一系列的DNA随机断裂、PCG扩增、限制酶切割后片段的比较、计算和分析，从而得到整个DNA序列以及荧光信号。
第二代的技术在测序引物上进行了改进，采用了大量的小片段序列。
第三代技术则采用了Nanopore技术，这种技术能够通过单个、具有节点的蛋白质孔使带电物质（如DNA分子）通过，从而能够得到更直观和高保真的测序结果。
这些人工智能的算法已经使整个测序的过程变得快速、简便和可靠。
二、测序技术的应用1、基因组测序：高通量基因组测序已经成为现代分子生物学研究的创新平台。
通过通过基因组测序，可以对物种的基因组结构，基因有序性和功能进行全面、细致的分析。
利用高通量测序技术可以高效地分析人类、动物和植物的基因结构和特征，被广泛应用于药物研发、肿瘤分型和精准医疗等多个领域。
2、转录组测序：转录组测序是平衡表达和微小表达谱分析的重要工具。
分析细胞RNA的构成，造成的差异性和相似性，从而可以深入了解基因表达和细胞信号通路的影响以及转录因子和DNA的相互作用。
DNA测序技术的发展与应用前景
DNA测序技术的发展与应用前景DNA测序技术被广泛应用于基因组研究、医学诊断、药物开发等领域。
随着技术的快速发展，人们对于DNA测序技术的期望和应用越来越高。
本文将深入探讨DNA测序技术的发展历程以及其应用前景。
一、DNA测序技术的发展历程DNA测序技术的历史可以追溯到上世纪50年代。
当时，Frederick Sanger等人通过发明链终止法（dideoxynucleotide sequencing）开创了DNA测序技术。
这种方法建立在DNA链扩增技术的基础上，利用缺少3'羟基的二代核苷酸停止链的生长，从而确定DNA的序列。
此后，多种改进版本的链终止法被提出，包括Maxam-Gilbert法和Thermo Sequenase法。
到了1990年代，PCR（聚合酶链式反应）技术的出现，为DNA测序技术带来了新的革命。
PCR技术使得DNA片段得到扩增，从而减少了使用大量DNA的需要，并且加快了测序的速度。
同时，自动测序仪的问世也使得测序速度大大提升。
自动测序仪可以同时进行多个样本的测序，数据可以自动收集和处理，从而大大提高了测序的效率和准确性。
到了21世纪初，基于大规模并行测序（massively parallel sequencing, MPS）技术的第三代DNA测序技术开始涌现。
这些技术包括轮廓组、Roche/454、Illumina、Ion Torrent、PacBio SMRT 等。
第三代DNA测序技术的出现，使得整个测序过程更快速、准确和经济，同时也会产生更多的数据。
这些技术的出现，标志着DNA测序技术进入了新的阶段。
二、DNA测序技术的应用前景1. 基因组学研究DNA测序技术的一个重要应用领域是基因组学研究。
随着第三代DNA测序技术的发展，测序速度和产出数量都得到了大幅提升。
研究人员现在可以使用这种技术更全面地研究基因组变异、基因调控等问题。
这种技术可以帮助科学家更好地理解基因组的组成和功能以及其与疾病之间的关系。
DNA测序技术的发展及其实际应用
DNA测序技术的发展及其实际应用随着科技的发展，DNA测序技术在医学、生物学等领域中得到越来越广泛的应用。
这项技术可以帮助人们理解生物界更深层次的秘密，发现疾病的根源和诊治方法，甚至可以通过遗传分析来探究一个人的祖先和轨迹。
在本文中，我们将对DNA测序技术的历史、发展、原理以及实际应用进行详细的阐述。
历史与发展DNA测序技术起源于20世纪70年代初期，最初由美国分子生物学家斯佩里曼（Frederick Sanger）发明。
他的发现可以使人们在更深层次地研究DNA的基因组结构和细胞分裂过程。
斯佩里曼的研究大大推动了现代遗传学和分子生物学的发展，而他因此获得了1980年诺贝尔生理学或医学奖。
21世纪，随着科技的进步，DNA测序技术得以在更广泛领域发挥作用。
目前最先进的测序技术是第三代测序，可以以更低的成本、更快的速度同时读取DNA的数千条到数百万条序列。
同时，新的测序技术也得以帮助我们更好地理解宏观生物和小生物的生物系统，包括灵长类动物、微生物、植物等。
原理DNA测序的原理是将DNA片段通过一系列化学反应转化为信号，并用电脑分析这些信号。
DNA（脱氧核糖核酸）是生物体内存储和传递遗传信息的重要分子，其组成是由四种核苷酸（腺嘌呤（A）、胞嘧啶（C）、鸟嘌呤（G）和胸腺嘧啶（T））组成的序列。
通过选择不同的化学标记和方法，科学家们可以将所有核酸序列读取为二进制数字，以产生标准化和易于分析的数据。
这些数据可以与计算机程序、数据库和其他数据源结合，以确定有关DNA的各种信息，如单个基因信息、个人特征、环境适应性和父系/母系族谱。
实际应用DNA测序技术在实际应用中有很多方面。
其中，常见的应用领域包括：1.医学：DNA测序技术可以用于疾病的诊断、预测和治疗。
如癌症等遗传性疾病的诊断和治疗，个性化药物治疗等。
2.农业：DNA测序可以帮助农业科学家在畜牧、种植和水产养殖方面进行遗传研究，并为发展更耐受性和瘟疫抵抗力强的作物和动物品种提供支持。
DNA测序技术的发展
DNA测序技术的发展DNA测序技术的发展一直是生物学和医学领域的重要研究方向。
近年来，随着科学技术的快速发展，DNA测序技术呈现了令人瞩目的进步。
本文将从DNA测序技术的起源、发展历程以及应用领域等方面进行探讨。
一、DNA测序技术的起源20世纪50年代初，美国生物学家沃森和克里克提出了DNA的双螺旋结构模型，这为后来的DNA测序技术的发展奠定了基础。
当时，人们的主要目标是确定DNA的序列，以期揭示基因的组成和遗传信息的传递方式。
然而，由于技术限制，DNA测序工作进展缓慢。
二、传统的DNA测序方法在传统的DNA测序方法中，最著名的是萨里格测序法。
该方法是1967年由英国科学家弗雷德里克·萨里格发明的，奠定了DNA测序技术的基础。
这种方法通过在DNA链延伸的过程中使用含有放射性同位素的核苷酸，再用电泳将DNA分离并检测辐射信号，从而测定DNA 序列。
然而，传统的DNA测序方法存在着一些问题。
首先，这些方法需要大量的DNA样品，且操作复杂，效率低下。
其次，由于使用放射性同位素，有一定的辐射危险。
此外，这些方法对于复杂的DNA序列分析缺乏效果。
三、新一代测序技术的突破随着科技的发展，新一代测序技术的出现使得DNA测序工作变得更加高效、准确。
其中最重要的技术包括Sanger测序技术、454测序技术、Illumina测序技术和Ion Torrent测序技术等。
Sanger测序技术是一种经典的测序方法，由弗雷德里克·萨里格于1977年发明。
该技术通过DNA链延伸的过程中使用ddNTP，然后用电泳分离并检测不同长度的DNA片段，最终测定DNA序列。
尽管Sanger测序技术已经成为经典的DNA测序方法，但其需要大量的DNA样品和昂贵的设备，并且操作复杂。
随着技术的进步，新一代测序技术应运而生。
这些技术通过将DNA样本分离成许多片段，然后通过高通量平台进行并行测序，从而大大提高了测序速度和效率。
DNA测序技术的发展历史与最新（可编辑）
DNA测序技术的发展历史与最新在2002年4月，美国《科学》杂志，登载了一篇长达14页的论文尤其引人注目―――《水稻（籼稻）基因组的工作框架序列图》。
2004年12月，水稻基因组“精细图”全部完成 2004年12月10日，中国科学家在世界上率先完成的家蚕基因组“框架图”及基因组生物学分析成果在世界科学类权威的学术期刊――《Science》杂志上发表。
2009年12月13日，Nature杂志刊登了由深圳华大基因研究院领衔完成的大熊猫基因测序。
DNA测序技术的发展历史与最新进展主讲人：金瑞营第一代DNA测序技术成熟的DNA测序技术始于20世纪70年代中期。
●1977年am 和Gilbert报道了通过化学降解测定DNA序列的方法。
●同一时期, Sanger发明了双脱氧链终止法● 20世纪90年代初出现的荧光自动测序技术将DNA测序带入自动化测序的时代。
这些技术统称为第一代DNA测序技术。
化学降解法在该方法中,一个末端被放射性标记的DNA片段在5组互相独立的化学反应中分别被部分降解,其中每一组反应特异地针对某种碱基。
因此生成5组放射性标记的分子,每组混合物中均含有长短不一的DNA分子,其长度取决于该组反应所针对的碱基在原DNA片段上的位置。
最后,各组混合物通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离,再通过放射自显影来检测末端标记的分子。
双脱氧链终止法原理：核酸模板在DNA 聚合酶、引物、4种单脱氧核苷三磷酸 dNTP,其中的一种用放射性P32标记存在条件下复制时,在四管反应系统中分别按比例引入4种双脱氧核苷三磷酸ddNTP ,因为双脱氧核苷没有3′ -OH,所以只要双脱氧核苷掺入链的末端,该链就停止延长,若链端掺入单脱氧核苷,链就可以继续延长。
如此每管反应体系中便合成以各自的双脱氧碱基为3′端的一系列长度不等的核酸片段。
反应终止后,分4个泳道进行凝胶电泳,分离长短不一的核酸片段,长度相邻的片段相差一个碱基。
经过放射自显影后,根据片段3′端的双脱氧核苷,便可依次阅读合成片段的碱基排列顺序。
DNA测序技术的发展与应用
DNA测序技术的发展与应用DNA测序技术是一种重要的生物学研究方法，它可以帮助我们了解生命的本质，推动科学的发展。
本文将介绍DNA测序技术的发展历程、应用领域以及对科学研究和医学诊断的影响。
一、DNA测序技术的发展历程DNA测序技术的起源可以追溯到20世纪50年代初，当时研究人员利用化学手段首次确定了DNA的结构。
随后的几十年中，科学家们陆续提出了一系列测序方法，如Sanger测序、Maxam-Gilbert测序和荧光测序等。
这些方法在DNA序列分析方面起到了重要的作用，为后续的研究打下了基础。
然而，传统测序方法存在测序速度慢、成本高以及样品要求较严格等问题，限制了DNA测序技术的应用。
为了克服这些问题，科学家们不断进行研究和创新，逐渐发展出了新一代测序技术，如454测序、Illumina测序和Ion Torrent测序等。
这些技术的出现，使得DNA测序速度大幅提升，成本显著降低，同时还能同时测序多个样品，为科研实验和临床应用提供了更多的便利。
二、DNA测序技术的应用领域DNA测序技术在许多领域都有着广泛的应用。
首先，它在基础科学研究中起着至关重要的作用。
科学家们利用DNA测序技术来研究生命的演化、物种的起源以及基因功能的解析等。
通过对不同生物的DNA进行测序，我们可以更好地了解它们之间的关系，揭示生物多样性的奥秘。
其次，DNA测序技术在医学诊断和遗传学研究中也得到广泛应用。
通过对个体的DNA进行测序，医生可以准确判断遗传病和某些多发病的风险，为病人提供更加个性化的治疗方案。
同时，在肿瘤学研究方面，DNA测序技术可以帮助鉴定肿瘤的遗传突变和致病基因，为肿瘤的早期诊断和治疗提供参考依据。
此外，DNA测序技术还在农业、环境保护和人类祖源研究等领域发挥重要作用。
通过对农作物、家畜和野生动植物的DNA进行测序，科学家们可以帮助改良农作物品种、提高畜禽养殖效率，也可以对野生物种进行保护和保育工作。
在人类祖源研究方面，DNA测序技术可以追溯人类起源和迁徙的历史，揭示人类的进化过程和基因演化。
DNA测序技术的发展与应用
DNA测序技术的发展与应用引言：DNA测序技术是一项基础性的生命科学技术，它的出现和发展推动了生命科学的快速发展。
随着科技的不断进步，DNA测序技术也在不断发展和完善，其应用范围也日益广泛。
本文将对DNA测序技术的发展历程、技术原理、应用领域以及未来发展方向进行详细阐述。
一、DNA测序技术的发展历程DNA测序技术的发展历程可以追溯到20世纪50年代，当时，研究人员通过核酸电泳技术，首次将DNA进行分离和检测。
随后，研究人员又发展了一系列的DNA序列分析技术，包括限制性酶切分析、Southern blotting等技术。
直到1977年，Sanger等人发明了现代DNA测序技术，使得DNA测序技术迈入了一个新的时代。
二、DNA测序技术的原理DNA测序技术的原理主要是通过测定DNA分子中的碱基序列来确定DNA序列。
目前常用的DNA测序技术主要有三种：Sanger测序、Next Generation Sequencing (NGS)和第三代测序技术。
其中，Sanger测序是最早开发的DNA测序技术，其原理是通过DNA聚合酶催化DNA合成反应，并在反应中加入一种特殊的二进制反应器，以确定每个碱基的位置。
NGS技术则是一种高通量的DNA测序技术，可以同时测序大量的DNA样品，其原理是通过将DNA样品分成许多小片段，并使用DNA聚合酶进行扩增，然后使用高通量测序仪对这些小片段进行测序。
第三代测序技术则是一种新兴的DNA测序技术，其原理是通过直接读取DNA 分子中的碱基序列来确定DNA序列。
三、DNA测序技术的应用领域随着DNA测序技术的不断发展，其应用领域也日益广泛。
目前，DNA测序技术已经成为生命科学研究的重要工具之一，其应用领域涵盖了基因组学、遗传学、生物信息学、医学等多个领域。
在基因组学领域，DNA测序技术已经被广泛应用于微生物、植物和动物的基因组测序和分析。
在医学领域，DNA测序技术已经成为诊断和治疗疾病的重要手段之一，例如癌症、遗传性疾病等。
DNA测序技术发展
DNA测序技术发展DNA测序技术是近年来发展最为迅速的生物技术之一，它在基因检测、医学诊断、生态研究等领域都发挥了巨大的作用。
DNA测序技术的发展历程漫长，但却充满了奇迹和意外。
下面就让我们来探究DNA测序技术的历史和发展。
一、DNA测序技术的历史DNA测序技术的探索可以追溯到20世纪初。
当时，人们对DNA的理解还很有限，DNA只被认为是生命的分子基础，而未被应用于实际生产和生活中。
1960年代末，弗雷德里克·桑格和沃尔特·吉尔伯特成功地发现了DNA的重复性序列，从此开启了DNA的探索之路。
1977年，两个独立的团队，弗雷德里克·桑格和沙利文实验室，分别发明了面向DNA序列的化学法，并且实现了第一个重要的测序实验。
这个实验将一个病毒DNA的完整序列测定了出来，打开了DNA测序技术的研究之门。
1985年到2000年，DNA测序技术经历了一个突飞猛进的时期。
在这一时期，追求DNA测序技术的完美和高效性成为了科学界的主旋律。
人们开始采用自动化的方法进行DNA测序，不仅大大提高了测序速度，而且降低了操作难度和人力成本。
同时，生物信息学的发展也让DNA序列分析变得更加简单。
21世纪以来，DNA测序技术进一步迈向了高通量的阶段。
新一代测序技术的发展，使得DNA测序速度和准确度都得到了极大的改善。
目前最先进的新一代测序技术能够单次测序数百万条DNA序列，大大缩短了测序时间，降低了成本。
这种技术对生命科学研究的贡献是巨大的。
二、DNA测序技术的分类根据测序方法和技术的不同，DNA测序技术被分为了Sanger测序、二代测序和三代测序三种类型。
1、Sanger测序Sanger测序，也称为链终止法测序。
它是一种基于化学原理进行的分子生物学技术，是第一代测序技术。
Sanger测序技术是一种革命性的技术，不仅揭示了许多基因的结构和功能，还推动了人类基因组计划的启动。
Sanger测序原理是利用DNA聚合酶进行DNA合成，遇到ddNTP时会停止聚合，并导致DNA链终止。
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Solexa测序技术路线：
Genome Analyzer系统应用了边合成边测序（Sequencing By Synthesis）的原理。加入改造过的DNA聚合酶和带有4种荧光标记的 dNTP。 这些核苷酸是“可逆终止子”，因为3’羟基末端带有可化学 切割的部分，它只容许每个循环掺入单个碱基。此时，用激光扫描 反应板表面，读取每条模板序列第一轮反应所聚合上去的核苷酸种 类。之后，将这些基团化学切割，恢复3'端粘性，继续聚合第二个核 苷酸。这样，统计每轮收集到的荧光信号结果，就可以得知每个模 板DNA片段的序列。目前的配对末端读长可达到2×50 bp，更长的 读长也能实现，但错误率会增高。读长会受到多个引起信号衰减的 因素所影响，如荧光标记的不完全切割。
# 三种第二代测序技术对比 #
测序技术 上市时间 454
2005
Solexa
2007
SOLiD
2007
价格（万美元，2007） 50
45
59
单次反应数据量 读长（bp） 优势
0.4
20
50
400 长读长
100 低测序成本， 高性价比
50 高通量， 高准确度
第三代DNA象的发展
自20世纪70年代DNA序列分析技术发明以来，人类对基 因和基因组结构的研究和探索就没有停止过。 1977年测定了噬菌体X174基因组全部核苷酸序列。 目前，已分析完成了大批生物的全部基因组序列，包括 噬菌体、病毒、细菌、酵母、多细胞真核生物、小鼠和人 类。 2001年初完成的人类基因组计划使基因组研究达到了高 潮，是人类真正认识和自我改造的开端。
第一代测序法的比较 方法
双脱氧末端终止法 化学降解法 荧光自动测序技术
优点
操作简便，结果清 晰可靠，一次能确 定300-500个核苷 酸序列，已成为最 常用的DNA测序方 法
不需要进行酶促反 应，可以分析甲基 自动化程度高，高 化等DNA的修饰情 效率，精确度增加 况
缺点
一次最多只能分析 花费时间过久，成 250个核苷酸 ，所 纯化量小，不能纯 本较高 用的许多化学试剂 化较长的片段 有毒
三，荧光自动测序技术
• 荧光自动测序技术基于Sanger原理，用四种不同的荧光混 合物分别标记四种反应的产物，用四种反应物混合在一起 进行电泳，在激光的激发下四种带有不同荧光染料标记物 的ddNTP可以在同一反应管种进终止测序反应，并于变性 的聚丙烯酰胺凝胶的同一泳道中进行电泳检测。当带有某 种荧光素标记的DNA片段电泳到激光探头的检测范围时， 激光所激发的荧光信号被探测器接受，经计算机分析数据， 自动排列出DNA序列。
中国机构主要承担和参与已完成的动植物基 因组测序项目
• 2009年12月13日， Nature杂志刊登了由深圳 华大基因研究院领衔完成 的大熊猫基因测序。
为什么要进行DNA测序？ DNA测序的目的就是为了认识生命的本质， 了解生物的差异性，以及不同的生物进化 和发展的历史。 DNA测序对重组DNA的研究提供了方向。 DNA测序在疾病诊断和基因分型中有重要 的实用价值
Hale Waihona Puke ABI测序技术• ABI 3730XL的测序原理 • ABI 3730xl常规测序平台采用毛细管电泳技术叏代传统的聚丙烯酰胺 平板电泳，应用该公司与利的四色荧光染料标记的ddNTP(标记终止 物法)，因此通过单引物PCR测序反应，生成的PCR产物则是相差1个 碱基的3'末端为4种丌同荧光染料的单链DNA混合物，使得四种荧光 染料的测序PCR产物可在一根毛细管内电泳，从而避免了泳道间迁移 率差异的影响，大大提高了测序的精确度。由于分子大小丌同，在毛 细管电泳中的迁移率也丌同，当其通过毛细管读数窗口段时，激光检 测器窗口中的CCD(charge-coupled device)摄影机检测器就可对荧 光分子逐个进行检测，激収的荧光经光栅分光，以区分代表丌同碱基 信息的丌同颜色的荧光，并在CCD摄影机上同步成像，分析软件可自 动将丌同荧光转变为DNA序列，从而达到DNA测序的目的。分析结 果能以凝胶电泳图谱、荧光吸收峰图或碱基排列顺序等多种形式输出。
转移酶在接头末端加上Cy3荧光标记。用小片段与表面带有寡聚 Poly(T)的平板杂交。然后，加入DNA聚合酶和Cy5荧光标记的dNTP进 行DNA合成反应，每一轮反应加一种dNTP。 将未参与合成的dNTP和 DNA聚合酶洗脱。 检测上一步记录的杂交位置上是否有荧光信号，如 果有则说明该位置上结合了所加入的这种dNTP。用化学试剂去掉荧光 标记，以便进行下一轮反应。经过不断地重复合成、洗脱、成像、淬 灭过程完成测序。
DNA测序技术的历史
第一代DNA测序技术
三测序方法的原理
第二代DNA测序技术
三个测序平台的工作原理及操作步骤
第三代DNA测序技术
单分子测序的特点及应用前景
自沃森和克里克在1953年建立DNA双螺旋结构以来，整个测序技术的发展历程。
第一代DNA测序技术
成熟的DNA测序技术始于20世纪70年代中期。 ●1977年Sanger发明了双脱氧链终止法。 ●同一时期, Maxam 和Gilbert报道了通过化学降解 测定DNA序列的方法。 ● 20世纪90年代初出现的荧光自动测序技术将DNA测序带入 自动化测序的时代。
这些技术统称为第一代DNA测序技术。
一，双脱氧链终止法
原理：核酸模板在DNA聚合酶、引物、4种dNTP 存在条 件下复制时,在四管反应系统中分别按比例引入4种双脱氧 核苷三磷酸( ddNTP) ,因为双脱氧核苷没有3′ -OH,所以只 要双脱氧核苷掺入链的末端,该链就停止延长,若链端掺入 单脱氧核苷,链就可以继续延长。如此每管反应体系中便合 成以各自的双脱氧碱基为3′端的一系列长度不等的核酸 片段。反应终止后,分4个泳道进行凝胶电泳,分离长短不一 的核酸片段,长度相邻的片段相差一个碱基。经过放射自显 影后,根据片段3′端的双脱氧核苷,便可依次阅读合成片段 的碱基排列顺序。
种碱基，依照T、A、C、G的顺序依次循环进入PTP板，每次只进入一个碱 基。如果发生碱基配对，就会释放一个焦磷酸。这个焦磷酸在ATP硫酸化酶 和萤光素酶的作用下，经过一个合成反应和一个化学収光反应，最终将萤光 素氧化成氧化萤光素，同时释放出光信号。此反应释放出的光信号实时被仪 器配置的高灵敏度CCD捕获到。有一个碱基和测序模板进行配对，就会捕获 到一分子的光信号；由此一一对应，就可以准确、快速地确定待测模板的碱 基序列。这也就是大名鼎鼎的焦磷酸测序。
第二代DNA测序技术
二代测序的核心思想是边合成边测序，即通 过捕捉新合成的末端的标记来确定DNA的序列。 · 罗氏454 公司的GS FLX测序平台
· Illumina 公司的Solexa Genome Analyzer测序平台
· ABI公司的SOLiD测序平台
一、GS FLX测序技术的原理
1.样品输入并片段化：GS FLX系统支持各种不同来源的样品，包括基因组 DNA、PCR产物、BA和B接头（3’和5’端具 有特异性）连接到DNA片段上。接头也将用于后续的纯化，扩增和测序步骤。 一个磁珠携样就形成了只包含一个磁珠和一个独特 片段的微反应器 4.乳液PCR扩增：每个独特的片段在自己的微反应器里进行独立的扩增，而没有其
增后产生了几百万个相同的拷贝。随后，乳液混合物被打破，扩增的片段仍 然结合在磁珠上。
5.一个磁珠＝一条读长：携带DNA的捕获磁珠随后放入PTP板中进行后 继的测序。PTP孔的直径（29um）只能容纳一个磁珠（20um）。然 后将PTP板放置在GS FLX中，测序开始。放置在四个单独的试剂瓶里的四
一、GS FLX测序技术的优点
GS FLX系统的测序也是一种依靠生物发光进行DNA序 列分析的新技术。在DNA聚合酶，ATP硫酸化酶，荧光素酶 和双磷酸酶的协同作用下，将优点引物上每一个dNTP 的 聚合与一次荧光信号释放偶联起来。通过检测荧光信号释 放的有无和强度，就可以达到实时测定DNA序列的目的。 此技术不需要荧光标记的引物或核酸探针，也不需要进行 电泳； 特点：分析结果快速、准确、灵敏度高和自动化。
二，化学降解法
在该方法中,一个末端被放射性标记的DNA片段在5组互相 独立的化学反应中分别被部分降解,其中每一组反应特异地 针对某种碱基。生成5组放射性标记的分子,每组混合物中 均含有长短不一的DNA分子,其长度取决于该组反应所针 对的碱基在原DNA片段上的位置。最后,各组混合物通过 聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离,再通过放射自显影来检测末 端标记的分子。
2. Pacific Biosciences公司
Pacific Biosciences公司的SMRT技术基于边合成边测序的思想， 以SMRT芯片为测序载体进行测序反应。SMRT芯片是一种带有很多ZMW孔的厚
度为100 nm的金属片。将DNA聚合酶、待测序列和不同荧光标记的dNTP放入
ZMW孔的底部，进行合成反应。与其他技术不同的是，荧光标记的位置是磷 酸基团而不是碱基。当一个dNTP被添加到合成链上的同时，它会进入ZMW孔 的荧光信号检测区并在激光束的激发下发出荧光，根据荧光的种类就可以判 定dNTP的种类。此外由于dNTP在荧光信号检测区停留的时间（毫秒级）与它 进入和离开的时间（ 微秒级） 相比会很长，所以信号强度会很大。其它未 参与合成的dNTP由于没进入荧光型号检测区而不会发出荧光。在下一个dNTP 被添加到合成链之前，这个dNTP的磷酸基团会被氟聚合物（fluoropolymer） 切割并释放，荧光分子离开荧光信号检测区。
PCR扩增，而这一PCR过程可能引入突变或者改变样品中核
酸分子的比例关系。另外，第二代测序的读长普遍偏短， 在进行数据拼接时会遇到麻烦。为了克服这样的缺点，业
界发展出了以单分子实时测序和纳米孔为标志的第三代测
序技术。
1. Helicos公司
Heliscope单分子测序仪基于边合成边测序的思想，
将待测序列随机打断成小片段并在3'末端加上Poly(A)，用末端